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PRCTICA 1

El laboratorio de
MICROBIOLOGA

CURSO 2014-15

ORGANIZACIN DE LAS PRCTICAS


Primera parte: METODOS DE DIAGNSTICO
(Pcas 2 y 3)
Segunda parte: DETECCIN, CRECIMIENTO Y
VISUALIZACIN
* Bacteriologa (Pcas 4-7)
* Parasitologa (Pcas 8-10)
* Artrpodos (Pca 11)
Tercera parte: PROBLEMAS
* Nuevos desarrollos (Pca 12)
* Diagnstico basado en problemas (Pcas 13-16)

ORGANIZACIN DE LAS PRCTICAS


Primera parte
Objetivos:
Comprender los mtodos que se aplican en la deteccin e
identificacin de los agentes causantes de enfermedades infecciosas

MTODOS diagnstico
Dco convencional
Dco molecular

MALDITOFF
Dco inmunolgico
Otros mtodos

ORGANIZACIN DE LAS PRCTICAS


Segunda parte
Objetivos:
Capacitar en las habilidades manuales. Identificacin
y visualizacin de agentes infecciosos

Bacteriologa
Crecimiento microbiano. Microbiota saprofita.
Control de los microbios. Antibiograma.
Visualizacin de bacterias y hongos. Tinciones.
Parasitologa
Visualizacin de Protozoos.
Reconocimiento de helmintos
Artrpodos vectores y causantes de enfermedad

ORGANIZACIN DE LAS PRCTICAS


Tercera parte
Objetivos:
Exponer y discutir las innovaciones en la aplicacin de
microorganismos en la terapia de procesos clnicos
Comprender cmo realizar el diagnstico microbiolgico mediante la
resolucin de problemas.

Microbiotecnologa y Bioterapia
Discusin en base trabajos
Diagnstico Microbiolgico basado en problemas
Infecciones urinarias y digestivas
Infecciones respiratorias
Infecciones quirrgicas y traumticas
Infecciones de regiones estriles

EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA
Lugar habilitado para LA MANIPULACIN de
MICROORGANISMOS con seguridad

Riesgo biolgico

Grupos de
Nivel 1 >
Nivel 2 >
Nivel 3 >
Nivel 4 >

riesgo:
riesgo individual
riesgo individual
riesgo individual
riesgo individual

y poblacional escaso o nulo.


moderado y poblacional bajo.
elevado y poblacional bajo-medio.
y poblacional elevado.

http://www.mtas.es/insht/practice/g_biolog.htm

NIVEL 2 DE CONTENCIN

NIVEL 3 DE CONTENCIN

NIVEL 4 DE CONTENCIN

NIVEL 1

NIVEL 2

NIVEL 3

Riesgos Biolgicos: Virus


Vacunacin
Controles
postexposicin
(basal y a los 6 meses)

VHB
Antirretrovirales

VHC
VIH

Riesgos Biolgicos: Bacterias


Precauciones respiratorias:
Higiene de manos
Habitacin individual con presin negativa
Mascarilla quirrgica
Residuos biolgicos (contenedor)

Precauciones
contacto:
E. coli
poliR

Higiene de manos
Guantes

M. tuberculosis
S.aureus poliR
S.epidermidis

Riesgos Biolgicos: Parsitos


Precauciones contacto:
Guantes
Higiene de manos
Ropa y objetos personales, Lavado

Precauciones contacto:
Higiene de manos
Guantes

Cryptosporidium
parvum

Pediculus capitis

Taenia solium

Riesgos Biolgicos: Hongos


Precauciones Respiratorias:
Higiene de manos
Habitacin individual con presin negativa
Mascarilla quirrgica
Residuos biolgicos (contenedor)

