UNIVERSIDADE TECNOLOGICA FEDERAL DO PARAN

CAMPUS MEDIANEIRA
ENGENHARIA DE ALIMENTOS
DISCIPLINA: ENGENHARIA BIOQUMICA
ACADMICAS: BIANCA C. PERON; ISABELA CANCI; MARIANA MARINE
CRESPI; VANESSA F. BOURSCHEIDT

CINTICA DE CRESCIMENTO MICROBIANO

MEDIANEIRA
2014

SMARIO

1 INTRODUO ........................................................................................................ 2
2 MATERIAIS E MTODOS ...................................................................................... 4
2.1 MATERIAIS........................................................................................................... 4
2.2 MTODOS ............................................................................................................ 5
2.2.1 Prepararam-se os meios de cultura .................................................................. 5
2.2.2 Inoculao dos meios de cultivo ....................................................................... 6
2.2.3 Anlise de concentrao celular ....................................................................... 7
2.2.4 Curva Padro Biomassa ................................................................................... 7
2.2.5 Medida de Massa Seca .................................................................................... 7
3 RESULTADOS E DISCUSSO .............................................................................. 8
4 CONCLUSO ....................................................................................................... 26
5 REFERNCIAS .................................................................................................... 26

INTRODUO
O estudo cintico consiste na anlise do avano dos valores de

concentrao de um ou mais componentes do sistema de cultivo, em funo do

tempo. Esses componentes so os microrganismos (biomassa), os produtos
formados (metablitos) e os nutrientes (substratos) que compem o meio de cultura
e so representados pelas letras X, P e S, respectivamente.
Abaixo segue uma figura referente ao comportamento de X, P e S
durante um processo cintico microbiano.

Figura 1. Curvas de ajustes de um processo cintico microbiano.

A cintica microbiana possibilita, fazer uma comparao quantitativa entre as

diferentes condies de cultivo (pH, temperatura...), por meio de variveis, como:
velocidades de transformao e os fatores de converso.
A curva de crescimento microbiano analisada aps a inoculao de um
meio de cultura, favorvel ao desenvolvimento do microrganismo, sob temperatura
controlada e agitao adequada, observando o comportamento nos valores da
concentrao celular.

As fases de crescimento so:

Fase lag imediatamente aps a inoculao do meio com o
microrganismo. um perodo de adaptao em que a clula sintetiza as enzimas
necessrias ao metabolismo dos componentes presentes no meio. Nessa fase no
h reproduo celular.
Fase log ou exponencial onde a velocidade especfica de crescimento
constante e mxima, onde ocorre o desenvolvimento dos microrganismos.
Fase estacionria onde a velocidade de desenvolvimento constante, ou
seja, o crescimento e a morte do microrganismo so na mesma proporo.
Fase de declnio O valor da concentrao celular diminui a uma velocidade
que excede a velocidade da produo de clulas novas. Nessa fase ocorre uma
autlise dos microrganismos, provocado pela ao de enzimas intracelulares.
Abaixo segue uma figura mostrando essas fases citadas:

Figura 2. Curva de crescimento microbiano.

