BIOTRANSFORMATIONS DES XENOBIOTIQUES Exposition aux xnobiotiques au niveau de : -Tractus respiratoire -Tractus digestif -Peau -Voies parentrales Puis arrive au niveau du compartiment sanguin aprs passage par le systme ADME But : dtoxification /limination des xnobiotiques Lipophilie hydrophilie = limination (/ urines) Moyens :3 phases essentielles : -lipophilie RH 1/fonctionnalisation ex :-OH ROH 2/ conjugaison groupement hydrophile endogne X ex :acide glucuronique -hydrophilie ROX 3/ transport (systme de P* transporteuses) sortie de la cellule limination de lorganisme (urines)
A) REACTION DE PHASE I :FONCTIONNALISATION raction doxydation ,de rduction , dhydrolyse
I- Raction doxydation 1- Les mono-oxygnases greffage dun atome doxygnes sur le substrat 1-1- Mono-oxygnase cytochrome P450 Hmoprotine mise en vidence par spectrophotomtrie absorption = 450 nm compose de : hme (Fe3+) + Protine + cystinate +Site actif de CYP450
CYP450 localisation cellulaire
-Membrane du RE -2 lments indispensables -NADPH cyp450 rductase -PL cyp450 (de la mb du RE) : permet la cohsion entre la Mono-oxygnase et la rductase
CYP 450 cycle catalytique
1- substrat :benzne lipophile se positionne dans le SA de lEnzyme 2- arrive dun lment fournit par la NADPH cyp450 rductase permet rduire latome de fer Fe+ 3- arrive dune m* doxygne complexe [FeOO]+ 4- arrive dun autre lment fournit par NADPH lment rduit [FeOO]+ en [FeOO]+ :forme instable trs ractive qui permet cassure liaison scission vs 2 atomes dO[FeO]3+ :son O se fixe sur le substrat benzne Fe3+
O Parfois ces systmes toxifient le produit initial (ex :poxyde)
CYP450 classification et rpartition
-ubiquitaires -481 isoformes rpertoris (+ de 40 chez lhomme) -classification en familles ,sous familles : homologies de squence des acides amins : -famille :chiffre arabe > 40% dhomologie -sous famille :lettre > 35% -isoforme = chiffre arabe ex :CYP 1A1 et 1A2 ,CYP 2D6 ,CYP 3A4 CYP 450 classification et rpartition
Isoformes impliqus dans le mtabolisme des mdicaments xnobiotiques
Spcificit : -relative :un isoforme va mtaboliser des substrats diffrents ex :aromatiques et thanol (S) -chevauchante :un mme S est mtabolis par plusieurs isoformes ex :paractamol
2- ge -Ftus :3A7 : un seul isoforme qui nexiste pas chez ladulte -Nouveau n :isoformes matures ds la 2me semaine puis ( adulte) ( fragilit de certains enfants vis--vis des xnobiotiques) 3- Pathologies -Cirrhose ,hpatite ,hpatocarcinome -Toute atteinte du foie altre ces biotransformations 4- environnement -Xnobiotiques : -pollution -alimentation -mdicament subissent 2 phnomnes :induction et inhibition variation des ASC (AUCs = aire sous la courbe) lorigine de plus de 50% des interaction mdicamenteuses i) Induction 1 inducteur augmente la capacit mtabolique dun isoforme x30 CYP substance mre mtabolite consquence: clairance mtabolique PA mtabolite inactif Si inducteur : [PA] efficacit thrapeutique -pro drogue PA si inducteur :[PA] surdosage (voir toxicit) -xnobiotiques mtabolites toxiques si inducteur :toxicit exemples : isoformes inductibles :1A 2C8 2E1 3A4 2D6 inducteurs : phnobarbital (2C ,2D6 ,3A) thanol (2 E1) fume de cigarette (1A) mcanismes : transcriptionnel :inducteur transcription de lisoforme synthse de cette Protine post transcriptionnel : dgradation de la Protine processus lent :exposition ritre ii) Inhibition 1 inhibiteur la capacit mtabolique dun isoforme CYP substance mre mtabolite consquence : clairance mtabolique
-PA mtabolite inactif
