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PROTEINES TOTALES

REACTIFS BIOLABO

Mthode Biuret
Prt lemploi

www.biolabo.fr

Ractif pour le dosage quantitatif des protines totales


dans le plasma ou le srum humains
FABRICANT :

BIOLABO SA,
02160, Maizy, France
REF LP87016

R1 1 x 200 mL

R2

SUPPORT TECHNIQUE ET COMMANDES


Tel : (33) 03 23 25 15 50
Fax : (33) 03 23 256 256

INTERET CLINIQUE (1)

PREPARATION DES REACTIFS

La composition globale en protines dun srum ou dun plasma de


patient doit tre tudie par dtermination du contenu en protines
totales et ensuite en examinant sa composition par lectrophorse.
La diminution du volume deau plasmatique (hmoconcentration),
frquente en cas de dshydratation (vomissement aigu, diarrhes,
maladie dAddison, ou acidose diabtique), se traduit par une
hyperprotinmie relative. Lhmodilution (augmentation du volume
deau plasmatique) apparaissant dans les cas dintoxication par leau ou
les syndromes de rtention de sel, pendant une perfusion intraveineuse,
et physiologiquement en cas dallitement prolong, se traduit par une
hypoproteinmie relative. Souvent et pour diffrentes raisons,
lhypoprotinmie peut aussi tre due une diminution de la
concentration en albumine. Laugmentation de protines spcifiques
peut galement conduire une hyperprotinmie moyenne (infection) .
Une hyperprotinmie marque peut tre due une augmentation
importante des immunoglobulines monoclonales produites lors de
mylomes multiples ou autres hyperparaprotinmies malignes.

Les ractifs sont prts lemploi.

PRINCIPE (4) (5)


Mthode colorimtrique dcrite par Gornall et al. Les liaisons
peptidiques des protines ragissent avec Cu2+ en solution alcaline pour
former un complexe color dont labsorbance, proportionnelle la
concentration en protines dans le spcimen, est mesure 550 nm. Le
ractif Biuret contient du sodium potassium tartrate qui complexe les
ions cuivriques et maintient leur solubilit en solution alcaline.

REACTIF BIURET

Xi : R36/38 : Irritant pour les yeux et la peau.


Hydroxyde de sodium
Tartrate-Na-K
Iodure de potassium
Sulfate de cuivre
flacon R2

370
10
3
3

IVD USAGE IN VITRO

STABILITE ET CONSERVATION
A rception, stocker lEtalon (flacon R2) 2-8C.
Ractif (flacon R1) et Etalon (flacon R2) : Transvaser la quantit
ncessaire, bien reboucher le flacon.
Conserver le ractif (flacon R1) 18-25C.
En labsence de contamination, les ractifs sont stables jusqu' la
date de premption indique sur ltiquette du coffret, sils sont
utiliss et conservs dans les conditions prconises.
Ne pas utiliser le ractif (flacon R1) sil est trouble ou si labsorbance
est > 0.050 550 nm.

PRELEVEMENT ET PREPARATION DU SPECIMEN (2)


Srum ou plasma.
Lanalyse doit tre ralise sur spcimen frais ou stock 2-8C moins
de 72 h.
Les protines sont stables dans le srum :
6 mois 20C.
indfiniment 70C.

INTERFERENCES (3)
Les spcimens lipmiques ou hmolyss peuvent conduire des
rsultats survalus. Pour viter ces interfrences, il convient de
raliser un blanc spcimen (voir MODE OPERATOIRE : procdure
n2).
Young D.S. a publi une liste des substances interfrant avec le
dosage.

REACTIFS
flacon R1

CODE CNQ : WT

1 x 5 mL

mmol/L
mmo/L
mmol/L
mmol/L

ETALON

REACTIFS ET MATERIEL COMPLEMENTAIRES


1. Equipement de base du laboratoire danalyses mdicales.
2. Solution NaCl 9 g/L pour la ralisation du blanc spcimen.
3. Srums de contrle normaux et pathologiques.

Albumine 60 g/L

PRECAUTIONS
Les ractifs BIOLABO sont destins du personnel qualifi, pour un
usage in vitro.
Vrifier lintgrit des ractifs avant leur utilisation.
Utiliser des quipements de protection (blouse, gants, lunettes).
Ne pas pipetter avec la bouche.
En cas de contact avec la peau ou les yeux, rincer abondamment
leau et consulter un mdecin.
Les ractifs contiennent de lazide de sodium (concentration < 0,1%)
qui peut ragir avec les mtaux tel que le cuivre ou le plomb des
canalisations. Rincer abondamment.
La fiche de donnes de scurit peut tre obtenue sur simple
demande.
Elimination des dchets : respecter la lgislation en vigueur.
Par mesure de scurit, traiter tout spcimen comme potentiellement
infectieux. Respecter la lgislation en vigueur.

CALIBRATION
Etalon du coffret (flacon R2) ou BIOLABO-Multicalibrator REF 95015.
Ou tout calibrant raccord sur une mthode ou un matriau de
rfrence.
La frquence de calibration dpend des performances de lanalyseur et
des conditions de conservation du ractif.
Il est recommand de calibrer nouveau dans les cas suivants :
1. Changement du lot de ractif.
2. Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
3. Les valeurs de contrle obtenues sortent des limites de confiance
indiques, mme aprs utilisation dun deuxime flacon de srum de
contrle frachement reconstitu.
Version : FT LP87016 20 01 2009

CONTRLE DE QUALITE

CODE CNQ : WT

BIOLABO EXATROL-N (taux I) REF 95010.


