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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL
CENTRO INTERDISCIPLINARIO DE INVESTIGACIN PARA

EL DESARROLLO INTEGRAL REGIONAL
Comparacin de los perfiles de flavonoides de

organo (Lippia graveolens HBK. s.l.) de varias
poblaciones del Estado de Durango
TESIS
QUE PARA OBTENER EL GRADO DE
MAESTRA EN CIENCIAS EN GESTIN AMBIENTAL
Presenta
Romana Ros Reyes
DIRECTORA: M.C. Martha Celina Gonzlez Gereca
CODIRECTORA: Dra. Yolanda Herrera Arrieta
Durango, Dgo. Agosto de 2010
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
M.C. en Gestin Ambiental
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Romana Ros Reyes
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EL PRESENTE TRABAJO SE REALIZ EN LABORATORIOS DEL CENTRO

INTERDISCIPLINARIO
DE
INVESTIGACION
PARA
EL
DESARROLLO
INTEGRAL REGIONAL DEL INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL, UNIDAD

DURANGO, CON LA DIRECCIN, DE LA MAESTRA EN CIENCIAS MARTHA
CELINA GONZLEZ GERECA Y
LA DOCTORA YOLANDA HERRERA
ARRIETA.
PARA LA REALIZACIN DE ESTA TESIS SE CONT CON EL APOYO

ECONMICO DE UNA BECA CONACYT (No. REGISTRO 221860) Y DEL
PROGRAMA INSTITUCIONAL DE FORMACIN DE INVESTIGADORES (PIFI)
DEL INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL.
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NDICE
Pg.
NDICE ............................................................................................................................... i
RELACIN DE FIGURAS................................................................................................... i
RELACIN DE CUADROS.................................................................................................ii
RESUMEN......................................................................................................................... iv
ABSTRACT ...................................................................................................................... vii
INTRODUCCIN.............................................................................................................. vii
I. ANTECEDENTES.................................................................................................... .......1
1.1 Aspectos biolgicos del gnero Lippia..................................................................... 3
1.2 Lippia graveolens (organo mexicano)..................................................................... 5
1.3 Distribucin ............................................................................................................. 5
1.4 Registros de especies del genero Lippia para Durango.......................................... 7
1.5 Sinonimia de Lippia graveolens............................................................................... 8
1.6 Importancia econmica del organo......................................................................... 9
1.7 Importancia social del organo............................................................................... 11
1.8 Composicin qumica del organo......................................................................... 11
1.8.1 Flavonoides ............................................................................................................ 12
1.8.2 Funcin de los flavonoides en las plantas ............................................................... 14
1.8.3 Propiedades antioxidantes de los flavonoides........................................................ 15
1.8.4 Uso e importancia de los flavonoides...................................................................... 16
1.8.5 Investigaciones realizadas sobre Lippia.................................................................. 18
1.8.6 Mtodos de extraccin de flavonoides .................................................................... 21
II. JUSTIFICACIN.......................................................................................................... 24
III. OBJETIVOS................................................................................................................ 25
i
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3.1 Objetivo General .................................................................................................... 25

3.2 Objetivos Especficos ............................................................................................. 25
IV. MATERIALES Y MTODOS ...................................................................................... 26
4.1 Descripcin del rea de Estudio ............................................................................. 26
4.1.1 Clima ...................................................................................................................... 28
4.1.2 Suelo ...................................................................................................................... 30
4.1.3 Vegetacin.............................................................................................................. 32
4.2 Sitios de colecta .................................................................................................... 35
4.3 Recopilacin de los datos de las condiciones ambientales de los sitios ................. 36
4.4 Colectas del material vegetal.................................................................................. 37
4.5 Preparacin de las muestras para su anlisis qumico ........................................... 37
4.6 Obtencin de extractos........................................................................................... 39
4.6.1 Extractos para el anlisis cromatogrfico preliminar ...................................................... 39
4.6.2 Extractos para el anlisis de HPLC/DAD................................................................. 39
4.7 Anlisis cromatogrfico .......................................................................................... 39
4.7.1 Cromatografa de capa fina..................................................................................... 39
4.7.2 Cromatografa de lquidos (HPLC/DAD)................................................................. 40
4.8 Caracterizacin estructural de flavonoides ............................................................. 41
4.9 Anlisis estadstico ................................................................................................. 42
V. RESULTADOS Y DISCUSIN .................................................................................... 44
5.1 Caracteristicas ambientales de los sitios de muestreo............................................ 44
5.2 nalisis cromatogrfico .......................................................................................... 46
5.2.1 Perfil de flavonoides detectados por cromatografa en capa fina ..................... 46
5.3 Perfiles de flavonoides detectados por HPLC/DAD ................................................ 48
5.3.1 Caracterizacin del esqueleto de flavonoides obtenidos ........................................ 53
5.4 Anlisis estadistico.................................................................................................... 66
ii
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5.4.1 Anlisis de similitud y de componentes principales ........................................... 66

5.4.2 Anlisis cuantitativo de unidades arbitrarias de concentracin (UAC) .............. 72
VI. CONCLUSIONES....................................................................................................... 78
VII. RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS................................................................ 79
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.......................................................................... 80
RELACIN DE FIGURAS
Pg.
Figura 1. Lippia graveolens H.B.K..................................................................................... 4
Figura 2. Distribucin de Lippia graveolens H.B.K. en Mxico .......................................... 6
Figura 3. Distribucin de Lippia graveolens H.B.K. en Durango ........................................ 8
Figura 4. Esqueleto bsico de flavonoides ...................................................................... 12
Figura 5. Estructura bsica de los principales grupos de flavonoides ............................. 13
Figura 6. Estructuras qumicas algunos flavonoides ....................................................... 14
Figura 7. Mapa del rea de estudio................................................................................. 27
Figura 8. Tipo de clima del rea de estudio..................................................................... 28
Figura 9. Temperatura media anual del rea de estudio ................................................. 29
Figura 10. Precipitacin media anual del rea de estudio ............................................... 30
Figura 11. Tipo de suelo del rea de estudio .................................................................. 31
Figura 12. Porciento (%) de superficie de la unidad de suelo.......................................... 32
Figura 13. Uso del suelo y vegetacin del rea de estudio............................................. 33
Figura 14. Superficie del uso del suelo y vegetacin del rea de estudio........................ 33
Figura 15. Sitios de colecta en el rea de estudio .......................................................... 36
iii
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Figura 16. Herborizacin y recoleccin del material vegetal............................................ 37

Figura 17. Procesamiento del material vegetal................................................................ 38
Figura 18. Preparacin de las muestras previo al anlisis qumico ................................. 38
Figura 19. a) Aplicacin de extractos en placas de silica gel y b) Elucin del
cromatograma.................................................................................................................. 40
Figura 20. Formas tpicas de los espectros de abosrcin en el UV de flavonoides ...... 472
Figura 21. Cromatogramas obtenidos en capa fina (TLC) a) expuetas al eluyente b) bajo
luz UV. ........................................................................................................................... 497
Figura 22. Cromatogramas de los perfiles de flavonoides detectados por HPLC/DAD.... 49
Figura 23. Dendrograma del anlisis CLUSTER cualitativo de las poblaciones foliares de
Lippia graveolens de acuerdo a sus perfiles fenlicos foliares ........................................ 69
Figura 24. Grafico del anlisis de Componentes Principales de las poblaciones foliares
de Lippia graveolens de acuerdo a sus perfiles fenlicos foliares ................................... 71
Figura 25. Dendrograma del anlisis cuantitativo de las poblaciones de Lippia graveolens
en funcion de sus perfiles fenlicos foliares ..................................................................... 74
Figura 26.Grafico del anlisis de Componentes Principales de las poblaciones de Lippia
graveolens en funcin de los perfiles fenlicos foliares.................................................... 77
RELACIN DE CUADROS
Pg.
Cuadro 1. Especies de Lippia registradas en el Listado florstico de Durango................... 7
Cuadro 2. Municipios con la mayor produccin de organo en Durango......................... 10
Cuadro 3. Costos del organo en grea y en hoja seleccionada (2006-2009)................. 10
Cuadro 4. Algunos flavonoides identificados en el gnero Lippia spp y Origanum .......... 20
Cuadro 5. Coordenadas extremas del rea de estudio ................................................... 27
iv
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Cuadro 6. Tipos de clima representado como unidad de superficie ............................... 29

Cuadro 7. Tipo de suelo expresado como unidad de superficie ..................................... 31
Cuadro 8. Coordenadas geogrficas de los sitios de muestreo....................................... 35
Cuadro 9. Rangos de absorcin de UV de flavonoides ................................................... 41
Cuadro 10. Caracteristicas ambientales de los sitios de colecta ..................................... 44
Cuadro 11. Nmero total de sitios de colecta por caractersticas ambiental .................... 45
Cuadro 12. Valores de Rf y coloraciones de los compuestos separados por cromatografa
de capa fina (TLC) .......................................................................................................... 47
Cuadro 13. Caracterizacin del esqueleto principal de los flavonoides detectados ......... 54
Cuadro 14. Resultados del anlisis cromatografico y espectros obtenidos de los
compuestos mayoritarios detecctados en muestras de Lippia graveolens ....................... 55
Cuadro 15. Espectros de absorcin de los estndares analizados.................................. 63
Cuadro 16. Caracteristicas espectrales de flavonoides reportados en especies de los
gneros Lippia y Origanum .............................................................................................. 65
Cuadro 17. Tiempos de retencin de los compuestos detectados................................... 66
Cuadro 18. Matriz cualitativa de presencia /ausencia de la distribucin individual de los
compuestos detectados ................................................................................................... 67
Cuadro 19. Comparacin del anlisis de similitud y las caractersticas ambientales ....... 70
Cuadro 20. Matriz Cuantitativa de la distribucin individual de los compuestos detectados
........................................................................................................................................ 72
Cuadro 21. Concentracin de los compuestos por grupo formado .................................. 75
Cuadro 22. Comparacin del anlisis cuantitativo y las caractersticas ambientales ...... 76
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RESUMEN
Se compararon y caracterizaron los perfiles fenlicos de 25 poblaciones silvestres
de Lippia graveolens H.B.K. de los aos de 1998, 2007 y 2008 procedentes de 12
de los principales municipios del Estado de Durango, en los cuales se recolecta el
organo para su venta. La determinacin de la composicin fenlica se realiz
mediante la tcnica de cromatografa lquida de alta resolucin con detector de
arreglo de diodos (HPLC/DAD), usando un mtodo de gradiente de fase reversa
de acetonitrilo-agua. Se elabor una matriz binaria de presencia/ausencia con los
compuestos fenlicos resueltos en los cromatogramas respectivos y se
cuantificaron los compuestos mayoritarios por medio de los valores de porciento
de rea de cada compuesto, expresados como unidades arbitrarias de
concentracin (UAC). La matriz obtenida del anlisis cualitativo se someti a un
anlisis de agrupamiento (CLUSTER) con el algoritmo Unweighted Pair Group
Method with Arithmetic mean (UPGMA) y el ndice de Jaccard, as como un
anlisis de componentes principales (CP). En la matriz del anlisis cuantitativo,
se utiliz el algoritmo Wards en el anlisis CLUSTER y el ndice de distancias
Euclidianas en el anlisis de CP para determinar la variabilidad intraespecfica e
interespecfica y el valor de los perfiles fenlicos para delimitar y discriminar entre
poblaciones. Los resultados mostraron el dominio del tipo de flavonoide flavanona
en los 22 compuestos estudiados. La relacin de las caractersticas ambientales
respecto a la variabilidad intraespecfica en los perfiles fenlicos foliares fue
detectada independiente para el anlisis de similitud pero dependientes en el
anlisis cuantitativo de las unidades arbitrarias de concentracin de cada
compuesto.
Palabras clave: Lippia graveolens H.B.K., flavonoides, HPLC/DAD.
vi
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ABSTRACT
We compared and characterized the profiles of 25 wild populations of Lippia
graveolens HBK collected the years 1998, 2007 and 2008 from 12 major
municipalities in the State of Durango, where oregano is collected for
commercialization. The determination of phenolic composition was performed
using the technique of high resolution liquid chromatography with diode array
detector (HPLC/DAD), using a method of reverse phase gradient of acetonitrilewater. It was elaborated a binary matrix of presence/ absence of phenolic
compounds determined in the respective chromatograms. Main compounds were
quantified through the values of percent area of each compound, expressed as
arbitrary units of concentration (UAC). The matrix obtained from the qualitative
analysis underwent a cluster analysis (CLUSTER) using the Jaccard index and a
principal components analysis (PC), while the quantitative matrix used Ward's
algorithm for cluster analysis and Euclidean distances for CP, in order to determine
intraspecific and interspecific variability and the value of phenolic profiles to identify
and distinguish between populations. The results showed that the predominant
type of flavonoid was flavanone in the 23 compounds studied. The relationship of
environmental characteristics with respect to the intraspecific variability in leaf
phenolic profiles was detected as independent on the qualitative analysis of
similarity, but dependent on the quantitative analysis of arbitrary units of
concentration of each compound.
Keywords: Lippia graveolens HBK, Flavonoids, HPLC / DAD.
vii
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INTRODUCCIN
El organo (Lippia graveolens) es un recurso importante en el mercado
internacional y nacional ya que es ampliamente usado como condimento, como
materia prima para la produccin de aceites esenciales y como aditivos en la
industria alimenticia, qumico-farmacutica y de perfumera (CONAFOR, 2008;
Villavicencio et al., 2007).
Los principales Estados recolectores de organo son, en orden de importancia:
Chihuahua, Durango, Tamaulipas, Coahuila, Jalisco, Zacatecas, Quertaro,
Hidalgo y Baja California Sur (Villavicencio et al., 2007).
En Durango y en otras regiones de Mxico esta especie presenta variabilidad
morfolgica asociada a los diferentes hbitats de crecimiento, lo que ha dado lugar
a controversias por su sinonimia con otras especies como es el caso de Lippia
berlandieri (Snchez et al., 2007).
Adems de la morfologa, actualmente se utilizan otras herramientas para ayudar

a su clasificacin botnica, como son la citogentica, los marcadores moleculares,
la quimiotaxonoma, entre las principales. En esta ltima, los caracteres qumicos
que se han empleado como atributos para identificar una planta por su perfil
cromatogrfico, son los compuestos fenlicos.
Las principales tcnicas utilizadas para este propsito son la cromatografa en

capa fina (TLC,Thin Layer Cromatography) y la cromatografa de lquidos de alta
resolucin (HPLC, High Performance Liquid Cromatography) con detector de
arreglo de diodos (DAD) o de masas (MS). La informacin que brindan estas
tcnicas es confiable debido a que reflejan la composicin de los compuestos en
una misma especie y de una misma zona geogrfica,
presentar
un perfil cromatogrfico
los cuales pueden
similar como consecuencia de crecer en
condiciones ambientales similares y de expresar una carga gentica similar (Feria

et al,. 2007).
1
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Con la finalidad de aportar informacin fitoqumica, se compararon los perfiles de

flavonoides, por cromatografa lquida de alta resolucin con detector de arreglo
de diodos (HPLC/DAD), de varias poblaciones naturales de organo del Estado de
Durango, para su utilizacin en investigaciones futuras sobre el organo mexicano
en taxonoma, biologa y medicina. Adems se correlacionaron las caractersticas
fitoqumicas de la L. graveolens con las condiciones ambientales de su hbitat
con base a la cartografa escala 1: 1000000 del INEGI (1981) y mapas elaborados
con el paquete ArcView 3.2 (ESRI).
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I. ANTECEDENTES
1.1 Aspectos biolgicos del gnero Lippia
Se conocen ms de 60 especies sui generis de plantas denominadas Organo,
con aroma y sabor caractersticos. La mayora de stas pertenece a las familias
Lamiaceae (principalmente
el gnero Origanum), conocido como organo
europeo o del Mediterrneo y Verbenaceae (gnero Lippia), en la cual se

encuentra el organo mexicano Lippia (Kintzios, 2002).
Lippia cuenta con 35 gneros y ms de 1000 especies de ellas alrededor de 200
especies estn distribuidas principalmente en Amrica tropical o subtropical,
algunas tambin se encuentran en el Antiguo Mundo (Rzedowski y Caldern,
2002). Contiene especies herbceas, arbustivas y rboles pequeos, a menudo
aromticos al estrujarse, con hojas por lo general opuestas, en ocasiones ternadas
o alternas, pinnatinervadas; inflorescencias bsicamente racimosas, pero por lo
comn contradas y en forma de cabezuelas o espigas, estambres 4, didnamos,
insertos en la parte superior del tubo corolino; ovario bilocular con un vulo
(Rzedowski y Caldern, 2002).
La distribucin de Lippia es amplia, sobre todo en Amrica, en donde se encuentra
desde el Sur de Estados Unidos hasta Amrica del Sur. Tambin en algunos
territorios del frica Tropical, Espaa, Francia, Grecia y Turqua. En Mxico se
desarrollan dos especies de Lippia con caractersticas semejantes al organo
europeo (Origanum vulgare L.), por lo cual se le considera sustituto de ste. Lippia
palmeri Wat, que se encuentra en Baja California y L. graveolens HBK. que tiene
mayor distribucin en el resto de la Repblica Mexicana, esta ltima es la ms
utilizada y se conoce como organo mexicano verdadero (Gonzlez, 2005;
Moldenke, 1965).
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1.2 Lippia graveolens (organo mexicano)

