Qumica Analtica

Cromatografa
1-Cromatografa: Fundamento-Clasificacin.
La cromatografa es una tcnica para la separacin de los distintos
componentes de una mezcla, permite la separacin de impurezas. El
tiempo necesario para la separacin se puede obtener informacin
importante acerca de la identidad de cada componente, pero para la
identificacin final se requiere normalmente, la confirmacin por algn
otro mtodo analtico como la espectroscopia infrarroja (ir), la
resonancia magntica nuclear (RMN) o la espectroscopia de masas.
El fundamento de la cromatografa es la separacin de diferentes tipos
de molculas cuando descienden por una columna o atraviesan una
delgada capa de material inerte.
2- Fase Estacionaria- Fase Mvil-Efluente-Columna-Capa Delgada Portador de Gases- Cromatograma.
La separacin cromatogrfica se basa en la utilizacin de una
columna, que consta de una fase estacionaria y otra mvil. La muestra
gasta parte de su tiempo en la fase estacionaria y el resto en la fase
mvil, que es cuando se desplaza hacia la parte inferior de la columna.
Si se colocan en la columna dos tipos distintos de molculas tales como
una parafina y un compuesto aromtico, es muy probable que el tiempo
que permanezcan en la fase mvil, sea distinto.
El tubo de arena es comparable a una columna de cromatografa
gaseosa y el gas que fluye a la fase mvil. La arena ser la fase
estacionaria. El gas que emerge despus de atravesar la columna se
llama efluente.
Los gases inertes como el helio, fluyen a velocidad constante a travs
de las columnas cromatogrficas, es decir no interaccionan y en
consecuencia, no gastan tiempo en la fase estacionaria. Por esta razn
los gases inertes se utilizan frecuentemente como portadores de gases.
El registro obtenido al representar la salida de los distintos componentes
frente al tiempo, recibe el nombre de Cromatograma.
3-El plato terico:
La unidad utilizada para expresar la
eficiencia
de
una
columna
cromatogrfica es el plato terico, que
deriva de los procesos de destilacin.
Cuando se calienta una mezcla de dos
componentes, hierve primero el de
menor temperatura de ebullicin. Sin
embargo
el
otro
componente,
presenta a esa temperatura una
presin de vapor finita y en
consecuencia, parte del
mismo se vaporiza junto al ms voltil. En estas condiciones, no se
efecta una separacin completa y la destilacin se conoce como
destilacin de palto sencillo.
4- Ecuacin de Van Deempter:
Comparando la altura de los platos tericos de dos columnas se
obtiene una medida directa de sus eficiencias relativas.

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

H= A + (B/V) + C.V
Siendo:
H= altura del plato terico.
A= una K que depende de las corrientes parasitas en el flujo gaseoso
y, por lo tanto de la geometra del relleno y de las paredes de la
columna, as como la turbulencia y la laminaridad del flujo.
B= una K que depende de la difusin de la muestra en la fase gaseosa
y liquida. Esta velocidad depende de la temperatura y de la rapidez con
que las molculas de muestra difunden n el gas portador o sustrato. Aun
cuando la mezcla no fluya, difundir y se extender a lo largo de la
columna.
C= es una K que depende de la transferencia de materia entre las
molculas de la muestra en fase gaseosa y liquida.
V= velocidad de flujo de gas portador.
5-Relacin entre altura de un plato terico y la velocidad de flujo de
un gas portador:

6- Equipo de Cromatografa Gaseosa:

7- Gas Portador utilizado en la Cromatografa Gaseosa:

El gas portador ha de ser inerte respecto a la muestra y al sustrato,
estable trmicamente. Los gases portadores ms frecuentemente
utilizados son argn, nitrgeno, e hidrogeno.
8- Sistema de Inyeccin de Muestra:
La muestra liquida se inyecta
con una jeringa en la cmara de
inyeccin. Si la muestra se
vaporiza
lentamente,
los
componentes tardan bastante
tiempo en entrar en el gas
portador y emergen de la
columna en largos periodos de