Precauciones
contacto:
Higiene manos
Guantes

Limpieza y
climatizacin
Candida albicans
Histoplasma
capsulatum

Trichophyton

rubrum

Aspergillus
fumigatum

LABORATORIO DE MICROBIOLOGA CLNICA


Calidad en el diagnstico
-

PRE-ANALTICA

ANALTICA

POST-ANALTICA

Circuito muestras/ informe Laboratorio


Enfermo
Examen.Seleccin

Interpretacin Informe

Toma de muestra

Envo informe

Transporte muestra

Informe

Registro

Anlisis

FASES DEL DIAGNSTICO MICROBIOLGICO


1. Recepcin de muestras
2. Visualizacin de microorganismos
3. a) Deteccin de microorganismos o sus componentes
b) Deteccin de la respuesta del paciente

4. Aislamiento e identificacin del agente infeccioso


5. Determinacin de resistencia/sensibilidad a los
antibiticos del agente infeccioso

6. Elaboracin de informes
1. Pre-analtica; 2-5. Analtica; 6. Post-analtica

OBJETI VO DEL LABORATORI O DE


M I CROBI OLOG A CL NI CA
Informar al clnico, sobre la presencia o ausencia de microorganismos patgenos de
un determinado proceso infeccioso y su sensibilidad a los antimicrobianos.
Va a depender del conocimiento del clnico:
El tipo de muestras que debe recoger
La forma de enviarla al laboratorio para su estudio
La eleccin de la muestra depende de:
El sitio de la infeccin
La sospecha sobre la posible etiologa del proceso inf eccioso.
Principio: una muestra enviada al laboratorio de microbiologa, a su llegada, debe contener
tanto cuali como cuantitativamente los microorganismos del lugar y momento en que se
obtuvo.

AYUDAR a RESOLVER problemas de diagnstico y


tratamiento de las ENFERMEDADES INFECCIOSAS
21

MALDI-TOF MS

Matrix Assisted Laser Desorption IonizationTime Of Flight ------ Mass Spectrometry


Fuente de ionizacin
Analizador de masas
Dispositivo de deteccin

Tiempo 6 minutos
Coste

MALDI-TOF MS
PREPARACIN:
Procesamiento previo de la muestra
depende del tipo de microorganismo
a identificar >>> PARED

RESULTADO:
Patrn de picos depende de la
composicin del microorganismo.
Base de datos para cada grupo
microbiano

MUESTRA CLINICA
1.- TINCIN DE GRAM (PRCTICA 4)
Tincin simple
Tincin de cido-alcohol resistencia (PRCTICA 5)
Tincin de fluorescencia
2.- SIEMBRA en medios de cultivo (PRCTICAS 2 y 6)
* Medio slido: Agar-sangre / Agar McConkey / Agar CLED
Otros medios especficos
* Medio lquido: Medios especiales (segn agente que se sospeche)
Medio para deteccin rpida del crecimiento
3.- Otros mtodos de diagnstico (PRCTICA 3):
* PCR / sondas de hibridacin / secuenciacin
* Inmunofluorescencia
* ELISA directo / indirecto

ASPECTOS IMPORTANTES DE LA TOMA DE MUESTRA


- Recoger del sitio donde se sospecha est la infeccin
(evaluar riesgo/beneficio)

- Obtener de forma adecuada y en recipientes adecuados


* antes de instaurar tratamiento antibitico
* en recipientes estriles adecuados
- Enviar en condiciones adecuadas
(conservacin frio / seguridad)
- Analizar lo antes posible
(tiempo desde recogida a anlisis mnimo)
- Indicar el diagnstico de sospecha
(ayuda al laboratorio a saber cmo analizar)
-Indicar el posible tratamiento
(ayuda a instaurar tratamiento especfico)

MUESTRA CLINICA
criterios de patogenicidad >> Tincin
Presencia de un microorganismo en una localizacin
donde no se le espera encontrar.
Predominio de un microorganismo frente al resto.

Presencia de clulas de respuesta inflamatoria.

Tomar la muestra SIEMPRE antes de instaurar el


tratamiento antibitico.