Esta especies se describe como un arbusto de 2 a 3 m de alto, aromtico al
estrujarse; ramas estrigoso-pubrulas o a veces pilosas, las principales a menudo
con corteza exfoliante; hojas opuestas, lmina angostamente ovalada a oblonga o
elptica, de 1 a 5(6) cm de largo, de 0.4 a 2(3.5) cm de ancho, margen ms o
menos regularmente crenado, de textura cartcea, inflorescencias en forma de
espigas cortas, cnicas a cilndricas, de 4 a 12(15) mm de largo, por lo general
agrupadas en fascculos de 2 a 4 en las axilas de las hojas, brcteas comnmente
ordenadas en 4 hileras, persistentes, ovaladas a suborbiculares, de 2 a 3 mm de
largo, conduplicado-aquilladas, agudas a acuminadas, cliz apenas 4dentado, de
1 a 2 mm de largo, piloso-viloso; corola blanca a amarilla (Rzedowski y Caldern,
2002) (Figura. 1).
Figura 1. Lippia graveolens H.B.K.
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Esta especie se adapta a condiciones variadas de clima, preferentemente del tipo

seco y semiseco, con temperaturas que varan de 20 a 24 C y una precipitacin
que va de 182 a 267 mm. En el matorral micrfilo y rosetfilo su hbitat se localiza
en mesetas, planicies, cerros, lomeros, laderas, arroyos y caadas poco
accesibles de suelos alcalinos, en general pedregosos, de textura franco-arenosa.
Tambin se desarrollan poblaciones en suelos con textura ligera migajn-arenoso
(Villavicencio et al., 2007).
En Durango la temperatura mnima que se reporta en algunos hbitats del
organo es de 15.8 C y mximas de 26.7C; su precipitacin media anual es de
hasta 660 mm (CONAFOR, 2008). Se le encuentra principalmente en lomeros
calcreos (derivados de rocas gneas) en el Malpas de la Brea Durango, estos
lomeros estn cubiertos por un matorral rosetfilo. En zonas semiridas como El
Mezquital en Durango la L graveolens est asociada con sitios perturbados, en
las zonas ridas como el Bolsn de Mapim tiene un comportamiento distinto y es
un arbusto caracterstico de matorrales primarios (Snchez et al., 2007).
1.3 Distribucin
De acuerdo a Rzedowski y Caldern (2002), en Mxico L. graveolens crece en
Sinaloa, Chihuahua, Coahuila, Nuevo Len, Tamaulipas (lectotipo de L.
berlandieri), Durango, Zacatecas, Aguascalientes, San Luis Potos, Guanajuato,
Quertaro, Hidalgo, Nayarit, Jalisco, Michoacn, Mxico, Morelia, Puebla,
Veracruz, Guerrero, Oaxaca, Chiapas, Campeche, Yucatn, Quintana Roo.
Snchez et al.,( 2007) reportan que el intervalo altitudinal que ocupa esta especie
es desde el nivel del mar hasta 2300 metros. En el Desierto Chihuahuense se
desarrolla entre los 1200 y los 2300 m de altitud de zonas ridas y semiridas. En
Jalisco, Zacatecas, Durango, Coahuila y San Luis Potos, se encuentra en
pequeas serranas por arriba de los 1350 m de altitud. En el altiplano de San Luis
Potos, Lippia graveolens se desarrolla en sitios entre 1400 y 1600 m y en el valle
de Zapotitln de las Salinas, Puebla a altitudes de 1500 m.
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En un mapa sobre la distribucin de L. graveolens realizado por Snchez et al.,

(2007) seala la continuidad del hbitat dada la distribucin discontinua del taxn
en Mxico, en funcin de las coordenadas y localidades reportadas por la Unin
Internacional para la Conservacin de la Naturaleza (UICN) del 2001,. (Figura 2).
Snchez et al., 2007
Figura 2. Distribucin de Lippia graveolens H.B.K. en Mxico.
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1.4 Registros de especies del genero Lippia para Durango

En el listado florstico de Durango realizado por Gonzlez-Elizondo et al.,(1991),
se registraron siete especies nativas de Lippia, tres de ellas son sinnimos de los
cuales las ms importantes L. graveolens y L. berlandieri (Cuadro 1):
Cuadro 1. Especies de Lippia registradas en el Listado florstico de Durango.
Especie
Importancia
L. graveolens H.B.K.
Econmica, medicinal, condimento
L. appendiculata Robins & Greenm.
medicinal, condimento
L. berlandieri Schaver sinnimo de L. graveolens H.B.K.
L. duranguensis Mold Pennell
L. ligustrina (Lag.) Britt.
L. lycioides (Cham.) Steud sinnimo de Aloysia gratissima
(Gill. &Hook) Tronc.

L. umbellata Cav.
L. wrightii A. Gray sinnimo de Aloysia wrightii (A. Gray)
Heller.
De acuerdo con las coordenadas geogrficas de 70 colectas registradas en el

Herbario CIIDIR del Instituto Politcnico Nacional, en el Estado de Durango Lippia
graveolens se distribuye en la regin oriental (Figura 3).
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Figura 3. Distribucin de Lippia graveolens H.B.K. en Durango.
1.5 Sinonimia de Lippia graveolens

Existen especies de plantas las cuales presentan controversias en su sinonimia
para una sola planta tal es el caso de Lippia graveolens como se puede observar
a continuacin:
Lippia graveolens H.B.K. f. macrophylla Moldenke, Phytologia 49:431. 1981
Tipo: Mxico, Edo. de Mxico, Zitcuaro, Hinton s.n. NY.
Lippia graveolens H.B.K. f. loeseneriana Moldenke, Phytologia 52:130-131.

1982. Tipo: Mxico: Chiapas, Seler 3543 US
Lantana origanoides Martens & Galeotti, Bull. Acad. Roy. Sci. Bruxelles
11(2):327. 1844. Tipo: Mxico, Hidalgo, et dans champs de Mextitlan prs
Real del Monte, Galeotti 756 (BR).
8
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Lippia berlandieri Schauer, en DC., Prodr. 11:575. 1847. Sintipos: Mexico,

Tamaulipas, entre Santander y Victoria, Berlandier 2252 (G); Oaxaca,
Andrieux 166 (B); Hidalgo, San Bartolo, Ehrenberg 720 (B).
Goniostachyum graveolens (H. B. & K.) Small, Fl. Southeast. U.S.
1012.1903 (Snchez et al., 2007).
1.6 Importancia econmica del organo
La hoja de organo tiene dos usos principales: como condimento y como materia
prima para la produccin de aceites esenciales, utilizados como aditivos y
saborizantes en la industria alimenticia, por su contenido de timol y carvacrol
(CONAFOR, 2008). Recientemente se ha incrementado la bsqueda de
antioxidantes de origen natural para ser usados en alimentos y como base de
nuevos frmacos con la finalidad de reemplazar los antioxidantes sintticos,
debido a los problemas de carcinogenicidad que stos presentan (Arroyo-Maya y
Hernndez- Unzn., 2007; Muoz et al., 2007).
Turqua, Grecia y Mxico son los principales proveedores mundiales de organo
seco. Turqua y Mxico aportan el 65 y 31 % de la produccin respectivamente
(Villavicencio et al., 2007). En Mxico, la recoleccin de organo se ha
incrementado, de manera que en 2002 se colectaron 1 053 841 kilogramos de
especie, que generaron divisas de 1 783 000 dlares. Posteriormente para el 2003
se reportaron 617 466 kilogramos y se obtuvieron 994 000 dlares (CONAFOR,
2008).
El comercio del organo mexicano se realiza principalmente con Estados Unidos,
al que se exporta alrededor del 85% de la produccin nacional total; el 10% va al
mercado domstico nacional y el 5% a pases europeos y asiticos. La aceptacin
del organo mexicano se explica por su calidad, expresada en su gran poder
saborizante (Huerta, 1997).
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En Durango, durante el ao 2007, la produccin de organo (Lippia spp.) fue de

alrededor de 1628 toneladas, que representan $14 653 000 pesos, (Cuadro 2)
(INEGI, 2008) y se ha vendido en los ltimos aos a precios reportados por el
Sistema Nacional de Informacin e Integracin de Mercados de la SAGDR
(Cuadro 3).
Cuadro 2. Municipios con la mayor produccin de organo en Durango.
Municipio
Toneladas
Pesos
Cuencam
591
5316000
General Simn Bolivar
195
1759000
Lerdo
13
117000
Mapim
101
911000
Mezquital
244
2196000
Nazas
180
1620000
Nombre de Dios
111
999000
Pen Blanco
44
393000
Rodeo
108
972000
San Juan de Guadalupe
32
291000
San Luis del Cordero
79000
INEGI, 2008.
Cuadro 3. Costos del organo en grea y en hoja seleccionada (2006-2009).

Ao
Costo/Kg ($)
Forma fsica
2006
8.00
Grea
2007
9.00
Grea
2008
8.00 a 10-00
Grea
2009
12.00
Grea
2006
14.00
Cribado
2007
16.00
Cribado
2008
16.00
Cribado
2009
18.00
Cribado
Ramrez, 2009.
10
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1.7 Importancia social del organo

La recoleccin de organo se realiza en comunidades ms pobres de las zonas
ridas y semiridas en donde existen pocas fuentes de empleo las condiciones
climticas y edficas son poco benignas para la agricultura y la ganadera, por lo
que la recoleccin de organo es una actividad de importancia socioeconmica
(Martnez, 2008). En Jalisco un recolector recibe $ 300.00 por 4 5 costales de 9
kg cada uno. Con el fin de dar mayor valor agregado al producto, se sugiere que
los productores la empaquen y etiqueten directamente, ya que la mayor utilidad
(87%) es para el intermediario (Villavicencio et al., 2007).
La productividad del recurso vara en funcin de la zona ecolgica y del nmero
de plantas aprovechables por hectrea. En condiciones semiridas, se puede
obtener un rendimiento de 0.30 Ton/Ha de hoja seca. En la zona oreganera de
Jalisco, la produccin de hoja seca vara de 0.102 a 0.389 Ton/Ha. Mientras que
en sitios donde no se lleva la recoleccin como San Luis Potos, la produccin de
hojas secas es de 0.019 0.030 Ton/Ha (Hernndez, 1991), lo cual indica una
gran variacin en la productividad del arbusto a lo largo de su extensa rea de
distribucin (Villavicencio et al., 2005).
1.8 Composicin qumica del organo
La mayor parte de los estudios sobre la composicin qumica de L. graveolens, se
han enfocado principalmente a los compuestos terpnicos contenidos en el aceite
esencial (Arcila-Lozano et al., 2004; Pascual et al., 2001). As mismo, diversos
autores han reportado la presencia de flavonoides en el gnero Lippia con
distintas actividades biolgicas (Lin et al., 2007; Coll y Abdala, 2005; Huerta,
1997).
11
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
1.8.1 Flavonoides
Flavonoide palabra del latn flavus, amarillo. Son un tipo de compuestos fenlicos
de bajo peso molecular que comparten una estructura bsica de 15 tomos de
carbono (C6-C3-C6). Estn compuesto por dos anillos de fenilos (A y B) ligados a
travs de un anillo (C) de pirano (Martnez et al., 2002). Su estructura se deriva de
dos vas biosntticas, la va del cido shiqumico y la va del cido malnico (Taiz
y Zeiger, 2002). Los tomos de carbono en los flavonoides se numeran a partir de
los anillos C y A, y los del anillo B se enumeran con serie prima; la estructura
bsica de carbono de un flavonoide puede tener numerosos sustituyentes (Figura
4). Los grupos hidroxilos estn usualmente presentes en la posicin 4, 5, y 7, pero
tambin pueden ser encontrados en otras posiciones. Los que tienen un grupo
orto-dihidroxilo en el anillo B del esqueleto de flavonoides tienen una actividad
antioxidante potencialmente aumentada comparada con aquellos que no lo tienen
(Olsson et al., 1998).
Cuando X est en la posicin 3 del anillo C sustituido por un OH, se trata de un
esqueleto de flavonol como Quercetina (R1= OH, R2=H); Kamferol (R1= H, R2=
H); Miricetina (R1= OH, R2= OH). Cuando X esta en la posicin 3 del anillo C
sustituido por un H, se tiene un esqueleto de flavona: Apigenina (R1= H, R2= H);
Luteolina (R1= OH, R2= H), (Figura 4) (Hertog et al., 1992).
Figura 4. Esqueleto bsico de flavonoides.
12
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Con base en el grado de oxidacin del anillo C, los flavonoides se clasifican en

