PRINCIPIOS DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE.

Resumen.
La tecnologa de DNA recombinante es un procedimiento de ingeniera gentica
que se viene usando desde hace algunos aos y en la actualidad tiene una amplia
variedad de aplicaciones. Esta tcnica se basa en la insercin de DNA forneo al
genoma de una clula hospedadora, para que sta lo exprese como si fuese suyo.
Este proceso se realiza mediante el uso de enzimas de restriccin, vectores de
clonacin y hospedadores (procariotas o eucariotas), y consiste en aislar un
fragmento de DNA con genes de inters para el investigador e introducirlo en un
vector, el cual se encarga de llevarlo al hospedero para que ocurra recombinacin.
En la actualidad se producen alimentos transgnicos y bio-molculas con esta
tecnologa, la cual tambin ha abierto nuevas perspectivas en el campo de la
medicina, la gentica, la bio-remediacin y la industria.
Palabras clave: DNA, recombinacin, enzimas, ciclo celular, replicacin, virus,
plsmidos.
Introduccin.
Uno de los ms grandes avances de la ciencia contempornea ha sido el
desarrollo de la ingeniera gentica y la biotecnologa. Por medio de estas dos
disciplinas muy relacionadas entre s se ha logrado manipular genticamente a
los individuos con el fin de propiciarles nuevas caractersticas.
La tecnologa del DNA recombinante es una tcnica que ha permitido introducir
material gentico forneo en un individuo, y hacer que ste organismo incorpore
dicho material a su genoma y lo exprese como si fuera suyo (Bohinski 1991,
Greene & Rao 1999). Esta tecnologa desarroll a partir del descubrimiento de las
enzimas de restriccin (Griffiths et al. 1998, Klug & Cummings 1999) y su accin
sobre los cidos nucleicos. Cuando se complement el estudio de las enzimas de

restriccin con la micro-manipulacin (conjunto de tcnicas que permiten inyectar

y succionar porciones de una clula) se desarroll esta nueva tecnologa, que ha
abierto las puertas a un nuevo y amplio campo de accin a la gentica molecular
(Reina 2000).
El principio de la tecnologa de DNA recombinante se basa en la insercin de un
fragmento de DNA forneo (Reina 2000) en un hospedero de clonaje molecular
(Silva 1999) por medio de un vector de clonaje, como ser un virus o un plsmido
(Moreira & Mendes 1998). Una vez que el fragmento de DNA forneo se ha
introducido en el hospedero, comienza el proceso de clonaje molecular y la
recombinacin, dando como resultado la expresin del gen o los genes
introducidos en un organismo diferente (Madigan et al. 1998).
En la actualidad existe una gran cantidad de aplicaciones de la tecnologa de DNA
recombinante a todo nivel. Se aplica esta tcnica para la produccin de vacunas
(Klug & Cummings 1999), para la produccin de protenas, aminocidos, vitaminas
y ribonucletidos (Hashimoto & Ozaki 1999) y la produccin de curas genticas
para algunas enfermedades (Griffiths et al. 1998, Klug & Cummings 1999), en el
campo mdico.
La ingeniera gentica en plantas tambin ha provisto la mejora de ciertas
especies hacindolas ms resistentes o introduciendo ciertas caractersticas de
otros individuos para mejorarlas (Madigan et al. 1998, Klug & Cummings 1999).
Otra aplicacin de la tecnologa de DNA recombinante bastante reciente, es la
produccin de microorganismos transgnicos para procesos de bioremediacin de
hidrocarburos (Keasling & Bang 1998, Timmis & Pieper 1999, Pieper & Reineke
2000; Coates & Anderson 2000), metales pesados como el mercurio (Chen &
Wilson 1997, Sayler & Ripp 2000). Las tcnicas de bioremediacin permiten una
descontaminacin de ambientes afectados por medio del uso de microorganismos
capaces de degradar ciertas sustancias, en muchos casos se han empleado
organismos nativos del lugar pero tambin se ha trabajado con numerosas cepas
modificadas genticamente para amplificar su accin sobre los contaminantes.

En esta revisin se vern los principios bsicos de la tecnologa de DNA

recombnate y se analizarn las diferentes aplicaciones actuales y potenciales de
este proceso.
PRINCIPIOS DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE.
Enzimas

de

restriccin:

produccin

de

fragmentos

de

DNA

para

recombinacin.
Las enzimas de restriccin o endonucleasas de restriccin fueron descubiertas
por Werner Aber, Hamilton Smith y Daniel Nathans (Stryer 1995). Estas son
enzimas sumamente especficas que catalizan la hidrlisis de los enlaces
fosfodister de los cidos nucleicos (Bohinski 1991) y son capaces de cortar
ambas hebras del DNA en lugares especficos, creando de esta manera una serie
de fragmentos (Stryer 1995). Se ha visto que ciertas cepas de E. coli degradan
(cortan) el DNA de ciertos virus fagos infectivos, a menos que los cidos nucleicos
presenten metilacin (adicin de grupos metilo) en algunos residuos de adenina o
citosina del sitio de corte.
La funcin de las enzimas de restriccin es la proteger al organismo de DNA
extrao. Cuando una porcin de DNA forneo ingresa a la clula, las enzimas de
restriccin se encargan de degradarlo cortndolo en pequeos fragmentos,
siempre y cuando ste no est modificado (Smith & Wood 1998).
Actualmente se conocen unas 200 enzimas de restriccin (las ms conocidas se
muestran en la tabla 1), las cuales se nombran de acuerdo al organismo del cual
se extraen, como por ejemplo EcoRI y EcoRII, que se extraen de E. coli o HaeIII
que se extrae de Haemophilus aegyptius.

Tabla 1: Algunas de las principales enzimas de restriccin conocidas y su

origen (en base a Griffiths et al. 1998).

Enzima de
restriccin

Organismo de donde
se extrae

EcoRI

Escherichia coli

EcoRII

Escherichia coli

HindII

Haemophilus
influenzae

HindII

Haemophilus
influenzae

HaeIII

Haemophilus aegyptius

HpaII

Haemophilus
parainfluenzae

PstI

Providencia stuartii

SmaI

Serratia marcesens

BamI

Bacillus
amyloliquefaciens

BglII

Bacillus globiggi

Las enzimas de restriccin trabajan nicamente sobre secuencias especficas de

bases nitrogenadas, el lugar donde se produce el corte se denomina sitio de
restriccin y producen dos tipos de corte: (1) corte con extremos cohesivos y (2)
corte con extremos romos (ver Fig. 1) (Griffiths et al. 1998). Los extremos
cohesivos dejan porciones lineales a ambos lados del fragmento, es decir,
quedan pequeas secuencias de bases sin aparear a cada lado, siendo stas
complementarias entre s, mientras que los extremos romos son aquellos en los
que no queda una porcin lineal a ninguno de los lados. De acuerdo a la
especificidad de las enzimas de restriccin, se conocen dos tipos: las enzimas de
tipo I cortan en un sitio cercano al sitio de restriccin, a una distancia que vara
aleatoriamente, y por ello no se suelen emplear para DNA recombinante. Las de
tipo II reconocen y cortan en la secuencia especfica, y son las ms empleadas en
este tipo de protocolos por su alta precisin. Las enzimas de restriccin de tipo III
son similares a las de tipo II en cuanto a la precisin del lugar de corte, pero se

diferencian de stas en que slo cortan entre nucletidos del mismo tipo, por
ejemplo entre dos adeninas.

Fig. 1: Produccin de extremos (a) cohesivos y (b) romos, por medio de enzimas de
restriccin en hebras de DNA.

Otro mtodo para producir fragmentos pequeos de DNA para recombinacin

consiste en emplear ultrasonidos. Los ultrasonidos son capaces de romper al
DNA cromosomal en pequeos fragmentos. A pesar de ser un procedimiento muy
sencillo, tiene la desventaja de producir fragmentos aleatorios y no permite aislar
genes con gran precisin (Mateos 2000), sin embargo son empleados por su
facilidad de uso.
Algunas enzimas de restriccin como EcoRV encuentran el sitio de restriccin, por
medio de un barrido a lo largo del surco mayor del DNA y reconocen una
secuencia palindrmica de seis nucletidos de longitud, en la que se presenta una
simetra rotacional binaria. Cuando la enzima de restriccin encuentra el sitio de
corte, se producen una serie de reordenamientos estructurales en el DNA y se
produce un ajuste inducido en el cual el DNA sufre una torsin de 50 grados. En
este proceso se va haciendo un barrido muy rpido sobre la hebra de DNA,
leyendo grupos de seis nucletidos, hasta encontrar la secuencia diana. Esto
comprueba el carcter altamente especfico de las enzimas de restriccin (Stryer
1995).
Los puntos de corte de las enzimas de restriccin pueden ser empleados como
marcadores para la elaboracin de mapas de restriccin (Mateos 2000). Para
elaborar un mapa de restriccin, se tien los fragmentos resultantes de la lisis y se
los separa mediante una electroforesis PAGE (Electroforesis en gel de
poliacrilamida) (Smith & Wood 1998, Mateos 2000) y se establecen las distancias
de migracin, siendo los resultados muy especficos para cada molcula de DNA
en estudio (Griffiths et al. 1998). Los extremos cohesivos son los ms empleados