A espectrofotometria uma forma de medir a intensidade da luz,

independentemente do comprimento de onda (energia). Ela se baseia da absoro
da radiao nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho. Passase um feixe de luz atravs de uma soluo, que mede a quantidade de luz que foi
absorvida por tal, isso realizado em um espectrofotmetro.
Como tm diferentes padres de absoro, a espectrofotometria permite
identificar e quantificar substncias com base no seu espectro. Para determinar a
concentrao de um soluto em uma amostra por espectrofotometria, tem-se que
comparar a absorbncia da amostra com uma soluo padro.
Com os valores de absorbncia e de concentrao conhecidos, pode-se
fazer um grfico conhecido como curva-padro, o qual a reta indica a
proporcionalidade entre o aumento da concentrao e da absorbncia e a poro
linear correspondente ao limite de sensibilidade do mtodo espectrofotomtrico para
o soluto em questo.
A Saccharomyces cerevisiae tem grande destaque no mercado como uma
das melhores leveduras utilizadas na produo de etanol, os registros da sua
utilizao constam desde a antiguidade (FERREIRA, 2010).
Algumas leveduras em particular, a Saccharomyces cerevisiae so os
microrganismos mais desejados no estudo de biologia celular bsica, e diversas
razes podem explicar este motivo, como a facilidade de seu isolamento e
manuteno, pouca exigncia nutricional, bom crescimento em meios constitudos
por resduos industriais, amplo uso em processos industriais e sua reconhecida
capacidade de produzir enzimas extracitoplasmticas (NEVES, 2006).
Este trabalho teve como objetivo determinar a curva padro do crescimento
da Saccharomyces cerevisiae, bem como determinar Ks e mx em cultivo de S.
cerevisiae com glicose como fonte de carbono.

2.1

MATERIAIS E MTODOS

MATERIAIS
Microrganismo: Saccharomyces cerevisiae (fermento biolgico liofilizado)
Reagentes, equipamentos e materiais necessrios:
4

 Sulfato de amnio
Fosfato de amnio
Sulfato de magnsio
Extrato de levedura
Fermento biolgico
Glicose
Balo volumtrico de 1L
Tubos de ensaio
Erlenmeyers
Pipetas de 9 mL e 1 mL
Pipetadores automticos de 1 mL e 10 mL
Autoclave
Mesa agitadora refrigerada
Espectrofotomtro 600 nm
Agitadores de tubos

A tabela 1 apresenta os dados para o preparo do meio de cultura.

Tabela 1. Meio de Cultura.

Substncia

Quantidade (g/L)

Glicose

Varivel

Sulfato de amnio

Fosfato de amnio

Sulfato de magnsio

0,2

Extrato de levedura

0,1

gua

qsp. 1L

*Concentraes: 10, 20, 50, 75, 100, 125, 150, 200 e 250 g/L

2.2

MTODOS

2.2.1 Prepararam-se os meios de cultura

 Pesou-se os substratos, foi considerado um volume de 2,0 litros (balana

semi-analtica)
Solubilizou-se com gua destilada
Completou-se o volume no balo volumtrico de 2,0 litros
Transferiu-se 200 mL do meio para 09 Erlenmeyers de 500 mL
Adicionaram-se as quantidades correspondentes de glicose, conforme
tabela 2.

Tabela 2. Concentrao de glicose em cada meio.

Ensaio

Concentrao de

Quantidade de glicose a

glicose (g/L)

ser adicionada (g)

01

10

02

20

03

50

10

04

75

15

05

100

20

06

125

25

07

150

30

08

200

40

09

250

50

Fecharam-se os Erlenmeyers com tufos de algodo hidrfobo e gaze e

esterilizou-se em autoclave a 121C por 20 minutos

2.2.2 Inoculao dos meios de cultivo

Transferiu-se 0,04g da levedura Saccharomyces cerevisiae (Saft-Instant) para
cada

erlenmeyer

contendo

200

mL

de

meio

esterilizado,

seguido

de

homogeneizao;
Retirou-se uma alquota para fazer a leitura da densidade tica no tempo
zero.

2.2.3 Anlise de concentrao celular

Procedeu-se leitura da absorbncia das alquotas retiradas em duplicata em
espectrofotmetro de feixe simples (610 nm), diluindo-se quando necessrio, para
leituras de absorbncia de at 1,0;
Para o clculo das concentraes celulares dos cultivos em funo do tempo,
utilizou-se a curva padro de crescimento da Saccharomyces cerevisiae.

2.2.4 Curva Padro Biomassa

Para a construo da curva padro da S. cerevisiae, realizou-se a mistura dos
meios 2,3,4 e 5 e as seguintes diluies foram feitas, como mostra a tabela 3.
Tabela 3. Diluies para construo da curva padro.

