Vous êtes sur la page 1sur 6

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE CHIHUAHUA

FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS

MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Dr. Rubn Mrquez Melndez

REPORTE DE LABORATORIO
PRACTICA #1

Preparacin y esterilizacin de medios de cultivo

Jesus Heras Batres


220527

RESUMEN
Esta prctica se inicio con la preparacin de medios de cultivo en forma solida y en caldo
de cultivo, se utilizaron diferentes nutrientes para elaborar los medios de cultivo, estos se
elaboraron utilizando como nutrientes glucosa, peptona de casena, extracto de carne y
NaCl. Estos nutrientes fueron colocados en matraces bafle tapados con un algodn forrado
de gasa y aluminio, asi como en tubos de ensaye para preparar caldo niutritivo. Estos
medios de cultivo fueron sometidos a esterilizacin en la autoclave y presentaron un
oscurecimiento en su color el cual fue dado por la reaccin de maillard.
ABSTRACT
This practice began with the preparation of culture media in solid form and in the culture
broth, various nutrients to develop the culture media were used , these were prepared using
nutrients as glucose , peptone, casein , meat extract , and NaCl . These nutrients were
placed in flasks covered baffle lined with cotton gauze and aluminum , as well as in simple
Petri dishes containing agar. These culture media were subjected to autoclaving and
presented a darkening in color which was given by the Maillard reaction .
INTRODUCCION
La esterilizacin es un proceso mediante el cual se logra la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en un determinado material. La esterilizacin es
importante para la preparacin de medios de cultivo los cuales son empleados con
diferentes propsitos (cultivo de alimentos, control de ambiente, anlisis microbiolgico,
cosmticos, alimentos, etc.) (3)
El calor hmedo destruye los microorganismos por coagulacin de sus protenas celulares.
El principal mtodo que emplea calor hmedo es la esterilizacin por vapor a presin, la
cual se lleva acabo en la autoclave. Estos equipos emplean vapor de agua saturado a presin
de 15lb lo que permite que la cmara alcance la temperatura de 121C. el tiempo de
esterilizacin es de 15 minutos sin embargo, en algunas oportunidades, dadas las
caractersticas del material, es necesario variar el tiempo de esterilizacin.(1)
Cuando se utiliza ste mtodo es importante controlar en el autoclave la reaccin de la
temperatura, la presin y el tiempo de exposicin, ya que estos son factores crticos en el
proceso. Solo cuando el vapor se coloca bajo presin, es cuando su temperatura aumenta
por encima de los 100 C y esto permite alcanzar las temperaturas de esterilizacin
(121C). entre las ventajas de este mtodo de esterilizacin, tenemos que no deja residuos.
Este es el mtodo de eleccin para esterilizar materiales termoestables y no sensibles a la
humedad como medios de cultivo, cultivos de microorganismos para descartar, lencera,
instrumentos quirrgicos, etc. Entre sus desventajas estn que no permite la esterilizacin

de materiales sensibles al calor y materiales no miscibles con el agua como en el caso de


polvo, aceites y grasas. (1)
La reaccin de Maillard es un grupo muy complejo de transformaciones que traen consigo
la produccin de melanoidinas coloreadas que van desde amarillo claro hasta caf oscuro,
o incluso negro; para que se lleven acabo se requiere de un azcar reductor (cetosa o
aldosa) y un grupo amino libre proveniente de un aminocido o de una protena. (2)
Aunque la reaccin se puede efectuar en diferentes condiciones, est principalmente
influenciada por los siguientes parmetros:
a) A pH alcalino se incrementa la velocidad y alcanza el mximo a pH de 6.
b) Las temperaturas elevadas tambin la aceleran, pero debido a que su energa de
activacin es baja, tambin se observa hasta en condiciones de refrigeracin. por
cada 10C de aumento, la velocidad se incrementa tres veces.
c) Otro factor importante es la actividad acuosa por lo que los alimentos de actividad
de agua intermedia son los ms propensos.
d) El tipo de aminocido es decisivo, puesto que stos sern ms reactivos en la
medida en que se incremente el tamao de la cadena y tengan ms de un grupo
amino.
e) Los azcares reductores que ms favorecen la reaccin de maillard son en primer
trmino las pentosas y, en segundo trmino las hexosas; asimismo, las aldosas
actan ms fcilmente que las cetosas, y los monosacridos son mas efectivos que
los disacridos.
La reaccin de maillard se lleva a cabo de manera muy compleja mediante un gran
nmero de mecanismos que incluyen la posible produccin de radicales libres.

