1

Aula Prtica 1
1. Exame direto das fezes
Material:

Lminas de microscopia
Lamnulas
gua ou soluo salina (0,85%)
Basto de vidro ou palito
Lugol (soluo de iodo/iodeto de potssio) usado como corante para permitir
uma melhor visualizao da estrutura interna dos ovos e oocistos.
Microscpio

O exame direto utilizado para demonstrar a presena de ovos e larvas de helmintos e

cistos de protozorios.
1. Coloque uma pequena quantidade de fezes em uma lmina de microscopia.
2. Coloque uma gota de lquido nas fezes e misture bem com uma esptula ou basto. Se
voc estiver examinando trofozotos (formas vivas e ativas) de protozorios, e necessitar
diluir o material, utilize soluo salina. Se estiver buscando ovos de helmintos ou ento
cistos de protozorios, ento dilua o material em gua ou lugol.
3. Cubra com uma lamnula. A suspenso deve ter espessura fina o suficiente para
permitir a passagem da luz. Procure no deixar uma poro no misturada de fezes no
centro. A suspenso dever ser homognea.
Errado!

Certo

4. Examine a lmina com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude para a objetiva
de 40X.
5. A inspeo da lmina dever ser feita escolhendo-se um canto e ento movendo a
lmina para ao canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobrepor
parcialmente os campos microscpicos.

Observao: Devido pequena quantidade fezes examinada por esta tcnica, ela
somente recomendada para os seguintes casos:
a. Fezes lquidas que podem conter trofozotos de protozorios.
b. Amostras fecais cuja quantidade pequena demais para permitir a realizao de
outras tcnicas. Isso particularmente freqente em amostras de animais silvestres
como peixes, aves, rpteis e anfbios.
Vantagens da tcnica

Rpida de preparar.
Se utilizada com soluo salina, no causa distores nos parasitas
nica maneira de visualizar trofozotos (obrigatrio o uso de soluo salina)
til para examinar fezes de pequenas aves e rpteis (onde trematides so
comuns)

Desvantagens da tcnica

Como somente se utiliza uma amostra muito pequena das fezes, os parasitas
podem no ser detectados se a sua concentrao for muito baixa ou se
houver excesso de debris ou gordura
Areia, sementes e outros debris fecais podem dificultar a deposio
adequada da lamnula
Pode requerer muito tempo para um exame adequado

Cuidados de segurana
Fezes podem conter patgenos perigosos (bactrias, vrus etc.). Procedimentos
adequados de higiene e segurana devem ser empregados. Use avental e luvas durante a
execuo da tcnica.
Bibliografia
- FAO Agriculture Department Animal Production
-http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.
VETERINARY
PARASITOLOGY
http://cal.vet.upenn.edu/paraav/

and Health

VPTH603

Division

LABORATORY-

2. Concentrao de ovos de helmintos e cistos de protozorios por

flutuao em sal

Material:

Lminas de microscopia
Lamnulas
Basto de vidro ou palito
Gaze ou coador de ch
Tubo de ensaio ou recipiente de filme ou similar
Provetas graduadas
Bqueres ou recipientes similares
Soluo para flutuao
Microscpio

Princpio
A tcnica de flutuao um teste qualitativo para a deteco de ovos de nematides e
oocistos de protozorios. uma tcnica til para ensaios preliminares visando
identificar que grupos de parasitas esto presentes em uma amostra. Contudo, ovos de
muitas espcies de trematides e cestides, bem como cistos de Giardia no so
detectados.
Os ovos e/ou cistos so separados do material fecal e concentrados por uma soluo de
flutuao em uma gravidade especfica apropriada. Ovos leves, por terem densidade
menor do que aquela do fluido de flutuao tendem a subir e permanecer no topo da
coluna de lquido.
Os lquidos de flutuao utilizados so:
Soluo saturada de sal (NaCl)
Soluo saturada de acar (sacarose)
Soluo de sulfato de zinco (ZnSO4)
Mtodo
1. Misture em um bquer uma pequena quantidade de fezes (cerca de 1 grama) com 10
ml de soluo de flutuao e homogenize bem com um basto de vidro ou palito.
2. Transfira a suspenso para um recipiente (caixa de filme, tubo de ensaio, etc.)
filtrando-a com o auxilio de um funil com gaze ou, alternativamente, usando-se uma
peneira de ch.

4
3. Adicione a suspenso at a mesma formar um menisco convexo na extremidade
superior do recipiente.
4. Coloque uma lamnula por sobre a superfcie convexa da suspenso.
5. Deixe por 15 minutos para que os ovos e oocistos possam flutuar.
6. Remova com cuidado a lamnula e coloque-a sobre uma lmina de microscopia.
7. Observe a lmina ao microscpio com uma objetiva de 10x e, posteriormente, mude
para a objetiva de 40X.
8. A inspeo da lmina dever ser feita escolhendo-se um canto e ento movendo a
lmina para ao canto oposto, em um movimento de ida e volta, procurando sobreopor
parcialmente os campos microscpicos.

Gravidade especfica de alguns ovos de helmintos, conforme determinada utilizando-se

centrifugao em gradiente de densidade de sacarose*
Espcie

Gravidade Especfica Mdia

Faixa

1,0559

1,0549 1,0573

Toxocara canis

1,0900

1,0791 1,0910

Toxocara cati

1,1005

1,1004 1,1006

Taenia spp.

1,2251

1,2244 1,2257

Physaloptera spp.

1,2376

Ancylostoma caninum

Soluo de ZnSO4

Soluo saturada de sal ou acar

1,18
1,20

1,2372 1,2380
-

5
* David and Lindquist, 1982. J. Parasitology 68:916-919.