en la construccin de DNA recombinante, puesto que al tener una porcin lineal

"pegajosa" es ms sencillo que se produzca la unin con el DNA del hospedero,
por complementacin de bases, dicha unin se produce por la intervencin de
enzimas denominadas ligasas. Adicionalmente, la enzima transferasa terminal
puede ser usada para generar extremos cohesivos en un fragmento de DNA. A
pesar de ser ms difcil, tambin es posible realizar uniones de extremos romos,
mediante la adicin de conectores sintticos de DNA que actan a manera de
extremos cohesivos (como el caso de la transferasa terminal), sin embargo este
procedimiento no es de mucha utilidad para realizar una clonacin directa de DNA.
Existe otro tipo de enzimas de restriccin de doble funcin, denominadas endo
exonucleasas, las cuales son capaces tanto de aadir nucletidos como de
removerlos de una hebra de DNA. Estas enzimas tambin son muy especficas y
reconocen secuencias exactas (Bohinski 1991, Stryer 1995) Fraser (1994), plantea
que las enzimas de restriccin del tipo endoexonucleasas pueden tener un
papel fundamental en la reparacin del DNA y/o en la muerte de clulas
defectuosas, gracias a la especificidad de la enzima. Se han hecho numerosos
experimentos con endoexonucleasas aisladas de E. coli, Neurospora crassa,
Aspergillus nidulans, mitocondrias de Saccharomyces cerevisiae, Drosophila
melanogaster, clulas de mono y clulas leucmicas de humano (Fraser 1994).
Las potenciales aplicaciones en la medicina de estas enzimas podra llevar a curar
varias enfermedades, este aspecto se ver a detalle ms adelante.
Vectores de clonacin.
Una vez que se han aislado los fragmentos de DNA de inters, por medio de
enzimas, el siguiente paso es unirlos a un vector de clonacin. Los vectores de
clonacin permiten la unin de los fragmentos de DNA extrao a su propio DNA
por medio de sitios de restriccin compatibles, sin afectar su replicacin, por medio
de un proceso de recombinacin (Madigan et al. 1998, Moreira & Mendes 1998,
Klug & Cummings 1999) El vector es el vehculo que transporta el gen o genes de
inters al hospedero, que normalmente es una bacteria o una clula eucariota

viva. Una vez dentro la clula, el vector se multiplica produciendo varias copias
idnticas del gen que transporta (Moreira & Mendes 1998). Para que un vector sea
utilizable en la tecnologa de DNA recombinante, debera ser fcilmente
recuperable de la clula hospedadora, adems de no producir daos.
Actualmente, se usan diferentes tipos de vectores para la produccin de DNA
recombinante, los principales son los plsmidos, los bacterifagos, los csmidos,
vectores transbordadores, clulas eucariotas y cromosomas artificiales, entre otros
(Madigan et al. 1998, Klug & Cummings 1999).
Plsmidos.
Los plsmidos (Fig. 2) son molculas de DNA bicatenario de carcter
extracromosmico

tienen la capacidad de
replicarse
autnomamente.
Adems de transportar
los genes de inters
para

el

investigador,

los

plsmidos

transportan

otros

genes que le confieren

propiedades
importantes

al

hospedador, como ser

la resistencia a ciertos
antibiticos

(Madigan

et al. 1998, Klug &

Cummings 1999).

Fig. 2: Plsmido pBR322 con sus diferentes sitios de restriccin (tomado de Klug &
Cummings 1999).

Los plsmidos pueden dividirse en dos grupos: plsmidos conjugables y plsmidos

no conjugables. Los primeros promueven la conjugacin entre bacterias, pasando
de una clula a otra, y confirindola nuevas caractersticas codificadas en su
genoma, los otros actan principalmente en procesos de transformacin. Los
plsmidos se clasifican en plsmidos de fertilidad, plsmidos de resistencia,
plsmidos col, plsmidos degradativos y plsmidos virulentos (Moreira & Mendes
1998).
La utilizacin y el diseo de plsmidos para ingeniera gentica ha considerado
que estos vectores contengan un nmero limitado de sitios de restriccin (puesto
que la posicin es importante), y adems que posean genes de resistencia para
varios antibiticos. El vector pBR322 fue uno de los primeros plsmidos usados
para la construccin de DNA recombinante (Klug & Cummings 1999). Segn
Madigan et al. (1998), este plsmido presenta nueve caractersticas que lo hacen
adecuado como vector de clonacin:
1. Es pequeo, slo tiene 4361 pares de bases.
2. Es estable cuando se encuentra dentro el hospedador.
3. Se pueden producir muchas copias de l, por medio de la inhibicin de la
sntesis de protenas.
4. Es fcil de aislar en su forma sper enrollada.
5. Pueden clonar fragmentos insertos relativamente grandes.
6. Se conoce la secuencia completa de bases del mismo.
7. Existen sitios de restriccin nicos para las principales endonucleasas.
8. Posee varios genes de resistencia a antibiticos.
9. Es fcil de introducir a los hospedadores.
Fagos y Bacterifagos.
Los virus ms empleados como vectores para DNA recombinante son los
bacterifagos lambda y M13, por su facilidad de incorporar genes de otros

individuos a su genoma. La transduccin especializada que presentan los

fagos lambda hacen que sean usados como vectores, pero en este caso la
recombinacin se da dentro de la clula hospedadora y no en los tubos de
ensayo (Madigan et al. 1998). Esta transduccin especial se basa en un
proceso de eliminacin del grupo gnico central del DNA del fago, por medio
de enzimas de restriccin, y la posterior insercin y ligamiento del DNA
exgeno, para luego proceder al empaquetamiento del virus.
Los fagos lambda silvestres no son tiles como vectores, por lo tanto se deben
producir fagos modificados, que contengan el DNA forneo. El proceso de
incorporacin de DNA forneo se muestra en la Figura 3 (Madigan et al. 1998).
Los pasos que se deben seguir para la clonacin del fago lambda son los
siguientes (segn Madigan et al. 1998):
1. Aislar el DNA del fago vector y proceder a la digestin por enzimas de
restriccin.
2. Ligar los fragmentos esenciales del DNA del vector con el DNA forneo.
3. Empaquetar el DNA hbrido en extractos celulares que contengan las
protenas de la cpside y la cola.
4. Producir la infeccin del hospedero.
Los fagos M13 son filamentosos (Moreira & Mendes 1998) y se caracterizan
por presentar una cadena de DNA simple, la cual se replica dentro el
hospedero formado una doble cadena, denominada forma replicativa. Este
fago es til porque resulta sencillo aadir una porcin de DNA forneo a su
cadena lineal, mediante el empleo de enzimas de restriccin apropiadas. Los
vectores M13 tambin pueden ser usados para la secuenciacin de DNA,
mediante la elaboracin de mapas de restriccin, que hacen ms fcil la
secuenciacin del material gentico (Madigan et al. 1998, Klug & Cummings
1999), mediante un proceso previo de replicacin del material gentico a una
estructura de doble hebra, puesto que las enzimas de restriccin no son
capaces de cortar cadenas simples.

Fig. 3 Pasos a seguir para la incorporacin de DNA forneo a un virus vector (Madigan
et al. 1998).

Virus
En la actualidad existen muchos virus conocidos, sin embargo solamente se
utilizan dos como vectores para el trasporte de DNA extrao. Esto se debe a que
no todos los virus renen las condiciones necesarias que permitan insertar en su
material gentico otros genes y transportarlos hasta el hospedero. En la actualidad
se est estudiando a posibilidad de utilizar otros virus como vectores de clonacin,
entre ellos estn el SV40, algunos adenovirus y algunos baculovirus (Moreira &
Mendes 1998).

Se distinguen dos tipos principales de vectores de clonacin en virus: los vectores

de insercin y los vectores de sustitucin. Los vectores de insercin son aquellos
en los cuales se elimina una parte de DNA "no esencial" para la insercin de los
genes forneos, mientras que en los vectores de sustitucin se reemplazan
porciones del DNA "esencial" por medio de la accin enzimtica sobre varios sitios
de restriccin (Moreira & Mendes 1998).
Csmidos.
Los csmidos son modernos vectores hbridos que emplean genes especficos del
fago lambda: la secuencia cos. Estos vectores se construyen con la secuencia

cos ms la porcin de DNA forneo insertada en el extremo cohesivo de este

fragmento.

La porcin

cos se emplea porque es necesaria para el

empaquetamiento del material gentico dentro del virin lambda, las secuencias
plasmdicas de replicacin y la informacin necesaria para la resistencia a
antibiticos (Madigan et al. 1998, Moreira & Mendes 1998, Klug & Cummings
1999).
El DNA forneo se una con la secuencia cos y penetra en la clula como un virus,
pero una vez que est dentro, se comporta como un plsmido. Puesto que la
mayora del genoma del fago lambda se ha eliminado, la porcin de DNA forneo
que se puede introducir es mucho mayor (puede transportar hasta 50kb de DNA),
lo cual constituye una ventaja frente a los otros vectores que slo pueden
transportar de 5 a 10kb.
Vectores transbordadores.
Otros vectores hbridos modernos, son los vectores transbordadores. Estos
provienen de diferentes fuentes, como el virus SV40 y otros plsmidos o virus
vegetales y/o animales. Tanto los csmidos como los vectores transbordadores
permiten clonar una mayor cantidad de DNA con un menor nmero de clones
(Madigan et al. 1998). Los vectores transbordadores permiten introducir DNA

