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Travaux Pratiques de Microscopie


TPM-2
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Coloration au May-Grnwald-Giemsa (Pappenheim)

Gnralits.
Le sang, tissus noble de notre organisme peut nous apporter de nombreux renseignements sur notre
tat de sant.
Nombreux d'entre-nous avons t (ou serons) confronts une feuille de rsultats de laboratoire
comportant une analyse appele Numration Formule Sanguine.(NFS)
La NFS comprend une Numration et une Formule.
La Numration sanguine consiste compter le nombre des lments figurs du
sang (Globules).
Le rsultat est exprim en lments par mm3 (millimtre cube).

Hmaties....................

4 500 000

5 000 000

/ mm3

Leucocytes..................

6 000

8 000

/ mm3

Plaquettes ..................

200 000

300 000

/ mm3

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La Formule sanguine donne la proportion de chacun des types de globules


blancs.
Polynuclaires neutrophiles

55

75

Polynuclaires osinophiles

0.5

20

35

6 - 10

Polynuclaires basophiles
Lymphocytes (Petits + Grands)
Monocytes

Les NFS sont habituellement effectues par des automates de laboratoire, mais l'tude fine des
Formules sanguines se fait au microscope aprs coloration au May-Grndwald-Giemsa (MGG).

C'est la Coloration Panoptique de Pappenheim.

Matriel.
Microscope biologique.
Prlvement sanguin.
Lames dgraisses. Ou lamelles
Pince lames
Pissette d'eau neutre.
COLORANTS
May-Grnwald pur RAL
Giemsa-R RAL dilu au 1/10

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Giemsa-R RAL dilu au 1/10


Giemsa-R ........... 3 gouttes
Eau neutre ...........2 ml

Tampon phosphat pH 7 (*AV)

Phosphate monopotassique 1 g
Phosphate disodique 5 g
Eau distille 5000 ml

Protocole.

1. PRLVEMENT.
Le prlvement au laboratoire ou en clinique se fait au vacutainer sur sang veineux avec
anticoagulant (K3 EDTA)
Pour le microscopiste amateur, pratiquer un prlvement capillaire la pulpe du doigt.
2. FROTTIS
Le frottis peut se pratiquer sur lame ou sur lamelle.
1. FROTTIS SUR LAME.
Dposer une goutte de sang de taille moyenne 1.5 cm du bord droit d'une lame
dgraisse.
taler par capillarit la goutte au contact de l'arte d'une deuxime lame rode
tenue 45 degrs.
Pousser rapidement la deuxime lame vers la gauche de la premire lame en
entranant le sang qui s'tale en une couche mono cellulaire (Frottis).
Si la goutte de sang est de taille convenable, le frottis doit se terminer 1 cm
environ du bord gauche de la lame.
Variante: on peut remplacer la deuxime lame par une lamelle couvre objet.
2. FROTTIS AVEC LAMELLES.
Dposer une goutte de sang capillaire sur une lamelle couvre objet.
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Poser une deuxime lamelle sur la goutte de sang 45 degrs de la premire.


Tirer rapidement sur un angle de la lamelle suprieure en maintenant la lamelle
infrieure avec l'autre main.
3. DESSICCATION.
Le frottis sche rapidement l'air a l'abri des poussires.
4. COLORATION au MGG.
1. Coloration sur lame
Dposer 10 15 gouttes de May-Grnwald sur le frottis et couvrir pour viter
l'vaporation. Pendant 3 mn. C'est la Fixation.
Dposer 10 15 gouttes d'eau tamponne et mlanger par rotation de la lame. 1 mn
goutter
Recouvrir de Giemsa dilu 15 mn. C'est la coloration.
goutter
Laver l'eau neutre.
Scher au papier Joseph.

2. Coloration sur lamelles


La coloration est identique la coloration sur lame mais on dispose les lamelles dans un
verre de montre.

3. Coloration en cuve
La coloration dans des cuve est lgrement diffrente de la coloration sur lame.
Elle est prcde par une tape de fixation dans l'alcool.
La deuxime cuve contient le May-Grnwald dilu 50%

5. EXAMEN.
Examen l'objectif 40 X hmatologie ou
Examiner l'immersion 100 X et oculaires faibles
Dplacer la lame en faisant des "crneaux" pour ne pas repasser au mme endroit.
Compter 100 leucocytes (ou mieux 200 ) ce qui donne immdiatement le rsultat.
Au laboratoire on utilisera un compteur de cellules.
6. CONSERVATION DES FROTTIS.

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6. CONSERVATION DES FROTTIS.


Les frottis aprs examen l'immersion sont couverts d'huile qui a tendance d'abord
ramasser poussires et fibres puis scher. De ce fait un r-examen ultrieur de la lame est
rendu difficile. Son nettoyage au xylne n'est pas satisfaisant.
Une bonne habitude consiste dposer une grosse goutte d'huile de cdre sur le frottis et de
poser par dessus une ou deux grosses lamelles contigus.
Au bout de quelques jours le frottis est transform en prparation permanente qui se
conserve indfiniment. La prsence de lamelle malgr son paisseur ne nuit pas la mise au point
lors d'un futur examen l'immersion.

