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Cours PCEM2

Physiologie bactrienne

Anne-Laure Michon- Laboratoire Bactriologie


Hpital Arnaud de Villeneuve - Montpellier

Objectifs
les principaux lments de la physiologie bactrienne :
les conditions de la croissance bactrienne
la croissance bactrienne proprement dite

nutritionnelles
environnementales
division bactrienne
dynamique de la croissance

leurs implications :
dans la conduite dun examen cytobactriologique
dans le diagnostic dune infection bactrienne

Dfinition
Physiologie
Science des fonctions et des constantes du
fonctionnement normal des organismes vivants,
unicellulaires comme pluricellulaires
(Larousse Mdical)

Science qui traite des fonctions organiques par


lesquelles la vie se manifeste
(Petit Larousse)

Plan
Les principaux lments de
la physiologie bactrienne

Implication lors de lexamen


cytobactriologique

- Besoins nutritifs

- Choix des milieux de culture

- Conditions environnementales

- Choix de T, atmosphre
dincubation

- Division bactrienne

- Dlais de croissance et de
rendu des rsultats

- Dynamique de la croissance

- Dnombrement, identification
antibiogramme

Besoins nutritifs (1)


Bactries : organismes vivants devant trouver dans
lenvironnement les substances ncessaires
leur nergie et leurs synthses cellulaires
1. Source dnergie :
lumineuse : bactrie phototrophe
composs minraux ou organiques : bactrie chimiotrophe
- lment minral : bactrie chimiolithotrophe
- lment organique : bactrie chimioorganotrophe

2. Sources de carbone :
bactrie autotrophe : CO2 exclusivement
bactrie htrotrophe : CO2 ou substances hydrocarbones
(alcool, acide actique, acide lactique, sucres divers,)

Besoins nutritifs (2)


3. Sources dazote et besoins en soufre
4. Besoins inorganiques : phosphore
5. Autres lments :
Sodium, Potassium, Magnsium, Chlore
Oligo-lments : Manganse, Nickel, Zinc, Slnium,
Facteurs de croissance :
- Acides amins : Acide folique, Acide nicotinique,
- Divers : drivs de lhme

Vitamines : B6 (pyridoxine), K et drives, ...

Milieux de culture (1)


Quels sont les composs qui doivent tre inclus dans un milieu
de culture pour permettre la croissance bactrienne ?
Substrats nutritifs :Acides amins, peptides, bases nucliques,
Systme tampon

sucres, etc

Sels minraux
Vitamines
autres facteurs de croissance pour certaines bactries :
Sang, protines, hmoglobine, vitamines supplmentaires

Milieux de culture (2)


- Composition
synthtiques
semi-synthtiques

Composition dfinie
Ajout dun extrait dorganismes (levures : facteurs

complexes

Ralisation empirique (extraits de viande, de levure,

de croissance)

extraits enzymatiques, protines = peptones)

- Rle
disolement
denrichissement
enrichis
slectifs
( voir en T.P.)

Croissance de plusieurs espces


Croissance d1 espce en faible quantit favorise
Croissance des bactries exigeantes
Croissance dun type bactrien favorise
+ inhibition de celle des autres

Milieux de culture (3)


- Liquides

bouillons de culture

En tubes
Croissance bactrienne
= trouble du bouillon

En flacons

Ex : bouillons
dhmoculture

Incubation jusqu 15 jours 37 C le plus souvent

Milieux de culture (4)


- Solides

milieux gloss en botes de ptri

Incubation 24 72 h 37 C le plus souvent


Mise en vidence de colonies bactriennes
(1 bactrie 1 colonie)

Combinaison de plusieurs types de milieux de 2 (ECBU)


9 (Copro)

Plan
Les principaux lments de
la physiologie bactrienne

Implication lors de lexamen


cytobactriologique

- Besoins nutritifs

- Choix des milieux de culture

- Conditions environnementales

- Choix de T, atmosphre
dincubation

- Division bactrienne

- Dlais de croissance et de
rendu des rsultats

- Dynamique de la croissance

- Dnombrement, identification
antibiogramme

Conditions environnementales
Le pH : bactries

neutrophiles (6- 8)
alcalinophiles (> 8)
acidophiles (< 6)

Escherichia coli
Pseudomonas
Lactobacillus

La pression osmotique : bonne tolrance gnrale


halophiles : ncssitent du NaCl
halotolrants
La pression mcanique / hydrostatique : bonne tolrance
espces barophiles (fonds marins)

La temprature :

bactries msophiles : 10-45C optimum 30-37C,


psychrophiles : -15C 20C (5-10C)
thermophiles (45-70C)
hyperthermophiles (>80C)

Conditions environnementales (2)


Loxygne molculaire = mode respiratoire des bactries
Bactries

2 - micro-arophiles
(Campylobacter)
3 - aro-anarobies facultatives
(Escherichia coli)
4 - anarobies strictes
(Clostridium)

Croissance bactrienne

1 - arobies strictes
(Pseudomonas)

Atmosphre normale

Atmosphres particulires

Etuve CO2 (5%)