Flutuao em sal ou acar - Vantagens da tcnica

Tcnica flutua os ovos mais comuns de helmintos e oocistos de coccdias

Solues empregadas so baratas
H poucos debris para dificultar a viso dos parasitas

Flutuao em sal ou acar - Desvantagens da tcnica

A tcnica no flutua ovos de trematides e ovos de alguns vermes chatos

(ordem Pseudophyllidea Ex. Diphyllobothrium)
Distorce a morfologia de cistos de Giardia
Pode ser demorada se no for feita com centrifugao
No aplicvel em amostras de fezes contendo gordura

Flutuao em sulfato de zinco - Vantagens da tcnica

Tcnica recomendada para a maioria dos exames de fezes

Flutua a maior parte dos ovos de helmintos
Melhor mtodo para cistos de protozorios, especialmente Giardia e para
ovos de Trichuris. Na maioria dos casos recupera larvas de nematides.

Flutuao em sulfato de zinco - Desvantagens da tcnica

No flutua ovos de alguns trematides e vermes chatos (ordem

Pseudophyllidea Ex. Diphyllobothrium)
No aplicvel em amostras de fezes contendo gordura
ZnSO4 caro e um hidrmetro deve ser usado para se fazer a soluo
(gravidade especfica de 1,18)

Cuidados de segurana
Fezes podem conter patgenos perigosos (bactrias, vrus, etc.). Procedimentos
adequados de higiene e segurana devem ser empregados. Use avental e luvas durante a
execuo da tcnica.
Bibliografia
- FAO Agriculture Department Animal Production
-http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.

and Health

Division

6
VETERINARY
PARASITOLOGY
http://cal.vet.upenn.edu/paraav/

VPTH603

LABORATORY-

3. Contagem de ovos de helmintos e cistos de protozorios nas fezes

Material:
Balana
Provetas graduadas
Soluo para flutuao
Basto de vidro ou palito
Gaze ou peneira de ch
Bqueres ou recipientes similares
Pipetas Pasteur com peras de borracha
Cmara de contagem de McMaster
Microscpio
Princpio
A tcnica de McMaster a mais usada para demonstrar a presena de ovos de helmintos
e oocistos de coccdias em amostras de fezes.
O mtodo utilize uma cmara de contagem que permite examinar microscopicamente
um volume conhecido (2 x 0,15 ml) de suspenso fecal. Um peso conhecido de fezes
misturado a um volume conhecido de soluo de flutuao e o nmero de ovos (ou
oocistos) por grama de fezes pode ser calculado. Esse valor conhecido como o.p.g.
As quantidades de fezes e lquido so escolhidas de forma que a contagem de ovos
possa ser facilmente derivada pela multiplicao do nmero de ovos sob a rea
delimitada por um simples fator de converso.
A cmara de McMaster apresenta dois compartimentos, cada um com uma retcula
gravada na sua superfcie superior. Quando preenchida com a suspenso de fezes em
soluo de flutuao, a maior parte dos debris se sedimenta no fundo, enquanto os ovos
leves e oocistos flutuam, aderindo na superfcie. Os parasitas presentes abaixo da
retcula podem ser facilmente contados.
As contagens podem ser feitas antes e aps um tratamento anti-helmntico, permitindo
monitorar a resistncia a drogas. Contagens realizadas entre tratamentos permitem
avaliar a carga parasitria e assim escolher a melhor estratgia de tratamento.

Mtodo

8
1. Pesar 2 gramas de fezes.
2. Diluir com 28 ml de soluo salina saturada ou com sulfato de zinco.
3. Homogeneizar bem a suspenso e transferir para um bquer ou recipiente similar
passando-a atravs de peneira de ch ou em gaze dupla.
4. Ainda sob homogeneizao, retirar uma alquota com pipeta Pasteur e aplicar com
cuidado em cada um dos compartimentos da cmara de McMaster.
5. Deixar a cmara em descanso por 5 minutos e examinar em microscpio.
Primeiramente focar as linhas das retculas. Em seguida posicionar em um dos cantos de
uma retcula e alterando ligeiramente o foco, focar os ovos/oocistos.
6. Cada rea definida por uma retcula dever ser inteiramente coberta e os parasitas
detectados contados progressivamente.
7. Para o clculo de o.p.g., multiplicar a soma dos ovos encontrados nos dois
compartimentos por 50.
Explicao
Cada compartimento embaixo da retcula comporta um volume de 0,15 ml (a rea
riscada de 1 cm por 1 cm, e a profundidade de 0,15 cm, perfazendo um total de 0,15
cm3 ou 0,15 ml. Examinando-se os dois compartimentos, o volume total analisado ser
de 0,3 ml, que corresponde a 1/100 do volume total em que a amostra de fezes foi
originalmente ressupensa (2 gramas em 30 ml). Para o clculo de ovos por grama, a
multiplicao dever feita, portanto, por 50 (100 divido por 2 gramas).
Vantagens da tcnica

No requer nenhum equipamento especializado.

Permite quantificar o nmero de parasitas eliminados pelo hospedeiro.

Desvantagens da tcnica

A contagem pode ser demorada, especialmente se houver grande quantidade

de debris.
No aplicvel em amostras de fezes contendo gordura
No flutua alguns tipos de ovos.

Cuidados de segurana
Fezes podem conter patgenos perigosos (bactrias, vrus, etc.). Procedimentos
adequados de higiene e segurana devem ser empregados. Use avental e luvas durante a
execuo da tcnica.
Bibliografia

- FAO Agriculture Department Animal Production

-http://www.fao.org/ag/againfo/resources/en/multimedia.html.
VETERINARY
PARASITOLOGY
http://cal.vet.upenn.edu/paraav/

and Health

VPTH603

Division

LABORATORY-