UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS Y FARMACIA

ESCUELA DE QUMICA BIOLGICA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA
Juan Carlos Gutierres Fuentes
Daimer Alejandro Flores Espaa
Stephany Elizabeth Waight Albizurez
Andrea Marin Castellanos Moreira

200817185
200918010
201113520
201119658

Seccin de laboratorio: B

PRCTICA No. 10
RECUENTOS MICROBIANOS DEL SUELO
INTRODUCCIN
El suelo es considerado un espacio heterogneo definido por sus propiedades
fsicas, qumicas y biolgicas, que bajo condiciones naturales tiende a
desarrollar un equilibrio dinmico entre sus diferentes atributos, lo que genera
las condiciones adecuadas para una diversidad de organismos transformadores
y descomponedores de sustratos. En general, se considera que la microbiota
del suelo, conformada por miles y millones de bacterias, actinomicetos,
hongos, protozoos, etc., por gramo de suelo; que juegan un papel importante
en los procesos biogeoqumicos de la materia del suelo como: la fertilidad,
reciclaje de nutrientes, evolucin, estructura y conservacin del mismo (Reyes
y Valery, 2007).
En la presenta prctica se utiliz la tcnica de recuento en placa para
determinar el nmero de las bacterias, los actinomicetos y los hongos del
suelo, utilizando diluciones en serie y medios selectivos para cada grupo de los
microorganismos. Para la identificacin se emplearon tinciones de cultivos
puros y en lmina. Los resultados obtenidos fueron 3 cepas para bacterias
identificndose como Bacillus sp. y Corynebacterium sp.; 4 cepas de
actinomicetos pertenecientes al gnero Estreptomices; y 3 cepas de hongos
identificndose una de ella como Paceilomyces sp.

DIAGRAMA DE FLUJO

TOMA DE
MUESTRA
Realizar
diluciones:
Agitar
1:100;
30 min1:1,000;
1:10,000;
1:100,000;
1:1,000,000;

25g de suelo
225ml H2O dest.
(1:10)

BACTERIAS
Sembrar en Agar
Tripticasa: 1:10,000
1:10,000,000

24h

o
37Observar
C
crecimiento, realizar
conteo y tincin de
Gram
o

Confirmar
crecimiento con
tincin de Gram

Identificacin:
Mx 1 y 2 Bacillus sp.
Mx 3 Corynebacterium sp.

72h
Resembrar en
tubo con
Tripticasa Soya

Aislar en agar
Tripticasa Soya
37
Realizar tincin de
Gram y verde
malaquina

ACTINOS
Sembrar en Agar
Glicerol Extracto
Levadura: 1:1,000
1:1,000,000

37 oObservar
C
24h
crecimiento y
realizar conteo

Aislar en Agar
Glicerol
37

48h
Cultivo en
lmina

37 oC
Identificacin:
Mx 1, 2 y 3 Estreptomices sp.
37oC
Mx 4 tipo Hirsuto

Aislamiento en
Agar Glicerol por
contaminacin en
paso anterior

48h

Tincin de
48h Gram
Tincin de
Gram

HONGOS

Sembrar en Agar Sabouraud

+ cido tartrico:
1:1,000 1:100,000

Observar
27 oC
crecimiento
y
72h
realizar conteo
o

Aislar en Agar
Sabouraud y
resembrar en tubo
27

72h

Cultivo en
lmina
27oC 72h
Identificacin:
Mx 3 Pacecilomyces sp.

Tincin de
azul de
lactonefol

RESULTADOS
Tabla 1. Nmero de colonias por placa.
Organismo
s
Bacterias

#
Colonia/Plac
a
22

Dilucin

1:10,000,0
00
1:100,000

Tiempo

72 horas

Actinomice 32
48 horas
tos
Hongos
3
1:100,000
72 horas
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Microbiologa de
sistemas naturales en el edificio T12, Facultad de Ciencias
Qumicas y
Farmacia.
Se presenta el nmero de colonias que crecieron en los medios selectivos para
bacterias, actinomicetos y hongos, tambin se indica el tiempo de incubacin.
Tabla 2. Aislamiento de bacterias a partir de una muestra de suelo.
N
o
1

Tipo

Macroscpico

Gram

Dilucin

Redonda borde
irregular, grande,
blanca, opaca,
aterciopelada y
plana.
Redonda, grande,
aterciopelada, plana,
opaca y
transparente.
Redonda borde
regular, grande,
blanca, cremosa y
convexa.
Redonda borde
regular, grande,
opaca, creomosa y
convexa.
Redonda borde
regular, pequea,

Bacilos gram
positivos
esporoformadore
s.

Colonia
pura

Dilucin

Colonia
pura

Dilucin

Bacilos gram
positivos.

Bacilos gram
positivos
esporoformadore
s.
Bacilos gram
positivos en
cadena.
Bacilos gram
positivos

Verde
Malaquita

Identificacin
Bacillus sp.

Esporas de
color verde
dentro del
bacilo.
Bacillus sp.

Esporas de
color verde
dentro del
bacilo.
Corynebacteriu
m sp.

cremosa, brillante y
convexa.
Redonda borde
regular, mediana,
cremosa, opaca,
elevacin cnica.

delgados y
lanceolados.
Colonia
Bacilos gram
Sin presencia
pura
positivos
de esporas.
delgados,
lanceolados,
distribucin en
palizada.
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Microbiologa de
sistemas naturales en el edificio T12, Facultad de Ciencias
Qumicas y
Farmacia.
La tabla anterior se muestra el aislamiento de bacterias de la muestra de
suelo, se anot las caractersticas macroscpicas, tambin se describe su
morfologa vista en la tincin Gram y la observacin especialmente de esporas
en verde malaquita, lo que permiti identificar a los gneros de las bacterias,
pero no a su especie.
Tabla 3. Aislamiento de actinomicetos a partir de una muestra de suelo.
N
o

Macroscpico
Descripcin de
colonias
Redonda borde
regular 1mm*,
dura, opaca y
convexa.

