PROTEINES TOTALES

REACTIFS BIOLABO
www.biolabo.fr

Mthode Biuret

FABRICANT :
BIOLABO SA,

Ractif pour le dosage quantitatif des protines totales

dans le plasma ou le srum humains

02160, Maizy, France

REF 80016 : R1 1 x 500 mL

R3 1 x 5 mL

R2

1 x 500 mL

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES

Tel : (33) 03 23 25 15 50
Fax : (33) 03 23 256 256

CODE CNQ : WT

IVD USAGE IN VITRO

INTERET CLINIQUE (1)

PREPARATION DES REACTIFS

La composition globale en protines dun srum ou dun plasma de

patient doit tre tudie par dtermination du contenu en protines
totales et ensuite en examinant sa composition par lectrophorse.
La diminution du volume deau plasmatique (hmoconcentration),
frquente en cas de dshydratation (vomissement aigu, diarrhes,
maladie dAddison, ou acidose diabtique), se traduit par une
hyperprotinmie relative. Lhmodilution (augmentation du volume
deau plasmatique) apparaissant dans les cas dintoxication par leau ou
les syndromes de rtention de sel, pendant une perfusion intraveineuse,
et physiologiquement en cas dallitement prolong, se traduit par une
hypoproteinmie relative. Souvent et pour diffrentes raisons,
lhypoprotinmie peut aussi tre due une diminution de la
concentration en albumine. Laugmentation de protines spcifiques
peut galement conduire une hyperprotinmie moyenne (infection) .
Une hyperprotinmie marque peut tre due une augmentation
importante des immunoglobulines monoclonales produites lors de
mylomes multiples ou autres hyperparaprotinmies malignes.

Ajouter 400 mL d'eau distille au contenu du flacon R1 (NaCl) et du

flacon R2 (Biuret). Mlanger par retournements. Les ractifs ainsi
dilus sont prts lemploi.

PRINCIPE (4) (5)

Mthode colorimtrique dcrite par Gornall et al. Les liaisons
peptidiques des protines ragissent avec Cu2+ en solution alcaline pour
former un complexe color dont labsorbance, proportionnelle la
concentration en protines dans le spcimen, est mesure 550 nm. Le
ractif Biuret contient du sodium potassium tartrate qui complexe les
ions cuivriques et maintient leur solubilit en solution alcaline.

REACTIFS
flacon R1

CHLORURE DE SODIUM

Chlorure de sodium
flacon R2

75

mmol/L

A rception, stocker lEtalon (flacon R3) 2-8C.

Etalon (flacon R3) : transvaser la quantit ncessaire, bien reboucher
le flacon et stocker 2-8C.
Utiliss et stocks comme indiqu, les ractifs (flacon R1, R2, R3)
sont stables dans le flacon dorigine bien bouch et en labsence de
contamination, jusqu' la date de premption indique sur ltiquette
du coffret.
Aprs ouverture :
Les ractifs de travail (prts lemploi) sont stables au moins 3 mois,
stocks 18-25C et labri de la lumire.
Ne pas utiliser les ractifs de travail sils sont troubles ou si labsorbance
du mlange volume volume du contenu du flacon R1 dilu et R2 dilu
est > 0.050 550 nm.
Ne pas utiliser les ractifs de travail aprs la date de prremption
indique sur ltiquette du coffret.

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)

Srum ou plasma.
Lanalyse doit tre ralise sur spcimen frais ou stock 2-8C moins
de 72 h.
Les protines sont stables dans le srum :
6 mois 20C.
indfiniment 70C.

REACTIF BIURET

INTERFERENCES (3)

C : Corrosif, R35 : provoque de graves brlures.

Hydroxyde de sodium
Tartrate-Na-K
Iodure de potassium
Sulfate de cuivre
flacon R3

STABILITE ET CONSERVATION

370
10
3
3

mmol/L
mmo/L
mmol/L
mmol/L

ETALON

Albumine 60 g/L

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
Le contenu du flacon R2 reste corrosif aprs dilution (R34 : provoque
des brlures).
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

Les spcimens lipmiques ou hmolyss peuvent conduire des

rsultats survalus. Pour viter ces interfrences, il convient de
raliser un blanc spcimen (voir MODE OPERATOIRE : procdure
n2).
Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le
dosage.

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES

1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.
2. Srums de contrle normaux et pathologiques.

