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METABOLISMES OU

BIOTRANSFORMATIONS DES
XENOBIOTIQUES
Exposition aux xnobiotiques au niveau de :
-Tractus respiratoire -Tractus digestif
-Peau
-Voies parentrales
Puis arrive au niveau du compartiment sanguin aprs passage par le systme ADME
But : dtoxification /limination des xnobiotiques
Lipophilie hydrophilie = limination (/ urines)
Moyens :3 phases essentielles :
-lipophilie
RH
1/fonctionnalisation ex :-OH
ROH
2/ conjugaison
groupement hydrophile endogne X
ex :acide glucuronique
-hydrophilie ROX
3/ transport (systme de P* transporteuses)
sortie de la cellule limination de lorganisme (urines)

A) REACTION DE PHASE
I :FONCTIONNALISATION
raction doxydation ,de rduction , dhydrolyse

I- Raction doxydation
1- Les mono-oxygnases greffage dun atome doxygnes sur le
substrat
1-1- Mono-oxygnase cytochrome P450
Hmoprotine mise en vidence par spectrophotomtrie
absorption = 450 nm
compose de : hme (Fe3+) + Protine + cystinate
+Site actif de CYP450

CYP450 localisation cellulaire


-Membrane du RE
-2 lments indispensables
-NADPH cyp450 rductase
-PL cyp450 (de la mb du RE) : permet la cohsion entre la Mono-oxygnase et la
rductase

CYP 450 cycle catalytique


1- substrat :benzne lipophile se positionne dans le SA de lEnzyme
2- arrive dun lment fournit par la NADPH cyp450 rductase permet rduire latome
de fer Fe+
3- arrive dune m* doxygne complexe [FeOO]+
4- arrive dun autre lment fournit par NADPH
lment rduit [FeOO]+ en [FeOO]+ :forme instable trs ractive qui permet cassure
liaison
scission vs 2 atomes dO[FeO]3+ :son O se fixe sur le substrat benzne Fe3+

Raction gnrale :
NADPH

NADPH CYP450
rductase oxyde

CYP450
Fe+

NADP

NADPH CYP450
Rductase rduite

CYP450
Fe3+

O2

H2O

RH

ROH

CYP 450 :princinpales ractions doxydation


hydroxylation aliphatique : R-CH2 R-CH2-OH
hydroxylation aromatique : -R OH--R
O-,N-,S-, dsalkylation : R-X-CH2R-X-CH2OHHCHO +R-NH2 (X=N)
R-OH (X=O)
R-SH (X=S)
N-hydroxylation :
-NH2-NHOH
N-oxidation , S-oxidation : R2N R2N->-O
R2SR2S->-O
poxydation : R-CH=CH2R-CH-CH2

O
Parfois ces systmes toxifient le produit initial (ex :poxyde)

CYP450 classification et rpartition


-ubiquitaires
-481 isoformes rpertoris (+ de 40 chez lhomme)
-classification en familles ,sous familles :
homologies de squence des acides amins :
-famille :chiffre arabe
> 40% dhomologie
-sous famille :lettre
> 35%
-isoforme = chiffre arabe
ex :CYP 1A1 et 1A2 ,CYP 2D6 ,CYP 3A4
CYP 450 classification et rpartition

Isoformes impliqus dans le mtabolisme des mdicaments xnobiotiques

Spcificit :
-relative :un isoforme va mtaboliser des substrats diffrents
ex :aromatiques et thanol (S)
-chevauchante :un mme S est mtabolis par plusieurs isoformes
ex :paractamol

Rpartition :
Tissus (cellules spcialises :cellules mtaboliques comptentes) :
-majoritairement voie dentre :
poumons :1A1 2B 3A
Tube Digestif : 3A4/ 3A5 en petite quantit
Foie : 3A
> 30% (3A4 3A5)
2C
20% (2C8 ,2C9, 2C18 ,2C19)
1A2 10 20%
2 E1 10 20%
2D6 5%
Peau
Et aussi placenta, reins, SN.
Foie :surtout voie orale (organes barrire de cette voie)
1er passage

CYP450 variation du mtabolisme


1- espces
-Variations qualitatives (diffrents isoformes) et/ou quantitatives (mme isoformes taux
diffrents)
exemple :Rat 2B1=homme 3A 2D
-Mtabolites ventuellement diffrents extrapolation des tudes ?