Visualizacin de las muestras


(PRACTICAS 4 y 5)

Hans Christian J. Gram


Ide la tincin de diferenciacin de bacterias en el ao

1884:

Coloracin de Gram

Gram positivo

Gram negativo

Diagnstico de presuncin / probable

Gram de frotis de una herida


Cocos Gram positivos intracelulares en racimos

Staphylococcus aureus

Diagnstico de presuncin / probable

Gram de esputo
Predominio de cocos Gram positivos en parejas

Streptococcus pneumoniae

CONTRIBUYE AL DIAGNSTICO DE VAGINOSIS


BACTERIANA

Frotis vaginal normal


Frotis vaginosis bacteriana

TIPO DE INFECCIONES segn el rgano/sistema AFECTADO


1.- PIEL, TEJIDOS SUBCUTNEOS. OCULARES Y DE
OIDOS.

2.- TRACTO RESPIRATORIO.


3.- TRACTO GASTRO-INTESTINAL
4.- TRACTO URINARIO.
5.- SEPTICEMIA Y ENDOCARDITIS.
6.- SISTEMA NERVIOSO CENTRAL.
7.- TRANSMISIN SEXUAL.

1.- PIEL Y TEJIDO SUBCUTNEO.

Los microorganismos de la piel soportan la sequedad y el alto


contenido de sal (7.5%). Excepciones, zonas hmedas: cuero
cabelludo, cara, oidos, axilas, ingles, perin, palmas, pies.

Microbiota: Staphylococcus, Streptococcus, Corynebacterium.

Microorganismos estan presentes en los folculos pilosos y


glndulas sudorparas (Propionibacterium acne).

Hay microorganismos transeuntes (transitorios)


Los microorganismo residentes estan en las capas
profundas de la epidermis, glandulas sebceas y folculos
pilosos.
TOMA DE MUESTRA

Hisopo o escobilln, jeringas, raspado.


Herida: Si la lesin es seca / costra es dificil hacer diagnstico.
Si hay exudado tomar muestra de zona interior.
Abscesos (mayor volumen de muestra) puncin con jeringa.

2.- TRACTO RESPIRATORIO.


Origen de las infecciones
Transmisin persona-persona (origen ms frecuente)
Origen endgeno: complicacin de otro proceso respiratorio [virus]
Zoonosis: Fiebre Q (Coxiella), Psitacosis (Chlamydia)
Ambiental: Legionelosis (Legionella).
TOMA DE MUESTRAS
Tracto Resp SUPERIOR:
Frotis exudado farngeo;
lavados (nasales farngeos).
Tracto Resp INFERIOR:
Esputo (recoger a primera
hora de la maana)
Lavados broncoalveolares /
Broncoaspirados (BAS)
Aspirado gstrico en nios
(no espectoracin)

EE II
ms frecuentes

3.- TRACTO GASTRO-INTESTINAL


Patologas Infecciosas
Gastroenteritis
Sndrome con sintomatologa
gastro-intestinal.
(nauseas, vmitos, diarrea,
molestias gastrointestinales)
Intoxicacin alimentaria
Infeccin asociada al
consumo de alimentos con
toxinas (microbianas o no).
TOMA DE MUESTRAS
Muestra de heces o frotis rectal.
(Aislar el mismo patgeno en
tres muestras)
Deteccin de toxinas.
Muestra de alimento / bebida.
Examen en fresco (descartar
parsitos)

Enfermedades infecciosas
que causan ms mortandad
en paises en desarrollo

4.- TRACTO URINARIO.


Mecanismo patognico de las infecciones
- Penetracin del patgeno por va ascendente desde la zona rectal

TOMA DE MUESTRAS
Muestra ORINA
- Miccin espontnea, recoger la
parte media de la miccin; primera
miccin de la maana.
- Puncin suprapbica.
-Sondaje permanente: La muestra se
toma por puncin y aspiracin directa
a travs de la sonda.
PROCESAMIENTO:
La infeccin urinaria >> bacteriuria
significativa.
Bacteriuria significativa: recuento de
ms de 105 ufc/ml.

Enfermedades infecciosas
frecuentemente
adquiridas en el hospital

5.- SEPTICEMIA Y ENDOCARDITIS.