BIOLABO EXATROL-P (taux II) REF 95011.
Tout autre srum de contrle titr pour cette mthode.
Programme externe de contrle de la qualit.
Il est recommand de contrler dans les cas suivants :
Au moins un contrle par srie.
Au moins un contrle par 24 heures.
Changement de flacon de ractif.
Aprs oprations de maintenance sur lanalyseur.
Lorsquune valeur de contrle se trouve en dehors des limites de
confiance indiques, appliquer les actions suivantes :
1. Rpter le test en utilisant le mme contrle.
2. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, prparer un srum
de contrle frachement reconstitu et rpter le test.
3. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, utiliser un autre
calibrant ou un calibrant frachement reconstitu et rpter le test.
4. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, calibrer nouveau
en utilisant un autre flacon de ractif et rpter le test.
5. Si la valeur obtenue reste en dehors des limites, contacter le service
technique BIOLABO ou le revendeur local.

Dans le srum ou le plasma

Prmatur

36-60

Nouveau-n

46-70

1 semaine

44-76

7 jours-1 an

51-73

1 an-2 ans

56-75

> 3 ans

60-80

Adulte, ambulatoire

64-83

1 mL

1 mL

1 mL

20 SL

Spcimen
20 SL

Eau dminralise

Bien mlanger. Laisser reposer 10 minutes temprature ambiante.


Lire les absorbances 550 nm (530-570) contre le blanc ractif.

Procdure n2 (avec blanc spcimen)


Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.
Blanc
Ractif

Blanc
Spcimen

Etalon

Dosage

1 mL

1 mL

1 mL
1 mL

20 SL
20 SL

20 SL

20 SL

Bien mlanger. Laisser reposer 10 minutes temprature ambiante.


Lire les absorbances 550 nm (530-570) contre le blanc ractif. Lire les blancs
spcimen contre NaCl 9 g/L.

PERFORMANCES
Inter-srie
N = 40

Dosage

20 SL

Eau dminralise

Valeurs de ladulte diminues de 2

Taux faible Taux moyen

Etalon

Etalon

Spcimen

Il est recommand chaque laboratoire de dfinir ses propres valeurs


de rfrence pour la population concerne.

Intra-srie
N = 20

Ractif R1

Blanc
Ractif

Etalon

60-78

> 60 ans

Mesurer dans des tubes essais


bien identifis :

Ractif R1

48-80

Adulte, alit

Ramener les ractifs et spcimens temprature ambiante.

NaCl 9 g/L

(g/L)

dans le cordon

Procdure n1 (sans blanc spcimen)

Mesurer dans des


tubes essais
bien identifis :

INTERVALLES DE REFERENCE (2)


Protines totales

MODE OPERATOIRE (TECHNIQUE MANUELLE)

Taux faible Taux moyen

Moyenne g/L

48,8

54,5

Moyenne g/L

69,2

74 ,5

S.D. g/L

0,6

0,6

S.D. g/L

1,1

1,3

C.V. %

1,2

1,2

C.V. %

1,6

1,7

Remarques :
Des procdures spcifiques sont disponibles pour les analyseurs
automatiques. Contacter le service technique BIOLABO.
Raliser un Blanc spcimen pour les srums troubles, lipmiques ou
hmolyss.
Il faut tenir compte du fait que les valeurs cibles donnes pour
certains srums de contrle sont obtenues avec ou sans blanc
spcimen.
En analyse bichromatique, la 2me longueur donde est 600 ou
700 nm.

CALCUL
Le rsultat est dtermin daprs la formule suivante :

Limite de dtection :
environ 2,1 g/L
Sensibilit pour 10 g/L : environ 0.056 Abs. 550 nm.
Comparaison avec un ractif de la concurrence :
y = 0,9758 x + 1,4819
r = 0,9945

Sans blanc spcimen :


Rsultat =

Abs (Dosage)

x concentration de lEtalon

Abs (Etalon)

Avec blanc spcimen :

LIMITE DE LINEARITE
La raction est linaire jusqu 100 g/L. Au-del, diluer le spcimen
avec une solution NaCl 9 g/L et refaire le dosage en tenant compte de
la dilution dans le calcul du rsultat. La limite de linarit dpend du
rapport de dilution spcimen/ractif.

Rsultat =

Abs (Dosage)- Abs (Blanc spcimen)

x concentration de lEtalon

Abs (Etalon)

REFERENCES
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)

TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3rd Ed. C.A. Burtis, E.R. Ashwood,
W.B. Saunders (1999) p. 477-530.
Clinical Guide to Laboratory Test, 3rd Ed., N.W. TIETZ (1995) p. 518-522.
YOUNG D.S., Effect of Drugs on Clinical laboratory Tests, 4th Ed. (1995) p. 3498 3-511
GORNALL A. C., BARDAWILL C. J., DAVID M. M., J. Biol. Chem. 1949, 177,
751
TIETZ N.W. Text book of clinical chemistry, 3d Ed. C.A. Curtis, E.R. Silverman
L . M., Christensen R. H. (1995) p. 523-524.

Made in France
Version FT LP87016 20 01 2009

Fabricant

Date de premption

IVD

Usage in vitro

Temprature de conservation

REF

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