DETERMINACION CUALITATIVA DE BENZODIACEPINAS

I.

INTRODUCCIN:
Las benzodiacepinas son frmacos de tipo psicotropico que actan a nivel de SNC.
Estn estos frmacos implicados en circuitos catecolaminrgicos, colinrgicos o
serotoninrgicos, pero su principal actividad es actuar amplificando las
inhibiciones mediadas por el GABA en el SNC.
Con respecto a sus efectos y uso, son variados destacando el tratamiento de la
ansiedad, insomnio, epilepsia, procesos invasivos y/o quirrgicos menores como
endoscopia, procedimientos dentales, entre otros.
Cuando las benzodiazepinas se unen, en una neurona postsinptica, al Rc GABA A
(que es un canal inico controlado por ligando), este permite la entrada de mayor
cantidad del anin cloro (Cl - : es un elemento de carga negativa) a la clula. Al
entrarcloro a la neurona, esta se hiperpolariza (se vuelve ms negativa) y se aleja de
la carga que necesita para poder comenzar su actividad elctrica como manera de
llevar la informacin hacia la siguiente sinpsis. Otra manera de decirlo es que la
hiperpolarizacin aleja a la neurona de su umbral de disparo.
Las muertes por BZD son extremadamente raras, a no ser que se ingieran con otros
frmacos como barbitricos, etanol y antidepresivos. Para identificar si una persona
ha consumido o no Benzodiacepinas se realiza un anlisis toxicolgico realizando un
screening toxicolgico en muestras biolgicas (orina), consistente en una
investigacin o anlisis general que tiene por finalidad confirmar o descartar la
presencia de sustancias toxicas.
Para la obtencin del extracto seco, el proceso de extraccin que se realiza es por
decantacin, este proceso se puede repetir varias veces para tener un mejor
producto luego a este se le aplica un mtodo de investigacin como CCF .

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CURSO: TOXICOLOGIA II
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La cromatografa es una tcnica que consiste en la separacin de una mezcla de dos

o ms compuestos Todas las tcnicas cromatogrfica dependen de la distribucin de
los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada
tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en
relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un
lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un
METABOLISMO:
Las benzodiazepinas se metabolizan a travs del sistema microsomal heptico donde
sufren procesos de desmetilacin e hidroxilacin (reacciones de fase I) para formar
productos farmacolgicamente activos. Estos a su vez son posteriormente
conjugados con cido glucurnico (reaccin de fase II) para formar metabolitos ms
hidrosolubles, que son inactivos desde el punto de vista farmacodinmico y son
excretados rpidamente por la orina. Tanto el oxazepam como el temazepam y el
lorazepam no sufren reacciones de fase I y son directamente conjugados con cido
glucurnico para formar metabolitos inactivos.
Esto tiene importancia clnica para los pacientes con hepatopatas crnicas como
cirrosis, o en pacientes ancianos, donde las reacciones de fase I son las ms
afectadas. Por otra parte, la glucuronizacin no es patrimonio exclusivo del hgado.
En estos pacientes, entonces, ser conveniente usar drogas que solo sufren
conjugacin con cido glucurnico como oxacepam, lorazepam o temazepam para
evitar los efectos adversos producidos por la acumulacin con el uso de otras
benzodiazepinas.

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II.

OBJETIVO:

Determinacin de y benzodiacepinas en orina.

III.

MATERIAL Y PROCEDIMIENTO:

Materiales:

Tubos de ensayo.

Vaso de precipitacin.

Probeta

Luna Reloj

Pipetas.

Varilla de agitacin

Probeta.

Capilares

Papel tornasol

Reactivos:
REACTIVOS EXTRACTO SECO :
10 ml Cloroformo
5ml NH4OH al 10 %,
10 ml metanol,
Agua Destilada,
2ml Acetona
Solucin de dragendorff

Muestra biolgica:

Orina

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PROCEDIMIENTO:

PROCEDIMIENTO: OBTENCION DEL EXTRACCTO SECO.

1. Se toma 5 ml mL de orina en un tubo de ensayo y se toma el PH de la

muestra
2. le agregamos 2 ml mL NH4OH al 10 % para alcalinizar hasta que la muestra
tenga un PH de 8 a 8.5 y obtener metabolitos txicos en medio bsico
3. Agregamos 5 ml de cloroformo a la mezcla suavemente y se deja separar.
4. Despus de separar las fases extraemos la fase orgnica y se coloca en un
vial previamente rotulado.
5. Seguidamente se coloca a desecar los productos obtenidos.

INVESTIGACION EN CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

1. Luego de haber desecado la muestra, se agrega el diluyente por las paredes

del vial que el extracto seco.
2. Seguidamente en la placa cromatografa previamente cortada y rayada se
realiza el sembrado con un capilar.
3. Esta placa se coloca en el vaso de precipitado que contiene el medio
(metanol) para realizar el corrido se tapa para evitar la evaporacin del
medio.
4. Se espera que el solvente recorra el 80 % de la placa.
5. Luego se retira la placa y se deja secar.
6. Despus de haber secado la placa cromatografca se procede a realizar el
revelado
7. El revelador se coloca en un spray para revelar

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8. Luego aplicar con el spray el revelador Dragendorff en la capa

cromatogrfica
9. Luego se observa : si hay presencia o no de BZD (positivo forma de media
luna y se manifiestan como manchas de color naranja intensa sobre un
fondo naranja ms claro)

PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIN DEL DILUYENTE

Metanol 2ml : Acetona 2mL

SEMBRADO DE LA PLACA CROMATOGRFICA

Acetona 2mL + Metanol 2mL Extracto seco + diluyente Placa Cromatogrfica

Sembrado de la Placa Cromatogrfica Colocamos el sembrado en el medio
Esperamos el 80 % recorrido de la placa Sacamos la placa del medio y dejamos
secar Luego de aplicar el spray con el revelador no se observ manchas de
naranja intenso en forma de media luna que indica para de BZD solo se observ
un fondo color naranja claro.

