PHOSPHATASES ACIDES

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr
FABRICANT :
BIOLABO SA,

Mthode Point final (PNPP)

Ractif pour le dosage quantitatif de lactivit Phosphatases Acides Totale (PAT) et prostatique
(PAP) [EC 3.1.2] dans le srum humain.

02160, Maizy, France

REF 33 000 60

R1
R2
R3
R4
R5

1 x 120 mL
1 x 60 mL
4 x 10 mL
1 x 40 mL
1 x 5 mL

Tampon Citrate
Tampon Tartrate
Substrat
Ractif Stop
Stabilisant

CODE CNQ : BX
SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES
Tel : (33) 03 23 25 15 50

IVD USAGE IN VITRO

Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1)

PREPARATION DES REACTIFS

Le dosage de lactivit PAP dans le srum est presque toujours destin

valuer lactivit de lisoenzyme prostatique, moins dans le but de
dtecter que de surveiller et dorienter le traitement du carcinome
prostatique. La frquence de llvation de lactivit PAP est variable en
fonction du stade du cancer. Elle passe de 11% pour le grade A 57%
pour le grade D. Le dpistage prcoce du carcinome prostatique fait
davantage appel au dosage du PSA (Prostatic Specific Antigen) et
lexamen clinique du patient. Le dosage de lactivit PAP apporte alors
une confirmation et une valuation dun diagnostic positif.

Les flacons R1, R2, R4, R5 sont prts lemploi.

PRINCIPE (4) (5)

Mthode dveloppe par Fishman et Al, optimise par Richterich et Al.
En
milieu
acide,
la
phosphatase
acide
hydrolyse
le
p-nitrophnylphosphate (PNPP) en paranitrophnol et phosphate. En
prsence de L-Tartrate, seule la Phosphatase Acide Non Prostatique
(PANP) est active. La diffrence entre le dosage de la PAT et celui de la
PANP donne lactivit PAP. La raction est stoppe en milieu alcalin.
Lapparition dun complexe color, dont labsorbance est proportionnelle
lactivit phosphatase acide, est mesure 405 nm.

REACTIFS
flacon R1

64 mmol/L

TAMPON TARTRATE

Tampon citrate pH 4,6

L-Tartrate
Conservateur
flacon R3

30 mmol/L

REACTIF STOP (irritant)

Hydoxyde de sodium
EDTA
flacon R5

64 mmol/L
25 mmol/L

SUBSTRAT

p-Nitrophnylphosphate
flacon R4

STABILITE ET CONSERVATION
Stocker 2-8C dans le flacon dorigine bien rebouch et labri de
la lumire.
Les ractifs sont stables jusqu' la date de premption indique sur
ltiquette du coffret, sils sont utiliss et conservs dans les
conditions prconises.
Le substrat reconstitu (flacon R3) est stable au moins 30 jours en
labsence de contamination.
Ne pas utiliser le substrat reconstitu aprs la date de premption
indique sur ltiquette.
Ne pas utiliser les ractifs sils sont troubles ou si labsorbance du
blanc ractif 405 nm > 0,200 ( MODE OPERATOIRE).

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)

TAMPON CITRATE

Tampon citrate pH 4,6

Conservateur
flacon R2

Flacon R3 : ajouter sans dlai au contenu du flacon la quantit d'eau

dminralise indique sur l'tiquette.
Mlanger doucement et attendre la dissolution complte avant dutiliser
le ractif (environ 2 minutes).
Flacon R3 : Utiliser un objet non coupant pour enlever la capsule.

1,0 mol/L
20 mmol/L

STABILISANT (corrosif)

Acide actique 10%

36,8 mmol/L

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipeter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

Srum non hmolys. Sparer le srum des cellules sanguines et

analyser rapidement. Acidifier pH 5,4-6,2 avec 1 goutte du flacon R5
(Stabilisant) pour 1 ml de srum.
Lactivit phosphatase acide est stable dans le srum acidifi pendant :
7 jours 2-8C.

INTERFERENCES (2) (3)

Les ions Oxalate et fluorure inhibent lactivit Phophatase Acide.
Bilirubine : sous-valuation partir de 30 mg/L.
Hmolyse : surestimation de lactivit phosphatase acide.
Lactivit Phosphatase Acide est trs instable dans le srum (perte de
50% de lactivit en 8 h dans le srum non acidifi).
Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le
dosage.

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.
2. Srums de contrle normaux et pathologiques.
3. Eau dminralise pour la reconstitution du ractif R3.