(Figuras 5):
Flavonoles, representados por la Quercitina que posee un grupo carbonilo
en C4 y un grupo OH en C3 del anillo C (Figura 5b y Figura 6b).
Flavonas, como la Diosmetina, cuyo grupo carbonilo se encuentra en C4 del
anillo C sin el grupo hidroxilo en C3 (Figura 5 y Figura 6c).
Antocianidinas, con un OH en posicin 3 y con un doble enlace entre los
carbonos 3 y 4 del anillo C (Figura 5d).
Flavanos, como la Catequina, con un grupo OH en C3 del anillo C, (Figura
5c y Figura 6a), (Keller, 2009; Varas, 2004; Martnez et al., 2002).
(a)
(c)
(b)
(d)
Figura 5. Estructura bsica de los principales grupos de flavonoides.
13
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
(a)
(b)
(c)
Figura 6. Estructuras qumicas de algunos flavonoides.
Los flavonoides se encuentran en las plantas en estado libre, pero ms

frecuentemente como glicsidos; estos ltimos son los que contribuyen a darle
color a las flores, frutos y hojas (Tereschuk et al., 2002; Velioglo et al., 1998). Son
abundantes en frutas, verduras, semillas y flores, as como en cerveza, vino, t
verde, t negro y soya (Prez-Trueba, 2003; Cadena, 1999).
1.8.2 Funcin de los flavonoides en las plantas
Algunas de las principales funciones de los flavonoides en las plantas son:
a) Proteccin contra la luz UV. Los flavonoides incoloros se acumulan en las
capas ms superficiales de las plantas y captan hasta el 90% de las radiaciones
UV, impidiendo los efectos nocivos de esas radiaciones en los tejidos internos un
ejemplo es el kaempferol que las protege de la luz ultravioleta. (Avalos-Garca y
Prez-Urra, 2009; Matias-Herrera, 2008; Pascual et al., 2001).
b) Regulacin del transporte de la hormona auxina. Las plantas mutantes que
no poseen la enzima chalcona sintasa, que forma parte de la va biosinttica de
los flavonoides, muestran un crecimiento irregular debido a una deficiencia en el
transporte de auxina a travs de la planta, probablemente por la ausencia de ese
flavonoide en la planta mutante (Avalos-Garca y Prez-Urra, 2009; MatiasHerrera, 2008;Taiz y Zeiger, 2002).
14
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
c) Atraccin de animales polinizadores. Muchos flavonoides como las

chalconas son componentes de pigmentos de las flores y hojas que confieren
coloraciones atrayentes de insectos polinizadores hacia las flores (Avalos-Garca y
Prez-Urra, 2009; Matias-Herrera, 2008; Taiz y Zeiger, 2002; Montiel, 2000).
d) Atraccin de presas. Las plantas carnvoras, como la Drosera y la Dionaea,
poseen antocianinas en sus flores y hojas, que cumplen una funcin de atraccin
de los insectos que les sirven de alimento (Avalos-Garca y Prez-Urra, 2009;
Matias-Herrera, 2008; Taiz y Zeiger, 2002).
e) Atraccin de animales dispersores de semillas y frutos. Algunos
flavonoides como las antociaininas confieren aromas y colores a los frutos que los
hacen ms apetecibles para los herbvoros que se alimentan de ellos, cumpliendo
as una funcin de dispersin de las semillas (Avalos-Garca y Prez-Urra, 2009;
Matias-Herrera, 2008; Taiz y Zeiger, 2002; Montiel, 2000).
1.8.3 Propiedades antioxidantes de los flavonoides
Los radicales libres son molculas o tomos que posen uno o ms electrones
desapareados en orbitales atmicos o moleculares, que le confieren un grado de
reactividad (Lpez y Echeverii, 2007). Entre estas molculas reactivas se
encuentran los hidrxidos (OH-), superxidos (O2 -) y otras especies oxigenadas
como los perxidos (H2O2) que actan retirando oxgeno reactivo especialmente
en forma de aniones superxidos, radicales hidroxilos, perxidos lipdicos o
hidroperxidos (Olsson, 1998; Bornman, 1999; Martnez et al. 2002).
Estos radicales pueden ser endgenos que se originan como parte del
metabolismo celular en el interior de la clula y son txicos para ellas. Y los del
tipo exgeno son originados dentro de la clula por fuentes externas tales como
humo
del
tabaco,
pesticidas,
solventes,
drogas,
bebidas
alcohlicas,
contaminacin ambiental y radiacin ionizante ultravioleta (Bornman, 1999).
15
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Independiente de su origen, los radicales libres afectan a compuestos celulares

como protenas, lpidos y cidos nuclicos, produciendo dao y/o muerte celular.
Cuando existe un desequilibrio entre antioxidantes y oxidantes se produce estrs
oxidativo y da origen a una enfermedad (Cadena, 1999).
Los antioxidantes son un grupo de molculas reconocidas por su capacidad para
neutralizar los radicales libres. (Lpez y Echeverii, 2007).
Entre los antioxidantes naturales encontrados en el reino vegetal, existen dos
grandes familias de inters farmacolgico que los contienen: carotenos y
flavonoides. Estos compuestos presentes en gran variedad de plantas neutralizan
los radicales libres. La actividad antioxidante de los flavonoides depende de las
propiedades redox de sus grupos hidroxifenlicos y de la relacin entre las
diferentes partes de la estructura qumica (Martnez et al. 2002).
1.8.4 Uso e importancia de los flavonoides
El creciente inters de los flavonoides se debe a la presencia de su amplia
actividad farmacolgica (Prez-Trueba, 2003; Martnez et al., 2002; Velioglo et al.,
1998). Poseen efectos antimutagnicos y anticarcinognicos, adems, tienen un
papel importante como agentes quimiopreventivos (Prez-Trueba, 2003 Hertog et
al., 1993; Hertog et al., 1992).
Pueden unirse a polmeros biolgicos como enzimas, transporte de hormonas y
ADN; pues poseen propiedades biolgicas y qumicas como su actividad
antioxidante, importante en la captacin de especies oxigenadas activas,
capacidad para modular ciertas actividades enzimticas; formacin de quelatos
con iones metlicos transitorios, como Fe 2+, Cu2+, Zn2+, catalizan el transporte de
electrones e intervienen en la depuracin de radicales libres (Martnez et al.,
2002).
16
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Otras actividades destacadas de los flavonoides son sus propiedades antivirales,

antialrgicas, antitrombticas, antiinflamatorias, as como efectos protectores en
patologas como la Diabetes mellitus, cncer, cardiopatas, lceras estomacal y
duodenal. Su efecto bactericida y antifngico es relevante (Martnez et al., 2002;
Velioglo et al. 1998).
Recientemente se ha comprobado que la quercetina y rutina son antioxidantes por
lo que podran tener un papel importante para prevenir la arterioesclerosis por
supresin de la oxidacin de la lipoprotena de baja densidad o colesterol "malo"
(LDL),
por
lo
que
su
consumo
disminuye
los
riesgos
de
afecciones
cardiovasculares (Martnez et al., 2002; Tereschuk et al., 2002; Hertog et al.,

1993).
As mismo, los flavonoides son de particular inters para correlacionar diferencias
morfolgicas entre especies muy relacionadas en un gnero en particular (Keller,
2009; Ruiz-Maqueda et al., 2005); por lo que los perfiles de flavonoides se utilizan
como una herramienta en la delimitacin de especies y en la ubicacin de diversos
taxa vegetales en un sistema de clasificacin (Almaraz-Abarca y et al., 2006;
Almaraz-Abarca, 2000; Del Pero y et al., 1997; Fiasson y et al., 1997; Abdala y
Seeligmann, 1995)
Existen algunas investigaciones en las que se utilizan a los flavonoides como
marcadores quimiotaxonmicos. Por ejemplo Almaraz-Abarca et al., (2008) y
en Almaraz-Abarca et al., (2007) encontraron en Cactaceae quimiotipos y
variabilidad intrapoblacional e
identificaron 13 glicosidos derivados de
Canferol. En otra investigacin Herrera-Arrieta y Chirez-Hernndez (2005)

reconocieron a Bouteloua a nivel genrico, dos subgneros y los flavonoles
Quercetina 3O rutinosida y Quercetina3-O glucosida.
En Hebe parviflora
Mitchell et al., (2001) obtuvieron seis nuevos componentes y variabilidad

intrapoblacional. De Enrech et al., (1996) presentaron los perfiles de
flavonoides de todas las especies y subespecies reconocidas en el gnero
17
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Fedia Gaertn y confirman la presencia de las flavonas Luteolina y Diosmetina,

como constituyentes mayoritarios en gran parte de las poblaciones analizadas.
1.8.5 Investigaciones realizadas sobre Lippia
Algunos estudios in vitro han demostrado que el aceite esencial y compuestos
obtenidos de extractos metanlicos del organo (Origanum spp. y Lippia spp.) son
inhibidores de la mutagenicidad, de la carcinognesis y presentan actividad
citotxica, antiproliferativa y/o apopttica en clulas transformadas, propiedades
que han despertado el inters por esta planta como posible tratamiento contra el
cncer (Zavala-Nigoa et al. 2006). Para el organo mexicano (L. graveolens
H.B.K.) se ha determinado su contenido fenlico, su capacidad antioxidante y su
efecto antiproliferativo en clulas de colon (CaCo-2), actividad antimutagnica en
composicin y otras actividades biolgicas (Coll y Abdala, 2005).
La tintura de hojas de L. graveolens demuestran que es activa contra Escherichia
coli, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, Shigella flexneri, Staphylococcus
aureus, Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes, pero inactiva
contra Haemophilus influenzae; la infusin de hojas demostr actividad contra los
mismos microorganismo. En estudios antifngicos, los extractos de diclorometano
y etanol son activos contra Candida albicans, Aspergillus flavus, Epidermophyton
floccosum, Microsporum gypseum y Trichophyton rubrum, pero inactivos contra C.
neoformans. La concentracin mnima ingerida (CMI) del extracto diclorometnico
contra bacterias es 10 mg/mL y del etanol es 1.75 mg/mL; la CMI contra
Microsporum gypseum
es 2.5 mg/mL (Morataya, 2006). Extractos totales de
flavonoides de partes areas de L. turbinata mostraron actividad antimicrobiana

frente a cepas Gram positivas y a bacilos entricos gram negativos (Morataya,
2006; Coll y Abdala, 2005).
18
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
En extractos metanlicos de hojas de L. graveolens se encontraron siete iridoides

minoritarios como loganina, secologanina, secoxiloganina, dimetilsecologanosido,
cido lognico, cido 8-epi-lognico y carioptosido y tres iridoides mayoritarios
como el cido carioptosdico y sus derivados 6-O-p-coumaroil y 6-O- cafeoil,
tambin fueron detectadas naringenina y pinocembrina, lapachenol e icterogenina
( Arcila-Lozano et al., 2004)
En extractos metanlicos del organo Mexicano, Lin et al., (2007) reportaron 23
flavonoides (Cuadro 4). En investigaciones realizadas en la Universidad Autnoma
de Quertaro, Mxico, se determinaron concentraciones fenoles y flavonoides
totales de distintas poblaciones encontrando 0.0074 a 0.0068 g de fenoles/g de
muestra y de 0.0889 a .01070 g de flavonoides/ g de muestra (Ruiz- Maqueda et
al., 2005).
19
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CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 4. Algunos flavonoides identificados en el gnero Lippia spp y Origanum.

Compuesto identificado
Especie
Autor
L. graveolens H.B.K., L. dulcis

Trev.M.
L. citridora
(Waisel y Waisel, 2009)
Origanum vulgare L.
(Kruma et al., 2008)

(Lin et al., 2007)
Cirsiliol
Cirsimaritina
L. citridora
L. graveolens H.B.K..
L. citridora
(Skaltsa y Shammas, 1988)

(Gonzlez, 2005)
Crisoeriol
Derivado de catequina
L. citridora

(Gonzlez, 2007)
6,7- Dimetilescutelarcina (I-5)
(Lin et al., 2007)
Diosmetina
Eriodictyol (II-4)
L. citridora
Origanum vulgare L..

(Lin et al., 2007)
Eupafolina
Galangina (I-1)
L. citridora

(Lin et al., 2007)
3-Hydroxyphloretina 6-O-hexoside (III-2-A)
(Lin et al., 2007)
6-Hydroxiluteolina 7-O-hexoside
(Lin et al., 2007)
6-Hydroxyluteolina (I-8)
(Lin et al., 2007)
6-hydroxyluteolina
6-Hydroxyluteolina 7-O-rhamnoside(I-8-B)
L. citridora

(Lin et al., 2007)
Hispidulina
Hexxido de quercetina
L. citridora
L. nodiflora

(Tomas-Berbern et al., 1987)
(Gonzlez, 2007)
Isokaemferido
L. dulcis Trev
(Waisel y Waisel, 2009),

(Arcila-Lozano et al., 2004)
(Gonzlez, 2007)
Jaceosidina
Kaempferol
L. nodiflora

(Gonzlez, 2007)
Luteolina (I-6)
Luteolina 7-O-glucosido
L. citridora;
L. dulcis Trev
Origanum vulgare L..
(Waisel y Waisel, 2009), (Lin et

al., 2007); (Skaltsa y Shammas,
1988)
(Lin et al., 2007)
6- Metilescutelarcina (I-4)
(Lin et al., 2007)
Metilgalangina (I-9)
(Lin et al., 2007)
Naringenina (II-2)
(Waisel y Waisel, 2009);

(Martnez-Rocha et al., 2008);
(Lin et al., 2007), (Gonzlez,
2007), (Arcila-Lozano et al.,
2004), Domnguez et al., 1989).
(Coll y Abdala, 2005)
Apigenina
Apigenina 7-O-glucoside (I-2-A)
Icterogenina
L. turbinata
L. dulcis Trev
Origanum vulgare L.
20
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Nepetina
L. nodiflora
Pectolinaringenina
Pentaflavanona-B hexoside-2(II-7-B)
L. citridora

(Lin et al., 2007)
Pentaflavanona-B hexoside-1(II-7-A)
(Lin et al., 2007)
Pentahidroxiflavanona- A hexoside (II-6-A)
(Lin et al., 2007)
Pilosina
(Gonzlez, 2007)
Pinocembrina (II-1)
Pinocembrina
L. dulcis Trev
(Waisel y Waisel, 2009),(Lin et

al., 2007)
(Arcila-Lozano et al., 2004),
Domnguez et al., 1989)
Pinocembrina
Phloridzina (III-1-A)
L. turbinata
(Coll y Abdala, 2005)

(Lin et al., 2007)
Quercetina (I-7)
(Lin et al., 2007)
Salvigenina
Sakuranetina(II-3)
L. citridora

(Lin et al., 2007)
Scutallarcin 7-O-hexosido(I.3-A)
(Lin et al., 2007)
Scutellarcin (I-3)
(Lin et al., 2007)
Taxifolin(II-5)
(Lin et al., 2007)
1.8.6 Mtodos de extraccin de flavonoides

La polaridad alta y baja de los flavonoides permite su extraccin con disolventes
polares, solos o en mezclas (agua, etanol y metanol generalmente). Algunos
mtodos utilizados implican la extraccin primaria con disolventes no polares para
eliminar grasas y ceras principalmente, y en seguida se utilizan mezclas acuosas
con etanol, que se fraccionan con disolventes orgnicos de diferente polaridad
(Lock et al., 2006).
Las principales tcnicas utilizadas para la separacin de compuestos qumicos
provenientes de extractos son: la cromatografa en capa fina y la cromatografa de
lquidos de alta resolucin con detector de arreglo de diodos (DAD) o de masas
(MS) (Feria et al., 2007). Para la separacin y aislamiento de flavonoides se
pueden utilizar los siguientes tipos de cromatografa:
21
Romana Ros Reyes
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a) Cromatografa en papel. Es una tcnica que fue muy utilizada en los

laboratorios para realizar anlisis cualitativos. La fase estacionaria est constituida
por una tira de papel grado cromatogrfico de poro homogneo. Muestras de
extractos se aplican y se deja evaporar el disolvente. Como fase mvil se utilizan
disolventes orgnicos de distintas polaridades los cuales dependiendo del tipo de
cromatografa ascendente o descendente actan sobre la fase estacionaria y
separan los compuestos de distinta polaridad. Cuando los componentes de los
extractos son incoloros, el cromatograma se observa bajo la luz UV o con un
qumico especfico para visualizarlos (Martnez, 2005; Harborne, 1984).
b) Cromatografa en capa fina o pelcula fina: o ms comnmente TLC (Thin
Layer Cromatography, en ingls). Es una tcnica cromatogrfica utilizada para
separar y purificar una fraccin. Los extractos adsorbentes ms comunes para
cromatografa en capa fina son: Silica gel, xido de aluminio almina (cida,
neutra bsica), celulosa (nativa o micro-cristalina) y poliamidas. La eleccin del
eluyente depender del tipo de flavonoides a separar y del soporte utilizado
(Martnez, 2005; Harborne, 1984; Marham, 1982).
c) Cromatografa en columna de fraccionamiento. Cuando se requiere aislar
los componentes de los extractos en cantidades de miligramos a gramos, la fase
estacionaria se sita dentro de una columna que puede ser silica gel, xido de
aluminio almina o poliamidas. Como fase mvil se utilizan mezclas de
disolventes de polaridad creciente en distintas proporciones (Martnez, 2005;
Harborne, 1984; Marham, 1982).
d) Cromatografa lquida de alta resolucin (CLAR). A este tipo de
cromatografa lquida, tambin se le llama HPLC (del ingls High Performance
Liquid Chromatography), Actualmente es una tcnica de las ms empleadas
normalmente en su modalidad de fase reversa, en la cual, la fase estacionaria
tiene carcter no polar y la fase mvil, carcter polar (generalmente agua o
mezclas con elevada proporcin de la misma, o de otros disolventes polares como
22
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
el metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la fase