Diluio

Meio (mL)

gua (mL)

1:5

1:10

1:12

11

1:14

13

1:16

15

1:18

16

1:20

19

1:25

24

1:30

29

2.2.5 Medida de Massa Seca

Para que fosse feita a pesagem da massa seca foram colocados 7 mL da
mistura das diluies 2,3,4 e 5 em tubos para que fosse efetuada a centrifugao
por 10 minutos. Aps a centrifugao as clulas foram colocadas em placas de Petri
e postas para secagem em estufa a 105C.

RESULTADOS E DISCUSSO
Na tabela 4 esto dispostos os dados das leituras de absorbncia das

alquotas, em duplicata feitas em espectrofotmetro de feixe simples, as quais foram

feitas de hora em hora, at o tempo de 12 horas. Esses dados serviram de base
para elaborao das curvas de crescimento dos 9 grficos de concentrao celular
versus tempo.
Tabela 4. Leitura da absorbncia em cada tempo.

Ensaios
0 (h)
1(h)
3(h)
Mdia
4(h)
Mdia
5(h)
Mdia
6(h)
Mdia
7(h)
Mdia
8(h)
Mdia
9(h)
Mdia
10(h)
Mdia
11(h)
Mdia

1
0,171
0,162
0,238
0,218
0,228
0,263
0,254
0,259
0,333
0,365
0,349
0,582
0,558
0,570
0,621
0,629
0,625
0,743
0,764
0,754
0,530
0,557
0,544
0,580
0,563
0,572
0,657
0,638
0,648

2
0,221
0,167
0,216
0,222
0,219
0,230
0,227
0,229
0,470
0,496
0,483
0,481
0,507
0,494
0,591
0,624
0,608
0,688
0,664
0,676
0,490
0,530
0,510
0,497
0,532
0,515
0,606
0,590
0,598

3
0,210
0,150
0,199
0,191
0,195
0,231
0,297
0,264
0,463
0,447
0,455
0,467
0,466
0,467
0,585
0,610
0,598
0,593
0,636
0,615
0,489
0,493
0,491
0,480
0,671
0,576
0,527
0,530
0,529

4
0,147
0,153
0,198
0,217
0,208
0,227
0,246
0,237
0,503
0,481
0,492
0,755
0,719
0,737
0,609
0,608
0,609
0,682
0,676
0,679
0,440
0,472
0,456
0,496
0,486
0,491
0,520
0,544
0,532

5
0,266
0,206
0,313
0,309
0,311
0,368
0,343
0,356
0,608
0,654
0,631
0,335
0,292
0,314
0,837
0,801
0,819
0,841
0,919
0,880
0,603
0,571
0,587
0,526
0,607
0,567
0,598
0,608
0,603

6
0,155
0,161
0,215
0,227
0,221
0,221
0,247
0,234
0,490
0,451
0,471
0,480
0,486
0,483
0,615
0,610
0,613
0,688
0,669
0,679
0,452
0,472
0,462
0,484
0,464
0,474
0,517
0,507
0,512

7
0,097
0,118
0,148
0,149
0,149
0,152
0,155
0,154
0,311
0,342
0,327
0,379
0,386
0,383
0,454
0,466
0,460
0,541
0,526
0,534
0,369
0,361
0,365
0,317
0,413
0,365
0,474
0,417
0,446

8
0,086
0,109
0,128
0,140
0,134
0,148
0,150
0,149
0,278
0,290
0,284
0,171
0,229
0,200
0,393
0,380
0,387
0,445
0,437
0,441
0,301
0,321
0,311
0,507
0,333
0,420
0,371
0,364
0,368

9
0,122
0,159
0,159
0,166
0,163
0,245
0,205
0,225
0,357
0,420
0,389
0,405
0,394
0,400
0,471
0,496
0,484
0,541
0,538
0,540
0,386
0,396
0,391
0,412
0,390
0,401
0,430
0,442
0,436

Ainda para poder transformar as absorbncias da tabela 4, foi-se necessria a

construo da curva padro, onde foram utilizadas as diluies da tabela 3, aps a
centrifugao e secagem da mistura dos ensaios, obteve-se os dados da tabela 5 e
6, o que tornou possvel a construo da curva padro, grfico 1.
Tabela 5. Dados para a construo da curva padro.

