DETERMINACIN DE LA ACTIVIDAD FOSFOMONOESTERASA ACIDA DEL SUELO MEDIANTE EL

MTODO DE TABATABAI Y BREMNER (1969); EN 3 MUESTRAS DE SUELO, JUNTO CON LA RECTA

DE CALIBRACIN
Ramrez Ramrez, O.L.1; Ilizaliturri Hernndez, C.A2 y Montes Rocha, J.A.2
1

Facultad de Ciencias de la Universidad Autnoma de San Luis Potos, lateral Av. Salvador Nava s/n, C.P. 78290,
San Luis Potos, S.L.P., MXICO mail: plumas_angel@hotmail.com
Facultad de Medicina de la Universidad Autnoma de San Luis Potos, Av. Venustiano Carranza No. 2405, C.P.
78210, San Luis Potos, S.L.P., MXICO mail: cesar.ilizaliturri@uaslp.mx

RESUMEN
La determinacin de la actividad enzimtica del suelo es un bioindicador de la calidad y sustentabilidad del terreno.
La ptima interpretacin de estos resultados colaborara a percatarse del porqu de varios procesos degenerativos en
la salud del suelo. Esta informacin seria de utilidad para la prevencin o conservacin del suelo.
Durante la estancia se determino la actividad de la fosfatasa acida en el suelo, siendo aun mas especifico, se elaboro
la determinacin de la fosfomonoesterasa acida en algunas muestras de suelo, junto con su recta de calibracin.

PALABRAS CLAVE
Suelo, enzima, fosfatasa

ABSTRACT
The determination of enzymatic activity is a bioindicador, quality and sustainability the ground. The correct
interpretation the results give the reason for many degenerative processes; this would be useful information for the
prevention or soil conservation.
During the stay was determined the activity of acid phosphatase in the soil, being even more specific, was
determined the fosfomonoesterasa acid in some samples of soil, together with its calibration straight.

KEY WORDS
Soil, enzyme, phosphatase

INTRODUCCIN
Las enzimas son protenas las cuales funcionan como catalizadores orgnicos; los catalizadores aminoran la energa
de activacin de las reacciones qumicas (Coyne 2000).
Dentro de la actividad enzimtica del suelo encontramos componentes intracelulares y extracelulares producidas por
microrganismos; races; residuos de planta/ tracto digestivo de meso y macrofasa del terreno. (Gianfrenda y Bollay

1996). La actividad enzimtica sobre el suelo es el resultado de actividades relacionadas a algunos factores biticos y
abiticos.
La palabra fosfatasa hace alusin a enzimas que catalizan la hidrlisis de esteres y anhdridos de acido fosfrico
(Eivazi y Tabatabai 1977 citado por Trasar et, al., 2003). La Comisin de Enzimas de la Unin Internacional de
Bioqumica catalogo a las fosfatasas respecto al tipo de enlace y a los compuestos en los cuales acta. Las
monoesterfosfato hidrolasas, son fosfatasas que actan sobre enlaces de tipo ster, a las cuales pertenece la fosfatasa
acida, tambin conocida como fosfomonoesterasa acida, la cual es una enzima inespecfica que cataliza la hidrlisis
de glicerofosfato y se diferencia con la fosfomonoesterasa alcalina por el pH optimo de activacin.
La fosfomonoesterasa acida puede estar en suelos con pH de 4 a 6.5 (Eivazi y Tabatabai, 1977, citado por Traser et,
al., 2003); las fosfatasas dominantes depende del pH del terreno. Esta enzima es afectada por: el pH, la
disponibilidad de P, el contenido de materia orgnica (Acosta et., 2007).
La fosfomonoesterasa son unas de las enzimas mas estudiadas debido a los mtodos de evaluacin y a que el 60% de
fosforo orgnico que se a identificado en el suelo, corresponde a fosfato inositol (Halstead y Mckercher 1975 citado
por Traser et, al., 2003).

