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bacteria. Es muy util porque permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Adems,
el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor
las colonias pequeas.
En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en el lquido, y aparece como una sustancia
espesa, con colonias dificilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente (w/v):1
0.5 % Peptona
1.5 % agar
0.5% NaCl
Agua destilada
http://es.wikipedia.org/wiki/Agar_nutritivo.
el instrumental como los medios de cultivo son invadidos con suma facilidad
por los microbios del medio ambiente.
Con el fin de subsanar stos inconvenientes se practica
la esterilizacin, procedimiento que consiste en destruir todos los grmenes
vivos que existan sobre los objetos o sustancias que se desean libre de ellos
(aspticos).
Los Microorganismos pueden clasificarse en criorresistentes, que son
los resistentes al fro y termo resistentes o resistentes a las altas temperaturas,
aunque la clasificacin ms comn es por la temperatura a la que se
reproducen. As se los puede clasificar en Crifilos (-5 a 14 C); Mesfilos (25 a
47 C) y Termfilos (50 hasta 113 C). Por ejemplo, muchos hongos se
destruyen con la temperatura, pero sus esporas an son viables y cuando
encuentran un medio apropiado, rico en nutrientes y humedad, se reproducen.
Por tal motivo la tecnologa para su destruccin debe considerar stas
variables.
LA ESTERILIZACIN
Esta operacin comprende todos los procedimientos fsicos, mecnicos
y qumicos, que se emplean para destruir, inactivar o retener grmenes en
general y patgenos en particular. A travs de esta, los materiales de
laboratorio para determinados diagnsticos y los elementos quirrgicos y la piel
del enfermo alcanzan un estado de desinfeccin que evita la contaminacin
operatoria.
Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o
sustancia, y que se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse
nuevamente.
http://es.wikipedia.org/wiki/Esterilizaci%C3%B3n_(microbiolog%C3%ADa)
Para desarrollar bacterias aerobias se incuban los medios de cultivo en agitacin constante o
introduciendo aire estril en el medio.
Los anaerobios estrictos son muy sensibles al O2 por lo que se debe evitar la exposicin de estos
microorganismos al O2. Se puede obtener un ambiente de anaerobiosis por los siguientes mtodos:
A.- Agregando al medio de cultivo un compuesto reductor, como es el tioglicolato sdico, para disminuir el
contenido de O2.
B.- Quitando el O2 por procedimientos mecnicos y reemplazndolo por N2 o CO2.
C.- Mediante reacciones qumicas dentro del recipiente que contiene el medio de cultivo inoculado para
combinar el oxgeno libre con otro compuesto. Por ejemplo: al encender una vela se transforma el
oxgeno en dixido de carbono.
4.- Suministro de luz
Los organismos fotosintticos debern ser expuestos a una fuente de iluminacin ya que la luz es su
fuente de energa. Esta fuente de iluminacin no debe plantear problemas de variacin de temperatura,
por lo que suelen usarse lmparas fluorescentes con un desprendimiento mnimo de calor.
5.- Control de la temperatura
El desarrollo de las bacterias depende de reacciones qumicas, y la velocidad con que se efectan estas
reacciones est influda por la temperatura, por lo que la temperatura puede en parte determinar la
velocidad de crecimiento de los microorganismos. Cada especie microbiana posee una temperatura
ptima de crecimiento clasificndose segn esto en los siguientes grupos:
i.- Psicrfilas: capaces de desarrollarse a 0 C o menos. Su temperatura ptima es alrededor de los 15
C.
ii.- Mesfilas: crecen mejor entre 25 y 40 C.
iii.- Termfilas: crecen mejor entre 45 y 60 C.
2.- Composicin:
A.- Medios sintticos o qumicamente definidos. Llevan fuente de carbono, fuente de nitrgeno, sales
que suplan iones (P, K, Mg, Fe, Ca...), otros elementos como son estimuladores del crecimiento (eritritol
para Brucella abortus) pero siempre a concentraciones conocidas.
