UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

INGENIERA AGROINDUSTRIAL

PROYECTO DE TESIS
Efecto de la temperatura y de la concentracin del solvente en el rendimiento del
extracto tnico de la semilla y vaina de Ponciana (Delonix regia)

AUTOR:

Jorge Luis Junior Rodrguez Snchez

ASESOR:

M. Sc. Ing. Jess Alexander Snchez Gonzlez

TRUJILLO PER

2014

PROYECTO DE INVESTIGACIN
TTULO: Efecto de la temperatura y de la concentracin del solvente en el
rendimiento del extracto tnico de la semilla y vaina de Ponciana (Delonix
regia)

1. PERSONAL INVESTIGADOR:
I.1. Nombres y Apellidos :

Rodrguez Snchez, Jorge Luis Junior

I.2. Departamento

Ciencias Agroindustriales

I.3. Facultad

Ciencias Agropecuarias

I.4. Categora

Ex alumno

I.5. Nmero de Matrcula :

022400708

2. ASESOR:
2.1. Nombres y Apellidos :

M. Sc. Ing. Jess Alexander Snchez Gonzlez

2.2. Facultad

Ciencias Agropecuarias

2.3. Escuela

Ingeniera Agroindustrial

3. TIPO DE INVESTIGACIN:
3.1. De acuerdo a la orientacin

3.2. De acuerdo a la tcnica de contrastacin :

4. REGIMEN DE INVESTIGACIN

Aplicada
Experimental
Libre

5. INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO:

Escuela de Ingeniera Agroindustrial de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la
Universidad Nacional de Trujillo.
6. LOCALIDAD E INSTITUCIN DONDE SE EJECUTAR EL PROYECTO:
6.1. Institucin

Universidad Nacional de Trujillo

6.2. Ubicacin

Ciudad Universitaria Av. Juan Pablo II s/n, Trujillo, Per.

7. CRONOGRAMA DE EJECUCIN DEL PROYECTO:

ETAPAS
1
X

Bsqueda y revisin bibliogrfica

Formulacin y sustentacin del proyecto

2
X

Pruebas experimentales

MESES
4
5

Evaluacin e interpretacin de resultados

X
X

Redaccin y correccin del informe

Presentacin y sustentacin
8. DURACIN

X
:

8 meses

FECHA DE INICIO

17 de Noviembre del 2014

FECHA DE TRMINO

15 de Junio del 2015

9. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:

a. Semanas

34 semanas

b. Horas/Semanas :

12 horas

c. Total de horas

510 horas

10. RECURSOS
10.1.

Personal:

Autor

Br. Rodrguez Snchez Jorge Luis Junior

Asesor

M. Sc. Ing. Jess Alexander Snchez Gonzlez

10.2.

Locales:

Laboratorio

Microbiologa

Biotecnologa

de

los

Productos

Agroindustriales de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la

Universidad Nacional de Trujillo.

10.3.

Materiales y Equipos:
Materiales
Materiales Biolgicos

Semillas de ponciana (Delonix regia) de aspecto liso y leoso, de color

castao claro a oscuro.

Vainas de ponciana (Delonix regia) maduras leosas, de color castao

oscuro.

Material de vidrio

Baln fondo plano

Bureta graduada de 100 mL

Condensador

Frascos de vidrio mbar 25 mL

Matraz de Erlenmeyer de 250 mL y 500 mL

Probetas graduadas de 500 mL y 1000 mL

Termmetro de mercurio (-10 C hasta 150C)

Termmetro digital

Tubos de ensayo

Varilla de agitacin

Vaso de precipitados de 250 mL y 500 mL.

Materiales Qumicos

cido clorhdrico 10 M

cido clorhdrico concentrado

cido glico

Agua destilada des ionizada

Alcohol rectificado 96 %

Carbonato de sodio

Catequina en polvo

Cloruro frrico al 10% p/v

Cloruro de sodio (NaCl)

Formaldehdo al 37 %

Gelatina al 1 %

ndigo carmn

Metanol

Permanganato de potasio 0.1 N

Solucin de Folin Phenol Ciolcateu.