2- ge
-Ftus :3A7 : un seul isoforme qui nexiste pas chez ladulte
-Nouveau n :isoformes matures ds la 2me semaine puis ( adulte)
( fragilit de certains enfants vis--vis des xnobiotiques)
3- Pathologies
-Cirrhose ,hpatite ,hpatocarcinome
-Toute atteinte du foie altre ces biotransformations
4- environnement
-Xnobiotiques : -pollution
-alimentation
-mdicament
subissent 2 phnomnes :induction et inhibition
variation des ASC (AUCs = aire sous la courbe)
lorigine de plus de 50% des interaction mdicamenteuses
i)
Induction
1 inducteur augmente la capacit mtabolique dun isoforme x30
CYP
substance mre
mtabolite
consquence: clairance mtabolique
PA mtabolite inactif
Si inducteur : [PA] efficacit thrapeutique
-pro drogue PA
si inducteur :[PA] surdosage (voir toxicit)
-xnobiotiques mtabolites toxiques
si inducteur :toxicit
exemples :
isoformes inductibles :1A 2C8 2E1 3A4 2D6
inducteurs : phnobarbital (2C ,2D6 ,3A)
thanol (2 E1)
fume de cigarette (1A)
mcanismes :
transcriptionnel :inducteur transcription de lisoforme synthse de cette Protine
post transcriptionnel : dgradation de la Protine
processus lent :exposition ritre
ii)
Inhibition
1 inhibiteur la capacit mtabolique dun isoforme
CYP
substance mre
mtabolite
consquence : clairance mtabolique

-PA mtabolite inactif


si inhibiteur : [PA] surdosage (toxicit)
mcanisme :
inhibition rversible :inhibiteur non mtabolique
fixation rversible sur le site actif :comptition
inhibiteurs : cimtidine (tous CYP)
antifongiques azols (3A)
antirtroviraux (3A) ,quinoline (2D6)
jus de pamplemousse (3A intestinale)
inhibition irrversible : inhibiteur mtabolis
son mtabolite inhibe le cytochrome
liaison avec le fer ou le N des noyau pyrroles ou lapoprotine
complexe stable = substrat suicide
altration rversible de lisoforme
inhibiteurs : thymyloestradiol (3A4)
chloramphnicol (2B 2C)
plus dangereux que linhibition rversible
Processus rapide :inhibition ds la 1re exposition
Exemples :
Millepertuis (hypericine) :inducteur CYP3A4
prise chronique
cyclosporine , indinavir effet thrapeutique
effet immunosuppresseur rejet de greffe
jus de pamplemousse :inducteur CYP 3A4 intestinal ds la 1re prise
Cisapride (Prepulsid) torsade de pointe
(donne au jeunes enfants pour problmes de dyspepsie)
tabac :inducteur 1A
Clozapine :traitement patient schizophrne forte dose (600 mg) depuis quelques semaines
sans rponse clinique :
-observance vrifie
-dosage plasmatique trs bas
-clairance trop leve ?
Clozapine mtabolise par 1A2
patient gros fumeur induction 1A2
test la cafine RM paraxanthine /cafine trs lev
Clozapinmie (g/ml)
RM=0.09
RM=1.8
Fluoxamine inhibiteur 1A2
600mg

500mg

Activit thrapeutique

Clozapine

5- polymorphisme gntique
Prsence au sein de la population dau moins 2 variants stables dune mme isoforme
capacit mtaboliques diffrentes
mcanisme :mutation
-substitution ou insertion de base
-dltion de base
-dfaut dpissage
ex :codon stop prmatur Protine tronque inactive
en gnral ,2 phnomnes dans la population :
mtaboliseurs lents (limites) :2 allles muts
mtaboliseurs rapides (extensifs) : 1 ou 2 allles sauvages
= distribution bimodale
nombre de sujets
mtaboliseurs rapides
mtaboliseurs lents
log rapport mtab = substance mre/mtabolite
frquence
seuil thrapeutique
seuil toxique
concentration ltat dquilibre
Polymorphisme connu pour :2D6 2C19 2C9 1A 2E1 (3A4 ?)
2D6 :plus de 37 variants connus (gnotypes)
distribution trimodale :
en + mtaboliseurs ultrarapides amplification du gne x12
1/mtaboliseurs lents :5 10% caucasiens ,africains
1 2% asiatiques
2/mtaboliseurs rapides :93%
3/mtaboliseurs ultrarapides :2%
consquence :
CYP2D6 :substrats :PA index thrapeutique troit
Bta bloquants ,ATD ,neuroleptiques ,opiacs
chez les mtaboliseurs lents surdosage
ex :dsipramine (ATD ,tricycliques)

