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PRIMER TALLER INTERNACIONAL DE BIORREMEDIACIN

EMPLEO DE BACTERIAS AUTCTONAS PARA LA


BIORREMEDIACIN DE EFLUENTES LQUIDOS Y
AGUAS CONTAMINADAS

Alfredo Gallego
Ctedra de Higiene y Sanidad
Facultad de Farmacia y Bioqumica
Universidad de Buenos Aires

GESTIN DE LOS COMPUESTOS QUMICOS


Ms de 100.000 compuestos
qumicos existentes
Un 10% se emplea en volmenes
superiores a las 10 toneladas
anuales
Llegan al ambiente durante su
produccin, transporte, empleo
o disposicin
En algunos casos se desconoce
su efecto en el ambiente

GESTIN DE LOS COMPUESTOS QUMICOS


ACUERDOS MULTILATERALES AMBIENTALES
Convenio de Basilea sobre el Control de los Movimientos
Transfronterizos de los Desechos Peligrosos y su Eliminacin
(1992)
Convenio de Rotterdam sobre el Procedimiento de
Consentimiento Fundamentado Previo Aplicable a Ciertos
Plaguidas y Productos Qumicos Peligrosos Objeto de
Comercio Internacional (2004)
Convenio de Estocolmo sobre Contaminantes Orgnicos
Persistentes (2004)

Enfoque Estratgico para la Gestin de Productos Qumicos a


Nivel Internacional (Objetivo 2020)

Ley N 24051 de Residuos Peligrosos


Decreto reglamentario 831/93
Uso agrcola

Suelos

Residencial
Industrial

Niveles gua para

Aire

Aire ambiental
Emisiones gaseosas

Fuente de bebida humana


Proteccin de la vida acutica

Agua

Irrigacin
Bebida para ganado

Pesca industrial
Recreacin

COMPUESTOS
CONTROLADOS

CONTAMINANTES
EMERGENTES

Clorofenoles

Medicamentos

Nitrofenoles
Herbicidas

Insecticidas
Solventes halogenados
Metales pesados

VAS DE ENTRADA DE LOS CONTAMINANTES

PRODUCCIN

PRODUCTOS

RESIDUOS

CONSUMIDOR

TRATAMIENTO DE
RESIDUOS
MUNICIPALES

TRATAMIENTO DE
RESIDUOS
INDUSTRIALES

CONTAMINANTE

REMEDIACIN
Tratamiento para reducir la contaminacin

CLASIFICACIN DE LAS TECNOLOGAS


EMPLEADAS EN REMEDIACIN
En base a:

La remocin o no de la
matriz contaminada

Ex situ
In situ

Procesos Fsico-qumicos
La naturaleza del proceso
empleado
Procesos Biolgicos

PROCESOS BIOLGICOS

VENTAJAS
Bajo costo
Degradacin completa a CO2 y H2O (Mineralizacin)
No afecta la flora y fauna del lugar

BIORREMEDIACIN
ES EL USO INTENCIONAL DE LOS PROCESOS DE
BIODEGRADACIN PARA ELIMINAR CONTAMINANTES
AMBIENTALES DE LOS SITIOS DONDE ELLOS SON O HAN
SIDO LIBERADOS INTENCIONAL O INADVERTIDAMENTE

BIORREMEDIACIN
Aplicacin de organismos vivos para:

Degradar (Biodegradacin)

Transformar (Biotransformacin)
Separar (Bioadsorcin)

BIORREMEDIACIN

INOCULACIN

MICROORGANISMOS
ESPECFICOS

BIOESTIMULACIN

NUTRIENTES
AIREACIN
SUSTRATO

EL COMPUESTO ES EMPLEADO COMO


FUENTE DE CARBONO Y ENERGA

TRANSFORMACIN INICIAL PARA PODER


INGRESAR A LAS VAS CATABLICAS

COMPUESTOS

BIOGNICOS
ESTRUCTURA
SEMEJANTE A LOS
COMPUESTOS
SINTETIZADOS POR
LOS SERES VIVOS

XENOBITICOS
ESTRUCTURAS O
SUSTITUYENTES
DISTINTOS A LOS
ENCONTRADOS EN LA
NATURALEZA

Cmo predecir la biodegradabilidad?


ASPECTOS BIOQUMICOS
TIPO DE SUSTITUYENTE

XENFOROS: CL, NO2, Br, SO3H

NMERO DE SUSTITUYENTES
POSICIN DE LOS SUSTITUYENTES
NMERO DE ANILLOS AROMTICOS
RAMIFICACIN DE CADENAS

ASPECTOS FISICOQUMICOS
COEFICIENTE DE PARTICIN OCTANOL / AGUA
PUNTO DE FUSIN / EBULLICIN
RADIO DE VAN DER WAALS
s HAMMET

Cmo predecir la biodegradabilidad?