RSULTATS

GNRALITS SUR L'HMATOPOSE.


L'Hmatopose est l'ensemble des processus biologiques ( diffrenciation,
transformation, maturation ) aboutissant la prsence d'lments figurs dans le sang
(diabase). Cette succession de transformations pour chacun des lments figurs
constitue une ligne.
La Mylopose .C'est la fabrication des cellules mylodes c'est dire qui ont leur
ligne dans la moelle osseuse. Elle concerne les hmaties, les polynuclaires*, les
monocytes et les plaquettes.
l'Erythropose est la formation des globules rouges.
La Granulopose est la fabrication des
polynuclaires neutrophiles
monocytes
polynuclaires osinophiles
polynuclaires basophiles
La ligne Mgacaryoblastique aboutit aux plaquettes.

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La Lymphopose C'est la fabrication des cellules lymphodes c'est dire qui ont
leur ligne dans la lymphe et les ganglions lymphatiques. Elle concerne les
Lymphocytes.
*Les polynuclaires (granulocytes) n'ont qu'un seul noyau mais il est polylob

Le Polynuclaire Neutrophile

1. Origine:
2.

Prcd dans la moelle osseuse par le Myloblaste,Promylocyte


neutrophile Mylocyte neutrophile et Mtamylocyte neutrophile.
Description:
Taille: 12-14 arrondi.
Noyau: Polylob 2-6 lobes (2-3 les plus nombreux)
Cytoplasme: clair acidophile
Granulations: neutrophiles violettes rgulires tes fines et
nombreuses

4 PN + Lymphocyte

Le polynuclaire Eosinophile

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1. Origine:
2.

Prcd dans la moelle osseuse par le Myloblaste,Promylocyte,


osinophile Mylocyte osinophile et Mtamylocyte osinophile.
Description:
Taille: 12-14 arrondi.
Noyau: 2-3 lobes
Cytoplasme: clair,acidophile presque pas visible recouvert par
les granulations
Granulations: acidophiles, roses, rondes,nombreuses

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Le Polynuclaire Basophile

1. Origine:
2.

Prcd dans la moelle osseuse par le Myloblaste,Promylocyte


basophile Mylocyte basophile et Mtamylocyte basophile.
Description:
Taille: 11-13 arrondi
Noyau: 2-4 lobes denses
Cytoplasme: acidophile clair
Granulations: trs nombreuses pouvant recouvrir le noyau
anguleuses bleu-violet fonc

Le Lymphocyte ( Petit )
1. Origine:

Prcd dans la moelle osseuse par le Lymphoblaste.

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2. Description:

Taille: 9-11 arrondi


Noyau: rond et dense
Cytoplasme: basophile bleu clair
Granulations: NANT

Le Grand Lymphocyte

1. Origine:

Prcd dans la moelle osseuse par le Lymphoblaste.

2. Description:

Taille: 10-15 Arrondi dformable( les bords pousent la


forme des cellules mitoyennes).
Noyau: rond ovale ou en drapeau
Cytoplasme:bleu trs clair
Granulations: quelques rares granulations azurophiles en paquet

Le Monocyte

1. Origine:
2.

Prcd dans la moelle osseuse par le Monoblaste et le Promonocyte


(Monocyte jeune)
Description:
Taille: 18-21 arrondi trs dformable
Noyau: rond ou encoch
Cytoplasme: basophile clair

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Granulations: trs fines et trs nombreuses azurophiles

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AUTRES LMENTS FIGURES


Les Hmaties (Globules Rouges) et les Plaquettes sont visibles sur les lames colores au MGG mais ne sont
pas comptabilises dans la Formule sanguine.

Hmaties (Erythrocytes, Globules Rouges, GR)


1. Origine: Prcd dans la moelle osseuse par le Prorythroblaste
2.

Erythroblaste basophile Erythroblaste polychromatophile


Erythroblaste acidophile Rticulocyte
Description:
Taille: 7.2 biconcave
Noyau: NANT
Cytoplasme: Acidophile gris-rose centre clair
Granulations: NANT(Prsence d'un rseau de chromatine
chez le Reticulocyte

Plaquettes (Thrombocytes, Globulins )


1. Origine: Prcd dans la moelle osseuse par le Mgacaryoblaste

Megacaryocyte basophile Mgacaryocyte granuleux Mgacaryocyte


thrombocytogne Thrombocyte.

2. Description:

Taille: 1-3
Noyau: NANT

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Cytoplasme:Basophile clair
Granulations: Azurophiles taille moyenne parpilles

LMENTS ANORMAUX
Certains lments de la moelle peuvent passer dans le sang soit exceptionnellement soit de manire
permanente mais ceci sort du cadre de ce chapitre.

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