Vainillina en polvo

Otros materiales

Bolsas con cierre hermtico Whirlpack

Bolsas Polietileno de 11 x 16 x 4

Cuaderno de apuntes

Cubeta estril

Etiquetas adhesivas

Materiales de escritorio

Placas de aluminio para secado y pesado

Recipientes plsticos

Software STATISTICA 7.0

Tapn de jebe

Tijeras

Equipos

Balanza analtica electrnica SARTORIUS

Bao mara

Bomba de vaco 0.5 HP

Espectrofotmetro JENWAY-640 UV/VIS

Estufa de Laboratorio MEMMER

Hornilla elctrica

Molino semi - industrial

Mufla marca Batnstead/thermolyne

Refrigeradora Electrolux
Sistema mecnico de agitacin.

11. PRESUPUESTO:

tem

Unidad

a Material de Oficina y Escritorio

Lapiceros
Unidad
Cuaderno de apuntes
Unidad
Marcador indeleble
Unidad
Tijeras
Unidad
Folder
Unidad
Subtotal
b Experimentacin
Materia Prima
Vaina entera de Ponciana
Unidad
Insumos y Reactivos
cido clorhdrico 10 M
L
Agua destilada.
L
Cloruro de sodio
Frasco
Cloruro Frrico
Frasco
Etanol al 96 %
L
Formaldehdo al 37 %
Frasco
Gelatina
Kg.
ndigo carmn
Frasco
Permanganato de potasio 0.1 N
L
Metanol
Frasco
cido catequico (catequenina)
Frasco
cido tnico
Frasco
Subtotal
c Pasajes y gastos de transporte
Pasaje interno
Psje.
Pasaje interprovincial
Psje.
Subtotal
d Otros servicios y materiales
Bolsas con cierro hermtico
Unidad
Frascos de vidrio mbar 250 mL
Unidad
Copias
Unidad
Impresiones
Unidad

Cantidad

Costo
Unitario
(S/.)

Costo
Total
(S/.)

2
1
2
1
2

1.00
2.00
1.60
1.50
0.50

2.00
2.00
3.20
1.50
1.00
9.70

100

0.10

10.00

0.6
12
1
1
4
1
1
1
0.6
1
1
1

210.00
1.50
39.76
160.00
8.00
138.32
5.48
136.29
110.00
100.00
100.00
180.00

126.00
18.00
39.76
160.00
32.00
138.32
5.48
136.29
66.00
100.00
100.00
180.00
1031.84

2
34

40.00
1.00

80.00
34.00
114.00

50
30
40
300

0.20
0.50
0.05
0.10

10.00
15.00
2.00
30.00

Hojas
Cartucho
Tinta
Anillado

Millar
Unidad
Unidad
Subtotal
Total

1/2
1
1
6

23.00
55.00
47.00
2.00

11.50
55.00
47.00
12.00
182.50
1337.40

12. FINANCIAMIENTO:
Propio.
PLAN DE INVESTIGACIN
I.

ANTECEDENTES
Los taninos vegetales han adquirido gran importancia a travs de los aos
conforme se ha profundizado en su investigacin y encontrado aplicaciones tan
variadas. lvarez y Lock (1992) mencionan que en el Per se han encontrado
diferentes especies nativas de semillas y frutos forestales como fuentes
potenciales de taninos, entre las cuales podemos mencionar: Caesalpinia
spinosa (Tara), Caelsapinia Paipai (charn), y la Punica granatum (granada).
Marquz y Surez (2008), resaltan como principal atributo en las leguminosas
forrajeras tropicales sus altas concentraciones en taninos los cuales presentan
alta afinidad frente a las protenas, carbohidratos y otros constituyentes en las
plantas. As mismo, por su alto contenido de protenas han sido sugeridas como
recursos promisorios para contrarrestar las deficiencias nutricionales que
caracterizan los forrajes de los pases tropicales, siendo fuentes importantes para
el ganado rumiante en pocas de escasez, debido a su adaptabilidad a diferentes
suelos y rpido crecimiento. Entre ellas se encuentra la Delonix regia (Roa y
Muoz, 2012) cuya elevada produccin de hojas y vainas la convierte en una
alternativa forrajera para dichos periodos.
Campos (2010), realiz un estudio para identificar los factores que afectan la
extraccin de taninos hidrolizables en vainas y semillas de tara (Caesalpinia
spinosa) en polvo obteniendo, segn el mtodo de Superficie de Respuesta, la
mxima cantidad de taninos hidrolizables de tara fue 473.4 mg cido glico/g
bajo las siguientes condiciones: solvente: agua; pH de extraccin: 3.5; relacin
materia prima solvente: 1/60; temperatura: 57.9 C; y tiempo: 0.58 h. As mismo
determin que el pH y la relacin materia prima/solvente no influyen de forma