mtaboliseurs rapides :t1/2 =17H


mtaboliseurs lents :100H cardiotoxicit
2D6
ex :codine
morphine (trs petite quantit en morphine grce 2D6)
mtaboliseurs lents :pas deffet analgsique
CYP2C19 :pop bimodale
mtaboliseurs lents : 3 5% caucasiens
18 23% asiatiques
2C19
ex :proguanil (prodrogue)
mtabolite actif
antipaluden
CYP 2C9 :0.5
CYP450 :identification
isoformes impliqus dans la biotransformation
-tudes toxicologique :espces animales
-interaction
Modles in vivo in vitro :
Diffrentes espces animales
Isoformes spcifiques induites par traitement pralable
Identification CYP 450 en utilisant :
-foie isol perfus
-hpatocyte
-microsomes (mb du RE)
-cellules gntiquement modifies
Identification du polymorphisme gntique
phnotypage
tests respiratoires /urinaires rapport mtabolique
ex :CYP 1A2 :cafine
mesure CO2 exhal
N dmthylation CYP 1A2
gnotypage :squenage
exemple :CYP 1A
dans de nombreuses espces (rat ,souris ,chien)
2 membres :CYP1A1 ,CYP 1A2 68% dhomologie
substrats :
xnobiotiques environnementaux mtabolites K^n
hydrocarbures aromatiques polycycliques (NAP)
amines aromatiques ,amines htrocycliques

aflatoxines
mdicaments :cafine ,thophylline ,olanzapine ,imipramine
CYP 1A1 :surtout extra hpatique (poumon ,placenta ,peau .. ;)
-exemple de substrat :Benzo(a) Pyrne (MAP)
Benzo[a]pyrne

CYP1A1

7,8poxyde

-polymorphisme gntique sur 1A1 :3 gnotypes ABC


C (11% pop) :ce variant a une activit mtabolique > forme sauvage : 50% activit
enzymatique susceptibilit cancer du poumon
-induction :
inducteurs :MAP (fume de cigarette) ,dioxines ,cafine, omprazole
mcanisme transcriptionnel

Hap: substrat et inducteur induisent leur propre toxicit !


CYP 1A2 :hpatique
-expression :grande variabilit interindividuelle
-inductible :rgulation mal connue

1-2- Mono-oxygnase Flavines


dans le rticulum endoplasmique
-5 isoformes (50 80% dhomologie) :foie ,poumons ,reins
-substrat :
oxydation de xnobiotiques sur un htroatome :N ,S ,P
ex :amines ,thiols ,phosphates N oxyde ,S oxyde..
minraux

2- Enzymes autres que les mono-oxygnases


2-1- Dshydrognases
alcool DH =ADH
aldhyde DH=ALDH

a) Substrat:
alcools et aldhydes aliphatiques et aromatiques

b) Famille :
ADH :6 classes (dimres ,sous unit)
classe I :3 isoformes :ADH1 () ,ADH2 () et ADH3 () hpatique
alcools aliphatiques de PM faible
classe II :peu abondante ,foie () ADH4
alcools aromatiques
classe III : foie ,() abondance nette entre I et II
alcools aliphatiques de PM lev
classe IV (estomac)
catalyse aussi oxydation de lthanol
classes V et VI ?
ALDH (aldhyde DH) :3 isoformes
-ALDH 1 et ALDH 3 cytosoliques varit de substrats :ALDH1 hpatique ,ALDH 3
extra hpatique
-ALDH2 :mitochondriale activit leve aldhyde aliphatique de faible PM

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Polymorphisme gntique
ADH2 (alcool DH) :3 variants
1 forme sauvage
ADH2*1
2 formes atypiques ADH2*2 ,ADH2*3 : activit
%ADH

2*1

2*2

2*3

amricains blancs
europens blancs
asiatiques
noirs

>95
>85
15
85

<5
<15
85
0

0
0
0
15

production importante dactaldhyde (si 2 allles muts )


ALDH2 : 2 variants
1 formes sauvage
ALDH2*1
1 forme atypique
ALDH2*2 inactive
ALDH2*2
10 50 % asiatiques
40% indiens dAmrique
0% caucasiens
accumulation dactaldhyde (si 2 allles muts)
polymorphisme sur ADH et/ou ALDH
Flushing syndrome =raction dintolrance =effet antabuse
Consquence clinique dune accumulation dactaldhyde
vasodilatation (rougeur) tachycardie sueur nause vomissement intolrance alcool
protection contre alcoolisme (ALDH2*2)