CALIBRATION
Etalon du coffret (flacon R3) ou BIOLABO-Multicalibrator REF 95015.
Ou tout calibrant raccord sur une mthode ou un matriau de
rfrence.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance
indiques, mme aprs utilisation dun deuxime flacon de srum de
contrle frachement reconstitu.
Version : FT 80016 28 08 2008

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : WT

BIOLABO EXATROL-N (taux I) REF 95010.

BIOLABO EXATROL-P (taux II) REF 95011.
Tout autre srum de contrle titr pour cette mthode.
Programme externe de contrle de la qualit.
Il est recommand de contrler dans les cas suivants :
Au moins un contrle par srie.
Au moins un contrle par 24 heures.
Changement de flacon de ractif.
Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance indiques, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter le test en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un srum
de contrle frachement reconstitu et rpter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
calibrant ou un calibrant frachement reconstitu et rpter le test.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service
technique BIOLABO ou le revendeur local.

Dans le srum ou le plasma

Protines totales

(g/L)

dans le cordon

48-80

Prmatur

36-60

Nouveau-n

46-70

1 semaine

44-76

7 mois-1 an

51-73

1 an-2 ans

56-75

> 3 ans

60-80

Adulte, ambulatoire

64-83

Adulte, alit

60-78

Mesurer dans des tubes essais

bien identifis :

Blanc

Etalon

Dosage

Ractif R1

1,02 mL

1 mL

1 mL

Ractif R2

1 mL

1 mL

1 mL

20 TL

Etalon

20 TL

Spcimen
Bien mlanger. Laisser reposer 10 minutes temprature ambiante.
Lire les absorbances 550 nm (530-570) contre le blanc ractif.

Procdure n2 (avec blanc spcimen)

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.
Blanc
Spcimen

Etalon

Dosage

Ractif R1

1,02 mL

2 mL

1 mL

1 mL

Ractif R2

1 mL

1 mL

1 mL

20 TL
20 TL

20 TL

Bien mlanger. Laisser reposer 10 minutes temprature ambiante.

Lire les absorbances 550 nm (530-570) contre le blanc ractif. Lire les blancs
spcimen contre le ractif R1.

PERFORMANCES
Inter-srie
N = 40

Blanc

Spcimen

Valeurs de ladulte diminues de 2

Taux faible Taux normal

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.

Etalon

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres valeurs

de rfrence pour la population concerne.

Intra-srie
N = 20

Procdure n1 (sans blanc spcimen)

Mesurer dans des

tubes essais
bien identifis :

INTERVALLES DE REFERENCE (2)

> 60 ans

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

Remarques :
Des procdures spcifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
Raliser un blanc spcimen pour les srums troubles, lipmiques ou
hmolyss.
Il faut tenir compte du fait que les valeurs cibles donnes pour
certains srums de contrle sont obtenues avec ou sans blanc
spcimen.
En analyse bichromatique, la 2me longueur donde est 600 ou 700
nm.

Taux faible Taux normal

CALCUL

Moyenne g/L

48,8

54,5

Moyenne g/L

69,2

74 ,5

S.D. g/L

0,6

0,6

S.D. g/L

1,1

1,3

Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :

C.V. %

1,2

1,2

C.V. %

1,6

1,7

Sans blanc spcimen :

Limite de dtection :
environ 2,1 g/L
Sensibilit pour 10 g/L : environ 0.028 Abs. 550 nm.
Comparaison avec un ractif de la concurrence :
y = 0,9758 x + 1,4819
r = 0,9945

Abs (Dosage)

Rsultat =

x concentration de lEtalon

Abs (Etalon)

Avec blanc spcimen :

Rsultat =

Abs (Dosage)- Abs (Blanc spcimen)

LIMITE DE LINEARITE

x concentration de lEtalon

Abs (Etalon)

La raction est linaire jusqu 100 g/L. Au-del, diluer le spcimen

avec une solution NaCl 9 g/L et refaire le dosage en tenant compte de
la dilution dans le calcul du rsultat. La limite de linarit dpend du
rapport de dilution spcimen/ractif.

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 477-530.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 518-522.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3498 3-511
GORNALL A. C., BARDAWILL C. J., DAVID M. M., J. Biol. Chem. 1949, 177,
751
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3d Ed. C.A. Curtis, E.R. Silverman
L . M., Christensen R. H. (1995) p. 523-524.

Made in France
Version FT 80016 28 08 2008

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Usage in vitro

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