significativa (p < 0.05). Sin embargo el solvente presenta una influencia

significativa, siendo el mejor solvente de extraccin la acetona al 80%, seguido
del agua destilada, el etanol 80% y finalmente el metanol 80%.
Cortez (2012) realiz una investigacin para obtener extracto tnico y glico, a
escala laboratorio, a partir de harina de la vaina del Guarango (Caesalpinia
spinosa (Mol) O. Kuntz). Utilizando como mtodo de extraccin la maceracin
dinmica, y obteniendo como variables ptimas del proceso de extraccin de
taninos: solvente de extraccin: agua destilada; relacin materia prima/solvente:
55 g y 220 mL; pH: 3.05; tiempo de extraccin: 60 min; temperatura: 18 20
C; y mtodo de extraccin: una sola etapa. En el caso de la variable ptima del
proceso de obtencin de extracto glico fue: tipo de hidrlisis cida bsica a
concentracin 2N, por el lapso de 20 horas.
Avils et al (2010) en su estudio determinaron las propiedades fisicoqumicas
(actividad antioxidante, polifenoles totales y contenido de taninos) de extractos
obtenidos por maceracin esttica y soxhlet, de distintas muestras de vaina de
tara (Caesalpinia spinosa). Determin como mejor mtodo de extraccin a la
maceracin bajo las siguientes variables ptimas de relacin, solvente/soluto:
1/10; tiempo: 2 semanas; tipo de solvente: hidroalcohlico (1:1); tipo de
muestra: polvo de vaina de tara; obteniendo un contenido de 54.56% en taninos
totales, con un 47.28% de taninos hidrolizables y 7.28% de taninos condensados.
Mustapha et al (2012) en su estudio sobre el rendimiento de extracto tnico de
cscara de Parkia (Parkia clappertoniana keay), determin mediante el mtodo
de maceracin dinmica un rendimiento de 78% de extracto tnico bajo los
siguientes parmetros, relacin solvente/soluto: 1/20; tiempo: 90 a 120 min;
temperatura: 70 C; tipo de solvente: agua destilada; tamao de partcula: 0.25
mm. Del mismo modo determin que el incremento del tamao de las partculas
reduce el rendimiento de extraccin debido a que a menor tamao de partcula es
ms grande el rea de superficie en contacto con el disolvente; y que la ruptura
de la pared celular debido al efecto de temperaturas altas de proceso (no mayor a
70 C) facilita la difusin del solvente en el soluto.
Insuasty et al (2013) realiz una caracterizacin botnica de algunas especies
arbreas y arbustivas de bosque seco tropical determinando, de manera

cualitativamente, un abundante contenido en taninos condensados en el forraje

(hojas) de Flamboyn o Ponciana (Delonix regia) como metabolito secundario.
Narvez y Lascano (2004) en su estudio sobre leguminosas, determinaron
cuantitativamente el contenido de taninos condensados totales en hojas (forraje)
de Ponciana (Delonix regia), obteniendo entre 35.5 % y 35.7 % para hojas
jvenes y maduras, respectivamente.
II.

JUSTIFICACIN
En los ltimos aos, el mercado mundial de productos agroindustriales se ha
enfocado en la bsqueda de nuevos productos de origen orgnico que se puedan
desarrollar de manera sustentable. Sin embargo, en el Per, en el mercado de la
curtiembre, los principales agentes curtientes son los compuestos a base de
cromo (como el sulfato bsico de cromo Cr(OH)SO 4) debido a su bajo costo,
menor tiempo de curtido y mejor acabo en el cuero. A pesar de ello, los efluentes
producidos en el curtido presentan altos niveles de toxicidad debido a la
generacin de compuestos de cromo de lenta biodegradabilidad, efecto
cancergeno (Cr+3 en altas concentraciones) y a su efecto mutagnico (Cr +6),
siendo un potencial peligro para el medio ambiente y comunidades aledaas. Por
tal motivo, se plantea la necesidad de investigar el rendimiento de extraccin
tnica a partir de semilla y vaina de Ponciana (Delonix regia), a fin de
determinar los parmetros ptimos del proceso y as establecer una nueva fuente
natural de taninos para su utilizacin en el proceso de curtiembre.
En el Per, la principal fuente natural de taninos es la vaina de tara (Caesalpinia
spinosa) la cual posee un elevado contenido de taninos del cual se puede obtener
extracto tnico, y a partir de este, extracto glico; los mismos que son
principalmente utilizados en la industria de la curtiembre. Sin embargo, se
estima que para el ao 2015 existir una demanda mundial 144 787 t de harina
de vaina de tara (Caesalpinia spinosa) equivalente a 13 000 ha cultivadas. De la
cual, la industria peruana siendo el principal exportador de harina de tara a nivel
mundial tan solo podra cubrir el 33.52% de dicha demanda (Fabara, 2012), esta
oferta insatisfecha (66.48%) otorga la posibilidad de ingreso de nuevas especies
tanferas al mercado peruano.