Peso da Placa Placa de petri +

(g)
clulas secas (g)
23,533
23,590
22,759
22,838
22,840
22,920
Mdia

Massa
seca (g)
0,057
0,079
0,080
0,072

[X] g/mL [X] g/L

0,008
0,011
0,011
0,010

8,143
11,243
11,403
10,263

A tabela 5 trs o valor da concentrao celular na mistura dos ensaios que

de 10,263 g/L, a partir disto possvel encontrar a concentrao celular em cada
uma das diluies, apresentado na tabela 6.
Tabela 6. Concentraes de clulas em funo da absorbncia.

Diluio Absorbncia [X] g/L

0,03
0,176
0,342
0,04
0,226
0,411
0,05
0,29
0,513
0,06
0,324
0,570
0,06
0,352
0,641
0,07
0,414
0,733
0,08
0,466
0,855
0,10
0,581
1,026
0,20
0,994
2,053
A curva padro a relao grfica entre os valores de absorbncia medidos a
partir de analises bem como os valores das concentraes de clulas (g/L), sendo
possvel assim traar o grfico 1, e verificar a obteno da linearidade entre todos os
pontos.

CURVA PADRO

y = 2.0938x - 0.0956
R = 0.99

2.500

[X] g/L

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.2

Absorbncia
Grfico 1. Curva padro.

Com a curva j construda, temos a equao da reta y=2,0938x-0,0956, onde

x a absorbncia e y a concentrao celular, assim com os dados da densidade
tica medidos de hora em hora para cara ensaio, possvel obter-se os grficos de
concentrao celular por tempo para cada ensaio. Obtendo-se assim nove grficos
(um de cada ensaio), como as diluies foram de 1:10 deve-se realizar a
multiplicao por 10 em cada valor de X(g/L) encontrados para obter-se o valor real
da concentrao de clulas.
Construiu-se os nove grficos do ln X (concentrao de clulas) em funo do
tempo com o objetivo de determinar o coeficiente angular da reta, equivalente ao
mx para cada concentrao especifica, e a partir destes grficos utilizando os
nove mx encontrados e as nove concentraes de substrato determinadas no
inicio do experimento, elaborou-se mais um grfico que mostra todo o crescimento
da Saccharomyces Cerevisiae e a partir de qual concentrao de glicose se iniciou a
inibio.
Para o 1 ensaio, temos a tabela 7, a partir desta pode se gerar o grfico 2 de
concentrao celular por tempo, e o grfico 3, ln de [X] por tempo, obtendo assim
mx.
Tabela 7. Dados do ensaio 1.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

Ln [X]
10

0
1
3
4
5
6
7
8
9
10
11

0,171
0,162
0,228
0,259
0,349
0,570
0,625
0,754
0,544
0,572
0,648

2,624
2,436
3,818
4,456
6,351
10,979
12,130
14,821
10,424
11,010
12,601

0,965
0,890
1,340
1,494
1,849
2,396
2,496
2,696
2,344
2,399
2,534

[X] g/L

1 ENSAIO
16.000
14.000
12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

6
Tempo (h)

10

12

Grfico 2. Grfico da concentrao celular versus o tempo para o 1 ensaio.

Retirando-se os pontos da fase de lag e de declnio obtm-se o grfico 3 do

Ln X versus tempo, com R mais prximo de 1, possibilitando assim encontrar mx
para o 1 ensaio.

11

1 ENSAIO
3.000

y = 0.2952x + 0.4213
R = 0.9597

2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 3. Ln da concentrao celular por tempo.