B.- Medios complejos o de composicin indefinida. Estos medios llevan ingredientes como extracto de
levadura, peptona, infusin de cerebro, extracto de carne, etc. que contienen nutrientes en abundancia
pero sin saber con exactitud la composicin cualitativa ni cuantitativa de estos nutrientes.
C.- Medios de enriquecimiento. Son medios complejos (normalmente) con aditivos adicionales para
favorecer el crecimiento de determinados microorganismos (particularmente hetertrofos exigentes).
Ejemplo: adiccin de sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas.
D.- Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseo el crecimiento especfico de un
microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una poblacin microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono es
selectivo para autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+); utilizando
maltosa como nica fuente de carbono slo crecern los que usen maltosa.
E.- Medios diferenciales. Son aquellos destinados a facilitar la discriminacin de microorganismos de
una mezcla por sus propiedades diferenciales de crecimiento en dichos medios. Ejemplo: Agar sangre
diferencia hemolticos de no hemolticos; McConkey diferencia lactosa (+) de lactosa (-).
F.- Medios de mantenimiento. Suelen ser distintos a los de crecimiento ptimo ya que el crecimiento
rpido y prolfico suele ocasionar la muerte rpida de las clulas. Ejemplo: al aadir glucosa y utilizarla los
microorganismos producen cidos, acidificndose el medio por lo que es preferible no utilizar glucosa en
los medios de mantenimiento.
Agar sangre:
Apto para el crecimiento de la mayora de los microorganismos de importancia clnica y para estudiar su
propiedad hemoltica. Se usa una base nutriente y sangre ovina estril al 5%.
El AS al 5% con base de Tripticasa-Soja es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de
microorganismos exigentes como no exigentes, que incluyen bacterias aerobias y anaerobias, aunque no
es medio de eleccin para anaerobios. Permite visualizar reacciones hemolticas que producen muchas
especies bacterianas.
Tiene por base una fuente proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) con una pequea
cantidad de hidratos de carbono naturales, cloruro sdico y 5% de sangre.
La aportacin de caseina y peptonas de soja al agar de Tripticasa-soja hace el medio en muy nutritivo por
el suministro de nitrgeno orgnico, particularmente aminocidos y pptidos de cadena ms larga. La
presencia de estas peptonas en el medio permite el cultivo de una gran varedad de grmenes aerobios y
anaerobios que crecen rpidamente, as como los del gnero Candida. Tambn permite el crecimiento
de algunos grmenes exigentes como estreptococos, pneumococos, Brucella,
corinebacterias, Erysipelothrix y Pasteurella.
El cloruro sdico proporciona electrolitos esenciales. La adicin de sangre de carnero desfibrinada
enriquece la base y lo hace un medio adecuado para realizar la prueba del factor CAMP.
Permite as mismo determinar la capacidad de algunas bacterias de producir enzimas extracelulares que
actan sobre los glbulos rojos, ya sea por lisis completa (hemlisis beta, produce un halo
transparentealrededor de la colonia hemoltica), parcial (hemlisis alfa, coloracin verdosa alrededor de la
colonia) o por ausencia de alteracin (hemlisis gamma).
La produccin de hemolisinas por las bacterias depende de muchos factores ambientales como pH o
atmsfera de incubacin.
Las muestras que puedan contener Brucella o Neisseria deben incubarse en atmsfera enriquecida en
CO2.
Si se aade al medio el 0,5% de telurito potsico es muy til par el cultivo y aislamiento selectivo
de Corynebacterium diphteriae, Candida albicans, Listeria y estreptococos.
PROCEDIMIENTO:
pesar el medio segn las indicaciones del envase, (staphylococus 110 44.7gr y agar
sangre 12gr)
Calentar agua
Vaciar el medio a un matrz Erlem Meyer y disolverlo.
Calentarlo con agitacin hasta que se haga translucido, cuidando que no ebulla
demasiado y as evitar que se derrame.
Se prepara para esterilizar y se pone a esterilizar a 15 lbs / 15 min.
ya estril, esperar a que baje la temperatura hasta poderla soportar con las manos, ya
que si se enfra demasiado se gelatiniza.