estacionaria estaba compuesta de slica o almina, de carcter polar y por tanto la
fase mvil eran disolventes orgnicos poco polares (Martnez, 2005; Varas, 2004;
Marham, 1982).
23
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
II. JUSTIFICACIN
El organo (Lippia graveolens) es un recurso importante en el mercado
internacional ya que es ampliamente usado como condimento y materia prima
para la produccin de aceites esenciales utilizados como aditivos en la industria
alimenticia, qumico-farmacutica y de perfumera. En Latinoamrica el gnero
Lippia se utiliza en la medicina tradicional generalmente para tratar trastornos
gastrointestinales y respiratorios, debido a su contenido de metabolitos
secundarios con actividad biolgica. Entre stos, los flavonoides son de particular
importancia para la salud humana por su actividad antioxidante, antiinflamatoria,
antiviral, antialrgenica y por su papel protector frente a enfermedades
cardiovasculares, cncer, Alzheimer, diabetes y otras enfermedades crnicodegenerativas.
Los perfiles de flavonoides sirven tambin como marcadores quimiotaxnomicos,
por su estabilidad qumica, por lo cual son muy utilizados en la clasificacin
taxonmica de especies de plantas en las que existen controversias, como es el
caso de Lippia graveolens y Lippia berlandieri, nombres actualmente considerados
como sinnimos.
Aunque se han realizado varios trabajos enfocados al anlisis qumico de los
aceites esenciales del organo, todava es poco conocida la variacin en los
perfiles de flavonoides entre poblaciones de esta especie. Se ha demostrado que
puede existir polimorfismo qumico en plantas de la misma especie, dando lugar a
variacin en la composicin qumica, ya sea debida a las distintas condiciones
ambientales en donde se desarrollan las plantas o debida a la variacin gentica
natural en la especie.
El presente trabajo pretende generar informacin sobre la variacin de la
composicin de flavonoides de diferentes poblaciones de L. graveolens
del
Estado de Durango, que sea de utilidad en investigaciones futuras sobre el

organo mexicano en el mbito mdico, taxonmico y biolgico.
24
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
III. OBJETIVOS
3.1 Objetivo General
Comparar los perfiles de flavonoides
foliares de organo (Lippia
graveolens
H.B.K. s.l.) de 25 poblaciones del Estado de Durango.
3.2 Objetivos Especficos
Caracterizar qumicamente los flavonoides foliares de 25 poblaciones de

organo silvestre por cromatografa de lquidos de alta resolucin con
detector de arreglo de diodos (HPLC/DAD).
Comparar las caractersticas fitoqumicas de L. graveolens con las

caractersticas ambientales de su hbitat.
25
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
IV. MATERIALES Y MTODOS

4. 1 Descripcin del rea de Estudio
La caracterizacin de los elementos fsicos-naturales de un rea especfica facilita
el anlisis de sus interacciones, condiciones e informacin que permite luego de
diversos anlisis, plantear propuestas para lograr un aprovechamiento, manejo,
conservacin sustentable de esa rea. La importancia de conocer las
caracterstica geogrficas del rea de estudio, ayuda a conocer los elementos
principales que la definen y proporciona informacin que puede ayudar a
comparar las caractersticas qumicas del organo (Lippia graveolens H.B.K) entre
los sitios de estudio.
Para caracterizar los elementos fsicos-naturales del rea de estudio se
emplearon los datos geogrficos digitales escala 1:1000,000 elaborados y
distribuidos por el INEGI, en su pgina de Internet (www.inegi.org.mx, INEGI,
2010), se us el paquete ArcView 3.2 (ESRI) para el anlisis espacial y
elaboracin de los mapas.
El rea de estudio se seleccion dentro de la regin Oriental (de Norte a Sur) del
Estado de Durango en una franja que comprende 12 de los principales municipios
en donde crece de manera natural el organo y es extrado para su
comercializacin (Figura 7); con una extensin de 38,838.65 Km2, la cual
representa el 31.52 % de la superficie total del Estado. Colinda al Norte con el
Estado de Chihuahua, al Oriente con Coahuila y Zacatecas, al Poniente con los
municipios de Hidalgo, San Pedro del Gallo, Rodeo, Pen Blanco, San Juan del
Ro, Guadalupe Victoria, Victoria de Durango y Pueblo Nuevo, al Sur con los
Estados de Nayarit y Zacatecas (Cuadro 5).
26
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Figura 7. Mapa del rea de estudio.
Cuadro 5. Coordenadas extremas del rea de estudio.

Proyeccin Cartogrfica
Datum Colindancia
Geogrfica
NAD 27
Longitud O
Latitud N
Norte
10416'22.152"W
2650'31.271"N
Sur
10228'20.495"W
2426'42.936"N
Este
10430'19.116"W
2220'42"N
Oeste
10505'09.348"W
2239'45.072"N
NAD 27: Datum de Norteamrica de 1927.
27
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
4.1.1 Clima
En el rea de estudio prevalece un clima seco semiclido, seguido por el semiseco
templado y seco semiclido (Figura 8 y Cuadro 6). La temperatura media anual de
10 a 24 C (Figura 9) y la precipitacin total anual, de 300 a 800 mm (Figura 10).
Figura 8. Tipo de clima del rea de estudio.
28
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 6. Tipos de clima representado como unidad de superficie.

Tipo de Clima
Superficie (Ha)
Muy seco semiclido
1,617,800
Semiseco templado
652,578
Seco semiclido
641,667
Templado subhmedo
599,149
Seco templado
200,887
Semiseco semiclido
63,118
Clido subhmedo
50,814
Semifro subhmedo
32,068
Semiseco muy clido
18,149
Muy seco clido
7,633
Figura 9. Temperatura media anual del rea de estudio.
29
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Figura 10. Precipitacin media anual del rea de estudio.
4.1.2 Suelo
Los tipos de suelo que predominan en el rea de estudio son litosol y xerosol. El
primero se encuentra en todos los climas y con muy diversos tipos de vegetacin,
en todas las Sierras de Mxico, barrancas, lomeros y en algunos terrenos planos.
Se caracterizan por su profundidad menor de 10 centmetros, limitada por la
presencia de roca, tepetate o caliche endurecido, con 31.46 % del rea, que
representa 1,221,171 ha de la superficie total del rea de estudio. El suelo del
xerosol, es seco y se localizan en las zonas ridas y semiridas. Su vegetacin
natural es de matorral y pastizal. Tiene por lo general una capa superficial de color
claro por el bajo contenido de materia orgnica y ocupa 26.62 % del rea de
estudio con una superficie de 1,033,437 ha (Figuras 11 y 12) (Cuadro 7) (INEGI,
2004).
30
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CIIDIR-IPN-DURANGO
Figura 11. Tipo de suelo del rea de estudio.
Cuadro 7. Tipo de suelo expresado como unidad de superficie.

Unidad de suelo
rea (Ha)
Cambisol
108,806
Castaozem
133,571
Chernozem
22,160
Feozem
155,802
Litosol
1,221,171
Luvisol
31,204
Planosol
1,155
Regosol
699,265
Rendzina
154,564
Solonchak
44,385
Solonetz
26,144
Vertisol
23,193
Xerosol
1,033,437
Yermosol
226,878
31
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CIIDIR-IPN-DURANGO
Figura 12. Porciento (%) de superficie de la unidad de suelo.
4.1.3 Vegetacin
En el rea de estudio lo que ms predomina en cuanto a los tipos de cobertura
del suelo predominantes son el matorral desrtico rosetfilo, el matorral desrtico
micrfilo, bosque de pino-encino y el pastizal natural segn su superficie en
hectreas (Ha) (Figuras 13 y 14).
32
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CIIDIR-IPN-DURANGO
Figura 13. Uso del suelo y vegetacin del rea de estudio.
Figura 14. Superficie del uso del suelo y vegetacin del rea de estudio.
33
Romana Ros Reyes
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El matorral desrtico rosetfilo se caracterizan por la abundancia de especies con

hojas alargadas y puntiagudas, agrupadas en forma de roseta, sin tallo evidente o
ste bien desarrollado. Las especies que predominan en Durango son Agave
lechugilla y/o Hechtia spp entre 1200 y 2000. Agave striada y maguey (Agave
asperrima) a 1300 y 1500 m, sotol (Dasylirion), palma (Yucca rigida), lechuguilla
(Agave lechuguilla) (Gonzlez-Elizondo et al., 2007).
El matorral desrtico micrfilo de mayor distribucin en zonas ridas y semiridas

formado por arbustos de hoja o foliolo pequeo. Se desarrolla principalmente
sobre terrenos aluviales ms o menos bien drenados y puede estar formado por
asociaciones de especies sin espinas, con espinas o mezclados; as mismo
pueden estar en su composicin otras formas de vida, como cactceas, Izotes
(palmas) o gramneas (CONAFOR, 2010). Entre los gneros caractersticos en
Durango son Larrea, Flourensia y Koeberlinia (Gonzlez et al., 2007).
El bosque de pino-encino son bosques mixtos de pinos (Pinus spp.) y encinos

(Quercus spp.) (CONAFOR, 2010).
El pastizal natural se desarrolla de preferencia en suelos medianamente profundos

de mesetas, fondos de valles y laderas poco inclinadas, casi siempre de
naturaleza gnea. Son frecuentemente dominantes o codominantes en las
asociaciones las especies del gnero Bouteloua y la ms comn de todas es
Bouteloua gracilis, que prevalece en amplias extensiones del pastizal, sobre todo
en sitios en que el sobrepastoreo no ha perturbado demasiado las condiciones
originales y preferentemente en suelos algo profundos (CONAFOR, 2010).
34
Romana Ros Reyes
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4.2 Sitios de colecta

Se seleccionaron 25 sitios de colecta del rea de estudio comprendidas dentro de
12 municipios del Estado de Durango, en los cuales se recolect el material
botnico en distintos aos. Las coordenadas
geogrficas
de los sitios se
muestran en el Cuadro 8 y su distribucin geogrfica en la Figura 15.

Cuadro 8. Coordenadas geogrficas de los sitios de muestreo.
Fecha de colecta
Sitio
9-Octubre-1998
3-Octubre-2007
3-Octubre-2007
6-Octubre-1998
6-Octubre-1998
6-Octubre-1998
6-Octubre-1998
9-Octubre-1998
9-Octubre-1998
3-Octubre-2007
3-Octubre-2007
10-Octubre-1998
29-Septiembre-2008
29-Septiembre-1998
2-Octubre-2007
2-Octubre-2007
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
3-Octubre-2008
29-Septiembre-1998
30-Septiembre-2008
9-Octubre-1998
3-Octubre-2007
29-Septiembre-2008
30-Septiembre-2008
30-Septiembre-2008
29-Septiembre-2008
18
19
20
21
22
23
24
25
Municipio
Coordenadas Geogrficas
Latitud N
Longitud O
Cuencam
Cuencam
Cuencam
El Mezquital
El Mezquital
El Mezquital
El Mezquital
Lerdo
Lerdo
Lerdo
Lerdo
Mapim
Nazas
Nombre de Dios
Nombre de Dios
Nombre de Dios
2511''48'
258''43'
258''43'
2339''48'
2337''32'
2330''
2329''
2540''30'
2540''27'
2542''55'
2535''37'
2551''
2514''31'
2356''
2348''37'
2356''44'
10352''26'
10350''6'
10350''6'
10422''27'
10422''12'
10424''
10426''
10349''40
10349''36'
10353''17'
10344''48'
10347''
1045''20'
10416''
10417''7'
10416''42'
Nombre de Dios
Poanas
San Juan de Guadalupe
Santa Clara
Simn Bolivar
Tlahualilo
2351''36'
2359''
2442''44'
252425'
2524''36'
2526''7'
2427''4'
2440''28'
2610''11'
10419''36'
1041''
10249''34'
10416''
10416''13'
10416''18'
10318''14'
10315''4'
10332''7'
35
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Figura 15. Sitios de colecta en el rea de estudio.
4.3 Recopilacin de los datos de las condiciones ambientales de los sitios

Las caractersticas ambientales de cada uno de los sitios analizados se obtuvieron
sobreponiendo los puntos de las coordenadas de las colectas en cada mapa
temtico elaborado en la caracterizacin
del rea de estudio utilizando el
algoritmo de Geoprocesamiento con la funcin de asignacin del paquete ArcView

3.2.
36
Romana Ros Reyes
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4.4 Colectas del material vegetal

Se trabaj con material botnico que fue recolectado en 25 localidades
procedentes de 12 municipios del Estado de Durango, los cuales fueron
colectadas en los aos 1998, 2007 y 2008 (Cuadro 8, Figura 7). El material vegetal
que fue proporcionado por la M.C. Martha Celina Gonzlez, est respaldado por
los ejemplares de herbario correspondientes, los cuales fueron preparados para su
identificacin botnica por especialistas del Herbario CIIDIR del Instituto
Politcnico Nacional (Durango, Mxico), (Figura 16).
Figura 16. Herborizacin y recoleccin del material vegetal.
4.5 Preparacin de las muestras para su anlisis qumico

En cada colecta el material vegetal se sec bajo la sombra y se separo la hoja del
tallo de cada individuo. Se eliminaron las hojas daadas (por plagas, hongos o por
la presencia de restos de insectos). Se molieron en un mortero y se tamizaron con
malla # 10 se procedi de la misma manera con el materia seco colectado en los
aos 1998 y 2007. Las muestras se etiquetaron y se depositaron en bolsas de
plstico de color negro y se almacenaron en un lugar oscuro y seco para su
anlisis qumico posterior (Figuras 17 y 18).
37
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Figura 17. Procesamiento del material vegetal.
Figura 18. Preparacin de las muestras previo al anlisis qumico.
38
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4.6 Obtencin de extractos

4.6.1 Extractos para el anlisis cromatogrfico preliminar
Se pesaron 50 mg del material procesado de cada poblacin y se macer en 5
mL de metanol absoluto durante 24 h en agitacin constante a 1000 rpm a
temperatura ambiente y en obscuridad. Posteriormente las muestras se filtraron
para su anlisis cromatogrfico por capa fina (Lock et al., 2006; Harborne, 1984).
4.6.2 Extractos para el anlisis de HPLC/DAD
Se pesaron 50 mg de muestra de organo de cada poblacin, se pusieron en
agitacin en 5 mL metanol al 70%, durante 60 minutos, a 1000 rpm a temperatura
ambiente y obscuridad. Los extractos resultantes se centrifugaron a 2500 rpm,
durante 15 minutos y se filtraron a travs de membranas de polivinilidenofluoruro
(PVDF). Se analizaron en un periodo menor a 24 horas.
4.7 Anlisis cromatogrfico
4.7.1 Cromatografa de capa fina
Los extractos se aplicaron en forma de banda de un cm con un capilar, sobre
placas de capa fina (20 x 20 cm) con soporte de silica gel (Figura 19a). Se
emplearon como eluyentes acetato de etilo: cido frmico: cido actico: agua
(AE-AF-AA-A) en la proporcin (100:11:11:26)(Figura 19b). La visualizacin de los
compuestos se realiz con luz ultravioleta antes y despus de la exposicin a
vapores de amonio. Para cada compuesto se calcul el valor de Rf (Gonzlez,
2005; Harborne, 1984).
39
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a)
b)
Figura 59. a) Aplicacin de extractos en placas de silica gel y b) Elucin del cromatograma.
4.7.2 Cromatografa de lquidos (HPLC/DAD)