Sendo o coeficiente angular da reta o valor de mx, neste caso

mx=0,2952.
Na sequencia realizou-se as mesmas anlises do 1 ensaio para os demais
ensaios, todos os dados foram dispostos nas tabelas 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 e 15.
Tabela 8. Dados do ensaio 2.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,221
3,671
1
0,167
2,541
3
0,219
3,629
4
0,229
3,828
5
0,483
9,157
6
0,494
9,387
7
0,608
11,764
8
0,676
13,198
9
0,510
9,722
10
0,515
9,817
11
0,598
11,565

Ln [X]
1,301
0,932
1,289
1,342
2,215
2,239
2,465
2,580
2,274
2,284
2,448

A partir da tabela 8, tem-se o grfico 4 e 5.

12

2 ENSAIO
14.000
12.000
[X] g/L

10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000

6
8
Tempo (h)

10

12

Grfico 4. Concentrao celular por tempo do 2 ensaio.

2 ENSAIO

y = 0,293x + 0,3424
R = 0,9548

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 5. Ln da concentrao celular do 2 ensaio por tempo.

Pela equao da reta, mx neste caso 0,293.

A tabela 9, apresenta os dados para a obteno dos grficos 6 e 7.
Tabela 9. Dados do ensaio 3 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,210
3,441
1
0,150
2,185
3
0,195
3,127
4
0,264
4,572
5
0,455
8,571

Ln [X]
1,236
0,781
1,140
1,520
2,148
13

6
7
8
9
10
11

0,467
0,598
0,615
0,491
0,576
0,529

8,812
11,554
11,910
9,325
11,094
10,110

2,176
2,447
2,477
2,233
2,406
2,313

3 ENSAIO
14.000
12.000

[X] g/L

10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 6. Concentrao celular do 3 ensaio por tempo.

Deixando apenas os pontos que fazem parte da fase exponencial do

crescimento obtm-se o grfico 7, e encontra-se mx para o 3 ensaio, igual a
0,327.

3 ENSAIO

y = 0.327x + 0.1856
R = 0.9972

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

tempo (h)
Grfico 7. Ln de X por tempo do 3 ensaio.

14

A tabela 10, trs os dados utilizados na construo dos grficos 8 e 9.

Tabela 10. Dados do 4 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,147
2,122
1
0,153
2,248
3
0,208
3,389
4
0,237
3,996
5
0,492
9,345
6
0,737
14,475
7
0,609
11,785
8
0,679
13,261
9
0,456
8,592
10
0,491
9,325
11
0,532
10,183

Ln [X]
0,752
0,810
1,220
1,385
2,235
2,672
2,467
2,585
2,151
2,233
2,321

4 ENSAIO
16.000
14.000

[X] g/L

12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 8. Concentrao celular do 4 ensaio por tempo.

15

4 ENSAIO

y = 0.2961x + 0.2859
R = 0.9829

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 9. Ln de X por tempo do 4 ensaio.

A partir do grfico 9, temos o mx do 4 ensaio igual a 0,2961.

A tabela 11 trs os dados para a construo dos grficos 10 e 11, referentes
ao 5 ensaio.
Tabela 11. Dados do 5 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,266
4,614
1
0,206
3,357
3
0,311
5,556
4
0,356
6,487
5
0,631
12,256
6
0,314
5,608
7
0,819
16,192
8
0,880
17,469
9
0,587
11,335
10
0,567
10,905
11
0,603
11,670

Ln X
1,529
1,211
1,715
1,870
2,506
1,724
2,785
2,860
2,428
2,389
2,457

16

[X] g/L

5 ENSAIO
20.000
18.000
16.000
14.000
12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 10. Concentrao celular do 5 ensaio por tempo.

5 ENSAIO

y = 0.2417x + 1.0422
R = 0.9069

3.500
3.000

Ln X

2.500
2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 11. Ln de X do 5 ensaio por tempo.

