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Unidad temtica: 2
Prctica no. 3
2.
Aplicar el mtodo de esterilizacin por calor hmedo para la preparacin de los medios de cultivo
Escenario: Laboratorio
Duracin: 6 horas
INTRODUCCIN
Un medio de cultivo es un sustrato que proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo del microorganismo a
probar.
Los microorganismos presentan grandes diferencias en sus requerimientos nutricionales que son reflejo de la extrema
diversidad bioqumica y fisiolgica; el agua, sales inorgnicas, fuentes de carbono y fuentes de nitrgeno, son necesarios a
todos.
Un medio de cultivo debe reunir las siguientes condiciones:
Poseer un pH especfico
MATERIALES DE LABORATORIO
REACTIVOS
Agar MacConkey
1 agitador
1 Probeta de 250 ml
Agua destilada
MATERIAL INDIVIDUAL
15 campanas Durham
Cuaderno de laboratorio
Cubrebocas
1 Esptula
4 Pipetas de 1 ml
Franela
2 Pipetas 10 ml
EQUIPO DE LABORATORIO
Papel manila
Refrigerador
1 Balanza granataria
Autoclave
PROCEDIMIENTO
Las formas de preparacin de los medios de cultivo vienen indicadas en cada etiqueta y dependen del fabricante. La tcnica
a emplear es la siguiente:
1.
2.
Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en que se va a preparar el medio de cultivo
3.
Pesar cada uno de los medios. Cada vez que se pese un reactivo lavar la esptula para evitar la contaminacin
de los medios de cultivo
4.
5.
Adicionar la otra mitad del agua, procurando bajar el agar que queda adherido en la pared del matraz, y
homogeneizar el contenido
6.
Calentar el medio de cultivo para lograr su completa disolucin con agitacin constante (si as lo indica la casa
comercial), esto evita que el agar se queme. Se debe evitar el calentamiento prolongado
7.
8.
9.
Verificar la limpieza del autoclave, si no se encuentra limpia asegurarse de que est desconectada y
lavarla con agua y jabn y enjuagar con agua destilada
b.
c.
Colocar el material a esterilizar dentro del autoclave, el autoclave no debe llenarse a ms de sus tres
cuartas partes
d.
e.
11. Concluido el tiempo de esterilizacin, sacar cuidadosamente los medios de cultivo dejndolos enfriar a una
temperatura de aproximadamente 45 C
12. Preparar el rea estril y verter los medios, dejar gelificar y someter a prueba de esterilidad por 24 horas a 37 C
13. Concluido el tiempo de prueba de esterilidad, si los medios cumplen el requisito, guardarlos en bolsas de plstico
limpias y refrigerar hasta la realizacin de la siguiente prctica, si la prueba result negativa, desechar los medios:
14. Los medios que resultaron contaminados se guardan en una bolsa de plstico roja, de acuerdo a lo que establece
la
NOM-087-ECOL-SSA1-2002.
Proteccin
ambiental-Salud
ambiental-
Residuos
Peligrosos
Biolgico
CUESTIONARIO:
1.
2.
3.
4.
5.
Cul es el o los criterios para establecer la clasificacin de los medios de cultivo? Explica.
BIBLIOGRAFA
1.
2.
Diagnstico microbiolgico. Texto y atlas a color. Elmer W. Koneman, Stephen D. Allen, William M. Janda.
Editorial Mdica Panamericana
3.
Biologa de los microorganismos. Thomas D. Brock, Madigan, Martinko, Parker. Edit. Prentice- Hall
4.
Microbiologa Estomatolgica. Fundamentos, gua y prctica. Marta Negroni. Editorial Panamericana. Mxico
2001.
5.
6.