COMPUESTO
BIODEGRADABLE

COMPUESTO
BIODEGRADADO

PRESENCIA DEL MICROORGANISMO

CONCENTRACIN Y DISPONIBILIDAD DEL


COMPUESTO

CONDICIONES FAVORABLES DEL MEDIO AMBIENTE

BIODEGRADACIN

Microorganismos
autctonos

Naturalmente presentes en
ambientes contaminados

Microorganismos
genticamente modificados

Mayor impacto
ambiental

OBJETIVO GENERAL

Seleccionar comunidades microbianas


autctonas capaces de degradar y
detoxificar compuestos txicos y
persistentes en el ambiente con el fin de
aplicarlos para la biorremediacin de
efluentes lquidos y aguas contaminadas

ESQUEMA DEL TRABAJO

Aguas superficiales contaminadas

Seleccin de comunidades degradadoras

Aislamiento

Identificacin

ESQUEMA DEL TRABAJO

Aislamiento

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Influencia de
distintos factores

Concentracin

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Influencia de
distintos factores

pH

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Influencia de
distintos factores

Tamao del inculo

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Influencia de
distintos factores

Presencia de otros
compuestos

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Influencia de
distintos factores

Adaptacin

ESQUEMA DEL TRABAJO


Aislamiento

Ensayos de
Biodegradacin

Reactor batch

Reactor continuo

ESQUEMA DEL TRABAJO

Ensayos de
Biodegradacin

ESQUEMA DEL TRABAJO

Ensayos de
Biodegradacin

Evaluacin de la
Biodegradacin

ESQUEMA DEL TRABAJO

Evaluacin de la
Biodegradacin

ESQUEMA DEL TRABAJO


Evaluacin de la
Biodegradacin

Evaluacin del
crecimiento
bacteriano

Evaluacin de la
degradacin del
compuesto

Evaluacin de la
toxicidad

Espectrofotometra UV

Bioensayos
estandarizados

DQO

Vibrio fischeri
Pseudokirchneriella
subcapitata

Recuento en placa
Microscopa electrnica
de barrido

Cromatografa
gaseosa
Electroforesis
capilar

Daphnia magna
Lactuca sativa

ESQUEMA DEL TRABAJO


Compuestos estudiados
2-clorofenol

p-cloroanilina

2,4-diclorofenol

2,4-D

2,4,6-triclorofenol

MCPA

m-nitrofenol

Ibuprofeno

o-, m- y p-cresol

Cloruro de
benzalconio

cido 3-clorobenzoico

Seleccin de microorganismos
Muestras de aguas superficiales

Enriquecimiento en medio mnimo


+ compuesto en estudio

Evaluacin del desarrollo bacteriano y la


degradacin del compuesto

Determinacin de la viabilidad

Subcultivos
sucesivos

Aislamiento
de cepas
degradadoras

Nuevo
subcultivo

Descartar

Ensayos de biodegradacin
Reactor batch
ADAPTACIN
Frasco Erlenmeyer + 100 mL medio mnimo
Incubacin a 28 C en
bao termostatizado
con agitacin planorotatoria

Microfermentador New Brunswick Multigen TA


Volumen efectivo 1250 mL
28 C - agitacin (200 rpm) aireacin
Medio mnimo + compuesto en estudio

Evaluacin de la
biodegradacin

Ensayos de biodegradacin

Reactores continuos

Reactor de lecho fluidizado


con recirculacin
Reactor de lecho fijo y flujo
ascendente
Reactor de lecho fijo y flujo
descendente

Reactor de lecho fluidizado


con recirculacin
Tubo de acrlico 152 x 9,2 cm

Aireacin

Relleno: Carbn activado granular


Volumen efectivo: 6 L
Salida

Caudal de entrada: 6 L/da


Caudal de recirculacin: 4 L/min

Relleno
Carbn activado
granular

Entrada

Recirculacin

Lquido residual sinttico:


Agua potable libre de cloro
+ fertilizante agrcola (N:P:K 10:2:6)
+ compuesto en estudio

Reactor de lecho fijo y flujo


ascendente
Recipiente de PVC 50 x 14 cm
Relleno: Cilindros de PVC (15 x 15 mm)
Volumen efectivo: 7,7 L
Caudal de entrada: 2-3 L/da
Flujo por goteo por diferencia de
presin hidrosttica

Lquido residual sinttico:


Agua potable libre de cloro
+ fertilizante agrcola (N:P:K 10:2:6)
+ compuesto en estudio