si inhibiteur : [PA] surdosage (toxicit) mcanisme : inhibition rversible :inhibiteur non mtabolique fixation rversible sur le site actif :comptition inhibiteurs : cimtidine (tous CYP) antifongiques azols (3A) antirtroviraux (3A) ,quinoline (2D6) jus de pamplemousse (3A intestinale) inhibition irrversible : inhibiteur mtabolis son mtabolite inhibe le cytochrome liaison avec le fer ou le N des noyau pyrroles ou lapoprotine complexe stable = substrat suicide altration rversible de lisoforme inhibiteurs : thymyloestradiol (3A4) chloramphnicol (2B 2C) plus dangereux que linhibition rversible Processus rapide :inhibition ds la 1re exposition Exemples : Millepertuis (hypericine) :inducteur CYP3A4 prise chronique cyclosporine , indinavir effet thrapeutique effet immunosuppresseur rejet de greffe jus de pamplemousse :inducteur CYP 3A4 intestinal ds la 1re prise Cisapride (Prepulsid) torsade de pointe (donne au jeunes enfants pour problmes de dyspepsie) tabac :inducteur 1A Clozapine :traitement patient schizophrne forte dose (600 mg) depuis quelques semaines sans rponse clinique : -observance vrifie -dosage plasmatique trs bas -clairance trop leve ? Clozapine mtabolise par 1A2 patient gros fumeur induction 1A2 test la cafine RM paraxanthine /cafine trs lev Clozapinmie (g/ml) RM=0.09 RM=1.8 Fluoxamine inhibiteur 1A2 600mg
500mg
Activit thrapeutique
Clozapine
5- polymorphisme gntique Prsence au sein de la population dau moins 2 variants stables dune mme isoforme capacit mtaboliques diffrentes mcanisme :mutation -substitution ou insertion de base -dltion de base -dfaut dpissage ex :codon stop prmatur Protine tronque inactive en gnral ,2 phnomnes dans la population : mtaboliseurs lents (limites) :2 allles muts mtaboliseurs rapides (extensifs) : 1 ou 2 allles sauvages = distribution bimodale nombre de sujets mtaboliseurs rapides mtaboliseurs lents log rapport mtab = substance mre/mtabolite frquence seuil thrapeutique seuil toxique concentration ltat dquilibre Polymorphisme connu pour :2D6 2C19 2C9 1A 2E1 (3A4 ?) 2D6 :plus de 37 variants connus (gnotypes) distribution trimodale : en + mtaboliseurs ultrarapides amplification du gne x12 1/mtaboliseurs lents :5 10% caucasiens ,africains 1 2% asiatiques 2/mtaboliseurs rapides :93% 3/mtaboliseurs ultrarapides :2% consquence : CYP2D6 :substrats :PA index thrapeutique troit Bta bloquants ,ATD ,neuroleptiques ,opiacs chez les mtaboliseurs lents surdosage ex :dsipramine (ATD ,tricycliques)
mtaboliseurs rapides :t1/2 =17H
mtaboliseurs lents :100H cardiotoxicit 2D6 ex :codine morphine (trs petite quantit en morphine grce 2D6) mtaboliseurs lents :pas deffet analgsique CYP2C19 :pop bimodale mtaboliseurs lents : 3 5% caucasiens 18 23% asiatiques 2C19 ex :proguanil (prodrogue) mtabolite actif antipaluden CYP 2C9 :0.5 CYP450 :identification isoformes impliqus dans la biotransformation -tudes toxicologique :espces animales -interaction Modles in vivo in vitro : Diffrentes espces animales Isoformes spcifiques induites par traitement pralable Identification CYP 450 en utilisant : -foie isol perfus -hpatocyte -microsomes (mb du RE) -cellules gntiquement modifies Identification du polymorphisme gntique phnotypage tests respiratoires /urinaires rapport mtabolique ex :CYP 1A2 :cafine mesure CO2 exhal N dmthylation CYP 1A2 gnotypage :squenage exemple :CYP 1A dans de nombreuses espces (rat ,souris ,chien) 2 membres :CYP1A1 ,CYP 1A2 68% dhomologie substrats : xnobiotiques environnementaux mtabolites K^n hydrocarbures aromatiques polycycliques (NAP) amines aromatiques ,amines htrocycliques
C (11% pop) :ce variant a une activit mtabolique > forme sauvage : 50% activit enzymatique susceptibilit cancer du poumon -induction : inducteurs :MAP (fume de cigarette) ,dioxines ,cafine, omprazole mcanisme transcriptionnel
Hap: substrat et inducteur induisent leur propre toxicit !