2-2- Monoamine oxydases


2 formes :A et B
foie et SN :raction de dsamination oxydative
R-CH2-N-R1R2R-CHO + HNR1R2 + H2O2
cas de toxification quand hrone contenant impuret dgrade neurones Parkinson

2-3- Prostaglandine synthase ou cyclo-oxygnase (Cox)


acide arachidonique PG G2 PG H2
2 activits : oxygnase
peroxydase co-oxydation de grande varit de S :B[a]P ,aflatoxines
raction dpoxydation ,formation de radicaux libres
voie de toxification

II- Raction de rduction


Peu courante
Mais CYP450 Fe+ puissant rducteur voie de toxification
Exemple : Halothane (gaz anesthsiant)

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III- Raction dhydrolyse


Estrases ,amidases ,peptidases
poxyde hydroxylase
substrat :poxyde ,arne oxydes
voie de dtoxification
raction :trans-addition deau dihydrodiol

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5 classes :
-mEH (microsomale ) xnobiotique
-autres :substrats endognes
mEH :faiblement inductible (phnobarbital ,HAP) x10
inhibiteurs :acide valproque (DEPAKINE) hydrocarbure aromatique polycyclique
antipileptique
polymorphisme gntique

B) REACTION DE PHASE II :
CONJUGAISON
RH

2 R-OX

conjugaison avec un compos endogne


formation dun compos polaire
6 ractions :
-glucuroconjugaison
-glutathion
-actylconjugaison
-sulfconjugaison
-mthylconjugaison
-conjugaison aux acides amins
1

R-OH

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I- Glucuroconjugaison
Voie principale

1- Compos endogne :
acide glucuronique

forme active :UDP GA acide uridine (diphosphate D glucuronique)

2- Enzyme :
uridine diphosphoglucuronyl transfrase :UGT

surtout :foie ,intestin ,rein


chez lhomme :13 isoformes dans 2 familles :
UGT1 :1 gne avec 16 exons 8 transcrits
UGT2 :5 gnes indpendants

3- Substrats :fonction nuclophile :


-OH ,-COOH ,-NH2 ,-NHR ,-SH
S endogne :bilirubine ,hormone...
Xnobiotique

4- Raction :
->-O ,N ,ou S-glucuronide :polaire urine ou bile

5- Toxification :oui dans quelques cas


hydrolyse du conjugu
pH (urines )hydrolyse et rupture liaison vs glu et S
glucuronidases bactrienne intestinales (virales)
Ar-NOH glucuronide Ar-NHOH Ar-N+ OH- ion nitrnium lectrophile cancer
Exemple :amines aromatiques

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Pb :colorant capillaire contient souvent amine aromatiques cancer de la vessie frquent


lectrophile adduits sur lADN cancer de la vessie

6- Variations :
-espces :

chat O
rat GUNN :dficient en UGT1
-ge :naissance
-environnementales :inductibles :HAP ,phnobarbital ,thanol
-polymorphisme gntique
NB : bilirubine UGT1
homme :mutation sur UGT1A1 hyperbilirubinmie
syndrome de Gilbert et syndrome de crigler Najar (mortel la naissance)

II- Glutathion conjugaison


Voie importante de dtoxification

1- Compos endogne :glutathion = tripeptide


Groupement SH

2- Enzyme:
glutathion S transfrase = GST
chez lhomme :
au moins 5 sous familles :A ,M ,P ,T ,Z (40% dhomologie)
>20 isoformes :A1 ,A2 M1 ,M2
cytosol (A,M P T )+ RE (Z) + noyau
surtout foie ,reins ,poumon ,intestin
pas indispensable la raction

3- Substrat :
C lectrophile (plus rarement N ,O ,S )
grande varit de composs environnementaux (carcinognes (ex :benzo[a]pyrne)
mdicaments :Paractamol ,anticancreux ,(alkylants)

4- Raction :
par le SH nuclophile acide mercapturique polaire

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5- Toxification :
cyclisation ion pisulfonium :lectrophile (liaison potentielle)
cyclisation spontane
alkylation de Macromolcules rnales

6- Variations:
-inductibles :HAP ,phnobarbital...
-polymorphisme gntique :M1 ,P1 ,T1 ,M3
GST M1 :3 variants
1 variant = dltion du gne 50% caucasiens
gnotype nul (2 allles )associ avec certains cancer (poumon ,vessie chez les fumeurs)

