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utilidad y estudios
Julia Serrano Masa
Cultivos celulares
Conjunto de tcnicas que permiten el
mantenimiento de las clulas in vitro,
conservando al mximo sus propiedades
fisiolgicas, bioqumicas, genticas y
metablicas de una manera semejante a
las que tenan en el rgano que las
origino
Caractersticas (I)
Caractersticas (II)
Caractersticas (III)
El cultivo de clulas y rganos aislados del
organismo constituye una va para resolver
problemas biolgicos:
-- ciclo celular
-- control del crecimiento celular
-- modulacin de expresin gnica
-- generacin de animales transgnicos
-- ensayos citotoxicidad
Evolucin (I)
F. D. Von Recklinhausen (1.866) mantuvo vivas clulas
sanguneas de anfibios durante 35 das
Wilhelm Roux (1.885) realiz cultivos de clulas de
embrin de pollo en solucin salina
Ross Harrison (1.907) cultiv tejido nervioso de rana y
obtuvo crecimiento y diferenciacin de los axones
Burrows (1.910) emple plasma de pollo para nutrir los
explantes de tejidos embrionarios de pollo
Evolucin (II)
12 Lugar Autor: Thomas Deerinck, EE.UU. Espcimen: clulas HeLa (cncer) (300X)
Cortesa de Nikon Small World
Clulas Hela:
desde 1954
VENTAJAS (I)
VENTAJAS (II)
VENTAJAS (III)
DESVENTAJAS (I)
DESVENTAJAS (II)
Lnea celular
Cultivos Primarios
Cultivo de clulas, tejidos u rganos tomados
directamente del organismo y puestos a
crecer en un medio artificial
Lnea Celular
Cultivo celular que tiene alta capacidad de
multiplicarse in vitro, establecido a partir
del primer subcultivo de un cultivo
primario y que tiene las mismas
caractersticas que el tejido de origen
Lnea Celular
Una lnea celular es un conjunto de clulas
todas idnticas que provienen de la
multiplicacin in vitro de un clon
Caractersticas celulares a
tener en cuenta (I)
la
Todas las clulas animales en fase lag son esf ricas
perdiendo sus morfologa de in vivo
Caractersticas celulares a
tener en cuenta (II)
10
Caractersticas celulares a
tener en cuenta (III)
las
la
Caractersticas de un clon
(I)
Un clon es una clula obtenida de un cultivo
primario,
con
propiedades
metablicas,
inmunolgicas y morfolgicas especficas y def inidas
Caractersticas del clon con el que se inicia la lnea
celular deben def inirse y preservarse tras
multiplicaciones finitas o infinitas de las clulas
Caractersticas de un clon
(II)
11
Caractersticas de un clon
(III)
12
Lneas tumorales
13
Caracterizacin de una
Lnea Celular (I)
Caracterizacin de una
Lnea Celular (II)
14
Curva de Crecimiento
15
Curva de Crecimiento
Curva de Crecimiento
Curva de Crecimiento
16
Curva de Crecimiento
Lneas f initas:
-- fase lag , f ase log y
f ase meseta
-- f ase log (>50 ciclos
celulares)
-- las clulas maduran y
se dif erencian en f ase
meseta
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Subcultivo
Confluencia
Tiempo de duplicacin
Criogenizacin
Objetivos
-- propagacin de la lnea celular
-produccin
de
clulas
experimentacin
para
la
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Criopreservacin
-- congelacin lenta (1-3C/min)
-- descongelacin rpida (bao a 37C)
Importante el uso de crioprotectores: DMSO,
glicerol en suero f etal
Clulas en f ase logartmica de crecimiento
Viabilidad superior a 80%
Congelar nmero de clulas 4 x 10 6
Imposible mantener
indefinidamente
una
lnea
celular
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Bancos
de
lneas
representacin:
celulares
con
mayor
Aplicaciones (I)
Medicina
Neurobiologa
Farmacologa
Ecotoxicologa
Inmunologa
Toxicologa
Aplicaciones (II)
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Aplicaciones (III)
Flujo
intracelular:
hormonas,
f luctuaciones metablicas
receptores,
Estudios (I)
Pellet
location
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Clulas tumorales
So x 9
GFAP
GFAP
Vim
Clulas tumorales
GFAP
So x 9
GFAP
Vim
Vimentin+DAPI
22
Sox9+DAPI
Lnea Celular
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