Relleno: Cilindros de PVC

Reactor de lecho fijo y flujo


descendente
Tubo de PVC 100 x 10 cm
Relleno: Cilindros de PVC
Volumen efectivo: 7,8 L
Caudal de entrada: 2-5 L/da
Flujo por goteo

Lquido residual sinttico:


Agua potable libre de cloro
+ fertilizante agrcola (N:P:K 10:2:6)
+ compuesto en estudio

BIOENSAYOS DE TOXICIDAD
Vibrio fisheri

Pseudokirchneriella subcapitata

Daphnia magna

Lactuca sativa

RESULTADOS

Degradacin de 2-clorofenol (100 mg/L) por


una cepa autctona de Achromobacter sp.

100

75
8
50
7
25

% 2-Clorofenol remanente

Crecimiento bacteriano (Log UFC/mL)

Reactor batch

10

20

30

40

Tiempo (h)

Eficiencia de remocin de compuesto/DQO: 97,5 / 91,6

Degradacin de 2-clorofenol (200 mg/L) por


una cepa autctona de Achromobacter sp.

C onc entr acin 2- Cl or ofenol (m g/L)

Reactor continuo de lecho fluidizado

300

200

100

0
30

60

90

120

Das de operacin

Eficiencia de remocin de compuesto/DQO: 99,9 / 94,9

Microfotografas del relleno del reactor

5 mm

2720 x

10 mm

2080 x

Evaluacin de la toxicidad
Reactor continuo
Achromobacter sp.
2-clorofenol 200 mg/L

CE 50 (%v/v)

INICIAL

FINAL
>90

75
50
25
5,5
0

Daphnia magna

Degradacin de Cloruro de Benzalconio (500 mg/L) por


una cepa autctona de Pseudomonas sp.
Reactor batch
100

50
7

10

20

30

40

Tiempo (h)
Eficiencia de remocin de compuesto/DQO: 98,0 / 89,1

0
50

% BKC remanente

Crecimiento bacteriano
(Log UFC/mL)

Degradacin de Cloruro de Benzalconio (100 mg/L) por


una cepa autctona de Pseudomonas sp.
Reactor continuo
140

Concentracin (mg/L)

120
100
80
60
40
20
0
0
Entrada
Salida

10

20

Das de
30
40
50
operacin

60

70

Eficiencia de remocin de compuesto/DQO: 99,5 / 95,0

Microfotografas del relleno del reactor

500mm

1 mm

5mm

Evaluacin de la toxicidad
Reactor continuo
INICIAL

>90 >90 >90

75
CE50 (%v/v)

FINAL

50

50
25
CE (%v/v)
0,2
0

1,0

0,1

Vibrio fischeri
Pseudokirchneriella subcapitata
Lactuca sativa

Degradacin de p-cloroanilina por una


comunidad bacteriana autctona

Pseudomonas sp.
Achromobacter sp.
Sphingopyxis sp.

Degradacin de p-cloroanilina por una


comunidad bacteriana autctona

Degradacin de p-cloroanilina por una


comunidad bacteriana autctona

Biodegradacin

Concentracin (mM)

0.30

Influente

Nitrificacin

Efluente

0.26

0.26

0.20

Efluente
0.26

0.18

Denitrificacin
Efluente
0.26

0.18

0.10

0.00
PCA

Cloruro

Amonio

Nitrato

Microfotografas del relleno del reactor

Evaluacin de la toxicidad
INICIAL

>90 >90 >90

75
CE50 (%v/v)

FINAL

50

50
22,0
25
16,0
14,4
CE (%v/v)
0

Vibrio fischeri
Pseudokirchneriella subcapitata
Daphnia magna

Seleccin de bacterias degradadoras de


ibuprofeno a partir de aguas superficiales

Ensayo respiromtrico
Agua superficial + Ibuprofeno 20 mg/L

Seleccin de bacterias degradadoras de


ibuprofeno a partir de aguas superficiales

Ibuprofeno
Control

Seleccin de bacterias degradadoras de


ibuprofeno a partir de aguas superficiales

Cultivo en medio
Mnimo con el compuesto
como nica
fuente de carbono

28C - Agitacin

Seleccin de bacterias degradadoras de


ibuprofeno a partir de aguas superficiales

Puntos a partir de los que se seleccionan bacterias

CONCLUSIONES
El empleo de bacterias y comunidades bacterianas
autctonas es una alternativa eficiente y econmica
para el tratamiento de efluentes y la biorremediacin de
aguas contaminadas con compuestos persistentes

MUCHAS GRACIAS

agallego@ffyb.uba.ar