Se inyectaron alcuotas de 25 L de cada extracto en un cromatografo de lquidos
con detector de arreglo de diodos marca Perkin Elmer. Se utiliz una columna
Perkin Elmer Brownlee Analytical C18 (4.6 x 250 mm, 5), de fase inversa.
Como fase mvil se us agua acidificada con cido frmico al 0.1% (solvente A) y
acetonitrilo (solvente B), de acuerdo al mtodo propuesto por Lin et al., 2007 con
algunas modificaciones. Los cromatogramas se registraron a 270 nm. Los
espectros obtenidos se registraron en el intervalo de 220-400 nm, usando un
detector de arreglo de diodos (Perkin Elmer Series 200).
40
Romana Ros Reyes
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4.8 Caracterizacin estructural de flavonoides

La caracterizacin estructural de los compuestos se realiz por comparacin
directa de los tiempos de retencin obtenidos en el anlisis cromatogrfico
correspondiente, de sus espectros de absorcin y forma de los mismos (Cuadro 9,
Figura 20), as como por comparacin con
cuatro estndares (catequina
hidratada, quercetina, naringenina y rutina). Posteriormente se compararon con

investigaciones realizadas por distintos autores como Waisel y Waisel, (2009),
Campos y Markham, (2007), Gonzlez, (2007), Lin et al., (2007), Arcila-Lozano et
al., (2004), Markham, (1982), Mabry et al., (1970).
Cuadro 9. Rangos de absorcin de UV de flavonoides.
Banda II (nm)
Banda I (nm)
250-280
250-280
250-280
245-275
245-275
310-350
330-360
350-385
310- 330sh
pico en 320
275-295
230-270
Baja intensidad 230-270
Baja intensidad 270-280
300-330sh
340-390
380-430
465-560
Tipo de Flavonoide
Flavona
Flavonoles (3-OH sustituidos)
Flavonoles (3-OH libre)
Isoflavonas
Isoflavonas (5-deoxi-6,7dioxigenado)
Flavanonas y dihidroflavonoles
Chalconas
Auronas
Antocianidinas y antocianinas
(Markham, 1982)
41
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Isoflavona (geniteina)
Flavanona (naringenina) o
dihidroflavonol
Flavona (apigenina)
Flavonol (kaempferol)
Chalcona (4,2,4-trihidroxi)
Aurona (4,6,4-trihidroxi)
Antocianina (pelargonidina 3-0rhamnosia)
(Markham, 1982)
Figura 20. Formas tpicas de los espectros de absorcin en el UV de flavonoides.
4.9 Anlisis estadstico

Con los datos obtenidos se determin el anlisis estadstico utilizando el paquete
estadstico PAST O.45 para ver la similitud o diferencia entre las poblaciones.
Con los picos mayoritarios de los cromatogramas se elabor una matriz binaria de
presencia/ausencia formada por las 25 muestras. Se tomaron en cuenta solo los
compuestos mayoritarios. Cada compuesto se trat como un carcter qumico
individual. La matriz
se someti a un anlisis de agrupamiento (CLUSTER)

42
Romana Ros Reyes
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empleando el algoritmo mtodo del grupo del par no ponderado con media
aritmtica
o del ingls Unweighted Pair Group Method with Arithmetic mean
(UPGMA) y el ndice de Jaccard, obtenindose un dendrogra:ma de distancias de

similitud. Se realiz tambin un anlisis de Componentes Principales (CP), (Rohlf,
1988; Hugh and Gauch, 1982).
Para la cuantificacin aproximada de dichos sustancias, se tomaron en cuenta los
porcentajes de rea de cada compuesto en los cromatogramas. Esos porcentajes
se expresaron como unidades arbitrarias de concentracin (UAC)
la matriz
formada por los compuestos de cada una de las muestras, se someti a un

anlisis de agrupamiento (CLUSTER) empleando el algoritmo Wards con
distancias Euclidianas y a un anlisis de Componentes Principales (CP) en el
paquete estadstico Statistica versin 7 y PAST 0.45 (Rohlf, 1988; Hugh, G. and
Jr. Gauch, 1982).
43
Romana Ros Reyes
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V. RESULTADOS Y DISCUSIN
5.1 Caractersticas ambientales de los sitios de muestreo
Las caractersticas geogrficas y ambientales de los 25 sitios de colecta son:
(Cuadro 10 y 11).
Cuadro 10. Caractersticas ambientales de los sitios de colecta.
Sitio
Municipio
Vegetacin
Tipode
Topoforma
Altitud
(msm)
Temperatura
(C)
Tipode
PTA(mm) MuyC
lima
seco
1 Cuencam
Matorral Desrtico Rosetfilo Bajada
1400
22
300
2 Cuencam
Matorral Desrtico Rosetfilo Llanura
1400
20
300
3 Cuencam
1400
20
300
4 El Mezquital
Matorral Subtropical
Lomero
1600-1800
28
500
5 El Mezquital
Bajada
1600-1800
28
500
6 El Mezquital
Bajada
1400-1600
20
500
7 El Mezquital
Lomero
1600-1800
18-20
500
8 Lerdo
Matorral Desrtico Micrfilo
Llanura
1400-1600
18
300-400
9 Lerdo
Llanura
1400-1600
18
300-400
10 Lerdo
Llanura
1400-1800
18
300-400
11 Lerdo
Llanura
1400
18
300
12 Mapim
Sierra
1200-1400
18-20
300
13 Nazas
1400
20
300
14 Nombre de Dios
Pastizal Natural
Meseta
1800
18
500
15 Nombre de Dios
Pastizal Natural
Sierra
1800
18
500
16 Nombre de Dios
Pastizal Natural
Meseta
1800
18
500
17 Nombre de Dios
Pastizal Natural
Sierra
1800-2000
16-18
500
18 Poanas
Pastizal Natural
Lomero
2000
16
500-600
1600
20
300
19 San Juan de Guadalupe Matorral Desrtico Rosetfilo Sierra
semiclido
Muyseco
semiclido
Muyseco
Litosol
semiclido
Seco
semiclido
Seco
Xerosol
semiclido
Semiseco
semiclido
Semiseco
Cambisol
semiclido
Muyseco
semiclido
Muyseco
Feozem
semiclido
Muyseco
semiclido
Muyseco
Xerosol
semiclido
Muyseco
semiclido
Muyseco
Xerosol
semiclido
Semiseco
templado
Semiseco
Xerosol
templado
Semiseco
templado
Semiseco
Castaozem
templado
Semiseco
templado
Muyseco
Castaozem
semiclido
Muyseco
semiclido
Muyseco
Litosol
semiclido
M
uyseco
semiclido
Semiseco
Litosol
Xerosol
Yermosol
20 San Luis del Cordero
Llanura
1400-1600
18-20
300
Llanura
1400-1600
18-20
300
Sierra
1600
18-20
300
23 Santa Clara
Matorral Desrtico Rosetfilo Bajada
2000-2200
16-18
400
24 Simn Bolivar
Matorral Desrtico Rosetfilo Sierra
1600
20
300-400
templado
Seco
semiclido
Muyseco
25 Tlahualilo
Pastizal Halofilo
1200
20
300
semiclido
Llanura
Unidadde Suelo
Xerosol
Cambisol
Regosol
Xerosol
Litosol
Litosol
Castaozem
Xerosol
Castaozem
Xerosol
Litosol
Litosol
PTA: Precipitacin total anual; msm: metros sobre el nivel del mar; mm: milmetros; C: grados centgrados
44
Romana Ros Reyes
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Cuadro 11. Nmero total de sitios de colecta por caracterstica ambiental.

Caracterstica Ambiental 1
Sitios
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 No. Total de Sitios
Tipo de Topoforma
Bajada
Meseta
Llanura
Lomero
Sierra
Altitud (msm)
1200
1400
1600
1800
2000
2200
Temperatura (C)
16
18
20
22
28
PTA (mm)
300-400
500
600
Tipo de Clima
Semiclido
Templado
Unidad de Suelo
Cambisol
Castaosem
Feosem
Litosol
Regosol
Yermosol
Xerosol
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
16
8
1
19
6
2
4
1
7
1
1
9
x
x
x
x
x
x
x
1
9
12
1
2
x
x
1
8
5
8
2
1
x
x
4
2
10
3
6
Las caractersticas ambientales de L. graveolens en los sitios de estudio (Cuadro 9

y 10) respecto al intervalo altitudinal Huerta (1997) lo reporta en altitudes de 400 a
2000 m. Su mayor abundancia se presenta entre 1000 y 1800 m, pero tambin se
reporta en altitudes superiores a los 2300 m en las zonas ridas y semiridas del
pas (Villavicencio et al., 2007).
45
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
5.2 Anlisis cromatogrfico

5.2.1 Perfil de flavonoides detectados por cromatografa en capa fina.
La informacin obtenida en los cromatogramas de placa fina mostr la separacin
de 10 bandas principales, varias de las cuales se empalmaron y ninguna vir su
color despus de su exposicin a la luz ultravioleta. La ltima banda de color verde
con luz visible y anaranjada bajo luz UV, fue la ms intensa, por lo que
probablemente se trate de clorofila, dada la polaridad de la misma en este sistema
de elucin (Cuadro 12, Figura 21).
De acuerdo con Markham (1982) los compuestos que presentan coloraciones

prpuras y que presentan esas caractersticas pueden ser del tipo:
Flavonas o flavonoles 3-O sustituidos con 5-OH pero carece de un 4-OH
libre.
Algunas flavonas 6-OH u 8-OH y flavonas 3-O- sustituidos con 5-OH.
Isoflavonas, dihidroflavonoles, biflavonilos y algunas flavanonas con 5-OH.
Chalconas con 2-OH o 6-OH pero sin 2-OH o 4-OH libre.
Estos resultados al ser comparados con los obtenidos del anlisis de HPLC/DAD
Resulta ser que si hay la presencia del tipo de Flavononas,Flavonas e Isoflavonas.
46
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 9. Valores de Rf y coloraciones de los compuestos separados por cromatografa de

capa fina (TLC).
No. de
Tipo de
Banda
Valores de Rf
Reacciones de color
Compuesto
Rf (AE-AF-AA-A)
(X SD)
UV
UV/ NH3
1
0.0638 0.0246
Violeta-Amarillo
Violeta-Amarillo
2
2
0.1455 0.0338
Violeta-Amarillo
Violeta-Amarillo
2
3
0.2264 0.0326
Naranja-Amarillo
Naranja-Amarillo
1
4
0.3154 0.0319
Morado-Amarillo
Morado-Amarillo
2
5
0.4331 0.0357
Morado-Violeta
Morado-Violeta
2
6
0.5265 0.0329
Morado
Morado
2
7
0.6566 0.026
Morado-Amarillo
Morado-Amarillo
2
8
0.7459 0.02083
Morado - Caf
Morado - Caf
2
9
0.8472 0.02183
Morado - Amarillo
Morado - Amarillo
2
10
0.9761 0.01526
Naranja
Naranja
1
AE-AF-AA-A: Acetato Etilo: cido frmico: cido actico: Agua
X: Media y SD: Desviacin estndar.
1:Flavonoles con 4-OH y con 5-OH libre 2: a) Flavonas con 3-O sustituidos o bien flavonoles con 5-OH y sin el 4-O
libre, b) Algunas 6- o 8-OH flavonas y flavonas 3-O- sustituidos con 5-OH, c) Isoflavonas, dihidroflavonol, biflavonol y
algunas flavanonas con 5-OH, d) Chalconas con 2- o 6-OH y con el 2- o 4-OH libre.
a)
b)
Figura 21. Cromatogramas obtenidos en capa fina (TLC) a) expuestas al eluyente b) bajo luz
UV.
47
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
5.3 Perfiles de flavonoides obtenidos por HPLC/DAD

Se obtuvieron 25 cromatogramas de las poblaciones de estudio de L. graveolens
(Figura 22), as como algunos espectros de absorcin al UV. De cada
cromatograma se seleccionaron los picos mayoritarios y 22 compuestos en el total
de los sitios de recoleccin. La mayora de los compuestos detectados eluyeron en
el intervalo de 10.0190.235 a 22.7650.145 minutos, debido a su mayor
polaridad.
Lo anterior concuerda con lo reportado por Lin et al., (2007) en donde la mayora
de los 23 compuestos identificados
eluyen en un intervalo de tiempos de
retencin de 10 a 34 min an cuando trabajo con una metodologa diferente a la

aplicada en este trabajo.
48
Romana Ros Reyes
a) Sitio 1. Cuencam 1998
c) Sitio 3. Cuencam 2007
e) Sitio 5. Mezquital 1998
CIIDIR-IPN-DURANGO
b) Sitio 2. Cuencam 2007
d) Sitio 4 Mezquital 1998
f) Sitio 6. Mezquital 1998
Figura 22. Cromatogramas de los perfiles de flavonoides detectados por HPLC/DAD.
49
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin Figura 22
g) Sitio 7. Mezquital 1998
h) Sitio 8. Lerdo 1998
i) Sitio 9. Lerdo 1998
j) Sitio 10. Lerdo 2007
k) Sitio11. Lerdo 2007
l) Sitio 12. Mapim 1998
50
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
m) Sitio 13. Nazas 2008
) Sitio 15. Nombre de Dios 2007
p) Sitio 17. Nombre de Dios 2008
n) Sitio 14. Nombre de Dios 1998
o) Sitio 16. Nombre de Dios 2007
q) Sitio 18. Poanas 1998
51
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
r) Sitio 19. San Juan de Guadalupe 2008
t) Sitio 21. San Luis del Cordero 2007
v) Sitio 23. Santa Clara 2008
s) Sitio 20. San Luis del Cordero 1998
u) Sitio 22. San Luis del Cordero 2008
w) Sitio 24. Simn Bolivar 2008
52
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
x) Sitio 25. Tlahualilo 2008
5.3.1 Caracterizacin del esqueleto de flavonoides obtenidos

Los datos espectrales obtenidos en esta investigacin, sealan que la mayora de
los compuestos separados, corresponden a estructuras bsicas de las flavanonas
y flavonas (Cuadros 13, 14 y 15). Estos resultados se encuentran en los intervalos
reportados por Markham (1982), (Cuadro 9, Figura 20) y en otras investigaciones
realizadas en la identificacin de compuestos encontrados en los gneros Lippia y
Origanum (Cuadro 16). De igual manera al ser comparados con los estndares
Quercetina y Naringenina, se constat de manera cualitativa que el compuesto 15
podra ser quercetina y el compuesto 19, naringenina. Los compuestos 9, 16, 17 y
18, podran tratarse de algunos de sus derivados (Cuadro13). Lo cual es
congruente con las investigaciones de otros autores (Domnguez, 1989; Gonzlez
et al., 2007).
53
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 13. Caracterizacin del esqueleto principal de los flavonoides detectados.