Sachet
Anarobiose
ou
Microarophilie

Jarres

Plan
Les principaux lments de
la physiologie bactrienne

Implication lors de lexamen


cytobactriologique

- Besoins nutritifs

- Choix des milieux de culture

- Conditions environnementales

- Choix de T, atmosphre
dincubation

- Division bactrienne

- Dlais de croissance et de
rendu des rsultats

- Dynamique de la croissance

- Dnombrement, identification
antibiogramme

Division bactrienne
Croissance bactrienne
=
Accroissement ordonn et coordonn de tous les composants de
la bactrie

du nombre des bactries


appauvrissement du milieu de culture en nutriments
enrichissement du milieu en sous-produits du mtabolisme

Division bactrienne (2)


Bactrie = organisme asexu
Reproduction par division cellulaire :
- Allongement de la bactrie,

- Duplication des constituants


- Sparation

1 cellule mre
2 cellules filles identiques
= reproduction binaire
= scissiparit

Etc, 1 colonie

Dlais de croissance
Temps de division et dlais de croissance dpendent :
- de la bactrie
- des conditions du milieu extrieur (favorables/dfavorables)
Temps de gnration de quelques espces bactriennes
Bactrie

Escherichia coli
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Mycobacterium tuberculosis

In vitro (min)
20-40

In vivo (h)
5

40

3-5

40

120-240

24-48

Conditionne le dlai de lanalyse et donc du rendu des rsultats

Plan
Les principaux lments de
la physiologie bactrienne

Implication lors de lexamen


cytobactriologique

- Besoins nutritifs

- Choix des milieux de culture

- Conditions environnementales

- Choix de T, atmosphre
dincubation

- Division bactrienne

- Dlais de croissance et de
rendu des rsultats

- Dynamique de la croissance

- Dnombrement, identification
antibiogramme

Dynamique de la croissance
Courbe de croissance = tude en milieu liquide : 6 phases
Log du
nombre
bactries

Temps
dincubation
1. Latence
3. Exponentielle
5. Stationnaire
2. Acclration 4. Ralentissement

6. Dclin

Dynamique de la croissance (2)


Courbe de croissance = tude en milieu liquide : 6 phases
(milieu adapt non renouvel)

- Phase de latence : Croissance 0


Accoutumance des bactries lenvironnement
- Phase dacclration : vitesse de croissance

- Croissance exponentielle :Taux de croissance maximal


- Phase de ralentissement : vitesse de croissance, puisement du
milieu, accumulation des dchets
- Phase stationnaire : arrt de la reproduction (facteur limitant)
taux de croissance nul (division = autolyse)
- Phase de dclin : ressources puises, le nombre de bactries

Applications
1/ Application au dnombrement des bactries par unit de
volume dchantillon analys

Dnombrement aprs culture (bactries viables) :


ensemencement dun volume dfini dchantillon sur milieu de culture
glos UFC/ml (Units Formant Colonie/ml)

Ex : 100 ml de LBA 70 colonies bactriennes


700 UFC/ml (seuil significatif : 104 UFC/ml)
autres : lames immerges (Uricult) pour lECBU
bactriurie

Applications (2)
Ex: ECBU Bactriurie
- Ensemencement volume dfini durine + dnombrement des colonies
bactriennes
- Lame immerge :
Milieu bacilles Gram ngatif
Bactries ou UFC/ml

103

104

Milieu tous germes

- Seuils significatifs (UFC) / ml

Cystite aigu : 103 Escherichia coli, 105 autres bactries


Pylonphrites et prostatites 104
ITU nosocomiales 103

105

106

107

Applications (3)
2/ Application lidentification bactrienne
Etude de la croissance en prsence de divers substrats =
tude du mtabolisme bactrien

Escherichia
coli

Exemple
Etude du
mtabolisme
glucidique
avec galerie
miniaturise

Klebsiella
pneumoniae

Inositol

Saccharose Arabinose

Applications (4)
3/ Application la ralisation de lantibiogramme
Etude de la croissance en prsence de divers
antibiotiques

Disque
dantibiotique

Croissance
(souche rsistante)
Inhibition de la
croissance
(souche sensible)

Applications (5)
4/Conduite dun examen cytobactriologique (Ex : ECBU)

J0 Examen direct (GB, GR, bactries, ) et mise en culture


J1 1 type de colonies Plusieurs types de Plusieurs types de
isoles
colonies isoles colonies non isoles

Numration
Identification(s)
Antibiogramme(s) ventuel(s)

J2

J3

Rsultat

Risolement

Identification et
antibiogramme ventuel
Rsultat

Conclusion
- Intrt de ltude de la croissance bactrienne : multiple
Lors dune maladie infectieuse :
- isolement, dnombrement et identification de la ou des bactries
en cause
- dtermination de la sensibilit aux antibiotiques

Ralisation de contrle de strilit ou de densit microbienne dans


certains locaux (air des blocs opratoires, surfaces, )
Contrle de la qualit microbiologique
Aliments, eaux, mdicaments, produits cosmtiques,

Importance de connatre la physiologie bactrienne

+++

Importance des conditions de ralisation de la culture bactrienne


(besoins nutritifs et conditions environnementales respects)

Pour en savoir plus ...


2 sites Internet
http://www.phem.fr/bio
puis Les bactries
Campus de microbiologie mdicale :
http://www.microbes-edu.org
avec
http://www.microbes-edu.org/etudiant/etudiants.html