extrao de hasta 50 kb de tamao, en contraposicin a los virus y plsmidos que

estn limitados para transportar de 5 a 10 kb nicamente, puesto que una porcin
de mayor tamao desestabilizara todo el genoma (Klug & Cummings 1999).
A menudo, los vectores transbordadores son usados para la investigacin de la
expresin gnica.
Otros vectores.
Adems de los vectores vistos anteriormente, existen otros que presentan algunas
modificaciones tiles. Estos son los vectores de expresin y los vectores de
secrecin. Los vectores de expresin son aquellos que se emplean para
obtener la sntesis de una protena codificada por e gen clonado dentro el vector.
Los vectores de secrecin hacen una tarea similar y adems exportan esta
protena fuera de la clula, porque contienen una secuencia seal (Madigan et al.
1998, Smith & Wood 1998).
Otros vectores de gran utilidad son los cromosomas bacterianos artificiales, los
cuales son muy tiles para el estudio de cartografa y anlisis de genomas
eucariticos complejos. Estos cromosomas bacterianos artificiales poseen los
genes de replicacin, varias copias del factor F y marcadores para la resistencia a
antibiticos, y son capaces de transportar hasta un milln de bases nitrogenadas.
Tambin se han desarrollado vectores a partir de clulas eucariotas. El ms
conocido y empleado consiste en un juego de cromosomas artificiales de
levadura, los cuales son capaces de albergar segmentos muy grandes de DNA.
Estos vectores son capaces de replicarse como si fueran cromosomas normales
de levadura y poseen varios sitos de insercin de genes (PrezGonzlez et al.
1993).
Hospederos para el clonaje de material gentico recombinante.
Una vez introducido el DNA forneo en el vector, es necesario que ste sea
incorporado a un sistema vivo para expresar los genes adicionados, la mayora de

las veces. Este hospedero, normalmente es una bacteria o una clula de levadura,
aunque tambin se han introducido vectores de DNA recombinante en organismos
eucariotas pluricelulares (Silva, 1999). Un hospedero debe presentar las
siguientes caractersticas, para que sea considerado apto para la produccin de
clones de DNA recombinante:
1. Debe tener un crecimiento rpido, para poder observar varias generaciones
en poco tiempo.
2. Poder crecer en un medio de cultivo econmico, pues de lo contrario
representaran costos muy elevados y el nmero de estudios estara
limitado por problemas econmicos.
3. No ser patgeno, por seguridad del investigador y el personal de
laboratorio.
4. Tener el mismo origen de replicacin que el vector, para que as sea
factible la insercin del DNA forneo que ste transporta.
5. Tener las enzimas adecuadas que permitan la replicacin adecuada del
vector.
6. Ser un organismo del cual se tenga bastante conocimiento, como E. coli,
puesto que mientras ms informacin se tenga ser ms fcil explicar los
fenmenos ocurridos.
Silva (1999) define una tabla (ver tabla 2) con los hospederos ms
usados en ingeniera gentica:

La insercin del DNA forneo, mediante el vector, se realiza generalmente por un

proceso de transformacin. Las clulas receptores crecen luego en una placa de
cultivo, produciendo varias clulas genticamente idnticas, llamadas clones, las
cuales tienen incorporado el gen o genes que se desea expresar. En el proceso de
insercin del DNA forneo mediante el vector, no todos los intentos son exitosos, y
alguna clulas no reciben el material gentico extra, puesto que stas deben estar
en un estado competente para poder recibir DNA del medio externo, y la cantidad
de clula, tiempo de duracin y condiciones del medio para que las clulas entren
en competencia depende de la clula y son caractersticas propias de cada
especie. Estas clulas deben ser aisladas de las recombinantes por medio del uso
de medios selectivos, puesto que normalmente el vector adems contiene ciertos
genes para la resistencia a antibiticos, un medio selectivo con diferentes
antibiticos es una buena alternativa (Klug & Cummings 1999).
Hospederos procariotas.
El primer hospedero empleado para clonacin de DNA mediante esta tcnica, y el
ms usado en la actualidad es E. coli. Esta bacteria, es posiblemente la mejor
conocida por los cientficos y se tiene gran cantidad de informacin sobre su
genoma y sus caractersticas fisiolgicas (Madigan et al. 1998, Smith & Wood
1998). La cepa K12 de E. coli constituye un hospedero bastante bueno, por
cumplir las condiciones anteriormente mencionadas. Sin embargo, E. coli en su
forma nativa produce una retencin de protenas en el periplasma, haciendo difcil
su aislamiento. Para contrarrestar este problema se han desarrollado cepas
modificadas de esta bacteria, como ser E. coli mutantes para la bioremediacin de
ambientes contaminados con mercurio (Chen & Wilson 1997). Otra ventaja de E.
coli es que puede aceptar una amplia gama de vectores, como los plsmidos, los
bacterifagos y los csmidos, entre otros (Madigan et al. 1998, Klug & Cummings
1999).
Se ha usado a E. coli para la produccin de muchas sustancias de inters mdico,
como protenas y vitaminas, mediante la insercin de los genes que las codifican

(Hashimoto & Ozaki 1999). Un ejemplo de esto, es la produccin de grandes

cantidades de insulina en cultivos de E. coli transgnica, cuyos productos estn
destinados a los enfermos de diabetes (Bohinski 1991), sin embargo en la
actualidad se discute sobre los problemas que puede acarrear el uso de estas
bacterias modificadas, puesto que los productos obtenidos no son de origen
natural y existe la posibilidad que resulten txicos en cierta medida (Kppeli &
Auberson 1998).
La tecnologa de DNA recombinante llega an ms all de la simple produccin de
protenas, se han modificado cepas de E. coli para la bioremediacin de
hidrocarburos (Keasling & Bang 1998; Timmis & Pieper 1999; Coates & Anderson
2000) y mercurio (Chen & Wilson 1997), en ambientes altamente contaminados. El
desglose de estas aplicaciones se ver ms adelante,
Otro hospedero procariota utilizado en la tecnologa de DNA recombinante es
Bacillus subtilis. Esta bacteria normalmente no es patgena, no produce
endotoxinas y secreta protenas al medio. No existen tantos estudios de cmo
usar esta bacteria como hospedero, como los existentes para E. coli, y muchas
veces se presentan problemas al usarla como hospedador porque no es fcil
adaptarla para la clonacin de genes (Madigan et al. 1998), puesto que su
maquinaria biosinttica no es tan flexible como la de E. coli.
Hospederos eucariotas.
Si bien E. coli es un buen hospedero para muchos propsitos de ingeniera
gentica y DNA recombinante, tiene la desventaja de carecer de ncleo y otros
organelos, y al ser un organismo procaritico, es posible que no exprese
correctamente protenas introducidas de origen eucaritico, por ello se ha visto la
alternativa de emplear hospederos eucariticos (Silva 1999).
En la actualidad se vienen usando tambin clulas eucariotas como hospederos
para la clonacin de DNA. Esto ha permitido que se ample notablemente el
conocimiento que se tiene sobre cmo funciona la maquinaria gentica de las

clulas eucariotas. El hospedero eucariota ms empleado es la levadura

Saccharomyces cerevisiae, puesto que de sta se conoce mucho desde el punto
de vista gentico (Madigan et al. 1998), y se tiene un "catlogo" completo de
genes y mutaciones, as como la identificacin del plsmido 2m , de origen natural,
el cual constituye un excelente vector (Klug & Cummings 1999). Saccharomyces
cerevisiae tiene un genoma de aproximadamente 2*107 pares de bases,
contenidos en 17 cromosomas lineales, el plsmido 2m tiene 6318 pares de bases
y es comn encontrar muchas copias de l en cada clula alrededor de 50
copias, por lo cual se constituye en un organismo ideal para la clonacin de DNA
(Silva 1999).
Tomando como punto de partida la utilizacin de clulas de levadura como
hospederos para clonaje molecular, se han desarrollado otros mtodos para la
produccin de DNA recombinante en eucariotas. Uno de estos mtodos es la
construccin de cromosomas artificiales de levadura, los cuales se usan como
vectores (Klug & Cummings 1999).
Aparte de las levaduras, se han usado otros hospederos eucariticos para la
clonacin de DNA forneo, como ser hongos (Aspergillus sp. y Neurospora crassa
son los ms usados) y algas unicelulares como Chlamydomonas reinhardtir.
Adems se han hecho algunas pruebas con cultivos de clulas animales y
vegetales (Silva 1999). Los cultivos de clulas animales abren un vasto campo de
investigacin, muy relacionado con la medicina, ya que al tener clulas humanas
en cultivo, por ejemplo, sera mucho ms fcil estudiar fenmenos como el cncer.
Sin embargo, el utilizar cultivos de clulas animales, y en cierta medida cultivos
vegetales, significa un costo muy elevado y menores posibilidades de
manipulacin que con un cultivo de bacterias (Madigan et al. 1998, Klug &
Cummings 1999).
Transfeccin y clonacin del DNA.
Una vez que se aislado el fragmento a ser transportado, se lo ha insertado en el
vector y se ha seleccionado un hospedador adecuado, se debe proceder con la

transfeccin del material gentico para que comience el proceso de clonacin de

DNA.
La transfeccin del DNA incluido en el vector se la debe hacer tomando en cuenta
que la clula posee una barrera que la limita y escoge selectivamente qu
sustancias penetrarn dentro de ella, esta barrera es la membrana celular. Para
superar esta barrera, se han diseado las tcnicas de transfeccin de sustancias,
que se encargan de abrir poros en la membrana o inducir la endocitosis por vas
naturales (Reina 2000). Estos procedimientos se dividen en tcnicas de
permeabilizacin celular, microinyeccin y tcnicas de transfeccin propiamente
dichas.
Tcnicas de permeabilizacin celular.
Esta tcnica consiste en mantener a las clulas vivas por varias horas en una
solucin con condiciones diferentes a las del medio, para que la diferencia de
concentraciones produzca la apertura de poros a todo lo largo de la membrana
celular. Un efecto parecido se obtiene con el uso de detergentes suaves que
disuelven parcialmente la membrana. Este sistema es conveniente y resulta
econmico, pero presenta dos grandes inconvenientes: la escasa duracin del
ciclo celular viable, y la prdida incontrolable de componentes celulares (Reina
2000).
Microinyeccin.
Esta tcnica permite la introduccin de material ajeno a la clula mediante una
micropipeta (Fig. 4), que se controla bajo un microscopio de alta resolucin. Esta
tcnica es muy sensible, y requiere de equipo muy sofisticado y costoso, pero se
obtienen buenos resultados, a pesar de no ser recomendable para el tratamiento
de varias clulas ya que el trabajo se vuelve tedioso (Reina 2000).