dans le rticulum endoplasmique -5 isoformes (50 80% dhomologie) :foie ,poumons ,reins -substrat : oxydation de xnobiotiques sur un htroatome :N ,S ,P ex :amines ,thiols ,phosphates N oxyde ,S oxyde.. minraux
2- Enzymes autres que les mono-oxygnases
2-1- Dshydrognases alcool DH =ADH aldhyde DH=ALDH
a) Substrat: alcools et aldhydes aliphatiques et aromatiques
b) Famille : ADH :6 classes (dimres ,sous unit) classe I :3 isoformes :ADH1 () ,ADH2 () et ADH3 () hpatique alcools aliphatiques de PM faible classe II :peu abondante ,foie () ADH4 alcools aromatiques classe III : foie ,() abondance nette entre I et II alcools aliphatiques de PM lev classe IV (estomac) catalyse aussi oxydation de lthanol classes V et VI ? ALDH (aldhyde DH) :3 isoformes -ALDH 1 et ALDH 3 cytosoliques varit de substrats :ALDH1 hpatique ,ALDH 3 extra hpatique -ALDH2 :mitochondriale activit leve aldhyde aliphatique de faible PM
10
Polymorphisme gntique ADH2 (alcool DH) :3 variants 1 forme sauvage ADH2*1 2 formes atypiques ADH2*2 ,ADH2*3 : activit %ADH
2*1
2*2
2*3
amricains blancs europens blancs asiatiques noirs
>95 >85 15 85
<5 <15 85 0
0 0 0 15
production importante dactaldhyde (si 2 allles muts )
2 formes :A et B foie et SN :raction de dsamination oxydative R-CH2-N-R1R2R-CHO + HNR1R2 + H2O2 cas de toxification quand hrone contenant impuret dgrade neurones Parkinson
2-3- Prostaglandine synthase ou cyclo-oxygnase (Cox)
acide arachidonique PG G2 PG H2 2 activits : oxygnase peroxydase co-oxydation de grande varit de S :B[a]P ,aflatoxines raction dpoxydation ,formation de radicaux libres voie de toxification
II- Raction de rduction
Peu courante Mais CYP450 Fe+ puissant rducteur voie de toxification Exemple : Halothane (gaz anesthsiant)
chez lhomme :13 isoformes dans 2 familles : UGT1 :1 gne avec 16 exons 8 transcrits UGT2 :5 gnes indpendants
3- Substrats :fonction nuclophile :
-OH ,-COOH ,-NH2 ,-NHR ,-SH S endogne :bilirubine ,hormone... Xnobiotique
4- Raction : ->-O ,N ,ou S-glucuronide :polaire urine ou bile
5- Toxification :oui dans quelques cas
hydrolyse du conjugu pH (urines )hydrolyse et rupture liaison vs glu et S glucuronidases bactrienne intestinales (virales) Ar-NOH glucuronide Ar-NHOH Ar-N+ OH- ion nitrnium lectrophile cancer Exemple :amines aromatiques
14
Pb :colorant capillaire contient souvent amine aromatiques cancer de la vessie frquent
lectrophile adduits sur lADN cancer de la vessie
6- Variations : -espces :
chat O rat GUNN :dficient en UGT1 -ge :naissance -environnementales :inductibles :HAP ,phnobarbital ,thanol -polymorphisme gntique NB : bilirubine UGT1 homme :mutation sur UGT1A1 hyperbilirubinmie syndrome de Gilbert et syndrome de crigler Najar (mortel la naissance)
II- Glutathion conjugaison
Voie importante de dtoxification
1- Compos endogne :glutathion = tripeptide
Groupement SH
2- Enzyme: glutathion S transfrase = GST chez lhomme : au moins 5 sous familles :A ,M ,P ,T ,Z (40% dhomologie) >20 isoformes :A1 ,A2 M1 ,M2 cytosol (A,M P T )+ RE (Z) + noyau surtout foie ,reins ,poumon ,intestin pas indispensable la raction
3- Substrat : C lectrophile (plus rarement N ,O ,S ) grande varit de composs environnementaux (carcinognes (ex :benzo[a]pyrne) mdicaments :Paractamol ,anticancreux ,(alkylants)
4- Raction : par le SH nuclophile acide mercapturique polaire
15