No. Compuesto
Tipo de Flavonoide probable
1
No determinado
2
Flavanona
3
Flavanona
4
Flavanona
5
Flavanona
6
Flavona
7
Flavona
8
Flavanona
9
Flavanona
10
Flavona
11
Flavona
12
Flavona
13
Flavona
14
Flavanona
15
Flavanona
16
Flavanona
17
Flavanona
18
Flavanona
19
Flavanona
20
Flavona
21
No determinado
22
No determinado
54
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 14. Resultados del anlisis

cromatogrfico y espectros obtenidos de los
compuestos mayoritarios detectados en muestras de Lippia graveolens.
No.
Compuesto
Tiempo de
Retencin
(min)
Absorcin UV
mx (nm)
Espectro
Overlay
Stacked
Paged
2.1650.080
238,275 Sh
.2
Active Spectrum
Absorbance
.16
.12
199851~2@2.1597 <Active Spectrum

199851~2@3.0983
.08
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.04
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199851~2@18.7917
199851~2@19.3197
199851~2@19.745
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199851~2@32.373
199851~2@32.9597
210
230
250
270
290
310
Nanometers
330
350
370
390
410
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Overlay
Stacked
Paged
.75
Active Spectrum
.65
.55
8.7550.074
285,360 Sh
.45
Absorbance
.35
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.25
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.15
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.05
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-.05
5A2008~1@1.8957
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
5A2008~1@2.4677
400
Nanometers
55
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
3
.6
10.0190.235
Active Spectrum
285, 360 Sh,
.5
Absorbance
.4
.3
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.2
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.1
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200
220
240
260
280
300
Nanometers
320
340
360
380
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Overlay
Stacked
Paged
.5
Active Spectrum
.4
4
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.3
Absorbance
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.2
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.1
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200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
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400
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
.34
Active Spectrum
.3
.26
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.22
Absorbance
.18
.14

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.1
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.06
200751~2@32.4317
200751~2@32.901
200751~2@34.1183
200751~2@34.969
.02
200751~2@35.541
200751~2@10.1823
-.02
200
240
280
320
360
400
Nanometers
56
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
.32
.28
Active Spectrum
.24
11.8130.126
230,295 Sh,
310
.2
Absorbance
.16
.12
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.08
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.04
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-.04
512200~1@2.1597
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
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400
512200~1@9.757
Nanometers
512200~1@11.1797
Overlay
Stacked
Paged
.24
Active Spectrum
.2
13.0160.126
275, 332
.16
Absorbance
.12

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.08
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.04
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210
230
250
270
290
310
Nanometers
330
350
370
390
410
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Overlay
Stacked
Paged
.1
Active Spectrum
.08
.06
13.3940.142
281, 340 Sh
Absorbance
.04
.02
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-.04
200
220
240
260
280
300
320
Nanometers
340
360
380
400
420
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57
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
15.0170.296
.34
230, 287
326 Sh,
Active Spectrum
.3
.26
Absorbance
.22
.18
.14

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.1
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200
220
240
260
280
300
320
340
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380
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Nanometers
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Overlay
Stacked
Paged
.34
.3
Active Spectrum
.26
15.3690.143
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325 Sh
.22
Absorbance
10
.18
.14
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.1
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220
240
260
280
300
320
340
360
380
400
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
Active Spectrum
1.1
16.8460.114
220, 284
320 Sh
.9
Absorbance
11
.8
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.7
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.6
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.5
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200
220
240
260
280
300
320
Nanometers
340
360
380
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400
58
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
Active Spectrum
.8
17.9060.133
220, 283
325 Sh
.6
Absorbance
12
.4
510200~1@18.5277
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.2
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200
240
280
320
Nanometers
360
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400
510200~1@15.1983
Overlay
Stacked
Paged
.4
Active Spectrum
18.1940.111
.3
Absorbance
13
225, 283
325 Sh
.2
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.1
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Nanometers
8A2008~1@15.257
Overlay
Stacked
Paged
.2
Active Spectrum
.16
18.7020.126
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360 Sh,
Absorbance
.12
14
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-.04
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380
400
8A2008~1@15.521
420
8A2008~1@15.257
Nanometers
8A2008~1@18.161
59
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
.18
Active Spectrum
.14
22.7650.145
229, 289
332 Sh
.1
Absorbance
15
.06
5A2008~1@26.0957
5A2008~1@31.6837
5A2008~1@32.4757
5A2008~1@35.1303
5A2008~1@35.761
5A2008~1@1.8957
5A2008~1@2.4677
.02
5A2008~1@8.701
5A2008~1@10.6077
5A2008~1@11.033
5A2008~1@12.2943
5A2008~1@12.661
5A2008~1@14.5677
5A2008~1@16.9437
-.02
5A2008~1@17.6917
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
5A2008~1@18.5863
400
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
.4
Active Spectrum
26.0570.119
229, 289
330 Sh
.3
Absorbance
16
.2
511200~1@26.6677
511200~1@32.1677
511200~1@32.7543
511200~1@33.913
511200~1@34.8663
.1
511200~1@2.101
511200~1@2.9957
511200~1@5.0637
511200~1@9.8157
511200~1@11.2383
511200~1@11.605
511200~1@12.7197
511200~1@12.9837
511200~1@14.8317
511200~1@15.1983
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
511200~1@17.8383
400
511200~1@18.5277
Nanometers
511200~1@19.0117
511200~1@19.5397
60
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
Active Spectrum
17
26.6010.201
230, 290
332 Sh
Absorbance
.3
.2

520199~1@32.857
520199~1@32.4317
520199~1@34.0743
.1
520199~1@35.013
520199~1@35.5997
520199~1@2.2037
520199~1@3.0543
520199~1@10.1237
520199~1@11.5023
520199~1@12.9837
520199~1@13.2477
520199~1@11.825
520199~1@15.1983
520199~1@15.4183
520199~1@18.1023
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
400
520199~1@26.1397
420
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
Active Spectrum
.2
32.3540.093
230, 285
330 Sh
.1
Absorbance
18

512200~1@32.7543
-.1
512200~1@33.913
512200~1@35.4383
512200~1@2.1597
512200~1@2.9957
512200~1@9.757
512200~1@11.1797
-.2
512200~1@11.605
512200~1@12.9397
512200~1@14.7877
512200~1@15.0957
512200~1@17.7943
512200~1@18.425
-.3
512200~1@19.481
512200~1@21.4463
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
512200~1@22.605
400
512200~1@25.817
Nanometers
512200~1@26.565
Overlay
Stacked
Paged
32.8660.093
229, 289
325 Sh
Active Spectrum
1.1
.9
Absorbance
19
1.3
.7
.5
199851~1@34.0743
199851~1@34.9103
199851~1@35.541
199851~1@2.2037
.3
199851~1@3.0983
199851~1@9.2877
199851~1@10.4463
199851~1@10.6517
199851~1@12.133
.1
199851~1@14.201
199851~1@16.841
199851~1@17.633
199851~1@18.0583
199851~1@18.689
-.1
199851~1@25.9783
200
220
240
260
280
300
Nanometers
320
340
360
380
400
199851~1@26.565
199851~1@32.2703
61
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
Overlay
Stacked
Paged
.25
Active Spectrum
.15
20
34.1820.228
264, 360 Sh
.05
Absorbance
-.05
-.15
3A2008~1@35.0717
3A2008~1@35.7023
3A2008~1@10.021
-.25
3A2008~1@11.4437
3A2008~1@15.0957
3A2008~1@18.0583
3A2008~1@26.1397
3A2008~1@26.8877
-.35
3A2008~1@32.9597
-.45
200
240
280
320
360
400
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
.9
Active Spectrum
.7
35.0150.119
220, 260
280 Sh
.5
Absorbance
21

5A2008~1@35.761
.3
5A2008~1@1.8957
5A2008~1@2.4677
5A2008~1@8.701
5A2008~1@10.6077
5A2008~1@11.033
5A2008~1@12.2943
5A2008~1@12.661
.1
5A2008~1@14.5677
5A2008~1@16.9437
5A2008~1@17.6917
5A2008~1@18.5863
5A2008~1@22.5463
5A2008~1@26.0957
5A2008~1@31.6837
-.1
200
220
240
260
280
300
320
Nanometers
340
360
380
5A2008~1@32.4757
400
Overlay
Stacked
Paged
35.6190.085
220,275
280 Sh
Active Spectrum
.6
.5
Absorbance
22
.7
.4
.3
.2
.1
0
200
220
240
260
280
300
320
340
360
380
400
Nanometers
62
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 15. Espectros de absorcin de los estndares analizados.

Estndar
Tiempo de
Absorcin
Retencin (min)
UV mx (nm)
Espectro
1.4
Catequinahidratada
6.734
1.2
225 Sh, 270
Absorbance
.8
.6
.4
.2
0
200
240
280
320
Nanometers
360
400
440
.5
.4
15.518 y a 22.953
229, 290,
340 Sh
.3
Absorbance
Quercetina
.2
QUERCE~1@15.8877 <Active Spectrum

QUERCE~1@22.9717
QUERCE~1@15.5797
.1
200
220
240
260
280
300
320
Nanometers
340
360
380
63
400
420
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Continuacin
.22
.18
Naringenina
26.140 y a 32.575
290, 325 Sh
.14
Absorbance
.1
.06
NARING~1@32.593 <Active Sp
.02
-.02
-.06
-.1
200
240
280
320
360
400
440
Nanometers
Overlay
Stacked
Paged
.18
Active Spectrum
.16
.14
Rutina
11.471
258, 260 Sh,

290 Sh, 359
Absorbance
.12
.1
.08
RUTINA@10.769 <Active Spectrum
.06
.04
.02
0
200
240
280
320
360
Nanometers
400
440
480
64
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 16 Caractersticas espectrales de flavonoides reportados en especies de los gneros

Lippia y Origanum.
Compuesto
Apigenina
7-O-glucsido de apigenina
Circimaritina
Crisoeriol
Derivado de catequina
6,7- Dimetilescutelarcina
Diosmetina
Plantas que
lo contienen
1,2,3,6
1
Dihidrochalcones
Absorcin UV
(nm)
266,290 Sh,337
266, 338;
268, 333
272,329
241 Sh 252,259,290 Sh
348
241,249 sh, 269, 347
224,240,320
278,334
251,266 Sh 346
240 Sh,252,267,291 Sh
344
288,336 Sh
289,324 Sh
289,324 Sh
255,271,346
250 Sh 272,337
237 Sh,263,288 Sh
310,358
266,314 Sh, 360
267,305 Sh 359
226,286
Flavona
282, 344
Lin et al., 2007
1,2
1
2, 4
1, 3
1
1
Flavona
Flavona
Flavona
Flavonol
Flavona
Flavonol
282,346
282,346
272,335
236,256,368
240,268,356
248 Sh 266,295 Sh 310
Sh36
240,264,368
253 Sh 266,294 Sh 322
Sh367
256,266 Sh 348
253,267 Sh 291 Sh 350
242 Sh 253,257,291 Sh
349
256,266 Sh 346
276,336
266,340
289,326 Sh
240,288 Sh
292,332 Sh
289,326 Sh
288,364
288,364
288,360
Lin et al., 2007

Lin et al., 2007
Caigueral, 1986
Gonzlez et al., 2007
240,272,324
290,334 Sh
226,286
255,245 Sh 372
256,266 Sh 370
255,269 Sh 301 Sh 370
276,329
290,336 Sh
284,334
284,338
290, 336 Sh
290,327 Sh

Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Campos y Markham, 2007
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
Caigueral, 1986
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
1,2
2
Flavona
Flavona
1
1
2
Flavonol
Flavona
Flavona
Eriodictyol
1,6
Eupafolina
Eupatorina
Galangina
2
2
1
6-O-hexoside de 3Hidroxifloretina
7-O hexsido de 6Hidroxiluteolina
6-Hidroxiluteolina
7-O-ramnsido 6-Hidroxiluteolina
Hispidulina
Hexsido de quercetina
Isokaemferido
Kaempferol
Tipo de
flavonoide
Flavona
Flavona
Flavanona
Flavona
Flavona
Flavonol
Luteolina
1, 2, 3, 6
Flavona
7-O- glucoside -Luteolina

6- Metylscutellarcina
Methylgalangina
Naringenina
1,6
1
1
1,3, 5, 6
Flavona
Flavona
Flanonol
Flavanona
1
1
1
Flavanona
Flavanona
Flavanona
Pentaflavanona-B hexoside-2
Pentaflavanona-B hexoside-1
A- hexoside Pentahidroxiflavanona
Pilosina
Pinocembrina
Phloridzina
Quercetina
Salvigenin
Sakuranetin
7-O-hexosido-Scutallarcin
Scutellarcin
Taxifolin
1
1,3,5
1
1
2
1
1
1
1
Flavona
Flavanona
Dihidrochalcona
Flavonol
Flavona
Flavanona
Flavona
Flavona
Flavanona
Referencias
bibliogrficas
Lin et al., 2007, Mabry et
al., 1970.
Caigueral, 1986
Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
Caigueral, 1986
Caigueral, 1986
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007

Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007,
Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Mabry et al., 1970
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
Lin et al., 2007
65
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
5.4 Anlisis estadstico

5.4.1 Anlisis de similitud y de componentes principales
Se detectaron 22 compuestos de las 25 muestras analizadas por HPLC/DAD. La
mayora de estos compuestos se encontraron presentes en los tiempos de
retencin de 11.4440.172 a 15.0170.296 as como 18.7020.126 a 32.354
0.093 (Cuadros 17 y 18).
Cuadro 17. Tiempos de retencin de los compuestos detectados.
No.de Tiem
podeRetencin
Sitio
Com
puesto (m
in)XDS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
2.1650.080 2.177 2.152 2.196 2.001 2.195 2.125 2.182 2.129 2.185 2.138 2.144 2.121 2.184 2.121 2.127 2.145 2.173 2.127 2.174 2.187 2.183 2.172 2.127 2.496 2.164
1
2
8.7550.074 8.874 8.659 8.642 0 8.794 8.784 0 8.754 8.740 8.711 8.701 8.729 8.806 8.842 8.814 8.726 0 0 8.795 8.896 0 0 8.666 8.764 8.647
3
10.0190.235 10.225 9.825 9.922 9.489 10.307 10.032 10.233 9.956 9.322 9.927 9.892 9.908 10.028 10.090 10.086 9.971 10.247 10.055 10.327 10.189 10.233 10.161 9.852 10.164 10.037
4
10.7340166 10.815 10.684 10.405 10.514 11.072 10.723 0 10.595 10.486 10.569 10.732 10.704 10.816 10.742 10.723 10.757 10.591 10.899 10.947 0 10.967 10.951 10.670 10.684 10.836
5
11.4440.172 11.628 11.224 11.259 11.219 11.716 11.433 11.614 11.364 11.601 11.324 11.290 11.323 11.427 11.490 11.473 11.379 11.636 11.460 11.723 11.591 11.618 11.550 11.250 11.082 11.434
6
11.8130.126 11.919 11.589 11.890 11.662 12.023 11.774 11.941 11.693 11.800 11.670 11.647 11.701 11.790 11.828 11.805 11.714 11.971 11.805 12.038 11.893 11.911 11.887 11.635 11.929 11.804
7
13.0160.126 13.033 12.972 13.236 12.927 13.143 13.179 13.047 13.097 12.978 13.059 13.030 13.089 12.901 12.925 12.908 12.813 13.072 13.215 13.147 13.009 13.031 13.003 13.018 12.680 12.900
8
13.3940.142 13.358 13.400 13.701 13.254 13.450 13.418 13.357 13.500 13.598 13.443 13.435 13.507 13.198 13.235 13.221 13.119 13.388 13.580 13.473 13.326 13.349 13.312 13.465 13.558 13.204
9
15.0170.296 15.311 14.775 14.389 15.300 15.371 15.044 15.229 14.936 14.240 14.914 14.856 14.884 15.023 15.105 15.105 14.986 15.296 15.071 15.405 15.230 15.323 15.200 14.800 14.585 15.037
10
15.3690.143 15.493 15.114 0 15.539 15.581 15.324 15.486 15.236 0 15.203 15.168 15.242 15.346 15.386 15.357 15.258 15.521 15.357 15.600 15.460 15.469 15.455 15.166 0 15.367
11
16.8460.114 16.880 16.934 16.932 16.968 16.999 16.752 16.895 16.996 16.922 0 16.670 16.727 16.779 16.800 16.781 16.990 16.779 16.783 16.612 16.878 16.863 16.950 16.630 16.949 16.843
12
17.9060.133 0 17.815 17.684 17.993 17.832 17.996 0 17.926 17.723 17.885 17.864 17.965 18.021 18.064 17.997 17.940 17.776 18.032 17.811 18.097 18.069 17.683 17.882 17.712 18.082
13
18.1940.111 18.106 18.374 18.096 0 18.209 0 18.131 0 18.113 0 0 0 0 0 0 0 18.169 0 18.213 0 0 18.121 18.404 0 0
14
18.7020.126 18.826 18.509 18.741 18.624 18.909 18.687 18.827 18.620 18.739 18.598 18.558 18.663 18.749 18.632 18.581 18.515 18.753 18.589 18.827 18.889 18.865 18.686 18.940 18.610 18.622
15
22.7650.145 22.920 22.573 22.894 22.718 22.987 22.764 22.893 22.688 22.394 22.648 22.613 22.691 22.777 22.830 22.776 22.717 22.950 22.796 22.808 22.895 22.913 22.906 22.614 22.549 22.805
16
26.0570.119 26.177 25.878 25.994 26.040 26.240 26.039 26.157 25.988 25.937 25.922 25.896 25.980 26.070 26.115 26.048 25.999 26.215 26.081 26.257 26.153 26.179 26.181 25.923 26.106 25.853
17
26.6010.201 26.893 26.638 26.701 26.298 26.519 26.735 26.451 26.735 26.637 26.674 26.651 26.752 26.822 26.412 26.341 26.305 26.424 26.386 26.527 26.876 26.894 26.914 26.678 26.368 26.401
18
32.3540.093 32.377 32.181 32.356 32.436 32.480 32.295 32.392 32.279 32.306 32.213 32.191 32.302 32.394 32.415 32.280 32.250 32.467 32.369 32.479 32.366 32.372 32.455 32.284 32.492 32.431
19
32.8660.093 32.901 32.703 32.883 32.983 0 0 32.918 32.806 32.837 32.734 32.712 0 32.920 32.947 32.805 32.774 32.994 0 0 32.891 32.891 32.984 32.811 0 32.960
20 34.1820.228 34.090 33.921 34.081 34.519 0 34.424 34.496 34.433 34.038 33.947 33.924 34.474 34.137 34.518 0 0 0 34.497 34.032 34.085 34.085 34.186 33.897 34.009 34.027
21 35.0150.119 35.370 0 34.949 35.063 35.089 34.936 35.021 34.933 34.913 34.869 34.851 34.960 35.052 35.043 34.913 34.892 35.268 35.006 35.080 34.984 34.974 35.085 34.955 35.081 35.082
22
35.6190.085 35.613 35.487 35.588 35.699 35.718 35.567 35.649 35.566 35.558 35.501 35.485 35.594 35.687 35.667 35.538 35.520 35.738 35.634 35.714 35.617 35.603 35.716 35.595 35.729 35.715
1: Presencia; 0: Ausencia; X: Media; DS: Desviacin estndar.
66
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 18. Matriz cualitativa de presencia / ausencia de la distribucin individual de los