DISCUSION
La muestra biolgica (orina) es vlida para la identificacin de posibles metabolitos
txicos. El mtodo Screening para determinacin de BZD es vlido, sin embargo el
resultado obtenido en la prctica fue negativo esto se debe a diversos factores como:

La muestra estuvo contaminada

Se utilizo muestra de orina conteniendo midazolan

Los materiales utilizados estuvieron

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El midazolam, tras su administracin en bolo, tiene un comienzo de accin

rpido (5-15 minutos si es i.m.) y duracin de entre 1-2 horas. En general,
puede desarrollarse tolerancia, dependencia y la aparicin de sndrome de
deprivacin, que es ms frecuente cuando se usan en infusin prolongada
benzodiacepinas de corta duracin.

Las BZD se metabolizan en el hgado, y su metabolitos (que pueden ser activos

o no) se excretan por rin. El midazolam sufre oxidacin microsomal
heptica, que se ve afectada por la edad, patologa heptica o la presencia de
otras drogas. La vida media del midazolam es de unas 2.5 horas tras una nica
administracin en bolo, aunque estn recogidos en la literatura valores muy
variables, segn la edad, patologa de base, duracin de administracin.
La CCF es una tcnica analtica y tiene como objetivo el anlisis de una mezcla de
componentes, se desarrolla rpidamente debido a su simplicidad y velocidad, para el
anlisis cualitativo de los productos de una reaccin, puesto que permite conocer de
manera rpida y sencilla los componentes que hay en una mezcla. El Rf se puede
determinar para cada una de las manchas el valor de Rf (factor de retencin), o la
distancia que cada compuesto se desplaza en la placa. Cada compuesto tiene un Rf
caracterstico que depende del disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada,
pero es independiente del recorrido del disolvente. De esta manera se puede ayudar a
identificar un compuesto en una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto
conocido (preferiblemente cuando se hacen eluir en la misma placa de CCF).
Las benzodiazepinas responden a una cintica bicompartimental. Una vez que la droga
ingres al organismo se distribuye por el plasma y otros tejidos bien perfundidos como el
sistema nervioso central (SNC) donde alcanza concentraciones similares a las del plasma,
buscando un equilibrio de concentracin. En esta primera fase, denominada fase a, el
mayor porcentaje de la disminucin de la droga en plasma corresponde a su distribucin
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constituyendo la metabolizacin un porcentaje mnimo. Transcurrido un determinado

tiempo, la concentracin en plasma disminuye al punto que equipara a la de los tejidos
perifricos. Es entonces cuando la eliminacin del compartimento central (plasma)
depende fundamentalmente de los procesos de metabolizacin y excrecin de la droga.
A este segundo momento se lo denomina fase b. Es importante recalcar que cuando una
benzodiazepina se administra en dosis nica, la velocidad con la que esta ingrese a
biofase (latencia de accin) y se elimine de este compartimento (duracin de accin)
depende fundamentalmente de la fase a. Por lo tanto, aquellas drogas que sean ms
liposolubles tendrn una latencia menor y a la vez una duracin de accin tambin
menor por pasar con ms facilidad las barreras biolgicas.
Los compuestos glucuronizados se eliminan fcilmente por filtracin glomerular.

CONCLUSIN:
La determinacin de psicofrmacos en orina se solicita frecuentemente a los pacientes
que ingresan en centros de emergencia con signos y sntomas toxicolgicos o que se
sospecha los han utilizado, pero tambin se requiere dentro de controles laborales (tanto
ingresos como exmenes rutinarios o aleatorios) y finalmente para el seguimiento de
pacientes en tratamiento por el empleo de drogas de abuso. Esta determinacin presenta
una serie de particularidades legales y analticas.
Los mtodos detecta e identifica benzodiacepinas en orina.

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1.- Aspectos analticos de la determinacin de drogas en fluidos biolgicos. Snchez

Bruzon, J. Tcnicas bsicas. Especialmente cromatografas. The Journal of Analytical
Toxicology. Publicacin donde se recogen los ms importantes trabajos en toxicologa
analtica en el mbito mundial.
2.- Clarke aislamiento e identificacin de drogas en los productos farmacuticos, fluidos
corporales y materiales post-mortem. Segunda edicin. La prensa farmacutica - 1986.
Compendio de propiedades fsicas y qumicas de drogas y medicamentos.
3.- Soriano Garca Jorge Luis, Lima Prez Mayt, Batista Albuerne Noyde, Febles Cabrera Reimer, Morales
Morgado Dunia. Midazolam en la sedacin paliativa terminal de pacientes con cncer. Rev cubana med
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2011

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[citado

2014

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04] ;

50(4): 359-375.

Disponible en:

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4.- Celis-Rodrguez E., Besso J., Birchenall C., Cal M.. de la, Carrillo R., Castorena G. et al . Gua de
prctica clnica basada en la evidencia para el manejo de la sedo-analgesia en el paciente adulto crticamente
enfermo. Med. Intensiva [revista en la Internet]. 2007 Nov [citado 2014 Oct 05] ; 31(8): 428-471. Disponible
en: http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0210-56912007000800003&lng=es.

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