DEFINICIONES
Bacteriemia: Presencia de bacterias o sus toxinas circulantes en sangre
Sepsis (Septicemia): [envenenamiento de la sangre]
Infeccin (localizada o generalizada) + respuesta generalizada
Endocarditis:
Proceso de etiologa generalmente bacteriana que se localiza en el
endocardio, en particular en la superficie de las vlvulas

Implica la presencia fsica de microorganismos en la lesin

TOMA

DE MUESTRAS
Extremar las condiciones de asepsia.
Antisepsia de la piel
Anticoagulantes sin actividad
antimicrobiana
(Antibiotic Removal Device [ARD])
VOLUMEN:
10ml adultos / 1-2 ml hasta 10 aos.
MOMENTO:
En dependencia del cuadro
Antes o durante la subida febril.

Enfermedades infecciosas
de URGENCIA diagnstica
Enfermos
ingresados
HOSPITAL
UCI
Sepsis
severa

Respiracin
asistida

6.- SISTEMA NERVIOSO CENTRAL.


Enfermedades infecciosas
de URGENCIA diagnstica

Las infecciones del Sistema


Nervioso Central son
SIEMPRE DE CARACTER
URGENTE
Los resultados del
laboratorio deben informarse
al clnico lo antes posible.
MUESTRA y PRUEBAS
MUESTRA: LCR (puncin lumbar)
Sangre
PRUEBAS:
a)Bioqumica
> nmero y tipo de clulas
> niveles de protenas
> niveles de glucosa
b) Microbiologa
> tincin y cultivo
> deteccin antgenos
> deteccin de genomas

MENINGITIS
ENCEFALITIS

7.- INFECCIONES DE TRANSMISIN SEXUAL.


Generalidades
Comnmente llamadas Infecciones de transmisin sexual, por no
haber siempre enfermedad.
El reservorio y fuente de infeccin en la mayora de ellas es la
persona enferma o portadora.
Son importantes?

Producen invalideces y secuelas


relevantes.

Vinculadas al comportamiento sexual.

Causan importantes gastos econmicos y


sociales a nivel mundial.
TOMA DE MUESTRAS
Varn: exudado uretral con hisopo (penetrar 2-3 cm)
Mujer: toma endocervical (usar espculo)
Ambos: raspado en caso de lcera.
MEDIDAS PREVENTIVAS IMPORTANTES
(control de todos los implicados)

Enfermedades
infecciosas
incontrolables(?)

TCNICAS DE LABORATORIO.
Seguimiento estricto de las prcticas y
tcnicas microbiolgicas.

39

EN EL LABORATORIO
USAR BATA
EN LA MESA SOLO
MATERIALES DE TRABAJO
SENTARNOS SOLO EN
LAS SILLAS
NO COMER, BEBER NI
FUMAR
CABELLO RECOGIDO

Procedimiento para retirada de guantes


1

LAVADO DE MANOS
EL LAVADO DE MANOS es la manera ms
simple y efectiva de prevenir la difusin de
los procesos infecciosos.
Lavar las manos:
Al llegar al trabajo.
Antes y despues de comer.
Despues de ir al cuarto de bao.
Tras retirar los guantes.
Antes de dejar el trabajo, al final de
la jornada.

Los guantes no sustituyen al lavado de


manos , proporcionan proteccin adicional.

Ms frecuentemente
olvidadas

Menos olvidadas

Distribucin de reas de la
mano olvidadas durante
el lavado de las mismas
Dorso de la mano

Palma de la mano
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LAVADO DE MANOS
DESPUES DE
TRABAJAR CON
MUESTRAS O
CULTIVOS
ANTES DE SALIR
DEL
LABORATORIO

Reunin de PATGENOS ANNIMOS

http://www.youtube.com/watch?v=5Xi2Nc1UicQ
SALVAR LAS BACTERIAS

http://www.youtube.com/watch?v=ZHxEutX_jLk&feature=related
PESTE NEGRA explicada por Ratatouille

http://www.youtube.com/watch?v=ldZ
jaT4WXrA&feature=related
SOMOS LOS MICROBIOS (Freddie Mercury)

http://www.youtube.com/watch?v=gWh8meD1VuY