5- Toxification : cyclisation ion pisulfonium :lectrophile (liaison potentielle) cyclisation spontane alkylation de Macromolcules rnales
6- Variations: -inductibles :HAP ,phnobarbital... -polymorphisme gntique :M1 ,P1 ,T1 ,M3 GST M1 :3 variants 1 variant = dltion du gne 50% caucasiens gnotype nul (2 allles )associ avec certains cancer (poumon ,vessie chez les fumeurs)
III- sulfconjugaison 1- Composs endogne :SO2H forme active = PAPs
16
2- Enzyme : sulfotransfrase SULT: 16 isoformes chez lhomme rparties en 3 familles (SULT1 ,2 et 3) cytosoliques ,nombreux tissus
5- Toxification instabilit du sulfoconjugu : N hydroxyarylamines CYP450 SULT/ PAPs R-NH-CO-CH3 R-N(OH)-CO-CH3 R-N(OSO3H)CO-CH3
SO3H
ion nitrnium ion carbonium compos lectrophile adduits sur l ADN mutation cancer
6- Variation porc : pas de sulfconjugaison environnementales : polymorphisme gntique SULT1A1
IV- Actyl conjugaison
17
1- Compos endogne :-CO-CH3
forme active = actyl COA
2- Enzyme : N actyl transfrase :NAT cytosolique foie ,intestin ,rein ,poumon chez lhomme :2 isoformes :NAT1 et NAT2 xnobiotiques
3- Substrat : R-NH2 R-NH-NH2 R-SO2-NH2
4- Raction: R-NH2 R-NH-CO-CH3
5- Toxification :ponctuellement
6- Variation : espces :
chien :pas pour amines I
souris :3 isoformes polymorphisme gntique : NAT2 :9 mutation dtectes (1 n formes sauvage) dont 4 ont une activit trs faible :phnotype actyleur lent 50 70% Afrique du nord 50% caucasiens <25% asiatiques exemple :isoniazide
compos hpatotoxique
1% ncrose hpatique 18
actyleurs lents convulsions
corrlation entre le phnotype actyleur lent et certains cancers (vessie ,foie ,poumon/fumeurs ,polluants industriels ,cuisson)
V- Mthyl conjugaison hydrophilie
1- Compos endogne : -CH3 forme active S adnosyl mthionine = SAM ou adoMET mthionyl ATP + mthionine adnosyl AdoMET + ADP + Pi transfrase
2- Enzyme :mthyl transfrase MT
6 isoformes chez lhomme :O- ,N- ,S- mthyl transfrases ex : catchol O mthyl transfrase COMT :O mthylation thiopurine mthyl transfrase TPMT :S mthylation
3- Substrat : phnol ,amine ,thiol ,As (arsenic)
4- Raction :
As3+ acide monomthylarsenic acide cacodylique ou dimthyl arsenic
OH OH O=As-CH3 O=As-CH3 OH CH3 dtoxification de lAs
ex :6 mercaptopurine :leucmies chez lenfant (anticancreux)
raction inhibe chez enfant
sil ny a pas dactivation par TPMT en mthylthiopurine toxicit mdullaire grave par formation de nuclotides
VI conjugaison aux acides amins
1- Compos endogne :AA
2- Enzyme : aminoacide transfrase
3- Substrat : -COOH ,-NH2
4- Raction : conjugaison avec soit COOH soit NH2 conjugu limin par les urines
C) PHASE 3 :TRANSPORT
Etape indispensable la dtoxification
Transport du mtabolite conjugu hydrophile hors de la c* P* transporteuse :MRP multidrug related protein 7recenses :MRP1 ,MRP2
20
Dans tous les tissus
Ex :sur expression corrle avec rsistance aux anticancreux Alfatoxines B1 mycotoxine scrte par un champignon du genre Aspergillus micro-organisme qui contamine les crales ,les arachides et tous les produits drivs exposition par voie alim le + puissant carcinogne connu hpato carcinome zones endmique en Asie et Afrique gros problme de sant publique
Paractamol index thrapeutique large mais quand tentative de suicide stocke de glutathion limit si dose importante dpasse capacit de dtoxification voie toxique hpatolyse fulminante 21
pour traiter lintoxication aigu donner GSH
problme passe mal la membrane administration de cystine (partie active du GSH) N actyl cystine
