INDUCCIN DE ORGANOGNESIS DIRECTA A

PARTIR DE HOJA DE Saintpaulia ionantha (VIOLETA

AFRICANA)
Cristina Cholota, David Valencia
Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura, Carrera de Ingeniera en Biotecnologa de
la Universidad de las Fuerzas Armadas-ESPE. Sangolqu-Pichincha, Ecuador
Enero 2015

RESUMEN.- La violeta africana es una planta ornamental apreciada en la jardinera, la

organognesis directa es una alternativa para la multiplicacin a gran escala. La
organognesis directa es la formacin de rganos como raz, brotes entre otros, sin
formacin callo. El objetivo de esta prctica fue la induccin de organognesis directa a
partir de hoja de Saintpaulia ionantha (violeta africana) para la obtencin de brotes en un
medio MS enriquecido con AIA y KIN. Para esto se utiliz la lmina y el peciolo como
explantes; estos se sometieron a un proceso de desinfeccin con detergente al 1%
durante 15 min y NaClO 0.5% por 10min en agitacin. Los cuales fueron sembrados e
incubados durante 30 das. Como resultados se obtuvo que el 6.25% de los explantes
tubo contaminacin fngica, 62.5% sin contaminacin, 31.25% explantes libres de
contaminacin y con aumento de tamao en los tricomas y ninguno de los explantes
desarrollaron brotes (0%).
Palabras claves: explante, organognesis directa, brotes, contaminacin, tricomas.
ABSTRAC.- The African violet is a prized ornamental plant in the garden, direct
organogenesis is an alternative for large-scale multiplication. Direct organogenesis is the
formation of organs such as roots, buds among others, without callus formation. The
objective of this practice was the induction of direct organogenesis from Saintpaulia
ionantha sheet (African violet) to obtain shoots in MS medium supplemented with IAA and
KIN. The lamina and petiole were used like explants; these were submitted to a
disinfection process with 1% detergent for 15 min and 0.5% NaOCl for 10 min under
stirring. These were sown and incubated for 30 days. As outcomes were obtained 6.25%
of the explants with fungal contamination, 62.5% no pollution, 31.25% uncontaminated and
increased size in the trichomes explants and none of the explants developed outbreaks
(0%).
Keywords: explant direct organogenesis, outbreaks, pollution, trichomes.
INTRODUCCIN
La violeta africana (Saintpaulia ionantha)
es una planta ornamental de gran inters

dentro del comercio y la jardinera. Se

propagan por germinacin de semillas o
en forma vegetativa por esquejes. Las

violetas
africanas
presentan
gran
diversidad morfolgica y una amplia
gama de tonalidades de flores que van
desde violeta prpura a blancas, lo que
las hacen muy apreciadas (Badillo et al.,
2009).

axilares, hojas, pices o meristemos

apicales, protoplastos, races, pedicelos
y floretes. Las plantas obtenidas sern
clones exactos de la planta madre, sin
ninguna variabilidad gentica (Vences et
al., 2009)

El cultivo in vivo es complicado debido a

que la exposicin directa a la luz solar y
el uso de agua a bajas temperaturas
pueden provocar que las hojas se
marchiten y aparezcan manchas de color
caf oscuras, por eso varios autores han
desarrollaron diversas tcnicas de cultivo
in vitro para obtener violetas africanas a
gran escala, a partir de pequeas
porciones de peciolo y tejido foliar, una
de estas tcnicas es la micropropagacin
mediante organognesis directa (Badillo
et al., 2009).

El objetivo de esta prctica fue induccin

organognesis directa a partir de hoja de
Saintpaulia ionantha (violeta africana)
para la obtencin de brotes en un medio
MS enriquecido con AIA y KIN.

La tcnica de micropropagacin de
especies vegetales, utiliza diversas
porciones de rganos, tejidos, etc. y
proporciona una herramienta capaz de
producir un gran nmero de plantas en
cada cultivo; como consecuencia de la
totipotencialidad de las clulas vegetales
(Badillo et al., 2009).
A partir de la siembra in vitro de
diferentes
explantes
relativamente
grandes y en condiciones adecuadas,
puede inducirse la formacin de nuevos
rganos de manera directa sin la
formacin de callo. Si la formacin es de
brotes, races o flores se denomina
organognesis directa, esto sucede
gracias a sustancias reguladoras de
crecimiento especificas agregadas en el
medio tal es el caso de las citoquininas
(Echenique et al., 2004).
La organognesis directa se desarrolla a
partir de una gran variedad de explantes
como tallos (nodal e internodal), yemas

MATERIALES Y MTODOS
Obtencin de la muestra: la muestra
se obtuvo de una planta de violeta
africana. Los explantes fueron a partir del
peciolo y la lmina de la hoja,
completamente extendida y sin daos.
Desinfeccin de los explantes: se lav
las hojas en agua corriente frotando el
haz y el envs con el fin de retirar toda la
tierra y las impurezas. Luego se coloc
los explantes en 500mL de una solucin
al 1% de detergente durante 15min en
agitacin. Al cabo de este tiempo y
despus de dos lavados con agua
destilada, una con agua estril se
someti a los explantes a una solucin
de 500mL ms 3 gotas de Tween-20 y
NaClO al 0.5% por 10min en agitacin.
Inmediatamente de traslado las muestras
a las cmaras de flujo, donde se realiz
tres lavados con agua estril antes de la
siembra.
Preparacin de la cmara de siembra:
antes de realizar la siembra se tuvo que
limpiar el piso de la sala de siembra con
Kalipto y las cmaras se desinfectaron
con alcohol al 90%. Luego se procedi a
colocar todo el material necesario dentro
de las cmaras y se someti a estos a
luz ultravioleta durante 20min para

eliminar todo organismo que puede ser

contaminante.
Siembra: teniendo ya preparados todos
los materiales dentro de la cmara y en
condiciones aspticas estrictas se
procedi a realizar la siembra. Se realiz
cortes de las partes quemadas, toda la
periferia daados por la desinfeccin.
Luego se cort la lmina de la hoja en
forma de cuadrados (>1cm) sin la
nervadura y se sembr en el medio MS
enriquecido con AIA y KIN. Los peciolos
de cortaron en forma transversal y
longitudinal y se sembr en el mismo
medio de cultivo. Todos los frascos se
incubaron durante 30 das.
1

RESULTADOS

Despus de 30 das de incubacin, los

explantes presentaron los resultados
descritos en la Tabla 1.