A equao da reta do grfico 11, ns da o valor de mx para o 5 ensaio,

sendo este 0,2417.
A tabela 12, trs os dados para elaborao dos grficos 12 e 13, referentes
ao 6 ensaio.
Tabela 12. Dados do 6 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,155
2,624
1
0,161
2,436
3
0,221
3,818
4
0,234
4,456

Ln X
0,965
0,890
1,340
1,494
17

5
6
7
8
9
10
11

0,471
0,483
0,613
0,679
0,462
0,474
0,512

6,351
10,979
12,130
14,821
10,424
11,010
12,601

1,849
2,396
2,496
2,696
2,344
2,399
2,534

6 ENSAIO
16.000
14.000

[X] g/L

12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 12. Concentrao celular do 6 ensaio por tempo.

6 ENSAIO

y = 0.2952x + 0.4213
R = 0.9597

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 13. Ln da concentrao celular do 6 ensaio por tempo.

Neste grfico encontrou-se para mx o valor de 0,2952.

A partir da tabela 13, foi possvel elaborar o grfico 14 e 15.
18

Tabela 13. Dados do 7 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,097
1,075
1
0,118
1,515
3
0,149
2,153
4
0,154
2,258
5
0,327
5,880
6
0,383
7,053
7
0,460
8,675
8
0,534
10,214
9
0,365
6,686
10
0,365
6,686
11
0,446
8,372

Ln X
0,072
0,415
0,767
0,814
1,772
1,953
2,161
2,324
1,900
1,900
2,125

7 ENSAIO
12.000
10.000
[X] g/L

8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 14. Concentrao celular por tempo do 7 ensaio.

19

7 ENSAIO

y = 0.1864x + 0.8409
R = 0.9981

2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 15. Ln da concentrao celular por tempo do 7 ensaio.

Com os dados obtidos no ensaio numero 7, pode-se da mesma maneira que

nos anteriores determinar o valor de mx sendo igual a 0,1864.
A tabela 14 torna possvel a construo do grfico 16 e 17 para o 8 ensaio.
Tabela 14. Dados do 8 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,086
2,624
1
0,109
2,436
3
0,134
3,818
4
0,149
4,456
5
0,284
6,351
6
0,200
10,979
7
0,387
12,130
8
0,441
14,821
9
0,311
10,424
10
0,420
11,010
11
0,368
12,601

Ln X
0,965
0,890
1,340
1,494
1,849
2,396
2,496
2,696
2,344
2,399
2,534

20

8 ENSAIO
16.000
14.000

[X] g/L

12.000
10.000
8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 16. Concentrao celular por tempo do 8 ensaio.

8 ENSAIO

y = 0.2952x + 0.4213
R = 0.9597

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 17. Ln da concentrao celular por tempo do 8 ensaio.

A tabela 15 apresenta os dados do 9 ensaio o que possibilita a construo

dos grficos 18 e 19.
Tabela 15. Dados do 9 ensaio.

Tempo (h) Absorbncia [X] g/L

0
0,122
1,598
1
0,159
2,373
3
0,163
2,446
4
0,225
3,755
5
0,389
7,178

Ln X
0,469
0,864
0,895
1,323
1,971
21

6
7
8
9
10
11

0,400
0,484
0,540
0,391
0,401
0,436

7,409
9,168
10,340
7,231
7,440
8,173

2,003
2,216
2,336
1,978
2,007
2,101

9 ENSAIO
12.000
10.000
[X] g/L

8.000
6.000
4.000
2.000
0.000
0

10

12

Tempo (h)
Grfico 18. Concentrao celular por tempo do 9 ensaio.

9 ENSAIO

y = 0.2946x + 0.1049
R = 0.9704

3.000
2.500

Ln X

2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
0

10

tempo (h)
Grfico 19. Ln da concentrao celular por tempo do 9 ensaio.

Neste ensaio determinou-se o valor de mx, encontrando este como 0,2946.

22

Com os valores de mx determinados em cada grfico, para cada

concentrao de glicose, tem-se a tabela 16, retirando-se os ensaios 3, 5, 8 e 9,
gera-se o grfico 20 da velocidade especifica versus a concentrao de substrato.
Tabela 16. Dados para o grfico de mx por concentrao de substrato.