En otro aspecto, los rboles de la subfamilia Caesalpinioideae (ponciana,

quebracho, tara, etc.) pertenecen a la familia de las leguminosas (Fabaceae) y
por ende protegen el suelo de la erosin y recuperan la fertilidad del mismo
mediante la fijacin del nitrgeno del aire; por lo tanto fortalece
permanentemente el suelo y ofrece la proteccin de cuencas, en forma
simultnea.
Por lo antes mencionado el presente proyecto tiene por finalidad determinar el
rendimiento y optimizar los parmetros de proceso en la extraccin de taninos de
la semilla y vaina de ponciana (Delonix regia) como especie forestal local para
la industria del curtido, y as contribuir con la sustentabilidad medioambiental y
econmica de los procesos de curticin en nuestra regin.
III.

PROBLEMA
Cul ser el efecto de la temperatura y la concentracin del solvente en el
rendimiento de la extraccin tnica de semillas y vainas de ponciana (Delonix
regia)?

IV.

HIPTESIS
-

Es posible obtener a una temperatura de 47.5 C y concentracin de solvente

hidroalcohlico al 48%, la mayor cantidad de extracto tnico de semilla y
vaina de ponciana (Delonix regia).

V.

OBJETIVOS
Objetivo General
-

Determinar el efecto de la temperatura y concentracin del solvente en el

rendimiento del extracto tnico de semilla y vaina de ponciana (Delonix
regia).

Objetivo General
-

Determinar los parmetros de temperatura y concentracin de solvente que

mejoren la capacidad de extraccin.

Determinar el rendimiento de extracto tnico obtenido de las vainas y
semillas de la ponciana (Delonix regia).

Determinar la cantidad de taninos condensables e hidrolizables extrados.

Determinar la fraccin de disolucin retenida por el componente inerte en la
extraccin tnica de la ponciana (Delonix regia).

VI.

MATERIALES Y METODOLOGA
VI.1

Materiales

Materiales Biolgicos

Semillas de ponciana (Delonix regia) de aspecto liso y leoso, de color

castao claro a oscuro.

Vainas de ponciana (Delonix regia) maduras leosas, de color castao

oscuro.

Material de vidrio

Baln fondo plano

Bureta graduada de 100 mL

Condensador

Frascos de vidrio mbar 25 mL

Matraz de Erlenmeyer de 250 mL y 500 mL

Probetas graduadas de 500 mL y 1000 mL

Termmetro de mercurio (-10 C hasta 150C)

Termmetro digital

Tubos de ensayo

Varilla de agitacin

Vaso de precipitados de 250 mL y 500 mL.

Materiales Qumicos

cido clorhdrico 10 M

cido clorhdrico concentrado

cido glico

Agua destilada des ionizada

Alcohol rectificado 96 %

Carbonato de sodio

Catequina en polvo

Cloruro frrico al 10% p/v

Cloruro de sodio (NaCl)

Formaldehdo al 37 %

Gelatina al 1 %

ndigo carmn

Metanol

Permanganato de potasio 0.1 N

Solucin de Folin Phenol Ciolcateu.

Vainillina en polvo

Otros materiales

Bolsas con cierre hermtico Whirlpack

Bolsas Polietileno de 11 x 16 x 4

Cuaderno de apuntes

Cubeta estril

Etiquetas adhesivas

Materiales de escritorio

Placas de aluminio para secado y pesado

Recipientes plsticos

Software STATISTICA 7.0

Tapn de jebe

Tijeras

Equipos

Balanza analtica electrnica SARTORIUS

Bao mara

Bomba de vaco 0.5 HP

Espectrofotmetro JENWAY-640 UV/VIS

Estufa de Laboratorio MEMMER

Hornilla elctrica

Molino semi - industrial

Mufla marca Batnstead/thermolyne

Refrigeradora Electrolux
Sistema mecnico de agitacin.