4c

4d

Aumento de
tamao tricomas
-----

1d
1
b
1c

1a

2d

2b
2a

2c

Imagen 1. Explantes del frasco 1 y 2. Sin

contaminacin, con aumento del tamao de
tricomas en los explantes 2a, 2b y 2c. Sin
desarrollo de brotes en todas las muestras.

Tabla 1. Evaluacin de contaminacin,

nmero de brotes, longitud de los brotes y
otras caractersticas de los explantes de
lminas y peciolos provenientes de hojas de
violeta.
Nombre: Saintpaulia ionantha
(violeta africana)

No.
frasco

1
peciol
o

2
hoja

3
peciol
o
4
hoja

Fecha de
siembra:
10/12/201
4
Parte
area
No. brotes

1a
1b
1c

Contaminaci
n
(hongo
bacteria)
-

1d

2a

2b

2c

2d
3a
3b
3c
3d
4a

hogos
-

0
0
0
0
0
0

4b

Expl
.

0
0
0

Fecha de
evaluacin:
07/01/2015
Otras
caractersticas.
------------Aumento de
tamao de
tricomas
Aumento de
tamao tricomas
Aumento de
tamao tricomas
Aumento de
tamao tricomas
--------------------Muerte celular
----Aumento de
tamao tricomas

4b

3d

3b

4d

4a
3a

3c

4c

Imagen 2. Explantes del frasco 3 y 4. Con

contaminacin fngica en el explante 3d,
con aumento del tamao de tricomas en los
explantes 2b y 2c. Sin desarrollo de brotes
en todas las muestras.

Como muestra la Tabla 1 todos los

explantes del frasco 1, 2 y 4 no
presentan contaminacin (ver Imagen 1 y
2). Mientras que el explante 3d del frasco
3 hubo contaminacin fngica y muerte
celular como se observa en la Imagen 2.
Adems que en los explantes 2a, 2b, 2c,
4b y 4c correspondientes a explantes

provenientes de lminas de hojas hay un

aumento en el tamao de los tricomas
(ver Imagen 1 e Imagen 2). Como se
muestra en la Tabla 1 ninguno de los
explantes ha desarrollado brotes.

Tabla 2. Evaluacin en porcentajes de

contaminacin, aumento de tamao de
tricomas y desarrollo de brotes.

Contaminacin
fngica

Sin
contaminacin

Explantes

Porcentaje

3d

6,25%

10

1a, 1b,
1c, 1d ,
2d, 3a,
3b, 3a,
4a, 4d

62.5%

Sin
contaminacin y
aumento en
tamao de
tricomas

2a, 2b,
2c, 4b y
ac

31.25%

Desarrollo de
brotes

------

0%

Total explantes

16

DISCUSIN
Segn Suarez 2011, la contaminacin y
la oxidacin son las principales limitantes
en la obtencin de explantes viables, la
presencia
de
microorganismos
contaminantes ocurre cuando la planta
donante ha crecido en el campo donde
est expuesta a plagas y enfermedades,
y adems la morfologa propia de la
violeta
favorece
este
tipo
de
contaminacin al presentar tricomas que
impiden la penetracin total de
desinfectante, como en nuestro ensayo
hubo un 6.25% de contaminacin que
corresponde a un explante del peciolo de
la hoja que fue invadido por un hongo
como se observa en la imagen 2.
Montaez 2010, afirma que cuando se
realizan muchos cortes en el material
vegetal, las clulas liberan compuestos
fenlicos como mecanismo de defensa,
pero esto desencadena la oxidacin de
los explantes, como en la imagen 1 y 2
de los explantes de peciolo en los que
todos se oxidaron.
CONCLUSIONES

100%

En la Tabla 2 se puede observar que el

porcentaje de contaminacin fngica en
relacin a todos los explantes es de
6.25% dado que un explante fue
contaminado.
Los
explantes
sin
contaminacin alguna da como resultado
un 62.5%, mientras que los explantes
libres de contaminacin y con aumento
de tamao en los tricomas dan un
porcentaje de 31.25%, correspondiente a
los 5 explantes que presentan esta
caracterstica. Tambin se puede verificar
que el 0% de los explantes no
desarrollaron brotes.

El mtodo empleado fue adecuado para

explantes provenientes de hojas de
violeta, ya que se obtuvo en su totalidad
explantes viables, pero en el caso de los
explantes provenientes de peciolos la
mayora se oxidaron debido a los
muchos cortes que recibieron los tejidos,
por tanto es aconsejable que en el caso
de que se trabaje con peciolos se debe
aumentar la cantidad de antioxidantes en
el medio.
El uso de tween ayud a penetrar de
mejor manera a los desinfectantes, que a
pesar de las barreras fsicas que
presentan los explantes como los
tricomas, se obtuvo un mnimo de
contaminacin de tan solo el 6.25%,
aunque es aconsejable que los explantes
provengan de cultivos in vitro para

disminuir la posibilidad de explantes

contaminados.
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