Ensaios
1
2
3
4
5
6
7
8
9

mx (h-1)
0,2952
0,293
0,327
0,2961
0,2417
0,2952
0,1864
0,2952
0,2946

[glicose] g/L
10
20
50
75
100
125
150
200
250

Retirando-se os ensaios 3, 5, 8 e 9, gera-se o grfico 20 da velocidade

especifica versus a concentrao de substrato.

0.4

(1/h)

0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0

20

40

60

80

100

120

140

160

[glicose] g/L
Grfico 20. versus concentrao de substrato.

O resultado esperado era de que o crescimento da Saccharomyces cerevisiae

seguisse a cintica de Monod, onde o comportamento da concentrao celular fosse
similar figura 3.

23

Figura 3. Curva de crescimento microbiano em cultivo descontnuo, representada em ordenadas

lineares (A) e semilogartmica (B).

Fonte: (SCHMIDELL et al., 2001).

De acordo com Schmidell et al., (2001), o modelo de Monod no leva em
considerao o efeito inibidor, tanto pelo subsrato como pelo produto formado.
A inibio algo comum na prtica, principalmente durante o cultivo
descontnuo, onde h um crescente acmulo de metablitos que acabam
interferindo desfavoravelmente sobre o metabolismo e crescimento microbiano.
O autor ainda destaca a importncia de no se ignorar o fenmeno da inibio
por substrato, pois este efeito se manifesta quando um valor alto da concentrao
inicial S pode, ao inves de aproximar x de mx, provocar um efeito contrario, de
acordo com a figura 4 provocando inibio no crescimento celular.

24

Figura 4. Cintica de inibio pelo substrato (curva A), e sem inibio (- - -).

Fonte: (SCHMIDELL et al., 2001).

Portanto a linearizao impossibilitada, e a soluo para determinao de
Ks e mx somente grfica, como apresentado no grfico 21.

0.4

(1/h)

0.35
0.3
0.25
0.2
0.15
0

20

40

60

80

100

120

140

160

[glicose] g/L
Grfico 21. Soluo para determinao de Ks e mx.

Pela anlise do grfico obtemos o valor de S*=110 g/L, que a concentrao

onde ocorre a inibio e x = mx= 0,29 h-1. Utilizando a equao da cintica de
Monod obtm-se o valor de Ks.
[ ]
[ ]

25


( )
( )

Matematicamente os valores de Ks e Ki so 0, porm na prtica isso no

acontece.

CONCLUSO

A partir deste experimento laboratorial pode-se concluir que at a

concentrao de 120 g/L de glicose as clulas apresentaram um crescimento
constante, sendo inibidas na sequencia devido a maiores concentraes de glicose
no meio.
Matematicamente o valor de Ks encontrado foi igual a zero, sendo isto
considerado um erro, que possivelmente ocorreu devido algum problema na
medio da densidade tica. O crescimento das clulas poderia ser maior durante o
experimento se o meio ficasse sobre constante, atingindo possivelmente o resultado
esperado, porm como o meio permaneceu parado, a produo de etanol a partir
desta cepa seria o acontecimento mais provvel.

REFERNCIAS

FERREIRA, VERONICA. Produo de -glucosidase em Saccharomyces

cerevisiae recombinante e avaliao de seu emprego no processo de hidrlise
enzimtica simultnea fermentao para a produo de etanol de segunda
gerao. Escola de Qumica. Ps-Graduao em Tecnologia de Processos
Qumicos e Bioqumicos. Rio de Janeiro. 2010.
NEVES,
L.C.M.
Reviso
Bibliogrfica.
2006.
Disponvel
<file:///C:/Users/CentraLLNet%C2%AE/Documents/RevisaoBibliografica.pdf>.
Acesso em: 29 de out. de 2014.

em:

SCHMIDELL, W. et al. Biotecnologia Industrial. [S.l.]: Editora Edgard Blcher Ltda,

v. II, 2001.
26

27