Fig. 4: Microinyeccin de material gentico a un cigoto de mamfero (Klug &

Cummings 1999).

Existen adems sistemas de microinyeccin biolgicos, como los virus, que

inoculan su material gentico dentro de la clula hospedadora, y es por ello que
son muy usados como vectores.
Tcnicas de transfeccin.
Estas tcnicas han sido desarrolladas especficamente para la introduccin de
cidos nucleicos dentro de las clulas, y han permito ampliar los conocimientos
que se tenan sobre replicacin, regulacin gnica y el funcionamiento de las
clulas a nivel molecular, entre otras, que actualmente se aplican en el campo de
la gentica para la produccin de plantas y animales transgnicos (Cavener 1992;
Kppeli & Auberson 1998), lneas celulares modificadas, y una de sus principales
aplicaciones es la construccin de DNA recombinante.
La introduccin de una cadena de DNA recombinante en las que se ha situado
una secuencia codificante, bajo una secuencia de regulacin que se desea

estudiar permite medir con facilidad las tasas de expresin gentica en diferentes
situaciones experimentales. Por otro lado, la introduccin de un plsmido con
secuencias codificante y reguladora permite la produccin de una protena
deseada, en este caso se emplea a la clula hospedadora como una "fbrica" para
este producto (Reina 2000).
Para los dos casos vistos anteriormente puede ser importante la seleccin de las
clulas que han recibido el material gentico incorporado de las que no, para ello
se puede realizar un cultivo en medio selectivo, puesto que normalmente los
plsmidos que se insertan incluyen tambin genes de resistencia a algunos
antibiticos.
Las tcnicas de transfeccin se pueden dividir en tres grupos:

Mtodos qumicos: son aquellos en los que se forman complejos para que
la clulas sean capaces de aceptar o incorporar una cierta molcula a su
citoplasma, por medio del mecanismo normal de endocitosis. Para esta
finalidad se usan el fosfato de calcio, el DEAE dextrano y el mtodo de la
lipofeccin, los dos primeros se unen al DNA formando complejos
asimilables por la clula, mientras que la lipofeccin se basa en el
recubrimiento de la molcula de DNA en un complejo de lpidos capaces de
atravesar la membrana.

Mtodos fsicos: son aquellos en los que se produce una introduccin

mecnica del DNA, como la microinyeccin (que se vio anteriormente) o la
electroporacin, que consiste en aplicar una carga elctrica al medio para
forzar la apertura de poros de membrana por donde penetran las
sustancias.

Clonacin de DNA.
Una vez que se ha realizado el proceso de transfeccin comienza la etapa de la
clonacin de DNA dentro de la clula hospedadora. Este proceso es diferente en
procariotas que en eucariotas, y por ello se vern ambos casos por separado.
Clonacin en procariotas: En las clulas procariotas como E. coli el proceso de
clonacin de cidos nucleicos se da una vez que se obtienen los organismos
recombinantes, a partir de los cuales se obtienen clones por simple divisin. Para
ello se seleccionan las clulas que si recibieron el DNA forneo mediante el
vector, y se las asla en un nuevo medio de cultivo, dndoles condiciones ideales
para que crezcan y se reproduzcan. Esta seleccin es un proceso que requiere
cuidado y existen varias tcnicas para hacerlo. Uno de estos mtodos es la
seleccin rpida, en la que se eliminan a los no mutantes en un medio selectivo
(Smith & Wood 1998), otro mtodo frecuentemente usado es el de rastreo o
cribado (Klug & Cummings 1999), que consiste en separar a los organismos
mutantes de acuerdo a la caracterstica que se ha introducido, este mtodo
fundamentalmente se aplica cuando se usan plsmidos como vectores. El mtodo
de rplica tambin se usa para este efecto, siendo una variacin de la seleccin
rpida, puesto que consiste en tomar una "rplica" (Fig. 5) de la placa original y
sembrarla en un medio selectivo.

Fig. 5: Tcnica de produccin de rplicas para aislar mutantes (Klug & Cummings
1999).

Clonacin en eucariotas: En algunos eucariotas "inferiores" como la levadura

Saccharomyces cerevisiae se pueden aplicar los mismos mtodos que se usan en
la seleccin de procariotas mutantes, mientras que para hospederos ms
"avanzados", como ser tejidos vegetales se usan tcnicas de complementacin,
usando una cadena de DNA complementario (DNAc), en el cual se da una
seleccin de los mutantes mediante la aplicacin de enzimas de restriccin (Smith
& Wood 1998).
La clonacin de DNA en clulas mutantes tambin puede evidenciarse mediante el
uso de la tcnica de la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), utilizando
cebadores especficos que van a reaccionar con un tipo especfico de secuencia, y
permiten distinguir dos tipos celulares distintos en base a sus caractersticas
genticas (Olmos et al. 1999, Klug & Cummings 1999).
APLICACIONES DE LA TECNOLOGA DE DNA RECOMBINANTE EN LA
ACTUALIDAD.
Las aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante estn revolucionando el
mundo moderno, puesto que stas van desde el diseo de nuevos medicamentos
y curas para enfermedades hasta la produccin de plantas mejoradas, pasando
por un amplio espectro de aplicacin industrial, adems de contribuir a la biologa
y a la gentica con una mayor comprensin de los mecanismos moleculares que
operan en los sistemas vivos.
Utilidad y aplicabilidad de la tecnologa de DNA recombinante en el estudio
gentico.
La posibilidad de introducir secuencias forneas de DNA al genoma de una clula,
para que sta lo exprese como si fuera suyo ha revolucionado el estudio de la
gentica es muchos aspectos, ya que ha permitido entender mejor cmo se dan
los mecanismos de regulacin y expresin gnica, y por la misma va se han
mejorado las tcnicas de mapeo y cartografa de genes.

La construccin de genes artificiales tanto en procariotas como en eucariotas

(Griffiths et al. 1998) ha sido un punto de partida muy importante para comprender
la dinmica de la informacin gentica en los sistemas vivos, ya que se ha visto
que los diferentes tipos celulares se diferencian en la expresin de un mismo
material gentico, lo cual produce un resultado distinto cada vez. Esta tcnica
tambin ha sido el medio para la deteccin y comprensin de varias enfermedades
genticas.
Esta tcnica se est usando actualmente para la cartografa de genes humanos,
que dado el tamao y la complejidad de este genoma, es una tarea ardua y
morosa si se la realiza con las tcnicas tradicionales de mapeo gentico por medio
de frecuencias de recombinacin, siendo adems este mtodo impreciso por la
influencia de la interferencia.
La deteccin de enfermedades genticas y otros problemas relacionados se ha
visto obstaculizada por la imprecisin de las tcnicas tradicionales de cartografa,
pero hoy en da es posible efectuar estos anlisis con mayor precisin utilizando
como marcadores a los RFLP (polimorfismos de longitud fragmentos de
restriccin), los cuales se producen por la accin de diferentes enzimas de
restriccin, y estos fragmentos son altamente especficos y cualquier variacin da
la posibilidad de detectar mutaciones, ya sean stas de carcter mendeliano o no.
Incluso esta tcnica puede ser empleada para el estudio del ligamiento de genes,
ya que si se construyen familias de RFLP en varias generaciones es posible
incluso detectar genes completamente ligados, lo que a veces no se puede hacer
con las tcnicas tradicionales pues no se pueden diferenciar de los genes no
ligados (Klug & Cummings 1999).
Otra ventaja de la tecnologa de DNA recombinante es que abre la posibilidad de
realizar mutaciones direccionales (Griffiths et al. 1998), que a diferencia de las
mutaciones naturales, que ocurren de una manera aleatoria, permiten analizar una
caracterstica en particular, sin importar la complejidad o el comportamiento del
organismo a diferentes condiciones.