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

tiempo obtenindose una mala

resolucin. Para la vaporizacin
de la muestra, se calienta la
clula,
despus de su inyeccin hasta
temperaturas de 350C.
La muestra se vaporiza inmediatamente y los vapores son llevados al
sustrato por el gas portador. La temperatura de la columna no ha de
exceder nunca de la t de entrada de muestra.
9- Detectores Utilizados en la Cromatografa Gaseosa:
Detectores de Ionizacin de Argn.
Detector de Ionizacin de Llama.
Detector de Seccin Transversal.
Detector de Conductividad Trmica.
Detector de Captura Electrnica.
10Detector de conductividad trmica:
Cuando el gas portador sale de la columna entra en el detector. Este
consta de un tubo hueco con un hilo axial que se calienta
elctricamente alcanzando una temperatura constante cuando la
energa elctrica es igual al calor cedido al gas circundante. Bajo las
condiciones de temperatura estacionaria, la residencia elctrica del hilo
se mantiene constante. Cuando el gas que fluye rodeando el hilo
contiene algn componente de la muestra se produce un cambio de
conductividad trmica y el hilo pierde calor a velocidad distinta. En
consecuencia, cambia la temperatura del hilo y, por lo tanto su
resistencia elctrica; este cambio de resistencia se utiliza para detectar
los distintos gases que pasan sobre el conductor.
11Ramas de la cromatografa gaseosa:
Cromatografa gaseosa de columna de relleno.
Cromatografa gaseosa en columnas capilares.
Cromatografa gaseosa preparativa a escala.
Cromatografa gaseosa a temperatura programada.
12Cromatografa gaseosa en columna de relleno y en columna de
capilares:
En columna de relleno: se realiza en columnas de relleno de 0,25
pulgadas de dimetro interior y de 3 a 20 pulgadas de longitud.
Este mtodo, que representa el fundamento de la cromatografa,
gas-liquido, se utiliza en todas las formas de anlisis orgnico
molecular. Es ms interesante su aplicacin al anlisis cuantitativo,
porque permite obtener resultados seguros con muestras de
tamao, relativamente grande, normalmente de 0,1 ml. Cuando se
manejan muestras de gran tamao no son necesarios detectores de
gran sensibilidad, que permite utilizar cualquier detector
convencional. Algunos detectores pueden sobrecargarse con estas
cantidades y es necesario desdoblar la muestra antes de alcanzar
el detector. El desdoblamiento se consigue con un des doblador de
la muestra.
En columnas capilares: su dimetro es inferior a 0,1 pulgada y su
longitud puede ser de varios pies. Ordinariamente se utiliza un
sustrato lquido que humedece las paredes interiores de la

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

columna. Esta operacin requiere un equipo especial, ya que en

gral, se hace pasar el sustrato a travs de la columna a presin
elevada. Pueden analizarse muestras del orden de 1gr y aun as
puede ser necesario reducir el tamao con un des doblador. La
muestra no puede recuperarse despus de su inyeccin,
particularmente si se utilizan detectores destructivos como el de
ionizacin de llama. En consecuencia, la columna no es aconsejable
para aislar los componentes puros.
13rea de un pico cromatogrfico: es proporcional a la
concentracin del compuesto en la muestra.
14Factor respuesta: cuando se ha de realizar la determinacin
cuantitativa de un compuesto debe obtenerse previamente el llamado
factor respuesta. En la determinacin experimental de este factor, las
condiciones han de ser idnticas a aquellas bajo las cuales se analiza la
muestra. La forma de operar consiste en inyectar una cantidad conocida
del compuesto en el cromatografo gaseoso y medir el rea del pico
correspondiente. El factor respuesta, vendr dado por la relacin:
Factor respuesta: rea del pico / peso del comp. A= rea x unidad del
comp. A
15Problema: en una determinacin cuantitativa se obtuvieron los
siguientes datos:
Peso del compuesto A puro inyectado en la columna 0.0121gr
rea del pico correspondiente 3.42 pulgadas.
Peso de muestra inyectado en la columna 0.115gr.
rea del pico del compuesto A en la muestra 4.62 pulgada.

