DESCUBRIMIENTO DEL ADN

Hasta mediados del siglo 20 no se sospechaba que el cido

disoxirribonucleico, ADN, fuera la molcula capaz de asegurar la transmisin
de los caracteres hereditarios de clula a clula, generacin tras generacin.
Su limitada variedad qumica no permita suponer que poseyera la
versatilidad y ductilidad necesarias para almacenar la informacin gentica de
los seres vivos.
Durante el ao de 1869 el bilogo suizo Johann Friedrich Miescher, utilizo
alcohol caliente y luego una pepsina enzimtica, la cual separa la membrana
celular y el citoplasma de la clula, lo que se quera lograr era aislar el ncleo
de la clula.Este proceso se llev a cabo con los ncleos de las clulas
obtenidas del pus de vendajes quirrgicos desechados y del esperma de
salmn, sometindolos a estos materiales y a una fuerza centrfuga para
aislar a los ncleos y luego realizo un anlisis qumico a los ncleos.
De esta forma Miescher identifico a un nuevo grupo de substancias celulares
a las que denomino nuclenas.
Observo la presencia de fsforo,
despus Richard Altmann los identifico
como cidos y les dio el nombre de
cidos nucleicos.
En 1914 Robert Feulgen describi un
mtodo para revelar el ADN, basado
en el colorante fucsina.
En el transcurso de los aos 20, el
bioqumico P.A. Levene realizo un
analicis a los componentes del ADN y
encontr que contena cuatro bases
nitrogenadas: citosina y timina,
adenina
y
guanina;
azcar
desoxirribosa; y fosfato. Tambin
sealo que se encontraban unidas en
un orden definido el cual es: fosfatoazcar-base, formando lo que llamo
nucletido. Levene tambin expuso
que los nucletidos se encontraban
unidos por los fosfatos formando el ADN.
James Watson y Francis CrickEllos descubrieron la forma que del ADN al
interior de la clula: una hlice doble, que le permite replicarse y traspasar
informacin de una generacin a otra.

Este descubrimiento fue el punto de partida para el estudio del genoma.

Desde aquella fecha hasta hoy han pasado 50 aos, y los avances de la
Gentica han sido enormes.
El experimento de hershey-chase, el ADN es el material gentico.

En 1952 Alfred Hershey y Martha Chase, pertenecientes al grupo de bilogos

del Cold Spring Harbor Laboratory, estudiaron la gentica de los
bacterifagos, un bacterifago o fago, es un virus que especficamente ataca
e infecta una bacteria.

Ellos conocan que un fago tenia una capa externa de protena y un ncleo
interno de AND

El virus utiliza a la bacteria para reproducirse, de las observaciones con el

microscopio electrnico, ellos conocan que durante la infeccin el virus ataca
a la bacteria por sus colas, se pensaba que los genes eran introducidos en la
bacteria anfitrin, los cuales eran dirigidos a las enzimas de la bacteria para
replicar al virus.

El siguiente dibujo nos muestra en forma muy esquemtica los pasos en la

reproduccin del virus dentro de la bacteria y su ruptura con la distribucin de
nuevos virus.

Lo que se trataba de determinar la causa de la transformacin de la

bacteria en una factora de fagos, como lo sugera el trabajo de Avery, el
ADN del fago era un principio transformador.
De anlisis previos se conoca que el ADN contiene tomos de fsforo P
pero no azufre S, por otro lado las protenas del virus contenan tomos
de azufre pero no tomos de fsforo.
Se utiliz tomos radiactivos de fsforo 32P y azufre 35S para marcar
selectivamente el ADN y la protena del virus y al realizar la experiencia
se quera saber que componente entraba en la infeccin de la bacteria.

