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GUIA DE LABORATORIO
PRCTICA N05:
1.- TITULO:
2.- INTRODUCCION:
Se puede considerar como crecimiento al incremento de clulas individuales por un
lado, y por otro lado se puede considerar al crecimiento del nmero de clulas
(proliferacin de la poblacin).
En lo que se refiere al crecimiento de clulas individuales, este consiste en el aumento
del tamao y peso de las clulas que precede a la divisin celular.
Las bacterias se dividen por fisin binaria, a travs de la una cual clula madre al
alcanzar un determinado volumen se divide dando dos clulas hijas.
3.- OBJETIVOS:
Estudiar la curva de crecimiento de bacterias lcticas y al mismo tiempo construir la
curva de sntesis de cido lctico.
Comparar los resultados de una cepa con fecha de vencimiento vencida con una de
fecha no vencida.
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Basado en el concepto que una clula se divide dando dos clulas hijas, y stas a su
vez se vuelven a dividir dando dos clulas cada una de ellas, se presenta en el
siguiente cuadro la proliferacin de una poblacin de clulas a partir de una sola, con un
tiempo de generacin de 30 minutos
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de clulas versus el tiempo transcurrido en una grfica semilogartmica). Se obtiene as
una grfica en la que la relacin es lineal.
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Es posible distinguir cuatro fases:
1) fase de latencia o de retardo
2) fase exponencial
3) fase estacionaria
4) fase de muerte
En la fase de latencia existe un aparente reposo en el que las clulas sintetizan las
enzimas necesarias para la actividad metablica que deben llevar adelante. Cuando se
hacen mediciones del nmero de clulas en distintos tiempos dentro de esta fase, el
valor no cambia sustancialmente. En cambio, interiormente las clulas trabajan
activamente adaptando el equipo enzimtico al medio de cultivo. La bacteria se prepara
para hacer uso de los nutrientes que este medio le aporta, por lo tanto es la fase de
adaptacin al medio, con aumento de la masa celular pero no del nmero de clulas. La
edad del inculo va a influir en el tiempo de latencia en el medio fresco debido a la
acumulacin de materiales txicos y a la falta de nutrientes esenciales dentro de la
clula durante el crecimiento anterior. En general, inculos viejos alargan la fase de
latencia.
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Temperatura
mnima
Temperatura
ptima
Temperatura
Mxima
Mesfilo
Psicrfilo
Psicrtrofo
Termfilo
5 - 15
-5 + 5
-5 + 5
40 45
30 - 45
12 - 15
25 - 30
55 - 75
35 47
15 20
30 35
60 90
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PROCEDIMIENTOS:
1. Sembrar la leche con lactobacillus.
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3.
Luego en un matraz con 50ml de leche inocular el cultivo lctico BIFLORA (decima
parte), agitar y verter al vaso de precipitado con 1Lt de leche. Agitar con una varilla
de vidrio.
6. Incubar a 43 C.
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7. Controlar el proceso de fermentacin realizar las siembras y titulaciones necesarias.
8. Utilizar una cepa con fecha de vencimiento recientemente vencida. Comparar con
los resultados anteriores. Graficar los resultados vs. Tiempo.
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Hora de
anlisis
Tiempo min
D(acidez)
Recuento de Bacterias
lcticas
Ufc/ml
4
9:05
18
1 x 10
9:40
35
18.5
0 x 10
10:20
40
20
1 x 10
11:00
40
32
4 x 10
11:40
40
50
6 x 10
12:20
40
64
17 x 10
13:00
40
72
34 x 10
13:50
50
78
68 x 10
14:20
30
80
75 x 10
4
4
4
4
NO
VENCIDA (2013)
Hora de
anlisis
1
2
3
4
5
6
7
8
9
9:05
9:40
10:20
11:00
11:40
12:20
13:00
13:50
14:20
Tiempo
min
0
35
40
40
40
40
40
50
30
Tiempo
( )
min
0
35
75
115
155
195
235
285
315
D
(acidez)
18
18.5
20
32
50
64
72
78
80
Recuento de
Bacterias lcticas
Ufc/ml
1 x 104
0 x 104
1 x 104
4 x 104
6 x 104
17 x 104
34 x 104
68 x 104
75 x 104
Log
X
4
4.60
4.78
5.23
5.53
5.83
5.87
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GRAFICOS DE RESULTADOS
Recuento de
Bacterias lcticas
Ufc/ml
1 x 10
Tiempo ( )
min
75
4 x 10
6 x 10
17 x 10
115
155
195
34 x 10
68 x 10
235
285
75 x 10
315
Variacin de Biomasa
800000
x (Ufc/ml)
700000
600000
500000
400000
300000
200000
100000
0
75
115
155
195
235
285
315
(min)
D(acidez)
20
32
50
64
72
78
80
Tiempo ( )min
75
115
155
195
235
285
315
Acidez (D)
115
155
195
235
285
(min)
315
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Log X
4.60
4.78
5.23
5.53
5.83
5.87
Tiempo ( )
min
75
115
155
195
235
285
315
Nmero de Celulas
7
6
Log X
5
4
3
2
1
0
75
115
155
195
235
285
315
(min)
+ X
Recuento de
Bacterias lcticas
Ufc/ml
1 x 104
4 x 104
6 x 104
17 x 104
34 x 104
68 x 104
75 x 104
D(acidez)
20
32
50
64
72
78
80
x (Ufc/ml
VS
D )
100
Acidez (D)
80
60
40
20
0
10000
40000
X = 10 000 Ufc/ml
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7.- CONCLUSIONES:
En esta prctica se monitore la cintica de crecimiento de bacterias lcticas,
evaluando parmetros como pH, acidez, consumo de sustrato, densidad y unidades
formadoras de colonias; y de esta forma conocer cmo varan cada uno de ellos con
respecto al tiempo (manteniendo constantes las condiciones de operacin), adems
se llev a cabo la medicin del crecimiento, que arroj una grfica en la que se
observ claramente las cuatro etapas del crecimiento.
La prctica realizada nos mostr de manera sencilla un mtodo de crecimiento de
bacterias lcticas; haciendo uso de la leche como sustrato; as se pudo obtener a
diferentes tiempos la reproduccin inmediata de estas bacterias, entonces as se
pudo hacer una curva de crecimiento de bacterias; teniendo en los primeros minutos
un crecimiento minsculos hasta que llega a los 315 minutos donde el nmero de ufc
lleg a 75 x 104. Entonces se puede decir que a ms tiempo las colonias aumentan
hasta un punto tope donde estas bacterias mueren y esta curva debera descender.
La fermentacin cido lctica es aquella que se lleva a cabo por las bacterias cido
lctica cuya actividad se desarrolla en ausencia de oxgeno (anaerobiosis).
8.- BIBLIOGRAFIA:
http://www.monografias.com/trabajos15/fermentacion-acidolactica/fermentacionacidolactica.shtml
http://www.unne.edu.ar/unnevieja/Web/cyt/cyt2006/08-Exactas/2006-E-060.pdf
http://www.biologia.edu.ar/microind/cultivo%20y%20biorreactores.htm
http://itmorelia.edu.mx/2012-admin/extras/Bioquimica2010/BQF-1012.pdf
Mller, G. Microbiologa de los Alimentos Vegetales. Ed. Acribia S.A. Zaragoza,
Espaa 198
Jagnow, G. y Dawid, W. Biotecnologa. Introduccin con experimentos modelo.
Ed.Acribia S.A. Zaragoza, Espaa.1991
WILLET, Hilda. ZINSSER Microbiologa. Editorial Mdica Panamericana S.A. 2
edicin (Espaa 1994).
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