Adems la posibilidad de realizar mutaciones dirigidas reduce al mximo el sesgo

que representan sobre los resultados las mutaciones adicionales no detectables
que se puedan dar en el proceso de induccin de mutagnesis por tcnicas fsico
qumicas.
La produccin de cromosomas artificiales ha abierto las puertas a un campo antes
poco comprendido por los cientficos: la regulacin de la expresin gentica. Hasta
hace algunos aos todava no se tena claro el proceso o los procesos por los
cuales una sola clula inicial daba lugar a diferentes tipos celulares, y cmo un
mismo genoma poda codificar diferentes protenas en cada uno de estos tipos
celulares. La introduccin de cromosomas artificiales en estos distintos tipos
celulares ha llevado a comprender y evidenciar el mecanismo de regulacin de
esta expresin, y estos aplicacin ha sido tambin un importante punto de partida
para verificar la existencia y comprender el funcionamiento de las secuencias de
regulacin de genes y los mecanismos por los cuales actan los interruptores
moleculares (Tjian 1995, Fishel 1998). Estos estudios tambin han ayudado de
cierta manera a comprender mejor el funcionamiento de varias enzimas
relacionadas con la replicacin y reparacin de cidos nucleicos, como las
enzimas de restriccin y las polimerasas.
Adicionalmente, la posibilidad de producir grandes cantidades de una protena por
medio de cultivos bacterianos de clulas modificadas, ha llevado a reducir
notablemente los costos de enzimas industrializadas, que se usan para la mayora
de los estudios en esta rama de la biologa.
Aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante en el campo de la
medicina y la salud.
La medicina y la salud son quiz los campos de aplicacin ms beneficiados con
el descubrimiento y la implementacin de la tecnologa de DNA recombinante,
puesto que sta ha permitido detectar y buscar alternativas y tratamientos para
numerosas enfermedades, la deteccin de enfermedades genticas, la produccin
de sustancias y medicamentos revolucionarios, y como complemento a esto se

han desarrollado tambin terapias genticas para varios males que aquejan
diariamente a miles de personas.
Produccin de sustancias tiles y medicinas.
Esta es una de las primeras aplicaciones que se encontr para la tecnologa del
DNA recombinante en el campo de la medicina. La produccin de protenas,
enzimas, vitaminas y cidos nucleicos por medio de bacterias mutantes
(Hashimoto & Ozaki 1999) ha permitido la obtencin de estas sustancias en
grandes cantidades a precios mucho ms bajos, hacindolas ms accesibles al
pblico.
El ejemplo clsico de esto y una de las mayores producciones bacterianas por
DNA recombinante es la produccin de insulina en cepas de E. coli modificadas
(Bohinski 1991). La insulina es una hormona de carcter proteico que se sintetiza
en los islotes de Langerhans en el pncreas de los mamferos (Eckert et al. 1998),
la cual se encarga de regular los niveles de azcares en el organismo mediante un
complejo sistema de cascadas enzimticas. La diabetes es una enfermedad que
afecta a millones de personas en el mundo, y produce una deficiencia en la
sntesis de esta protena, por lo cual a los enfermos de diabetes se les debe
administrar una dosis diaria de insulina. Hasta hace algunos aos esta insulina se
extraa de otros mamferos y su costo era elevado, pero la tecnologa de DNA
recombinante permiti introducir el gen que la codifica en el genoma de E. coli, la
cual produce esta protena como si fuese propia, incluso se ha visto que en
algunos cultivos sta llega a constituir un 40% de la carga proteica total de la
clula. Entonces, un cultivo celular de reducido costo puede producir una gran
cantidad de insulina, hacindola ms accesible para los enfermos que padecen
diabetes.
Posiblemente el segundo producto de esta naturaleza en la lista de ventas es la
hormona humana del crecimiento (Smith & Wood 1998), la cual se produce en
grandes cantidades por medio de cultivos bacterianos y se usa para el tratamiento
del enanismo. Cuando existe un problema en el suministro de esta hormona por

parte de la hipfisis el organismo sufre un crecimiento reducido y en algunos

casos atrofia de ciertos tejidos. Antiguamente se extraa esta hormona en mnimas
cantidades de cadveres, pero sta era insuficiente incluso para pretender hacer
un tratamiento a un solo individuo. Hoy en da esta hormona se produce a escala
industrial en cepas modificadas de E. coli.
La capacidad de hacer que bacterias modificadas produzcan ciertas sustancias en
cantidades ha marcado una revolucin en el campo de la medicina farmacutica,
puesto que hizo factible la produccin en masa de medicamentos, a los que se
aaden ciertas vitaminas, factores de crecimiento y/o protenas de escasa
disponibilidad en la naturaleza. Incluso se han hecho pruebas modificando
bacterias para alterar sus vas metablicas para que stas transformen sus
propios productos metablicos en sustancias especficas (Hashimoto & Ozaki
1999), esto se hace por medio de la adicin de enzimas especficas al genoma,
las cuales se encargan de modificar los productos metablicos, por ejemplo se
pueden producir aminocidos a partir de intermediarios del ciclo de Krebs
aadiendo genes de transaminasas. Esta tecnologa puede aplicarse por dos vas,
la primera es la conversin directa, e la que una enzima especfica transforma un
determinado sustrato para dar lugar a un solo producto, la segunda estrategia
consiste en emplear rutas metablicas completas y alterarlas para este mismo fin.
Klug & Cummings (1999) hacen referencia a la produccin de productos
farmacuticos en huspedes animales. Esta es una aplicacin de la
biotecnologa mediante la cual es posible producir ciertas sustancias aadiendo el
o los genes que la(s) codifican en las clulas de algn animal. Recientemente se
ha podido incorporar con xito las principales protenas de la leche materna a la
leche de las vacas, este proceso se ha ido produciendo poco a poco,
introduciendo una protena por generacin, y actualmente se cran vacas en
Estados Unidos, cuya leche contiene cerca de un 80% de las protenas de la leche
materna humana. Este sin duda, sera un excelente sustituto a las leches
maternas artificiales que se comercializan actualmente.

Deteccin y tratamiento de enfermedades genticas.

Las tcnicas de clonacin selectiva de DNA, entre las que se incluye el DNA
recombinante, permiten el estudio de muchas enfermedades genticas. El
aislamiento y clonacin de un determinado gen responsable de una enfermedad
gentica provee informacin importante para disear estrategias de mitigacin del
mal o incluso puede dar las luces para la produccin de una cura. Dos de las
enfermedades genticas que se han estudiado mediante la tcnica de RFLP son
la neurofibromatosis y el sndrome de Marfan.
La neurofibromatosis afecta a 1 de cada 3000 individuos y produce una variedad
de defectos en el sistema nervioso, que son responsables en gran medida de los
problemas de aprendizaje y de la aparicin de tumores benignos en el cerebro.
Esta enfermedad se produce por un alelo autosmico y es de carcter recesivo. La
cartografa de este gen por los mtodos tradicionales resulta una tarea
prcticamente imposible, puesto que el estudio de las familias de genes
relacionadas con este mal representara una cartografa completa de los 22
cromosomas humanos, puesto que tienen una elevada tasa de mutacin
espontnea.
Mediante la tcnica del RFLP se ha podido establecer una cartografa parcial del
NF1, por medio de la elaboracin de un mapa de exclusin (en este tipo de mapa,
se toman posibilidades y se las va descartando de acuerdo a las evidencias
experimentales obtenidas), posteriormente se pudo conseguir la secuencia
completa de aminocidos y la secuencia gentica de este gen, lo cual permiti
identificar a la protena neurofibromina, responsable de a prdida de memoria y de
los tumores. Ya una vez que se identific y caracteriz esta protena, los
cientficos y los mdicos han emprendido una nueva investigacin en busca de un
medicamento que pueda minimizar sus efectos.
Otro candidato ideal para este estudio es el sndrome de Marfan, que afecta a
varios rganos del cuerpo, produciendo en la mayora de los casos, una muerte
por ruptura de los principales vasos sanguneos (Cummings 1995). El gen

responsable de esta enfermedad fue identificado mediante la tcnica de los genes

candidatos. Esta tcnica es una alternativa de cartografa de genes, que consiste
en analizar protenas, enzimas u hormonas que se cree son responsables de la
enfermedad, y en base a su secuencia de aminocidos se eligen genes que se
piensa son los que codifican estas protenas, estos son los genes candidatos, una
vez que se ha seleccionado un grupo de genes candidatos se va haciendo una
evaluacin ms profunda y descartando genes, hasta hallar el gen responsable
ms probable. El aislamiento y el clonaje de estos genes se lo realiza en base a
los principios detallados en la primera parte. La desventaja de este mtodo es que
se puede aplicar solamente si se tiene informacin previa del tema, no es til para
estudios que comienzan desde cero.
Este anlisis ha reflejado que los problemas que conlleva el sndrome de Marfan
estn relacionados a problemas con la protena fibrilina, la cual es parte
importante de las membranas oculares, los huesos y los vasos sanguneos, y es
por eso que los que padecen esta enfermedad tienen problemas de vista, huesos
y arterias dbiles y usualmente mueren por un aneurisma al realizar un esfuerzo
muy fuerte.
Los dos ejemplos anteriores muestran la aplicacin de las tcnicas de DNA
recombinante para el estudio de enfermedades en adultos afectados, pero es
posible detectar estas enfermedades antes del parto?. En respuesta a esta
pregunta

se

han

desarrollado

los

mtodos

de

deteccin

prenatal

de

enfermedades. Existen dos mtodos principales para este efecto: a amniocentesis

y la extraccin de vellosidades corinicas. El primero se basa en la extraccin de
una muestra del lquido amnitico que protege al feto dentro las membranas
embrionarias, y el segundo e la extraccin de una pequea muestra de tejido del
corion, una de las membranas de proteccin embrionaria (Klug & Cummings
1999).
Ya sea con la muestra de lquido amnitico o con la de tejido de corion, se
procede a hacer una serie de anlisis bioqumicos de las clulas, que inicialmente

dan informacin acerca del sexo, tipo de sangre y otra informacin bsica del feto.
Posteriormente, el material gentico de estas clulas puede ser sometido a
enzimas de restriccin y mediante tecnologa de DNA recombinante se hacen
cultivos con genes de inters (en este caso, la enfermedad a detectar debe ser
conocida y debe ser posible aislar su secuencia), para ver el efecto que produce
en estos, y de esta manera se determina si el feto padece o no una determinada
enfermedad (Fig. 6).

Fig. 6: Tcnica de amniocentesis, para detectar enfermedades genticas y realizar

anlisis bioqumicos en el feto (tomado de Klug & Cummings 1999).