HIPOTESIS
Al aplicar a un determinado material como un medio de cultivo, vapor de agua a presin de
15 lb (121C) por un tiempo determinado, se produce la destruccin total de los
microorganismos viables presentes en el mismo.

OBJETIVOS

Elaborar y esterilizar un medio de cultivo para su utilizacin


Conocer el funcionamiento de la autoclave y percatarse de las reacciones ocurridas
durante el proceso de esterilizacin

MATERIALES Y METODOS
Material
Glucosa
Peptona de casena
Extracto de carne
NaCl

Peso (g/l.)
30
5
3
8

metodologa

Se prepararon dos soluciones que contenan diferentes concentraciones de dextrosa


(glucosa), peptona y extracto de carne y NaCl.
En la primera se pesaron 18 g de glucosa la cual se introdujo a un matraz Erlenmeyer de 1l,
despus se pesaron 9 g de extracto de levadura y se aadieron al matraz con la glucosa.
Luego, se pesaron 18 g de peptona y se agregaron a la mezcla de glucosa y extracto de
levadura y se aadieron 900 ml de agua destilada a la mezcla (glucosa, extracto de levadura
y peptona). Posteriormente se agito hasta disolver la solucin en el agua, se coloc sobre la
tela de asbesto y se montaron en el trpode y se puso a fuego.
En la segunda se pesaron 10.5 g de glucosa y se vaciaron a un matraz Erlenmeyer de 1l, se
pesaron 5.75 g de extracto de levadura y se mezclaron con la glucosa en el matraz
Erlenmeyer de 1 L, se pesaron 10.5 g de peptona y se aadieron a la mezcla de glucosa y
extracto de levadura, se agregaron 525 ml de agua destilada a la mezcla (glucosa, extracto
de carne y peptona), la solucin se mont en la tela de asbesto sobre el trpode, el mechero
de bunsen fue posicionado por debajo de la tela de asbesto para calentar la solucin
mientras se agitaba con el agitador de vidrio hasta obtener una disolucin total.
Se vaciaron 150 ml de solucin en un matraz baflado de 500ml y se repiti el vaciado ocho
veces ms hasta obtener 9 matraces baflados con una cantidad de 150 ml de solucin, se
vaciaron 75 ml de solucin en un matraz bafle de 250 ml, se les puso un tapn de algodn a
los matraces y se les sello con papel aluminio, se pasaron los matraces que contenan la
solucin a una autoclave para su esterilizacin, pasaron 9 minutos para la fase de
calentamiento de la autoclave hasta 121C, se mantuvo la temperatura durante 15 minutos
(fase de sostenimiento), la temperatura empez a decrecer y se dej pasar un aproximado
de 30 minutos para sacar los matraces y enfriarlos ayudndonos con hielo y agua,
posteriormente se colocaron los matraces en el enfriador.

RESULTADOS Y DISCUCIONES
Antes de poner los matraces a esterilizar en la autoclave el medio de cultivo presentaba un
color amarillento el cual despus de ser esterilizado present un color caf claro. Esto fue
debido a la reaccin de maillard la cual nos indica que al someter el medio de cultivo a la
esterilizacin a determinada presin y alcanzar una temperatura de 121C durante un
tiempo de 15 minutos hubo una prdida de sustrato en el medio.

Imagen # 1 medio de cultivo antes de la esterilizacin

Imagen #2 medio de cultivo despus de la esterilizacin

CONCLUSIONES
Se esterilizaron los medios de cultivo utilizando la autoclave los cuales presentaron la
reaccin de maillard.

BIBLIOGRAFIA
1) http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Ester
ilizaci%C3%B3n_por_calor_h%C3%BAmedo.pdf Fecha de consulta: 20 de febrero
de 2014
2) Badui Dergal Salvador. Qumica de los alimentos. Pearson educacin. 1999. Pags
75, 76, 77, 78
3) http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M%
C3%A9todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf Fecha de consulta: 20 de febrero de
2014

Vous aimerez peut-être aussi