DESARROLLO EXPERIMENTAL
Las muestras fueron tamizadas a 0.25 mm. y conservadas a 4C dentro de tubos cnicos de polietileno; en las
muestras evaluamos el siguiente parmetro bioqumico:
Actividades enzimticas: La actividad enzimtica de la fosfatasa acida fue determinada segn el mtodo de Tabatabai
y Bremner (1969). La fosfatasa hidroliza fosfomonoesteres, liberando fosfatos. El mtodo se basa en la
determinacin espectrofotomtrica del p-nitrofenol liberado cuando el suelo es incubado a 37C, durante 1 hora, con
una disolucin tamponada (pH 6.5 para la fosfomonoesterasa acida) de p-nitrofenol fosfato.
Se proceso la recta de calibracin junto con algunas muestras de suelo que se encontraban previamente en el
laboratorio.
Para la realizacin de la recta se llevo acabo el siguiente procedimiento: se coloco p-nitrofenol entre 0 y 250 g ml -1,
en un matraz Erlenmeyer de 25 ml., se le aadieron 4 ml. de tampn MUB (tampn universal modificado) pH 6.5 y
se meti ala incubadora junto con las muestras; al salir de la incubadora se procesaron igual que las muestras.
Para la determinacin de la fosfatasa en las muestras se ejecuto la siguiente tcnica: En un matraz de 25 ml
colocamos 1 g. de suelo (previamente tamizado), le agregamos 4 ml de tampn MUB (tampn universal modificado,
llevado a 6.5 de pH con HCl) , le adicionamos 1 ml. de la disolucin de p-nitrofenil fosfato sal di sdica hexahidrato
0.025M, agitamos hasta homogenizar la muestra, luego se incubaron a 37C tapados durante 1 h. con agitaciones
constantes; colocamos en un bao de hielo por 5 min. (para detener la actividad), posterior mente agregamos 1 ml.
CaCl2 al 0.5 M y 4 ml de NaOH al 0.5 M, agitamos hasta homogenizar, pasamos parte de la solucin a tubos de
ensayo, centrifugamos y medimos a 400nm en un espectrofotmetro. Se realizaron 3 muestras, sus repeticiones y un
control para cada suelo.
Las muestras se deben de procesar junto con un control el cual se prepara con el mismo procedimiento que el de las
muestras exceptuando que la disolucin de p-nitrofenil fosfato sal di sdica hexahidrato se aade despus del CaCl 2
0.5 M y NaOH 0.5M, antes de centrifugar.

RESULTADOS Y DISCUSIN
A continuacin (Tabla 1) se muestra una relacin de los datos de la recta patrn de calibracin, enunciando la
actividad enzimtica de misma, y la representacin grafica de esta (Figura 1)

El nivel de la actividad enzimtica de la fosfomonoestersa acida de las muestras oscilo entre 1.24 y 3.25 mg pnitrofenol Kg-1 suelo h-1.
Se calcul la cantidad de p-nitrofenol contenido en los filtrados utilizando la recta de calibracin elaborada con
cantidades conocidas de p-nitrofenol. Se determino que existan diferencias estadsticamente significativas en la
actividad enzimtica de las muestras.

Nos damos cuenta que las medidas de absorbancia de las muestras entran perfectamente dentro de la recta
previamente establecida (recta de calibracin).

CONCLUSIONES
Los resultados de este trabajo representan la estandarizacin de la tcnica de determinacin de la fosfomonoesterasa
acida, la realizacin de la recta de calibracin de la fosfomonoesterasa acida la cual se usa como patrn al momento

de obtener los datos de concentracin y cantidad de p-nitrofenol de las muestras, con lo cual se pudo calcular la
actividad enzimtica que se presento en cada muestra.
Es importante mencionar que mediante la utilizacin del mtodo, es posible estudiar la fosfomonoesterasa acida y
obtener informacin sobre el potencial del mismo para movilizar Po.

BIBLIOGRAFIA
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