Las enfermedades que ms comnmente se detectar prenatalmente son la

talasemia y la anemia de clulas falciformes, porque de stas ya se sabe mucho y
se tiene un conocimiento previo de dnde se ubican, y por consiguiente es fcil
aislar los fragmentos de DNA para producir el cultivo en un hospedero y
determinar el comportamiento que tendr esa seccin.
La deteccin de enfermedades genticas se ha revolucionado con la
implementacin mdica de la tcnica de nucletidos especficos y rastreo gentico
(Klug & Cummings 1999). Esta tcnica, cuya abreviatura es ASO, utiliza en
condiciones adecuadas, una sonda que se denomina oligonucletido especfico de
alelo (de esta frase se deriva la abreviatura ASO, en ingls) el cual hibridar slo

con su secuencia complementaria y no con otras secuencias, aunque stas varen

slo en un nucletido. Para rastrear enfermedades como la anemia de clulas
falciformes, se utiliza esta tcnica combinada con anlisis de PCR, ya sea este
tradicional o una modificacin especfica, tal como un PCR de baja temperatura
(Iakobashvili & Lapidot 1999). En este mtodo se produce una extraccin de DNA
por lisis en los glbulos blancos de la sangre, y posteriormente este DNA es
desnaturalizado por calor. Luego se produce una amplificacin del gen en cuestin
(para el caso de la anemia falciforme, el gen de la bglobina, por ejemplo)
mediante la tcnica de PCR. Se coloca una gota del DNA amplificado en un filtro,
y se hibridiza con un ASO, y luego se lee el resultado en los filtros, de haber
hibridacin la molcula resultante es demasiado grande para atravesar los poros
del filtro.
Terapia gnica.
El rastreo y caracterizacin de los genes que producen las enfermedades
genticas desde un principio tuvo la finalidad de ofrecer un tratamiento a estas
enfermedades, de esto surge el concepto de terapia gnica, la cual consiste en
transferir alelos normales a un individuo enfermo para eliminar su problema. Ya se
han hecho varios experimentos en ratones y otros animales, en los cuales se ha
logrado exitosamente restaurar el funcionamiento normal de un alelo por la
insercin de la cadena correcta mediante un vector. El que hayan resultado
exitosos los ensayos realizados en ratones abre la mente a creer que en unos
aos ms este tipo de terapia pueda ser usada para curar las cientos de
enfermedades genticas de los humanos (Griffiths et al. 1998, Klug & Cummings
1999).
La terapia gnica tiene ya una cierta historia, en un principio se aplicaba en
humanos, inoculando al organismo dosis significativas de la protena faltante o
defectuosa, por ejemplo, se administraban fuertes dosis de insulina a enfermos de
diabetes, con la finalidad de que una elevada concentracin de la protena
funcional restaure la secuencia gentica. Desafortunadamente este tipo de terapia

gnica no tuvo xito, y los estudios derivados a investigar el o los mecanismos

necesarios para el reemplazo de una secuencia defectuosa por una normal,
mediante el uso de vectores y tcnicas de DNA recombinante.
Este proceso todava est en fase experimental y an no hay datos sobre ensayos
exitosos en humanos, todas las prueba realizadas se han hecho en invertebrados
como Drosophila y en mamferos pequeos como Mus musculus. Si bien el
proyecto genoma ya ha dado una versin preliminar de la secuencia de los 23
cromosomas humanos, y las tcnicas de transferencia de genes estn cada da
ms avanzadas, todava resulta difcil aislar genes especficos sanos en humanos,
y ms difcil an el implantarlos en el sitio correcto, en un organismo enfermo. El
tamao y la complejidad del genoma hacen de sta una ardua tarea.
Lucha contra el cncer.
Anualmente millones de personas mueren de cncer. Esta enfermedad ha sido
extensamente estudiada por los cientficos, pero an no se han podido dar curas
para este mal, pues todava no se tiene claro cmo se origina exactamente, y
cules son los mecanismos que operan para su tratamiento. Hasta ahora se sabe
que el cncer es producto de una mutacin en un sitio importante del genoma, que
ocasiona que las clulas se reproduzcan sin control generando tumores y
destruccin de tejidos. Se han hecho muchos estudios a nivel molecular y se han
lanzado cientos de hiptesis, pero todava no se tiene nada concreto que permita
disear una cura.
Uno de los estudios ms interesantes al respecto se lo ha realizado aislando y
estudiando los factores que determinan la muerte celular, pero investigaciones
recientes han mostrado que la solucin puede ser ms simple todava, Fraser
(1994) observ que en algunos organismos existen enzimas denominadas endo
exonucleasas aisladas de E. coli, que se encargan de la reparacin del DNA y
la muerte celular. Esta quiz sea la respuesta al cncer, puesto que esta enzima
bifuncional es capaz de quitar o aadir nucletidos al DNA para corregir errores, y
si fuera posible introducir el gen que la codifica en las clulas cancerosas, se abre

la oportunidad de una reparacin in vivo de la secuencia mutada, y de esta

manera detener e incluso tal vez, revertir el efecto del cncer en uno o ms
tejidos.
Si bien estas enzimas se han aislado inicialmente en E. coli y han sido
ampliamente estudiadas por medio de la tecnologa de DNA recombinante, y otros
mtodos como el PCR, se ha encontrado evidencia que existen enzimas parecidas
a estas en Saccharomyces cerevisiae y se ha dejado abierta la posibilidad de que
existan algunas enzimas parecidas a estas en los mamferos.
Si llegara a concretarse un estudio al respecto y ste revelara la factibilidad de
introducir el gen que codifica las endoexonucleasas en clulas humanas,
posiblemente la lucha contra el cncer habra encontrado un remedio, y la solucin
a este problema sera aplicar una terapia gnica de inclusin de DNA forneo para
reparar el material daado.
Aplicaciones forenses.
La tecnologa de DNA recombinante ha pasado a ser un fuerte aliado de la
medicina forense y la investigacin criminal. Caractersticas genticas especficas
estn siendo usadas como pruebas contundentes en cientos de juicios hoy en da,
puesto que basta una clula de donde se pueda aislar DNA para identificar a una
persona, con menos de un 1% de error. Esta tcnica se viene usando desde hace
algunos aos para pruebas de paternidad, problemas de inmigracin (para
determinar razas) y como una huella molecular para identificar criminales. No
obstante, estos procedimientos han levantado fuertes crticas ticas, ya que en
algunos casos estos resultados llevan a discriminaciones raciales y a problemas
familiares.
Actualmente se usan los minisatlites o VNTR (secuencias muy repetitivas en
tandeo) como huellas moleculares (Smith & Wood 1998, Klug & Cummings 1999)
puesto que al ser stas altamente variables, la combinacin de los distintos

satlites y la posicin de cada uno es una caracterstica nica de cada persona, la

cual no se puede modificar, ocultar o borrar.
La tecnologa de DNA recombinante y las plantas: aplicaciones en la
agricultura.
La aplicacin del DNA recombinante en la agricultura ha tenido una gran
aceptacin por parte de los grandes productores, puesto que esta revolucionaria
tcnica permite obtener especies transformadas a las cuales se les aaden o
acentan caractersticas especiales, como resistencia a herbicidas, mayor
produccin de vitaminas, etc.
Actualmente hay una gran cantidad de plantas que se pueden transformar, entre
estas estn los ctricos, que son los grupos en los que se han hecho ms estudios
y pruebas, muchas de ellas exitosas, todava se sigue tratando de transformar los
cereales como el trigo y el maz, pero an no se ha tenido xito. Lo cultivos de
papa, soya, rbano y tabaco, sin embargo, son fciles de transformar y se han
hecho muchas pruebas introduciendo material gentico usando como vector a la
bacteria Agrobacterium tumefaciens, que forma asociacin naturalmente con estas
plantas (Smith & Wood 1998).
La bacteria Agrobacterium tumefaciens posee un plsmido inductor de tumores
(Ti) que produce un crecimiento tumoroso o callo en las plantas (Smith & Wood
1998). Este callo es un conjunto de clulas vegetales no diferenciadas, que
producen unas sustancias qumicas llamadas opinas, de las cuales se alimenta
esta bacteria. El proceso de DNA recombinante para este caso sigue la siguiente
dinmica: el fragmento de DNA a incluir en la planta es aislado y lo inserta en la
regin de homologa del plsmido Ti, luego se induce a la formacin del callo por
accin de las bacterias y stas introducen en plsmido con el DNA forneo en un
cromosoma de manera aleatoria en las clulas del callo. Posteriormente las
plantas se regeneran a partir del callo, expresando el material gentico introducido
(Fig. 7).

Este mtodo ha servido para introducir una gran variedad de genes en estas
plantas, uno de los experimentos ms conocidos es la planta de Nicotiana
tabacum con genes de luciferasa, la cual brilla en la noche. Esta planta
luminiscente es sin embargo slo un atractivo visual, puesto que no tiene ninguna
utilidad, y detrs de la polmica que ha levantado la construccin de esta planta,
estn muchas otras a las que s se les ha hecho modificaciones tiles, como frutos
que se pudren ms lentamente, plantas que llevan vacunas o plantas resistentes a
plagas y herbicida.

Fig. 7: Tcnica de produccin de plantas transgnicas por medio de la formacin de

callos con Agrobacterium tumefaciens (Klug & Cummings 1999).

Gramneas resistentes a herbicidas.

Uno de los ms grandes problemas que enfrentan los agricultores es la aparicin
de malas hierbas en sus campos de cultivo. Usualmente estas hierbas se
combaten

usando

sustancias

qumicas

muy

variadas,

denominadas

genricamente herbicidas. Estos herbicidas, sin embargo, tambin afectan a las

gramneas del cultivo y las matan, por lo cual su aplicacin es sumamente
riesgosa, puesto que adems de matar las hierbas indeseables se matan las
plantas de cultivo.