Vaciar el medio a las cajas de petri, dejndola en la campana esteril, abiertas hasta
que se enfre.
se deja enfriar, despus se tapa y se almacena en un refrigerador previamente
envueltas en papel hasta su uso.
MATERIAL:
agua
staphylococus 110
agar sangre
sangre
autoclave
cajas de petri
vaso de precipitado
matraz
parrilla
balanza
esptula
agitador
algodn
gasa
tape indicador
OPERACIONES Y RESULTADOS:
Se prepar el medio en un matraz de acuerdo a las instrucciones del envase y se dejo enfriar hasta que el
alumno lo pudo soportar con las manos y de vaci en las cajas de petri; despus se dej hasta que enfre
y gelifque. Se tapan las cajas de petri y se envuelven en papel almacenadas hasta que se vayan a utilizar
en un refrigerador.
En la presente prctica se prepararon exitosamente los medios de cultivo tanto de agar sangre como de
staphylococus para poderse utilizar en la siguiente practica.
CONCLUSIN:
En esta prctica se puede concluir que el alumno elaboro de manera correcta los medios entes
mancionados y podran ser utilizados en la proxima clase.
http://html.rincondelvago.com/medios-de-cultivo.html
Trabajo prctico n 1
Preparacin de medios de cultivo
2009
Jefe de Ctedra: Ing. Eduardo Santambrosio
Jefe de Trabajos Prcticos: Ing. Marta Ortega
Auxiliar de 1: Ing. Pablo A. Garibaldi1. OBJETIVOS
Que el alumno se familiarice con los diferentes constituyentes de los
nutrientes que los
microorganismos necesitan para su desarrollo, las formas de preparacin de
los diferentes
medios de cultivo y su aplicacin.
2. FUNDAMENTOS
2.1. Nutricin Definicin
La nutricin es el proceso por el que los seres vivos toman las sustancias
qumicas que
necesitan para crecer, del medio donde habitan. Dichas sustancias se
denominan
nutrientes, y se requieren para dos objetivos:
Energticos: Los microorganismos requieren energa del exterior.
Biosintticos: formar sustancias que constituyen la clula (Ej.: protenas)
Los nutrientes pueden clasificarse en:
Universales: Son aquellos nutrientes que todos, o bien la mayora de los
microorganismos, requieren para su crecimiento. Los ms importantes son:
agua, dixido de carbono (CO2), fosfatos, sales minerales.
Particulares: Se trata de elementos que pueden ser cubiertos de modo
muy
distinto, dependiendo de las capacidades biosintticas del microorganismo
que
se considere. Concretamente consideraremos los elementos N y S (que
requieren todos los seres vivos).
que probados) y
elimina el
inconveniente de
trabajar a
temperatura
(tornando no
viables bacterias injuriadas), es que poseen una enorme versatilidad para
realizar
ensayos en sitios aislados, en situaciones que requieran gran delicadeza en
el
tratamiento trmico de muestras con bacterias necesitadas de recuperacin
y
varias aplicaciones no habituales en las cuales han mostrado un excelente
desempeo.
Cuando se requiere la realizacin de mltiples lecturas o para evitar
posibles
variaciones entre distintos tcnicos del
laboratorio, 3M ofrece la posibilidad de
utilizar un lector de placas, que proporciona
una lectura y registro consistentes y
automatizados de los resultados de las
Placas 3M Petrifilm (Recuento de Aerobios,
Coliformes, E. coli/Coliformes y Selectivo E.
coli) en tan solo 4 segundos.3. DESARROLLO
El trabajo en laboratorio consiste en preparar diferentes tipos de medios de
cultivo
lquidos, slidos, genricos, selectivos y diferenciales.
3.1. Materiales
Erlenmeyer de 250 cm
3
2. Agregar 250 cm
3
de agua destilada
3. Homogeneizar y disolver con varilla de vidrio
4. Una vez disuelto el medio, distribuirlo en porciones de 10 a 12 ml en
tubos
de ensayo
5. Tapar con tapones de plstico esterilizables, o en su defecto con
torundas
de algodn
6. Esterilizar en autoclave o a vapor fluente segn corresponda. (TP N 2)