VI.2

Metodologa

A. Esquema Experimental
El desarrollo de la secuencia experimental se observa en la Figura 1.
Inicialmente a partir de muestras de vainas maduras enteras de ponciana
(Delonix regia) se separarn manualmente en vainas y semillas y se
determinar su peso promedio, porcentaje de humedad y porcentaje de
ceniza. Posteriormente, se procedern a moler las vainas y semillas por
separado hasta obtener una muestra de harina estandarizada a un tamao de
partcula entre 0.250 mm a 0.297 mm, para posteriormente realizar la
extraccin tnica por maceracin dinmica en una sola etapa a cada tipo de
muestra con etanol a diferentes concentraciones (0 96) como solvente y
con un rango de temperaturas de proceso de 25 C a 70 C, obtenindose 12
tratamientos a los que se realizar un anlisis cualitativo y cuantitativo para
identificar y determinar el porcentaje de taninos en cada muestras de
semillas y vainas de ponciana (Delonix regia).
Ponciana (Delonix regia)

Extracto Tnico
Variables de proceso:
Concentracin del solvente (v/v)
Temperatura de extraccin (C)

Anlisis Fisicoqumicos:
Anlisis cualitativo de taninos.Peso
Semillas
Dimetro de partcula
Anlisis cuantitativo
de taninos.
Humedad
Cenizas.
Anlisis Fisicoqumicos:

Vainas

Maceracin dinmica

Figura 1. Esquema experimental del proyecto de investigacin.

B. Descripcin del proceso

Proceso de Extraccin de Taninos

Materia Prima

SELECCIN

ACONDICIONAMIE
NTO
SECADO M.P.

- Tiempo: 2 - 3 h
- Temperatura: 60 70
C

MOLIENDA

Tamao de
partcula 5

TAMIZADO

Solvente
hidroalcholico
(v/v) 0 96

EXTRACCIN

FILTRACIN

SECADO E. T.

Extracto Tnico

0.250 mm Tamao partcula

0.297 mm
- Tiempo: 2 h
- Temperatura: 25 70 C

- Tiempo: 2 - 3 h
- Temperatura: 60 70
C

Figura 2. Diagrama del proceso de obtencin del extracto tnico.

- Seleccin
Se proceder a seleccionar la materia prima en estado de madurez,
tomando como referencia el tamao (mediano) y color (marrn oscuro
marrn rojizo) de las vainas recolectadas.
- Acondicionamiento
Se proceder a almacenar las vainas en depsitos evitando el contacto
con el suelo y lluvia pero quedando expuestas al sol durante 7 das para
secarlas y acondicionarlas para la separacin manual de semillas y vainas
(Willan, 2006).
- Secado de M. P.
Se colocarn por separado las semillas y vainas troceadas en una estufa a
60 C hasta estabilizarse a un valor menor al 10% de humedad, valor
requerido para el proceso de molienda (Rojas y Aristizbal, 2012).
- Molienda
Se colocarn por separado las semillas y vainas en un molino semiindustrial mecnico con un tamiz de tamao de partcula menor o igual a
5 mm (N4), el proceso se repetir segn la uniformidad del tamao de
partcula obtenido en la primera molienda.

- Tamizado
Las muestras de semilla y vaina de ponciana se tamizarn por separado
en un tamiz N 50 para ser retenida en un tamiz N 60. Con lo que se
obtendr una harina con tamao de partcula en un rango de 0.250 mm a
0.297 mm. Posteriormente las muestras se almacenarn en recipientes
que aslen de la humedad del ambiente.
- Extraccin
La extraccin de taninos se realizar en cada muestra de harina de
semilla y de vaina de Ponciana (Delonix regia) mediante una maceracin
dinmica, las muestras se colocarn en matraces con un solvente
hidroalcholico a diferentes concentraciones (0 a 96) a una relacin
determinada