En dos experimentos paralelos, se combin a los virus marcados con los

tomos radiactivos con las bacterias,

Se esper un tiempo suficiente para que los virus infecten a las bacterias y a
este sistema se lo someti a una licuadora ( Waring blender).
A continuacin se someti a las muestras a una centrifugacin para separar
los fagos de las bacterias, las bacterias son ms grande y ms pesadas que
los virus, las bacterias se recogieron al fondo del tubo de ensayo, mientras
que los fagos se quedaron en suspensin.
Examinando luego las dos muestras se verifico, en la marcada como 35S los
nuevos fagos provenientes de la bacteria infectada no contenan el azufre
radiactivo, la cubierta del fago la cual esta echa de protena no fue usada
dentro de la bacteria para hacer un nuevo fago.
Al investigar la muestra marcada con fsforo radiactivo 32P, el mismo se
encontraba en los nuevos fagos, por lo tanto el ADN del fago fue usado
dentro de la bacteria para hacer nuevos virus.
La cubierta del fago entrega el ADN dentro de la bacteria y es el ADN
solamente el que lleva las instrucciones para replicar a los fagos dentro de la
bacteria, luego el ADN es el material gentico.

Griffith, Avery y el ADN

El cientfico ingls Frederick Griffith ha pasado a la historia por el llamado

"experimento de Griffith", realizado mientras investigaba para conseguir una
vacuna contra la neumona.

En 1928, realiz una serie

de experimentos en los que
infectaba conejos con
distintos tipos de
neumococos, obteniendo
los resultados que se
observan en la figura.

Como conclusin de sus

trabajos, dedujo que exista
un principio transformante
que poda transferirse de
unas bacterias a otras y
que alteraba las
caractersticas hereditarias
de las clulas receptoras,
ya que diferentes formas no
patgenas de neumococos
podan convertirse en
virulentas al entrar en
contacto entre s.

Su muerte en un bombardeo durante la 2 guerra mundial, en 1941, le priv

de todo reconocimiento de la comunidad cientfica, ya que hasta bastantes
aos despus no se hizo evidente la importancia de su famoso experimento.

En 1944, O.T. Avery y sus colaboradores (Colin McLeod y Maclin McCarty)

investigaron la naturaleza de esta sustancia.

Para ello, comenzaron analizando y

comprobando minuciosamente las
caractersticas conocidas del principio
transformante.
De ellas dedujeron que no poda tratarse
de una protena, ya que no se
desnaturalizaba por el calor.
Dado que el ncleo (en las bacterias,
nucleoide), parte de la clula
responsable de los caracteres
hereditarios, estaba compuesto
mayoritariamente por protenas y ADN,
trabajaron sobre la idea de que tal vez fuera el ADN la sustancia buscada.
Disearon un complejo mtodo para extraer el material gentico de
neumococos patgenos, separar las distintas molculas incluidas en su
interior y aislar el ADN. Por ltimo, eliminaron las distintas impurezas que
pudieran estar asociadas a esta molcula y la extrajeron por mtodos fsicos.
Repitieron estos procesos hasta obtener una cantidad apreciable de ADN de
neumococo virulento altamente purificado.
Por otra parte, emplearon los mtodos diseados por Griffith para obtener
cepas de neumococos sin cpsula y, por tanto, no virulentas.

Al poner en contacto el ADN con los neumococos no encapsulados,

observaron que aparecan individuos con cpsula y que, por ello, infectaban
a conejos. Es decir, el ADN de neumococos normales era capaz de
transformar a otros no virulentos, apareciendo bacterias encapsuladas.
Adems, comprobaron que nicamente el ADN era capaz de producir este
efecto, ya que no ocurra nada cuando se utilizaban las protenas, lpidos o
glcidos contenidos en el ncleo de estas clulas.

De todo ello dedujeron que el principio transformante de Griffith era el ADN y

que, por lo tanto, al menos en bacterias, esta molcula no tena el carcter
estructural que se le supona, sin que era la responsable de todas las
actividades bioqumicas y caractersticas especficas y heredables de las

clulas (en otras palabras: el ADN es el portador fundamental de la

informacin gentica).

Los resultados obtenidos por Avery y sus colaboradores, fruto del trabajo de
muchos aos, fueron difundidos en las ms importantes publicaciones
cientficas, pero no obtuvieron el inmediato reconocimiento que hubiera sido
de esperar...