III- sulfconjugaison
1- Composs endogne :SO2H
forme active = PAPs

16

2- Enzyme :
sulfotransfrase SULT:
16 isoformes chez lhomme rparties en 3 familles (SULT1 ,2 et 3)
cytosoliques ,nombreux tissus

3- Substrat :
-OH ,- COOH ,-NH2 ,NHR ,SH
SULT1phnols
SULT2alcools
SULT3amines

4- Raction :

Exemple : -OH -OSO3H

5- Toxification
instabilit du sulfoconjugu : N hydroxyarylamines
CYP450
SULT/ PAPs
R-NH-CO-CH3
R-N(OH)-CO-CH3
R-N(OSO3H)CO-CH3

SO3H

ion nitrnium
ion carbonium
compos lectrophile adduits sur l ADN mutation cancer

6- Variation
porc : pas de sulfconjugaison
environnementales : polymorphisme gntique SULT1A1

IV- Actyl conjugaison

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1- Compos endogne :-CO-CH3


forme active = actyl COA

2- Enzyme :
N actyl transfrase :NAT
cytosolique
foie ,intestin ,rein ,poumon
chez lhomme :2 isoformes :NAT1 et NAT2 xnobiotiques

3- Substrat :
R-NH2
R-NH-NH2
R-SO2-NH2

4- Raction:
R-NH2 R-NH-CO-CH3

5- Toxification :ponctuellement

6- Variation :
espces :

chien :pas pour amines I


souris :3 isoformes
polymorphisme gntique :
NAT2 :9 mutation dtectes (1 n formes sauvage) dont 4 ont une activit trs
faible :phnotype actyleur lent
50 70% Afrique du nord
50% caucasiens
<25% asiatiques
exemple :isoniazide

compos hpatotoxique

1% ncrose hpatique
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actyleurs lents convulsions


corrlation entre le phnotype actyleur lent et certains cancers (vessie ,foie
,poumon/fumeurs ,polluants industriels ,cuisson)

V- Mthyl conjugaison
hydrophilie

1- Compos endogne :
-CH3
forme active S adnosyl mthionine = SAM ou adoMET
mthionyl
ATP + mthionine adnosyl
AdoMET + ADP + Pi
transfrase

2- Enzyme :mthyl transfrase MT


6 isoformes chez lhomme :O- ,N- ,S- mthyl transfrases
ex : catchol O mthyl transfrase COMT :O mthylation
thiopurine mthyl transfrase TPMT :S mthylation

3- Substrat :
phnol ,amine ,thiol ,As (arsenic)

4- Raction :

As3+ acide monomthylarsenic acide cacodylique ou dimthyl arsenic


OH
OH
O=As-CH3
O=As-CH3
OH
CH3
dtoxification de lAs

5- Variations :
polymorphisme sur TMPT
caucasiens : 11% mthyleurs lents
1 personne/300 :activit nulle

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ex :6 mercaptopurine :leucmies chez lenfant (anticancreux)

raction inhibe chez enfant


sil ny a pas dactivation par TPMT en mthylthiopurine
toxicit mdullaire grave par formation de nuclotides

VI conjugaison aux acides amins


1- Compos endogne :AA

2- Enzyme :
aminoacide transfrase

3- Substrat :
-COOH ,-NH2

4- Raction :
conjugaison avec soit COOH soit NH2 conjugu limin par les urines

C) PHASE 3 :TRANSPORT

Etape indispensable la dtoxification


Transport du mtabolite conjugu hydrophile hors de la c*
P* transporteuse :MRP multidrug related protein
7recenses :MRP1 ,MRP2

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Dans tous les tissus


Ex :sur expression corrle avec rsistance aux anticancreux
Alfatoxines B1
mycotoxine scrte par un champignon du genre Aspergillus
micro-organisme qui contamine les crales ,les arachides et tous les produits drivs
exposition par voie alim
le + puissant carcinogne connu hpato carcinome
zones endmique en Asie et Afrique
gros problme de sant publique

Paractamol
index thrapeutique large
mais quand tentative de suicide
stocke de glutathion limit
si dose importante dpasse capacit de dtoxification
voie toxique hpatolyse fulminante
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pour traiter lintoxication aigu donner GSH


problme passe mal la membrane administration de cystine (partie active du GSH)
N actyl cystine

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