anteriormente

entre

soluto/solvente

distintas

temperaturas de proceso (25 C a 70 C), por un tiempo extraccin de 2

horas. Para evitar un resultado falso-positivo se agregar 15 gotas de una
solucin acuosa de NaCl al 10% a cada muestra, con el objetivo de
precipitar compuestos no tnicos (Tezn, 2008).
- Filtracin
La solucin o suspensin resultante de la extraccin se filtrar al vaco y
se depositarn en envases estriles.
- Secado
Finalmente el extracto tnico soluble se colocar en una bandeja de
porcelana y secar en estufa a 70 C por un periodo de 3 a 6 horas, el
residuo obtenido es el extracto tnico seco, el cual ser almacenado en
frascos de color mbar, para posteriormente realizar el anlisis cualitativo
y cuantitativo de taninos.
C. Mtodos de anlisis cualitativo y cuantitativo del extracto tnico
- El anlisis cualitativo se realizar mediante la identificacin y
caracterizacin de taninos por el mtodo de solucin acuosa de gelatina
1% y el mtodo de pruebas colorimtricas (Cortz, 2012).

- El anlisis cuantitativo de taninos hidrolizables se realizar por mtodo

volumtrico de taninos (Espinal, 2009; Marroqun, 2008).
- El anlisis cuantitativo de taninos condensados se realizar por el mtodo
de Stiasny (Romero, 2012; Tezn, 2008).
- El anlisis cuantitativo por espectrofotometra de masas se realizar para
taninos hidrolizables por el mtodo de Folin-Ciocalteu (Cortz, 2012;
Romero, 2012), mediante un comparativo con un patrn especfico (cido
glico); y para taninos condensados por el mtodo de Vainilla (Rosales et
al, 2006 mediante un comparativo con un patrn especfico (catecol).

D. Diseo experimental

Diseo Compuesto Central Rotacional (DCCR)

Este diseo consiste en un factorial o factorial fraccionado 2k donde los
factores son codificados de tal manera que el centro sea (0,0,...,0)
aumentado por 2k puntos axiales (, 0, 0,...,0), (0, , 0,...0), (0, 0, ,
0), (0, 0,..., ) y n puntos centrales (0, 0,...,0). De acuerdo a
Montgomery (1991) este modelo es probablemente el ms usado.
Este diseo se convierte en rotable mediante la eleccin de , esta se
calcula de la siguiente manera (Montgomery, 1991).
= (2k)1/4

(1)

Donde:

= valores puntos axiales segn el nmero de variables

= nmero de variables independientes

Otra propiedad til del diseo es que puede crecer a partir de un diseo
2k de primer orden, agregando puntos axiales y quizs algunos puntos
centrales. Con la eleccin del nmero de puntos centrales (n 0) el diseo

puede hacerse ortogonal o transformarse en uno de precisin uniforme

(Cornell, 1990).
Para este estudio se trabajar con un Diseo Experimental para dos (2)
variables independientes. Se realizar un diseo compuesto central
rotacional (DCCR) con 4(2k) puntos exponenciales + 4(2k) puntos
axiales y 4(t) repeticiones en el punto central, lo que nos da un nmero
total de 12 ensayos realizados, donde k=2 es el nmero de variables
independientes (temperatura de proceso y concentracin del solvente).
Para el clculo de las variables se utilizar la frmula (1) como se
muestra en el cuadro 2 (Rodrguez y Lemma, 2005).

Cuadro 2. Valores utilizados en DCCR para dos factores

Variables
Temperatura (C)
Concentracin del
solvente: Etanol (% v/v)

-1.41
25

-1
31.6

Niveles
0
47.5

14.1

48.0

+1
63.4

+1.41
70

81.9

96

De lo anterior los valores codificados para el diseo experimental para

las variables independientes a utilizar en el proceso de extraccin de
taninos se presentan en el Cuadro 3 (Rodrguez y Lemma, 2005).
Cuadro 3. Diseo codificado para la evaluacin del efecto de la
temperatura y la concentracin del solvente en el rendimiento de

Ensayos

extraccin de taninos de la semilla y vaina de Ponciana (Delonix regia).

1
2
3
4
5
6
7

Variables codificadas
Temperatura Concentracin
del solvente

-1
-1
+1
+1
-1.41
+1.41
0

-1
+1
-1
+1
0
0
-1.41

Variables reales
Temperatura
Concentracin del
(C)
solvente: Etanol (%v/v)

31.6
31.6
63.4
63.4
25.0
70.0
47.5

14.1
81.9
14.1
81.9
48.0
48.0
0

8
9
10
11
12

VII.