Gram
Colonia pura
Bacilos gram
positivos
filamentosos.

Estreptomices

Redonda borde
regular 1.5mm,
dura, opaca y
convexa.

Bacilos gram
positivos
filamentosos,
delgado y muy
segmentado.

Estreptomices

Redonda 0.5mm,
blanca, convexa,
opaca y dura.

Bacilos gram
positivos
filamentosos.

Estreptomices

Redonda 0.3mm,
color marrn y
convexa.

Bacilos gram
positivos
filamentosos.

Estreptomices
hirsuto
(filamentos
rectos)

*mm= milmetros

Identificacin

Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Microbiologa de

sistemas naturales en el edificio T12, Facultad de Ciencias
Qumicas y
Farmacia.
En la tabla anterior se describe las colonias desarrolladas en agar glicerol
extracto de levadura para el aislamiento de actinomicetos en los cuales se
identific principalmente a Estreptomices y una de ellos present forma de
hirsuto.
Tabla 4. Aislamiento de hongos a partir de una muestra de suelo.
N
o
1

Macroscpico de Colonia
pura
Color anverso cafe con
bordes blancos. Borde
irregular, aterciopelada, color
reverso blanco

Azul de lactofenol de Cultivo

en lmina
Hifas hialinas, septadas con
clamidiosporas intermedias y
terminales.

Identificacin

Color anverso blanco, bordes

irregulares, algodonosas,
color reverso blanco,
abundante micelio areo.

Hifas hialinas sin septos.

No se observ
debido a la
contaminacin

Desconocido

Color anverso blanca,

Hifas hialinas septada.
Paecilomyces
algodonoso, convexa, bordes
sp.
irregulares
Fuente: Datos experimentales obtenidos en el laboratorio de Microbiologa de
sistemas naturales en el edificio T12, Facultad de Ciencias
Qumicas y
Farmacia.
En la tabla anterior se describe el crecimiento de la muestra de suelo en agar
Sabouroud, para el aislamiento e identificacin de hongos del suelo analizado,
se logr identificar a Paecilomyces sp. y otra muestra se encontr contaminada
con caros.
DISCUSIN
Los Hongos toleran mejor la acidez que los actinomicetos, por lo general casi
siempre predominan en los suelos forestales (Forbes, 2009) debido que
presentan ser ms cidos, en el laboratorio se obtuvo poco aislamiento de
hongos de siembra en agar saburoaud ya que se asilaron tres cepas, mientras
que para actinomicetos se asilaron cuatro cepas y para bacterias el aislamiento
total fue de tres bacterias. Por lo tanto se podra considerar que el suelo de
donde se asilaron dichos microorganismos tena una mayor tendencia a ser un
suelo alcalino.

Los actinomicetos por lo general prefieren los suelos alcalinos, tambin se ven
favorecidas por la abundancia de calcio y como ya se mencion por un pH
alcalino pero tambin por un pH casi neutro (Forbes, 2009), los actinomicetos
suelen ser abundantes en suelos de praderas, el suelo alcalino tambin
favorece el crecimiento de bacterias, la proporcin de bacterias en
comparacin con la de los actinomicetos ser mayor aunque se conoce que
tanto bacterias como actinomicetos desarrollan actividades semejantes con la
diferencia que los actinomicetos con frecuencia los realizan a velocidades
inferiores, cabe mencionar que algunos de los actinomicetos del suelo pueden
producir sustancias que inhiben el crecimiento bacteriano como la
Estreptomicina (Forbes, 2009).
Los gneros de Estreptomices, Frankia, Actinomyces y Nocardia a menudo se
denominan de modo informal como actinomicetos, debido a que tienen una
forma de crecimiento radiado o similar a una estrella a causa de sus filamentos
ramificados (Tortora, 2007). El crecimiento de colonias de actinomicetos en
agar glicerol extracto de levadura por lo general presentan las caractersticas
de una apariencia seca y muy adherida al medio de cultivo (apariencia de
hundidas en el agar) (Forbes, 2009), en el laboratorio se aislaron cuatro
colonias que presentaron dichas caractersticas incluyendo ser de bordes
regulares, opacas, duras, convexa, lisas o cerosas, sin color a excepcin del
actinomiceto identificado con el nmero cuatro el cual present un color
marrn y de un tamao menor al resto de aproximadamente 0.3mm. El mayor
porcentaje reportado de actinomicetos encontrados en el suelo es
predominantemente Estreptomices lo que concuerda con los hallazgos en el
laboratorio ya que los actinomicetos aislados resultaron ser Estreptomices,
segn la literatura stos se observan en la tincin Gram en forma de
ramificaciones extensas con cadenas y esporas lo cuales no se fragmentan con
facilidad, en la tincin de Gram vista al microscopio se observ bacilos gram
positivos y filamentosas, en la tincin con azul de lactofenol se observ
crecimiento de micelio vegetativo altamente ramificado, presencia de conidios
en los extremos de los conidiforos que a su vez se encuentran al final de los
filamentos areos (Salazar, 2013), por lo general se observan terminaciones en
espiral, sin embargo el actinomices aislado nmero cuatro present una
terminacin denominada Hirsuto es decir con terminaciones rectas o en forma
de cepillo.
CONCLUSIONES

REFERENCIAS

Reyes, I., y Valery, A. (2007). Efecto de la fertilidad del suelo sobre la

microbiota y la promocin del crecimiento del maz con Azotobacter spp.,
Bioagro, 19 (3).
ANEXOS