CALIBRATION
La validit des rsultats dpend de lexactitude de la calibration de
linstrument, du juste dcompte du temps, du respect du rapport volume
ractif/volume spcimen et du contrle de la temprature.
Il est recommand dutiliser le facteur thorique ( CALCUL) ou
dutiliser un multicalibrateur srique enzymatique raccord sur une
solution ou une mthode de rfrence.
Version : FT 3300060 05 05 2008

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : BX

BIOLABO EXATROL-N (taux I) REF 95010.

BIOLABO EXATROL-P (taux II) REF 95011.

Tout autre srum de contrle titr pour cette mthode.

Programme externe de contrle de la qualit.

Il est recommand de contrler dans les cas suivants :

Au moins un contrle par srie.

Au moins un contrle par 24 heures.

Changement de flacon de ractif.

Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.

Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance indiques, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter lopration en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un
srum de contrle frachement reconstitu et rpter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, vrifier les
paramtres de lanalyse : longueur donde, temprature, volume
spcimen/volume ractif, temps dincubation et facteur de
calibration.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le
service technique BIOLABO ou le revendeur local.

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.
Pour chaque srum, mesurer
dans 3 tubes essais :

Blanc
srum

Essai 1

Essai 2

(A1)

(A2)

Flacon R1 (Tampon citrate)

1 mL

1 mL
1 mL

Flacon R2 (Tampon tartrate)

Srum

100 LL

100 LL

200 LL

200 LL

Mlanger. Incuber 5 minutes 30C ou 37C

Ajouter en dclenchant un chronomtre :
200 LL

Flacon R3 (Substrat)

Mlanger. Incuber exactement 15 minutes 30C ou 37C. Ajouter :

Flacon R4 (Ractif STOP)

200 LL

Srum

100 LL

200 LL

200 LL

Mlanger. Lire les absorbances A1 (Essai 1) et A2 (Essai 2) 405 nm

contre le blanc srum

Remarque :
Blanc Ractif : faire un tube supplmentaire en remplaant le spcimen
par de l'eau dminralise. Les autres ractifs sont ajouts comme
indiqu dans le tableau. Cette mesure sert uniquement valider la
qualit du ractif et nentre pas dans le mode opratoire ci-dessus
( STABILITE ET CONSERVATION).

INTERVALLES DE REFERENCE (2)

Phosphatase Acide Prostatique
0-0,6 UI/L

0-0,01 Lkat/L

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres

intervalles de rfrences pour la population concerne.

CALCUL
Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :
Phosphatases Acides Totales :

LIMITE DE LINEARITE

Avec facteur thorique :

La raction est linaire jusqu 80 UI/L (1,33 LKat/L).

Si labsorbance est > 1,400, diluer le spcimen avec une solution NaCl
9 g/L et refaire le dosage en tenant compte de la dilution. La limite de
linarit dpend du rapport de dilution spcimen/ractif.

Ul/L = A1 x 54
Lkat/L = A1 x 0,90
Avec multicalibrateur srique
x Concentration du Calibrant

A1 Calibrant

PHOSPHATASES ACIDES TOTALES

Intra-srie
N = 20

A1 Essai

Activit PAT =

PERFORMANCES

Phosphatases Acides Prostatiques :

Taux faible

Taux lev

Inter-srie
N = 40

Moyenne UI/L

9,2

50,4

Moyenne UI/L

8,9

34,1

S.D. UI/L

0,13

0,77

S.D.UI/L

0,35

1,0

C.V. %

1,4

1,5

C.V. %

2,9

Taux faible Taux lev

Avec facteur thorique :

Ul/L = (A1 A2) x 54
Lkat/L = (A1 A2) x 0,90
Avec multicalibrateur srique

PHOSPHATASES ACIDES PROSTATIQUES

Intra-srie
N = 40

(A1 A2 ) Essai

Activit PAP =

Taux faible

Taux lev

Inter-srie
N = 40

Moyenne UI/L

3,3

11,8

Moyenne UI/L

3,05

8,55

S.D. UI/L

0,12

0,70

S.D.UI/L

0,16

0,67

C.V. %

3,6

5,9

C.V. %

5,1

7,8

Taux faible Taux lev

Limite de dtection : environ 0,7 UI/L

Sensibilit pour 1 UI/L (0,017 LKat/L) : environ 0,018 Abs 405 nm.

x Concentration du Calibrant

(A1 A2) Calibrant

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 711-715
rd
Clinical Guide to Laboratory Test, 3 Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 516-519
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995)
p .3-498
FISHMAN W.H. and F.LERNER : J.Biol.Chem.200 : 89 (1952)
RICHTERICH R., COLOMBO J. P., WEBER H., Schweizerich medizinische
Wochenscrift, 92 (1962), p.1496-1500.

Made in France
Version : FT 3300060 05 05 2008

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

Temprature de conservation

REF

Rfrence du produit

Consulter la notice

LOT

Numro de lot