0
0
0
0
0

+1.41
0
0
0
0

47.5
47.5
47.5
47.5
47.5

96.0
48.0
48.0
48.0
48.0

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
lvarez, C.; Lock, O. 1992. Taninos. Revista de Qumica de la Pontifica
Universidad Catlica del Per. Volumen 1. Nmero 1.
Avils, R.; Carrin, J.; Huamn, J.; Bravo, M.; Rivera, D.; Rojas, N.; Santiago, J.
2010. Actividad antioxidante, polifenoles totales y contenido de taninos de
extractos de tara, Caesalpinia spinosa. Revista Peruana de Qumica. Volumen
13. Nmero 2.
Campos, D. 2010. Obtencin y caracterizacin de taninos hidrolizados de tara
(Caesalpinia spinosa) y evaluacin de su eficacia antioxidante en carnes y
aceites vegetales. Per Biodiverso. Lima. Per.
Cornell, J. 1990. How to apply response surface methodology. University of
Wisconsin. U.S.A.
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VIII. ANEXOS.
A. Mtodo de Identificacin de taninos por solucin acuosa de gelatina
1% y el mtodo pruebas colorimtricas.
1. Utilizar 1 g de extracto tnico seco y colocarlo en un vaso de
precipitacin.
2. Aadir 25 mL de agua caliente al extracto, agitar con varilla y dejar
enfriar.
3. Agregar 1 mL de solucin de cloruro de sodio al 10% y filtrar.
4. Adicionar 3 mL del filtrado a 4 tubos de ensayo.
5. Tubo 1: testigo.
6. Tubo 2: Agregar 4 a 5 gotas de solucin de gelatina al 1% (p/v).
7. Tubo 3: Agregar de 4 a 5 gotas de gelatina-sal (1 % de gelatina y
cloruro de sodio al 10%).
8. Tubo 4: Agregar 3 a 4 gotas de solucin de cloruro frrico al 10%
(p/v).
9. Observar la formacin de precipitado y/o cambio de coloracin. Con
cloruro frrico: grisceo-verde: catecol; grisceo azulado: pirogalol.
10. La formacin de un precipitado en el tubo 2 y 3 indica presencia de
taninos en el extracto, y en el tubo 4 por accin del cloruro frrico, la
aparicin de una coloracin verde griscea indica presencia de

taninos del tipo condensado (catecol), mientras que la coloracin azul

grisceo implica la presencia de taninos del tipo hidrolizables.

As mismo, un resultado negativo con el anlisis de gelatina y NaCl

(precipitado), pero produccin de coloracin verde grisceo o
azul grisceo implica ausencia de taninos y los cambios de
coloracin se atribuyen a otros constituyentes fenlicos del vegetal.

B. Determinacin del porcentaje de taninos hidrolizables mtodo

volumtrico.
1. Colocar 1 g del extracto total seco en un matraz de 250 mL y
disolverlo con 100 mL de agua destilada.
2. Luego transferir la solucin a un baln de fondo plano y colocarla a
reflujo por 4 horas.
3. En un matraz de 250 mL colocar 12.5 mL de solucin lquida tnica,
agregarle 10 mL de indicador ndigo de Carmn y adicionar 375 mL
de agua destilada.
4. Titular con permanganato de potasio 0.1 N, hasta visualizar un color
amarillo claro.
5. El residuo se desecha en un recipiente destinado para ello.
6. Preparar un blanco con agua, adicionando todos los reactivos en las
mismas condiciones y titular sin la muestra.
7. Calcular el porcentaje de taninos en el extracto total en base a las
siguientes relaciones:
mg de tanino=1 mLPermanganato de potasio 0.1 N
1 meq KMn O4 =1meq de tanino
C. Determinacin del porcentaje de taninos condensados mtodo Stiasny.

Cuantificacin de Taninos condensados por el nmero de Stiasny

1. Disolver una muestra de 10 g de extracto tnico en 50 mL de agua
desmineralizada.
2. Tomar una muestra de 50 mL de extracto y mezclar con 5 mL de
cido clorhdrico concentrado 10 M y 10 mL de formaldehido al 37 %
3. Calentar a reflujo durante 30 minutos.
4. Filtrar en caliente tarando previamente el papel filtro. Lavar el
producto con agua desmineralizada caliente para enjuagar el cido.
5. Secar y pesar el producto para cuantificar el contenido tnico.
6. En paralelo, secar y pesar 10 g de extracto tnico para determinar sus
slidos totales.
El Nmero de Stiasny es la relacin entre el precipitado formado respecto
a los slidos totales y corresponde al porcentaje de taninos condensados
del extracto. Este porcentaje se calcula multiplicando este nmero en
fraccin por el rendimiento en slidos obtenidos en cada extracto.
N de Stiasny=( PPx 100)/ PR