compuestos detectados.
No.de Tiem
podeRetencin
Com
puesto (m
in)XDS
1 2.1650.080
2 8.7550.074
3 10.0190.235
4 10.7340166
5 11.4440.172
6 11.8130.126
7 13.0160.126
8 13.3940.142
9 15.0170.296
10 15.3690.143
11 16.8460.114
12 17.9060.133
13 18.1940.111
14 18.7020.126
15 22.7650.145
16 26.0570.119
17 26.6010.201
18 32.3540.093
19 32.8660.093
20 34.1820.228
21 35.0150.119
22 35.6190.085
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
2
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
3
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
4
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
5
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
0
1
1
6
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
7
1
0
1
0
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
8
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
9
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Sitio
10
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
12
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
13
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
14
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
15
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
0
1
1
16
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
0
1
1
17
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
18
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
19
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
20
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
21
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
22
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
23
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
24
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
0
1
1
1
1
1
0
1
1
1
25
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1: Presencia; 0: Ausencia; X: Media; DS: Desviacin estndar
El anlisis CLUSTER (Figura 23) presenta dos grupos diferenciados y un elemento

aislado, el de mayor similitud con un valor de entre (1- 0.91) que pertenece al
grupo A comprendido por los sitios (4,8,10, 11, 13, 14, 15, 16, 20, 21,25 y 6, 12,
18 y 24) seguido por el grupo B formado por los sitios (1, 2, 3, 5, 9, 17, 19, 22 y
23) con un valor de 0.90 y el C del sitio 7 que se encuentra separado de los
anteriores grupos con un valor de 0.82 debido a que tiene la ausencia de 3
compuestos (2, 4 y 12). Los sitios que aparecen como iguales de acuerdo al
dendrograma son (15 y 16) el (25, 14, 13, 11, 8) tambin (6 y 12) y (3 y 9).
Una comparacin del anlisis de similitud de los grupos obtenidos respecto a sus
caractersticas ambientales, seala que los porcentajes que muestra el grupo A
con respecto a B, son homogneas. Lo cual indica independencia con respecto a
la composicin fenlica de los sitios y de las condiciones ambientales de los
mismos (Cuadro 19).
67
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Con relacin al tipo de topoforma, el grupo A est presente en mesetas y lomeros

en un 8 % y el grupo B en bajadas. La altitud en A se encuentra en el intervalo de
1200 y 2000 con un 4 % y 8% respectivamente, aunque en su mayora se
encuentra alrededor de 1400 con 20 %. En el grupo B, se muestra su presencia en
2200 con 4 % pero presenta altitudes de 1400, 1600 y 1800 m con 12 %. La
temperatura media anual de A, es de 16C con 4 % pero la mayora se encuentra
en el intervalo de 18 - 20 C con 2 4%. Mientras que en Bm es de 22C con 4 % y
la mayora es de 20C con 20 %. La precipitacin en ambos grupos es
homognea, aunque la mayora fue de 300-400 mm en A con 36 % y en B 28 %;
lo mismo ocurre con el tipo de clima, pero en este caso, en la mayor parte de los
sitios estudiados es semiclido para el grupo A, con 40% y en B 32%. Por ltimo
en la unidad de suelo los dos grupos nuevamente muestran homogeneidad en
cuanto a sus porcentajes.
Lo anterior confirma lo mencionado por (Harborne y Turner, 1984; Almaraz,

Abarca, 2000) de la poca influencia de las condiciones ambientales sobre la
expresin de los flavonoides. Adems Feria et al., 2007 hacen hincapi en
heterogeneidad de las muestras a analizar, debido a que se componen de
individuos de diferentes especies con una estrecha cercana filognetica, que
presentan estructuras celulares o perfiles cromatogrficos similares distinguibles
slo por la presencia de diferentes partes de la planta.
68
20
16
15
25
14
13
11
21
10
24
18
12
19
23
22
CIIDIR-IPN-DURANGO
17
Romana Ros Reyes
0.98
0.96
0.94
Sim ilarity
0.92
0.9
A
0.88
0.86
0.84
C
0.82
12
15
18
21
24
Figura 23. Dendrograma del anlisis CLUSTER cualitativo de las poblaciones foliares de
Lippia graveolens de acuerdo a sus perfiles fenlicos foliares.
69
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 19. Comparacin del anlisis de similitud y las caractersticas ambientales.

CaractersticaAmbiental
Sitios
4 8 10 11 12 13 14 15 16 18 20 21 24 25 1 2 3 5 6 9 17 19 22 23 7
No. Total deSitios
Grupodel anlisisdesimilitud A A A A A A A A A A A A A A B B B B B B B B B B C No. de Sitios GrupoAGrupoB GrupoC %A %B %C

14
10
1
56 40
1
TipodeTopoforma
Bajada
x
x x
x
Meseta
x
x
Llanura x x x
x
x x
x
x x
x
Lomero x
x
x
Sierra
x
x
x
x x x
16
10
28
12
12
12
14
10
56
40
20
12
12
16
12
14
10
56
40
24
12
12
24
20
14
10
56
40
16
36
28
16
12
14
10
56
40
19
10
40
32
16
14
10
56
40
12
16
12
20
16
Altitud(msm)
1200
x
1400
x x
x x x
x x x
1600 x
x
x x
x
1800 x
x
x
x
x
x x
x
2000
x x
2200
x
Temperatura(C)
16
x
18 x x x
x x x
x x
x
20
x x
x x x x
x x
x
x x
x
22
x
28 x
x
PTA(mm)
300-400 x x x x x
x x x x x x x
x
x x x
500 x
x x x
x x
x
x
600
x
TipodeClima
Semiclido x x x x x x
x x x x x x x x x x
x x
x
Templado
x x x x
x
x
UnidaddeSuelo
Cambisol x
x
Castaosem
x x
x
x
Feosem
x
Litosol
x
x
x x
x
x x
Regosol
x
Yermosol
x
Xerosol
x
x
x
x
x
x x
x
x
70
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Con respecto al anlisis de componentes principales (CP) muestra que el sitio 7 se

separa de los otros sitios debido a que tiene la mayor ausencia de tres
compuestos (2, 4 y 12), adems se aprecian tres grupos (A, B y C) diferenciados
(Figura 24) . El grupo A se encuentra en los cuadrantes I y II, el B en III y IV y el
C en el cuadrante III lo que respalda la informacin obtenida del anlisis
CLUSTER (Figura 24).
IV
0.8
5
19
3
9
24
0.6
C om ponent 2
0.4
2
6
12
23 0.2
1
-1.8 -1.5 -1.2 -0.9 -0.6
17
22
III
-0.3
-0.2
0.3 0.6
16
15
8
11
14
13
25
10
18
20
-0.4
-0.6
7
-0.8
4
21
II
Component 1
Figura 24. Grafico del anlisis de Componentes Principales de las poblaciones foliares de
Lippia graveolens de acuerdo a sus perfiles fenlicos foliares.
71
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
5.4.2 Anlisis cuantitativo de unidades arbitrarias de concentracin (UAC)

La matriz obtenida del porcentaje de rea de cada compuesto fueron expresados
en unidades arbitrarias de concentracin (AUC) (Cuadro 20).
Cuadro 20. Matriz Cuantitativa de la distribucin individual de los compuestos detectados .
No. de
Compuesto
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
1
0.86
2.11
9.96
1.30
3.51
1.94
0.86
1.71
1.58
4.44
0.01
0
7.08
1.16
0.59
3.02
1.83
1.05
15.72
2.24
0.07
0.66
2
0.83
1.11
6.83
2.78
3.85
3.16
2.89
1.60
4.36
6.73
1.01
4.94
0.93
1.18
0.81
3.27
1.31
1.28
9.80
1.29
0
0.88
3
0.49
0.57
4.29
2.34
3.57
1.24
2.30
2.14
8.86
0
3.98
1.82
1.33
1.57
0.41
2.37
2.38
0.78
20.66
3.33
0.57
0.44
4
0.58
0
10.14
2.98
5.19
5.37
4.31
4.31
1.81
9.51
0.43
1.39
0
0.39
1.09
1.41
0.19
0.39
0.10
0.32
0.83
2.11
5
1.00
0.91
16.12
4.33
5.51
5.31
2.13
4.23
3.14
13.49
0.64
0.54
4.71
0.48
0.98
2.81
0.30
0.46
0
0
1.68
1.04
UnidadesArbitrariasdeConcentracin(UAC) decadaSitio
6
7
8
9
10 11 12 13 14
1.03 1.43 0.89 0.76 0.78 0.63 1.37 0.84 1.41
1.48 0 0.68 1.15 1.69 0.64 0.07 0.03 2.47
13.37 17.27 17.97 7.40 10.02 6.67 14.87 14.00 14.34
1.40 0 1.36 2.59 1.17 2.66 4.25 2.65 2.35
5.24 4.70 5.45 0.40 4.74 3.64 7.98 5.81 7.06
3.41 1.72 2.92 1.18 2.83 2.51 3.95 2.11 4.82
1.72 1.02 3.99 2.39 1.53 2.47 4.57 1.02 1.98
1.95 0.78 1.91 1.20 1.33 1.53 2.08 1.43 3.28
4.05 3.04 3.85 6.04 2.69 2.16 3.11 2.26 2.10
12.65 13.20 1.77 0 6.27 6.05 10.26 1.04 6.70
1.06 0.14 0.98 5.76 0 0.94 1.19 0.10 0.41
3.97 0 14.64 1.84 8.72 3.79 4.61 19.01 6.12
0 4.50 0 0.86 0
0
0
0
0
2.81 1.98 1.05 2.17 1.38 1.64 1.43 1.34 0.84
1.24 1.53 1.58 0.98 0.63 1.05 0.80 0.69 0.94
2.96 3.63 1.57 2.58 3.00 3.25 1.60 4.31 2.39
0.05 0.44 0.05 2.06 2.72 2.73 0.01 1.74 0.28
0.63 0.87 0.49 0.73 1.02 0.78 0.38 0.95 0.61
0 0.16 0.60 12.21 19.96 12.71 0 19.84 0.22
0.45 0.70 0.68 1.85 3.33 1.79 0.29 3.57 0.53
1.57 1.38 1.48 0.87 0.30 0.27 2.65 1.49 1.86
1.89 3.24 1.75 0.29 0.50 0.38 0.93 0.95 3.89
15
0.86
1.14
10.39
1.44
5.69
4.79
2.04
4.70
2.80
9.38
0.84
2.17
0
3.60
1.64
2.27
0.24
0.67
0.22
0
0.32
3.68
16
0.90
2.01
10.99
4.53
5.83
3.53
1.88
4.18
3.44
8.66
0.23
1.19
0
1.39
0.94
2.35
0.45
0.65
0.36
0
0.26
3.03
17
0.74
0
5.59
13.14
5.66
3.74
2.01
4.15
0.25
0.75
0.29
0.99
5.97
1.57
0.19
0.36
0.44
0.07
0.10
0
0.89
0.01
18
1.13
0
11.10
7.17
7.48
5.26
3.12
2.42
2.57
5.49
0.04
4.37
0
1.26
0.75
1.42
0.24
0.47
0
0.34
1.51
4.20
19
0.60
0.86
9.73
1.30
5.23
4.11
1.93
5.10
2.22
6.89
1.54
1.28
8.53
3.92
0.51
2.32
0.22
0.58
0
0.16
3.04
0.48
20
0.73
0.98
11.46
0
4.82
2.59
1.88
2.08
2.17
4.67
0.49
7.92
0
2.12
0.78
1.52
1.77
0.62
12.72
2.57
1.13
0.53
21
0.61
0
9.08
2.44
3.35
2.57
1.44
2.38
2.02
6.28
0.38
4.12
0
1.33
0.69
5.36
4.31
1.61
22.82
3.50
0.82
0.69
22
0.79
0
10.58
2.29
4.88
2.69
1.46
4.76
2.57
6.97
0.77
0.63
7.48
1.51
0.83
1.80
3.09
0.80
14.43
2.52
1.25
0.74
23
1.54
2.15
10.95
4.52
5.71
4.29
4.50
1.29
3.70
7.02
0.06
5.74
2.35
0.15
1.71
5.59
0.01
1.39
0.27
0.56
5.49
1.21
24
1.05
13.03
1.10
6.02
4.30
2.76
4.91
2.83
12.33
0
8.01
3.85
0
2.81
1.70
3.48
0.34
0.78
0
0.23
5.06
0.93
25
1.04
0.91
8.94
3.00
4.45
3.25
1.69
3.59
4.67
6.81
1.01
7.16
0
2.95
1.46
0.18
0.18
0.72
0.19
0.31
2.70
0.65
El anlisis CLUSTER indica la existencia de dos grupos perfectamente

diferenciados: el grupo A comprendido por los sitios 8, 19, 5, 7, 4, 15, 16, 6,12, 14,
18, 23, 25, 17 y 24 y el grupo B por los sitios 9, 3, 1, 22, 20, 2, 11, 10, 21 y 13
(Figura 25). Los sitios 17 y 24 se separan de stos dos grupos, debido a que
tienen las concentraciones ms bajas de los compuestos seleccionados y a que
tres de ellos (10, 13 y 19), del sitio 24, no se encontraron presentes. El grupo A
comprende los sitios con la mayor concentracin de compuestos, probablemente
por una respuesta al ambiente en el que se desarrolla esta poblacin de plantas,
pues se localiza en la zona ms rida del rea de estudio. En este grupo los
compuestos con la mayor concentracin fueron 19, 12 y 3 (Cuadro 21).
72
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
La relacin del anlisis cuantitativo de las unidades arbitrarias de concentracin de

los dos grupos obtenidos con respecto a sus caractersticas ambientales, seala
que las caractersticas de precipitacin, tipo de clima y unidad de suelo, influyeron
de alguna manera en el agrupamiento de los grupos A y B (Cuadro 22). En el tipo
de topoforma el grupo A es meseta, lomero y en su mayora sierra expresada
como 20 %; en el grupo B, es llanura con 32 %. En altitud, A tiene de 1200 a 2200
m, pero en la mayora de los sitios de 1800 m, con el 24 %; mientras que en el
grupo B, se tienen altitudes de 2000 m y en la mayora de los sitios, de 1400 con
16 %.
En cuanto a la temperatura, el grupo A tiene entre 16 - 28C, con una temperatura

promedio en la mayora de los sitios de 20 C con 28 %, B con 22C y la mayora
de 18-20C con 20 %. La precipitacin del A (500 a 600 mm) es de las ms altas
comparadas con las precipitaciones de B, ya que los sitios que lo forman se
encuentran en la zonas menos ridas. El clima predominante de A es semiclido
y templado con 36 % y 24 %; para B es semiclido con 40 %. La unidad de suelo
que muestra A en su mayora es castaosem con 16 % y cambisol con 8 %; en el
grupo B es xerosol con un 24 % y litosol con 16 %.
La literatura reporta que los diferentes comportamientos ecolgicos de L.

