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TABLA DE CONTENIDO
I.
OBJETIVO .............................................................................................. .2
II.
ALCANCE .............................................................................................. .2
III.
RESPONSABILIDADES ........................................................................ .2
IV.
PARAMETROS DE VALIDACIN 2
V.
METODOLOGIA...3
VI.
CRITERIOS DE ACEPTACION..7
VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS..8
VIII.
ANEXOS......8
Elabor
Nombre: Perla Ivonne Hernndez Correa
Firma:
Fecha:14/08/20014
Revis: Supervisor
Nombre: Sal de Jess Daz Ramrez
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Fecha:16/08/2014
Autoriz: Asesor
Nombre: Hernan I. Cortes
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Fecha:
I.
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OBJETIVO
II.
ALCANCE
Este protocolo de validacin es aplicable al mtodo analtico para la determinacin de cido acetil
saliclico en orina mediante espectrofotometra UV.
lll. RESPONSABILIDADES
Es responsabilidad del asesor del mdulo del Laboratorio de Biofarmacia del rea de Farmacia
clnica autorizar el presente protocolo.
El supervisor es responsable de la realizacin, revisin y aplicacin de este protocolo. As como
de supervisar que cada actividad indicada en este documento se lleve a cabo conforme lo indicado
en este documento.
Los qumicos analistas tienen la responsabilidad de conocer y aplicar los procedimientos para la
validacin del mtodo analtico conforme lo indica este protocolo.
Linealidad
Precisin (Repetibilidad y Reproducibilidad)
Exactitud
Lmite de cuantificacin
Lmite de deteccin
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Nombre: Perla Ivonne Hernndez Correa
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V. METODOLOGA
Mtodo analtico a validar: Ver anexo 1
Reactivos
Fe (NO3)3
HNO3
HCl
HgCl2
Equipos
Centrifuga
Instrumentos
Espectrofotmetro UV
ml de orina diluida
(aadir con bureta)
Concentracin
(g/ml)
-----------------------10
Blanco
0.1
9.9
10
0.5
9.5
50
1
9
100
2
8
200
3
7
300
5
5
500
TABLA 1. Soluciones para la curva estndar.
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2. PRECISION
Preparar por quintuplicado las soluciones a utilizar como muestras control de acuerdo a la
siguiente tabla:
Muestra
control
MCB
MCM
MCA
ml de la solucin patrn
de salicilato de sodio en
orina o agua (1000
g/ml)
ml de orina diluida o
agua (aadir con
bureta)
Concentracin
(g/ml)
-----------------------0.3
2.5
4.0
10
9.7
7.5
6
Blanco
30
250
400
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2.1 REPETIBILIDAD
Analizar en un mismo da al menos por quintuplicado las siguientes muestras control MCB,
MCM y MCA.
Con los datos obtenidos de las muestras control de calidad en orina, interpolar las
absorbancias de la curva de calibracin promedio para obtener los valores de la concentracin
experimental, evaluar la Repetibilidad calculando el CV% y DEA%.
Muestra
Control Bajo
(30 g/ml)
1
2
3
4
5
Promedio
D.E.
C.V. (%)
Conc. Nominal (g/ml)
DEA %
30
Control Medio
Control Alto
(250 g/ml)
(400 g/ml)
Concentracin recuperada (g/ml)
250
400
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Equiop
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Control Bajo
(30 g/ml)
Control Medio
Control Alto
(250 g/ml)
(400 g/ml)
Concentracin recuperada (g/ml)
Equipo 1
Equipo 2
Promedio
D.E.
C.V. (%)
Conc. Nominal (g/ml)
DEA %
30
250
400
3. EXACTITUD
De los datos de repetibilidad y reproducibilidad calcular la desviacin de la concentracin
obtenida respecto al valor nominal (% de desviacin) empleando la siguiente ecuacin:
Concentracin adicionada Concentracin obtenida
% desviacin =
Concentracin adicionada
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Vl CRITERIOS DE ACEPTACIN
Parmetro
Criterio de aceptacin
Repetibilidad
Reproducibilidad
Exactitud
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VII. REFERENCIAS
VIII. ANEXOS
Anexo 1: METODO ANALITICO PARA LA DETERMINACIN DE ACIDO ACETIL SALICILICO
EN ORINA
Reactivo Trinder (para desarrollo de color):
Pesar con exactitud 4 g de cloruro mercrico, colocarlos en un matraz volumtrico de 100
ml, disolver en 12 ml de una solucin 1N de cido clorhdrico y disolver, ya disuelta la
mezcla aadir 4 g de nitrato frrico nonahidratado pesados con exactitud, mezclar y diluir
con agua destilada hasta el aforo.
Procedimiento:
En un tubo de centrifuga colocar 1 ml de muestra (utilice las soluciones de cada una de las
curvas y muestras control, tanto de agua como de orina) y utilizando una bureta adicionar 5
ml del reactivo de trinder para desarrollo de color. Agitar la muestra en vrtex durante 1 min.
Determinar la absorbancia utilizando un espectrofotmetro y celdas de cuarzo de 1 cm de
paso ptico a una longitud de onda de 540 nm, ajustando a cero con su blanco
correspondiente (orina diluida 1:10 o agua destilada segn el caso), preparando a las
mismas condiciones que la muestra.
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Linealidad del
mtodo
Repetibilidad
Reproducibilidad
Exactitud
Criterio de aceptacin
Resultados
Decisin
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