TC=( NSxET )/100

Dnde:
PP: peso del precipitado (g)
PR: del residuo de 50 mL de extracto (g)
TC: porcentaje de taninos condensados NS: N de Stiasny
ET: Porcentaje de extracto total
D. Determinacin de taninos hidrolizables por el mtodo Folin-Ciocalteu.
Determinacin de la concentracin de taninos hidrolizables por
absorbancia.

Se tomar una muestrade extracto seco de poncian, se preparar una

solucin, con un factor de dilucin 1:10 en agua destilada.

De esta solucin se tomar 0.5 mL, se aadir 0.5 mL de reactivo Folin

Phenol Ciolcateu, y agitar.

Despus de 3 minutos de reposo, se aadirn 10 mL de carbonato de

sodio en una concentracin de 75 g/L.

La mezcla final se aforar a 25 mL con agua destilada y se mantendr

en reposo por 60 minutos para que desarrolle color.

Adicionalmente, se preparar un blanco con agua destilada y todas las

muestras sern preparadas por triplicado.

El espectrofotmetro UV - visible fue calibrado a 750 nm. La solucin

coloreada se colocar en las celdas de cuarzo y se proceder a la lectura
de absorbancia.

Construccin de la curva de calibracin.

Para la construccin de las curvas de calibracin se utilizar el patrn
estndar: cido glico.
Para construir la curva de calibracin del cido glico se prepararn
soluciones de las siguientes concentraciones: 25, 50, 100, 150, 200 ppm,
partiendo de una solucin patrn de cido glico de 5000 ppm.
Las absorbancias registradas de las muestras sern comparadas con la
curva, para determinar el equivalente de cido glico por cada 100 g de
muestra seca.
El clculo de los equivalentes de cido glico de la harina de semilla y
vaina de ponciana se calcula de la siguiente forma:
- Se reemplaza el valor medio de las absorbancias, de cada muestra, en
la ecuacin resultante de las curvas de calibracin.

- El valor resultante se expresa en unidades de partes por milln (ppm o

mg/L), se multiplica por 10 debido al factor de dilucin aplicado.
- Para la representacin de los valores de equivalentes de cido tnico
en las unidades requeridas, se tom en cuenta las diluciones realizadas
y el cambio de unidades necesarias.
E. Determinacin de taninos condensables por el mtodo Vainilla.
Determinacin

de

concentracin

taninos

condensados

por

absorbancia.
El mtodo de vainillina consiste en adicionar a 1 mL de muestra disuelta
en metanol a 5 mL de reactivo de vainillina, se mezclar y se mantendr a
30C durante 20 min., luego se midi la absorbancia a 500 nm.
El reactivo de vainillina se preparar de la siguiente manera:
Solucin 1. Se afora a 100 mL con metanol 8 mL de cido clorhdrico
concentrado.
Solucin 2. Se adiciona 1 g de vainillina a un poco de metanol y se afora a
100 mL con metanol. Se mezclan volmenes iguales de ambas soluciones
y se obtuvo una solucin de HCl 4% y 5 % vainillina.
Para cada lote de muestras la temperatura a 30C se mantuvo utilizando un
bao Mara, y se leyeron en el espectrofotmetro a 500 nm. Los clculos
se hicieron conforme la siguiente ecuacin:
T c=

Cc x V t
W

TC = Taninos condensables (%)

CC = Concentracin de muestra conforme a la curva de calibracin (mg/L)
Vt = Volumen total del extracto (L)
W = Peso seco del extracto utilizado (g)
Determinacin de la curva de calibracin

Para la construccin de las curvas de calibracin se utilizar el patrn

estndar: cido glico.
El mtodo de vainillina es un mtodo colorimtrico, por lo que se requiere
de una curva de calibracin, de un estndar conocido. Se utilizar una
solucin de catequina disuelta en metanol en concentraciones de 20 a 200
mg/mL. La tcnica utilizada menciona que debe utilizarse una solucin de
vainillina recin preparada, por lo que sta se prepar en el momento de
realizar cada ensayo.