Mediante la tcnica del DNA recombinante se han producido gramneas

resistentes a algunos herbicidas como el glifosfato. Esto se ha logrado mediante
modificaciones que incrementan la sntesis de la EPSP sintetasa, encargada de
sintetizar aminocidos, esta enzima se encuentra en los cloroplastos y es la
primera en verse afecta por el glifosfato, pero al aumentar la sntesis de sta, el
efecto de los herbicidas es mnimo, puesto que se puede continuar con la sntesis
de aminocidos de una manera prcticamente normal (Klug & Cummings 1999).
Investigaciones similares se han hecho en este campo, para aadir a las plantas
factores de resistencia contra enfermedades virales (como el virus mosaico del
tabaco), contra plagas de insectos e incluso contra sequas prolongadas.
Actualmente se trabaja mucho en este campo y prximamente los centros de
abastecimiento, tales como supermercados, ofrecern a la venta productos
transgnicos como estos.
Plantas y vacunas transgnicas.
Otra de las aplicaciones de la tecnologa de DNA recombinante en las plantas es
la produccin de plantas transgnicas con vacunas. Las formas tradicionales de
produccin de vacunas son la utilizacin de capas inactivadas o atenuadas de la
bacteria o virus. La tecnologa del DNA recombinante ha permitido el desarrollo de
vacunas genticas o tambin llamadas vacunas de subunidad, en las que se
producen grandes cantidades de una protena de superficie del virus o la bacteria
contra la cual se desea hacer la vacuna, y esta protena va a generar los
anticuerpos necesarios para hacer frente a la enfermedad.
La aplicacin de esta tcnica de biotecnologa funciona as: se asla el fragmento
de DNA que codifica la protena de superficie que ir a constituir la vacuna de
subunidad, se utiliza como vector el plsmido Ti de Agrobacterium tumefaciens y
se produce una planta recombinante a partir del callo formado (se sigue el mismo
proceso visto anteriormente), una vez desarrolladas las plantas, stas expresarn
el antgeno contra la enfermedad (Klug & Cummings 1999). De esta manera se
producen grandes cantidades de vacuna a costos reducidos, y la administracin

de la misma se hace ms fcil, puesto que estos vegetales podran ser

comercializados para su consumo normal, luego de una certificacin previa de los
efectos colaterales que pueda tener el consumo de estas plantas alteradas
genticamente. Esta tcnica se ha aplicado con xito en la produccin de
antgenos para la hepatitis B en plantas de tabaco.
Todava falta hacer una gran cantidad de estudios en esta rea, pero las
perspectivas actuales muestran una interesante potencialidad a la produccin de
vacunas de subunidad en plantas transgnicas, ya que esto abrira la posibilidad
de prevencin de muchas enfermedades mortales, para las cuales no se conocen
vacunas tradicionales, y adems deja abierta la posibilidad de una vacunacin por
medio de los alimentos.
Cun seguro es consumir plantas transgnicas?
Si bien todos los ensayos y pruebas que se han hecho con plantas transgnicas
han estado delimitados muy claramente por un lmite de seguridad, existen
razones para dudar de que el consumo de productos transgnicos sea totalmente
inocuo y esto deja abierta una pregunta que hacen Kppeli & Auberson (1998):
Cun seguro es "suficientemente seguro" en la ingeniera gentica de plantas?.
Estos autores plantean que si bien se tienen todos los cuidados necesarios y se
realizan los procedimientos de DNA recombinante de la manera ms profesional y
responsable posible, siempre existen factores naturales de variacin que escapan
al control de los investigadores y pueden resultar peligrosos para el consumidor.
Los productos transgnicos pueden resultan potencialmente txicos para el
consumidor final, pues nunca se sabe a ciencia cierta el efecto que pueden causar
las mutaciones inducidas al individuo, las cuales pueden derivar en la produccin
secundaria de toxinas o incluso pueden llegar a producir enfermedades. Cuando
se asla un fragmento de DNA para ser incluido en una planta por medio de la
tcnica de A. tumefaciens, el investigador controla y predice el efecto primario que
ocurrir con el campo, es decir, este efecto primario es el fenotipo que se espera

obtener con la modificacin, el mismo que ha sido muy bien delineado, con lmites
conocidos y cuyo efecto es predecible con un elevado grado de certeza.
Adems de este efecto primario, pueden presentarse uno o ms efectos
secundarios, los cuales son los fenotipos y reacciones inesperadas. Estos efectos
secundarios se dan por muchas causas en los individuos transgnicos, pero la
principal explicacin es que las plantas son sistemas vivos con un genoma flexible
y dinmico, expuesto a otras mutaciones, cambios espontneos, fenmenos de
recombinacin y errores en la replicacin del DNA. Cualquiera de estos factores
es capaz de generar un efecto secundario, que produzca un fenotipo diferente al
esperado, potencialmente daino.
Puesto que estos procesos de variacin, responsables de los efectos secundarios,
son impredecibles y no estn considerados dentro del estudio inicial, no se sabe
exactamente cul es su efecto puesto que no se tiene un conocimiento completo
del cambio ocurrido a nivel molecular.
Otra causa de efectos secundarios es un defecto en el proceso de transfeccin del
DNA forneo desde el plsmido Ti (vector) hacia las clulas del callo, como ambos
son sistemas biolgicos dinmicos sometidos a constante variacin, a veces
ocurre un desplazamiento en el rea de transferencia de material gentico y se
transfieren otros fragmentos a parte o en lugar del fragmento de inters,
produciendo cambios no deseables.
Todos estos factores hacen de la ingeniera gentica en plantas un campo muy
promisorio para el futuro, pero potencialmente peligroso, y la comercializacin de
productos transgnicos debera darse una vez realizados estudios profundos de
los impactos a la salud y el ambiente que estos vegetales modificados puedan
causar.
Produccin de animales transgnicos mediante DNA recombinante.
Si bien la aplicacin de la tecnologa de DNA recombinante para la produccin de
animales transgnicos se viene realizando desde hace algunos aos en los

principales centros de investigacin cientfica del mundo, todava se levanta

polmica acerca de la tica y la manipulacin gentica de animales, y ms an de
humanos.
Numerosos estudios realizados en animales transgnicos han permitido entender
mejor la evolucin de los sistemas de regulacin gnica (Cavener 1992), la mayor
parte de estos estudios se han hecho en Drosophila melanogaster y ratones de
laboratorio. Dichos experimentos han sido un importante respaldo para las
investigaciones que trataron y todava tratan de dilucidar por completo el
funcionamiento de las regiones de control de los genes, y el cmo operan los
promotores y los inhibidores de genes, y el papel que stos tienen en la
diferenciacin celular y la produccin diferencial de protenas de acuerdo a lo que
se denomin un subprograma de vida.
Ya no es un secreto para nadie, que en Estados Unidos se han producido vacas
transgnicas, cuya leche contiene adems protenas humanas, propias de la leche
materna de esta ltima especie. Un reciente documental del Discovery Channel
mostr a estas vacas pastando como cualquier vaca normal, externamente se ven
idnticas a organismos normales, pero su genoma ha sido alterado para la
produccin de protenas adicionales. Este proyecto tiene miras de buscar
sustitutos "naturales" (si cabe el trmino) para la leche materna humana, pues se
ha visto que los sustitutos sintticos que se comercializan actualmente pueden
tener efectos secundarios sobre los lactantes.
Chile es en este momento el segundo mayor productor de salmn del mundo, lo
cual ha obligado a esta industria a buscar nuevas alternativas para asegurar su
produccin, protegiendo a los salmones de enfermedades (Bioplanet 2000). En la
actualidad son muchas las enfermedades que atacan a los salmones y producen
grandes prdidas econmicas a los productores de salmn, adems del efecto
nocivo que tiene una gran epidemia sobre el equilibrio de los ecosistemas.
Actualmente no se conocen muchos tratamientos o vacuna contra estas
enfermedades, y los estudios realizados son an insuficientes como para proveer
una solucin por este lado.

Por ello, es que el Instituto Tecnolgico del Salmn, en Chile, ha planteado otra
solucin: la biotecnologa. Para este fin, la compaa chilena de biotecnologa
Bios, ha desarrollado una serie de vacunas genticas (Gurunathan et al. 2000)
que permitan a los salmones adquirir resistencia contra estas bacterias, todava
poco conocidas. Este mtodo es altamente eficiente, puesto que la produccin de
anticuerpos es alta desde un principio y condiciona al organismo a estimular y
reforzar su sistema inmunolgico. Bajo el lema "es mejor prevenir que curar", se
han desarrollado adems vacunas genticas para enfermedades virales
potenciales, asegurando de esta manera a produccin de salmn de la industria
chilena.
Sobre estos mtodos de vacuna gentica, sin embargo, todava faltan realizar
estudios de efectos secundarios que puedan resultar potencialmente txicos al
consumidor final.
La tecnologa de DNA recombinante y el ambiente: bioremediacin.
Los problemas de contaminacin actualmente estn recibiendo gran atencin por
parte de las autoridades ambientales en el mundo entero. Si bien los problemas de
contaminacin no se pueden revertir, en la actualidad existe otra alternativa: la
bioremediacin. Bioremediacin se define como el proceso de descontaminacin
mediante la induccin de bacterias capaces de degradar las sustancias
contaminantes. Si bien esta tcnica tiene apenas 10 aos de antigedad e
investigacin, hoy en da son muchas las aplicaciones que se le da. Se emplea
bioremediacin para la degradacin de petrleo, de metales pesados, de
insecticidas e incluso para combatir radiacin.
La bioremediacin puede aplicarse usando bacterias silvestres que tengan la
capacidad de degradar el contaminante con el que se est tratando, sin embargo,
en muchos casos se deben construir bacterias mediante tcnicas de DNA
recombinante para la remediacin de un contaminante determinado.