graveolens parecen estar asociados con distintas tasas de crecimiento,
aparentemente dependientes de la precipitacin pluvial. En zonas ridas esta tasa
podra ser muy baja y la longevidad de las plantas mayor y el hecho de que se
encuentre en vegetacin secundaria derivadas de selvas estacionarias, sugiere
que existe cierto grado de perturbacin que le favorece, al menos en los sitios con
mayor precipitacin (Snchez et al., 2007).
La composicin qumica del aceite esencial de Lippia vara segn el hbitat en el

cual se encuentra. Adems, se reporta que existe una correspondencia entre la
sntesis de flavonoides y el hbitat en donde se desarrollan estas plantas (Coll y
73
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Abdala, 2005), ya que los flavonoides, son metabolitos secundarios de marcada

estabilidad, pero su contenido y concentracin, puede variar segn el medio
(condiciones climticas y ambientales) en el que se encuentran (Ruiz-Maqueda et
al., 2005).
Tree Diagram for 25 Variables

Ward`s method
Euclidean distances
1
22
2
11
20
3
9
10
21
13
4
15
16
6
12
14
18
23
25
5
7
19
8
17
24
20
40
60
80
100
120
Linkage Distance
Figura 25. Dendrograma del anlisis cuantitativo de las poblaciones de Lippia graveolens en
funcin de sus perfiles fenlicos foliares.
74
Romana Ros Reyes
CIIDIR-IPN-DURANGO
Cuadro 21. Concentracin de los compuestos por grupo formado.

No. de
Compuesto 4
A
1
0.58
2
0
3
10.14
4
2.98
5
5.19
6
5.37
7
4.31
8
4.31
9
1.81
10
9.51
11
0.43
12
1.39
13
0
14
0.39
15
1.09
16
1.41
17
0.19
18
0.39
19
0.10
20
0.32
21
0.83
22
2.11
5
A
1.00
0.91
16.12
4.33
5.51
5.31
2.13
4.23
3.14
13.49
0.64
0.54
4.71
0.48
0.98
2.81
0.30
0.46
0
0
1.68
1.04
6
A
1.03
1.48
13.37
1.40
5.24
3.41
1.72
1.95
4.05
12.65
1.06
3.97
0
2.81
1.24
2.96
0.05
0.63
0
0.45
1.57
1.89
7
A
1.43
0
17.27
0
4.70
1.72
1.02
0.78
3.04
13.20
0.14
0
4.50
1.98
1.53
3.63
0.44
0.87
0.16
0.70
1.38
3.24
8
A
0.89
0.68
17.97
1.36
5.45
2.92
3.99
1.91
3.85
1.77
0.98
14.64
0
1.05
1.58
1.57
0.05
0.49
0.60
0.68
1.48
1.75
UnidadesArbitrariasdeConcentracin(UAC)decadaSitio
12 14 15 16 17 18 19 23 24
A A A A A A A A A
1.37 1.41 0.86 0.90 0.74 1.13 0.60 1.54 1.05
0.07 2.47 1.14 2.01 0
0 0.86 2.15 13.03
14.87 14.34 10.39 10.99 5.59 11.10 9.73 10.95 1.10
4.25 2.35 1.44 4.53 13.14 7.17 1.30 4.52 6.02
7.98 7.06 5.69 5.83 5.66 7.48 5.23 5.71 4.30
3.95 4.82 4.79 3.53 3.74 5.26 4.11 4.29 2.76
4.57 1.98 2.04 1.88 2.01 3.12 1.93 4.50 4.91
2.08 3.28 4.70 4.18 4.15 2.42 5.10 1.29 2.83
3.11 2.10 2.80 3.44 0.25 2.57 2.22 3.70 12.33
10.26 6.70 9.38 8.66 0.75 5.49 6.89 7.02 0
1.19 0.41 0.84 0.23 0.29 0.04 1.54 0.06 8.01
4.61 6.12 2.17 1.19 0.99 4.37 1.28 5.74 3.85
0
0
0
0 5.97 0 8.53 2.35 0
1.43 0.84 3.60 1.39 1.57 1.26 3.92 0.15 2.81
0.80 0.94 1.64 0.94 0.19 0.75 0.51 1.71 1.70
1.60 2.39 2.27 2.35 0.36 1.42 2.32 5.59 3.48
0.01 0.28 0.24 0.45 0.44 0.24 0.22 0.01 0.34
0.38 0.61 0.67 0.65 0.07 0.47 0.58 1.39 0.78
0 0.22 0.22 0.36 0.10 0
0 0.27 0
0.29 0.53 0
0
0 0.34 0.16 0.56 0.23
2.65 1.86 0.32 0.26 0.89 1.51 3.04 5.49 5.06
0.93 3.89 3.68 3.03 0.01 4.20 0.48 1.21 0.93
25
A
1.04
0.91
8.94
3.00
4.45
3.25
1.69
3.59
4.67
6.81
1.01
7.16
0
2.95
1.46
0.18
0.18
0.72
0.19
0.31
2.70
0.65
1
B
0.86
2.11
9.96
1.30
3.51
1.94
0.86
1.71
1.58
4.44
0.01
0
7.08
1.16
0.59
3.02
1.83
1.05
15.72
2.24
0.07
0.66
2
B
0.83
1.11
6.83
2.78
3.85
3.16
2.89
1.60
4.36
6.73
1.01
4.94
0.93
1.18
0.81
3.27
1.31
1.28
9.80
1.29
0
0.88
3
B
0.49
0.57
4.29
2.34
3.57
1.24
2.30
2.14
8.86
0
3.98
1.82
1.33
1.57
0.41
2.37
2.38
0.78
20.66
3.33
0.57
0.44
9
B
0.76
1.15
7.40
2.59
0.40
1.18
2.39
1.20
6.04
0
5.76
1.84
0.86
2.17
0.98
2.58
2.06
0.73
12.21
1.85
0.87
0.29
10
B
0.78
1.69
10.02
1.17
4.74
2.83
1.53
1.33
2.69
6.27
0
8.72
0
1.38
0.63
3.00
2.72
1.02
19.96
3.33
0.30
0.50
11
B
0.63
0.64
6.67
2.66
3.64
2.51
2.47
1.53
2.16
6.05
0.94
3.79
0
1.64
1.05
3.25
2.73
0.78
12.71
1.79
0.27
0.38
13
B
0.84
0.03
14.00
2.65
5.81
2.11
1.02
1.43
2.26
1.04
0.10
19.01
0
1.34
0.69
4.31
1.74
0.95
19.84
3.57
1.49
0.95
20
B
0.73
0.98
11.46
0
4.82
2.59
1.88
2.08
2.17
4.67
0.49
7.92
0
2.12
0.78
1.52
1.77
0.62
12.72
2.57
1.13
0.53
21
B
0.61
0
9.08
2.44
3.35
2.57
1.44
2.38
2.02
6.28
0.38
4.12
0
1.33
0.69
5.36
4.31
1.61
22.82
3.50
0.82
0.69
22 Grupoconmayor
B concentracin
0.79
A=1.54
0
A=13.03
10.58 A=17.97
2.29 A=13.14
4.88
A=7.98
2.69
A=4.79
1.46
A=4.92
4.76
A=5.10
2.57 A=12.33
6.97 A=13.49
0.77
B=5.76
0.63 B=19.01
7.48
A=8.53
1.51
A=3.92
0.83
A=1.71
1.80
A=5.59
3.09
B=4.31
0.80
B=1.61
14.43 B=22.82
2.52
B=3.57
1.25
A=5.49
0.74
A=3.89
Nota: El color amarillo representa los sitios con mayor concentracin del grupo A, el azul el del grupo B y en color rojo el
compuesto que present la mayor concentracin de los 22 compuestos.
75
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Cuadro 22. Comparacin del anlisis cuantitativo y las caractersticas ambientales.

Sitios
4 5 6 7 8 12 14 15 16 17 18 19 23 24 25 1 2 3 9 10 11 13 20 21 22
Caracterstica Ambiental
Grupo del anlisis cuantitativo
Tipo de Topoforma
No. Total de Sitios
A A A A A A A A A A A A A A A B B B B B B B B B B No. de Sitios Grupo AGrupo B %A %B
Bajada
x x
x
x
Meseta
x
x
Llanura
x
x
x x x x x x x x
Lomero x
x
x
Sierra
x
x
x
x
x
x
15
10
60
40
12
10
32
12
20
15
10
60
40
16
16
12
24
15
10
60
40
16
20
12
28
20
15
10
60
40
16
10
24
40
32
15
10
60
40
19
10
36
40
24
15
10
60
40
16
12
16
12
24
Altitud (msm)
1200
x
1400
x x x x
x x x
x
1600
x
x
x
x
x
1800 x x
x
x x x
x
x
2000
x x
2200
x
Temperatura (C)
16
x
18
x
x x x x
x
x x x
20
x x
x
x
x x
x x
x x x x
22
x
28 x x
PTA (mm)
300-400
x x
x x x x x x x x x x x x x x
500 x x x x
x x x x
600
x
Tipo de Clima
Semiclido x x x x x x
x
x x x x x x x x x x x x
Templado
x x x x x
x
Unidad de Suelo
Cambisol x x
Castaosem
x x
x x
Feosem
x
Litosol
x
x
x
x
x
x x
Regosol
x
Yermosol
x
Xerosol
x
x
x
x x x
x x x
76
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El anlisis de componentes principales (CP) (Figura 26) muestra dos grupos

marcadamente diferenciados (A y B). El grupo A se encuentra en los cuadrantes I
y II, el B en III y IV. El sitio 24 se separa de los otros sitios, seguido por el sitio 17
esto debido a que presenta la ausencia de tres compuestos (10, 13 y 19) en el
sitio 24 y por bajas concentraciones en el caso del sitio 17. Los datos obtenidos de
este anlisis corroboran lo obtenido del anlisis CLUSTER.
IV
I
18
24
15
Component 2
12
9
17
B
3
-18 -15 -12

21
10
13
III
1
-9
11
22
-6
20
19
25 16
23
18
4
6 15
2
-3
3
-3
-6
14612
5
8
-9
Component 1
II
Figura 26. Grafico del anlisis de Componentes Principales de las poblaciones de Lippia
graveolens en funcin de los perfiles fenlicos foliares.
77
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VI. CONCLUSIONES
El perfil de flavonoides foliares del organo (Lippia graveolens H.B.K. s. l.), mostr
la presencia de diversos flavonoides del tipo de las Flavanonas (12 compuestos) y
Flavonas (7 compuestos) en distintas concentraciones en los sitios de estudio. De
los 22 compuestos mayoritarios seleccionados se identific Naringenina y
Quercetina.
El ao de colecta no influy en ninguno de los anlisis realizados, lo que corrobora
que los flavonoides son metabolitos secundarios muy estables, por lo que son
ampliamente utilizados en investigaciones quimiotaxonmicas.
El anlisis cualitativo de flavonoides mayoritarios detectados para L. graveolens
mostr uniformidad entre las poblaciones e independencia con relacin a las
caractersticas ambientales de cada sitio o poblacin, lo que sugiere la
probabilidad de que las poblaciones de organo que crecen en el Estado de
Durango, pertenecen a una misma especie, no obstante que el anlisis qumico
realizado, mostr algunas diferencias qumicas en ciertas localidades de estudio.
Los compuestos detectados en mayor concentracin (UAC)
fueron el 19 con
22.82 % , 12 con 19.01 % y 3 con 17.97% .
El anlisis cuantitativo de las unidades arbitrarias de concentracin (UAC) de los

perfiles de flavonoides, mostr el agrupamiento de dos grupos con una
dependencia
afinidad
con
respecto
las
condiciones
ambientales,
especficamente a la precipitacin pluvial y tipo de topoforma de cada sitio, lo cual,

confirma la estrecha relacin entre la concentracin de compuestos fenlicos y el
grado de estrs de las plantas y su hbitat.
78
Romana Ros Reyes
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VII. RECOMENDACIONES Y SUGERENCIAS
Para complementar y fundamentar esta investigacin es necesario continuar con

los siguientes estudios:
Realizar un estudio morfolgico comparativo de las muestras recolectadas en
las distintas poblaciones para determinar si existen diferencias significativas
entre ellas.
Identificar la estructura qumica de los compuestos separados en los sitios,
por tcnicas espectromtricas y espectrofotomtricas, como espectrometra
de masas (HPLC-MS), resonancia magntica nuclear (RMN) y ultravioleta
(UV).
Realizar mayor nmero de colectas en Durango y en otros estados de la
Repblica Mexicana para corroborar la existencia de quimiotipos o variedades
de L. graveolens.
Efectuar una caracterizacin molecular con la finalidad de proporcionar
informacin que complemente la identificacin de la especie en el Estado de
Durango.
79
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CIIDIR-IPN-DURANGO
VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

CENTRO INTERDISCIPLINARIO DE INVESTIGACIN PARA

Comparacin de los perfiles de flavonoides de

DIRECTORA: M.C. Martha Celina Gonzlez Gereca

CODIRECTORA: Dra. Yolanda Herrera Arrieta

Durango, Dgo. Agosto de 2010

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M.C. en Gestin Ambiental

Romana Ros Reyes

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EL PRESENTE TRABAJO SE REALIZ EN LABORATORIOS DEL CENTRO

INTEGRAL REGIONAL DEL INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL, UNIDAD

LA DOCTORA YOLANDA HERRERA

PARA LA REALIZACIN DE ESTA TESIS SE CONT CON EL APOYO

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3.1 Objetivo General .................................................................................................... 25

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5.4.1 Anlisis de similitud y de componentes principales ........................................... 66

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Figura 16. Herborizacin y recoleccin del material vegetal............................................ 37

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Cuadro 6. Tipos de clima representado como unidad de superficie ............................... 29

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Palabras clave: Lippia graveolens H.B.K., flavonoides, HPLC/DAD.

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Keywords: Lippia graveolens HBK, Flavonoids, HPLC / DAD.

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Adems de la morfologa, actualmente se utilizan otras herramientas para ayudar

Las principales tcnicas utilizadas para este propsito son la cromatografa en

los cuales pueden

similar como consecuencia de crecer en

condiciones ambientales similares y de expresar una carga gentica similar (Feria

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Con la finalidad de aportar informacin fitoqumica, se compararon los perfiles de

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el gnero Origanum), conocido como organo

europeo o del Mediterrneo y Verbenaceae (gnero Lippia), en la cual se

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1.2 Lippia graveolens (organo mexicano)

Figura 1. Lippia graveolens H.B.K.

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Esta especie se adapta a condiciones variadas de clima, preferentemente del tipo

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En un mapa sobre la distribucin de L. graveolens realizado por Snchez et al.,

Snchez et al., 2007