Si bien se conocen cerca de 70 gneros de bacterias silvestres que pueden ser

usadas para bioremediacin, la produccin de bacterias modificadas va ganando
terreno e importancia da a da. Numerosos estudios (Keasling & Bang 1998,
Timmis & Pieper 1999, Coates & Anderson 2000, Pieper & Reineke 2000, Sayler &
Ripp

2000)

ha

utilizado

bacterias

modificadas

genticamente

para

la

descontaminacin de ambientes, con un impacto mnimo a largo plazo, puesto que

al ser stos descontaminadotes agentes biolgicos, reducen y controlan su
poblacin luego de cumplir su funcin, y viven en los ambientes junto con el resto
de la microflora.
En muchos casos, es necesaria la construccin de estas cepas recombinantes,
puesto que todava no se conocen organismos silvestres capaces de efectuar
algunos tipos de degradacin. Coates & Anderson (2000) describen la
construccin de bacterias recombinantes para la degradacin anaerbica de
contaminantes ambientales, proceso an poco estudiado y poco comn en la
naturaleza (la mayora de los procesos de degradacin de contaminantes
requieren de oxgeno). Estudios como el de Katja & Top (1997) sugieren una
transferencia de genes a los microorganismos del suelo para acentuar las
caractersticas de biodegradacin en cepas nativas de ese medio.
Quiz uno de los casos ms llamativos por su importancia, es el propuesto por
Chen & Wilson (1997) para la construccin de cepas de E. coli modificadas
capaces de bioremediar mercurio. Todava no se han encontrado bacterias
silvestres capaces de remediar contaminacin por este metal, pero si bacterias
que pueden hacerlo menos txico para el ambiente, cambindolo de forma a
complejos orgnicos. Sin embargo, la posibilidad de construccin de una cepa
capaz de bioremediar este metal pesado, abre las puertas al tratamiento de reas
afectadas por la industria, en especial la minera, que vierte grandes cantidades de
residuos con mercurio a suelos y aguas.

Campo de aplicacin del DNA recombinante en la industria.

En la actualidad existen muchas aplicaciones industriales para la tecnologa de
DNA recombinante. Los productos que se generan a partir de organismos
recombinantes son muchos y tienen diferentes finalidades, que van desde la
industria vitcola hasta la produccin de medicamentos.
El microorganismo protagonista en la industria por DNA recombinante es la
levadura Saccharomyces cerevisiae, que al ser un organismo eucariota simple del
cual se tiene ya un gran conocimiento, se facilita la produccin de sustancias
mediante su maquinaria biosinttica. Actualmente se usan cepas de levadura
modificadas para la produccin a gran escala de taumatina y quimosina (Smith &
Wood 1998). La taumatina es una protena de origen vegetal, unas 200 veces ms
dulce que la sacarosa y es usada comercialmente en edulcorantes y como aditivo
para muchos alimentos. La quimosina, tambin conocida como renina, es una
protena que se utiliza en grandes cantidades para la produccin de queso.
Otra aplicacin de levaduras modificadas genticamente est dada en la industria
de los vinos (PrezGonzlez et al. 1993). Se han construido cepas de levadura
recombinante que expresen el gen de la b (1,4)Endoglucanasa, una enzima que
reacciona con los azcares del mosto, dndole al vino un aroma a frutas ms
intenso y agradable. Esta modificacin de la levadura del vino, favorece al proceso
de micro vinificacin, induciendo una fermentacin ms rpida del mosto, sin
alterar la calidad y el sabor del vino. El proceso de modificacin de esta cepa de
levadura es complejo y requiere de equipo sofisticado (ver PrezGonzlez et al.
1993 para mayor informacin), puesto que se debe asegurar el correcto
funcionamiento de la cepa ya que su aplicacin es de gran escala, y un error en la
construccin de la cepa puede representar prdidas millonarias para la industria,
pero su correcta aplicacin tambin genera un movimiento econmico significativo.
Como ya se vio en la parte de aplicaciones mdicas, las bacterias recombinantes
se usan ampliamente para la produccin de ciertos medicamentos y enzimas a

gran escala. Este mtodo de produccin tambin ha revolucionado la industria

farmacutica, puesto que desde hace algunos aos que este mtodo ha
reemplazado la produccin tradicional de insulina, enzimas, hormonas y otros, lo
cual ha llevado a una masificacin de su uso y una considerable reduccin de
costos. Si se compara el costo y rendimiento de la extraccin de microlitros de
hormona de crecimiento de cadveres, con los volmenes diarios que puede
proveer un cultivo de E. coli recombinante ya diferencia es abismal: gracias a la
industrializacin mediante tecnologa de DNA recombinante, millones de personas
en el mundo pueden acceder ahora a tratamientos mdicos con este tipo de
protenas.
El campo de la investigacin gentica y la biologa en general, tambin se han
visto favorecidas con la produccin de gran escala y menor costo de protenas y
enzimas necesarias para las investigaciones que se realizan en los diferentes
campos de estas ciencias.
Discusiones y conclusiones.
La tecnologa de DNA recombinante es una tcnica de reciente aplicacin, que a
tenido un gran impacto en la ciencia y diversos aspectos de la vida cotidiana.
Los principios de esta metodologa se han ido perfeccionando con el tiempo, los
estudios que se han ido realizando sobre vectores y hospederos han abierto las
puertas al uso de nuevos mtodos de aplicacin de este principio, tales como el
desarrollo de cromosomas artificiales, los mismos que han permitido entender
mejor los sistemas de regulacin gnica y la expresin.
La gentica se ha visto especialmente beneficiada por el desarrollo de esta
tecnologa, ya que ha permitido el estudio de mecanismos y procesos complejos,
que de otra manera habran tomado dcadas en ser dilucidados. La gentica y la
biotecnologa son dos ramas muy relacionadas que se benefician mutuamente, el
beneficio que da la biotecnologa a la gentica se lo acaba de explicar, y a su vez

la gentica beneficia a la biotecnologa, al propiciar el desarrollo de nuevas tcnica

y procedimientos en respuesta a las necesidades de los investigadores.
La capacidad de aislar fragmentos especficos de DNA e insertarlos dentro de otro
organismo para su expresin y su clonacin, ha permitido y permitir la
investigacin en genes. En la actualidad esta tcnica permite la deteccin de
enfermedades genticas tanto en individuos adultos como en individuos
prenatales, mediante una combinacin de la tecnologa de DNA recombinante con
la tcnica de PCR.
Este cambio dinmico en la tecnologa de DNA recombinante ha propiciado su
aplicacin en un conjunto heterogneo de campos, como ser la industria, la
agricultura y la bioremediacin. La posibilidad de crear organismos recombinantes
que expresen genes ajenos a su genoma hace que se puedan masificar procesos
industriales a costos ms bajos, que se puedan crear plantas transgnicas que
lleven vacunas, vitaminas o que tengan una mayor resistencia a la putrefaccin,
aunque la seguridad de consumir alimentos transgnicos est todava en tela de
juicio. De la misma manera, hoy en da se producen animales transgnicos en los
que se experimentan terapias gnicas, tambin se producen animales con gran
resistencia a enfermedades o que puedan producir protenas humanas en su
leche.
La medicina actual ha experimentado un gran desarrollo desde que se pueden
producir protenas y otras sustancias tiles en gran cantidad y a bajos costos por
medio de cultivos bacterianos. Se han planteado terapias gnicas que permitan
sustituir los alelos defectuosos que producen las ms de 500 enfermedades
hereditarias conocidas, por alelos normales para combatir estos males que
acechan a millones de personas en el mundo.
Esta tecnologa de DNA recombinante ha abierto las puertas a la aplicacin
masiva de la bioremediacin, puesto que al poder crear organismos transgnicos
capaces de degradar contaminantes, con un efecto ambiental colateral mnimo, se

puede hacer frente de una manera ms efectiva a los problemas ambientales de

contaminacin, ya sea esta por hidrocarburos, metales pesados o radiacin.
Si bien la aplicabilidad de la tecnologa de DNA recombinante ha llegado a
diversos campos y ha dado grandes resultados, todava se discute cun seguro es
el utilizar estos productos alterados genticamente, porque el investigador controla
y determina los efectos primarios que se vayan a producir, pero escapan de su
control los efectos secundarios que se puedan producir por los procesos naturales
de variacin propios de los seres vivos, y una alteracin significativa de carcter
aleatorio en los organismos transgnicos de uso comn (alimentos, cepas
industriales, etc.) representara un dao econmico y humano muy grande si no se
toman las previsiones del caso.
Tambin se discute mucho acerca de la tica de experimentar con humanos,
puesto que el factor intrnseco de variacin puede dar resultados inesperados, sin
embargo esta experimentacin tambin puede conllevar aspectos positivos como
la posibilidad de encontrar una cura para el cncer.
En sntesis, la tecnologa de DNA recombinante es una de las principales
herramientas de biotecnologa con la que cuenta el mundo actual, que al tener una
variedad tan amplia de aplicaciones, que van junto con un cambio y mejoramiento
dinmico constante, hacen que sea posible extender los horizontes de la cultura
humana ms all de los lmites que se tenan hace algunos aos, y por
consiguiente ha llevado a mejorar la calidad de vida de millones de personas que
se han visto beneficiadas con estas aplicaciones. Sin embargo, se debe tener muy
en cuenta que la utilizacin de sta y otras tcnicas de biotecnologa conllevan
riesgos potenciales y problemas ticos que no pueden ni deben pasar
desapercibidos.

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