16Cromatografa solido-liquido: la aplicacin mas importante de

esta tcnica es la separacin de compuestos de elevado peso molecular.
en gral. Esta tcnica se utilizara con aquellas muestras cuyos
componentes tengan puntos de ebullicin demasiado elevados y, por lo
tanto, sean difcilmente transformables en vapores incluso en
cromatografa gaseosa a temperatura programada, o bien, cuando los
componentes sean inestables. Los compuestos que son slidos a
temperatura ambiente hay que disolverlos en un disolvente adecuado.
17Ramas ms importantes de la cromatografa:
Cromatografa de Papel.
Cromatografa de Capa Fina.
Cromatografa de Columna.
18Cromatografa de papel: en la prctica, se suspende por un
extremo una tira de papel de espesor uniforme y el otro extremo se
introduce en el disolvente. En estas condiciones, el disolvente fluye
hacia arriba, a velocidad constante, por la accin capilar de las fibras de
papel. El disolvente entra en contacto con la muestra y se desplaza a lo
largo del papel con una velocidad proporcional a la velocidad de flujo del
disolvente y al tiempo que cada componente gasta en la fase
estacionaria.
19Cmo se realiza una cromatografa de papel?

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

Si se sabe que una muestra contiene tres

componentes: A,B y C, para identificarlos se
aaden al papel muestras separadas de A, B y
C y se procede al revelado una vez
conseguida la separacin. El componente A
de la muestra ser aquel que haya recorrido
la misma distancia que la muestra conocida A.
el mismo razonamiento sirve para la
identificacin de los otros componentes.
Si no se conoce la identidad de los componentes
de la muestra, deben ser identificados
despus de su separacin por algunas de las
tcnicas ya citadas.
20-Rf: el R.F de un compuesto, para un disolvente y sustrato
determinado es constante, y se define como la relacin de la velocidad
de flujo compuesto a la del disolvente. Determinado, pues el valor R.F.
de un compuesto desconocido se reduce considerablemente el nmero
de compuestos que pueden presentarlo y, en consecuencia, su
identificacin es mucho ms fcil.
21-Manifestacin del componente de una muestra: el revelado de
molculas en cromatografa de papel o de capa fina puede ser un
problema. Si las molculas son coloreadas, la deteccin se hace por su
observacin directa. sin embargo, es el caso menos frecuente. Para
algunos compuestos, existen reactivos especficos que reaccionan para
dar un compuesto coloreado de observacin directa. La proporcin de
compuestos que pueden ser detectados de esta forma es pequea.
22-Cromatografa de capa fina: es similar a la cromatografa de papel
excepto en que en lugar de papel se utiliza como sustrato una capa fina
de un material inerte, tal como Al2O3, MgO o SiO3. Se forma una pasta
con el oxido y un disolvente adecuado, se extiende uniformemente
sobre una superficie plana (vidrio) y se seca. La ventaja de operar con
un sustrato inerte es que pueden utilizarse para el revelado, sustancias
qumicamente ms reactivas, tales como acidos fuertes, que destruirn
el papel.
23-Cromatografa de Columna:
La muestra se disuelve en el disolvente
adecuado y se vierte sobre el sustrato por
la parte superior de la columna, se aade
disolvente, y de esta forma se separan y
recogen, a la salida.
Para recoger el disolvente y la muestra
disuelta que salen de la columna puede
utilizarse un colector de fracciones. Se
coloca uno de los tubos debajo de la
columna y se
repite hasta que todo el efluente se ha recogido en numerosas
fracciones pequeas. Posteriormente, se examinan por separado cada
una de estas fracciones para identificar los distintos componentes de la
muestra.

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

24- Donde se utiliza el mtodo de columna: este mtodo es muy

utilizado en la identificacin de mezclas complejas de compuestos
orgnicos de elevado peso molecular.
25- Sustrato utilizado en la columna cromatografca: entre los
materiales que se han utilizado como sustrato pueden citarse, Al 2O3,
SiO2, MgO y resinas. Disolventes tpicos son: heptano, ter, benceno,
ester y alcohol. El disolvente seleccionado debe ser inerte frente a la
muestra y la solubilidad de los componentes de la muestra debe ser
dist6inta, con objeto de obtener una buena separacin.
26- Elusin: cada disolvente provoca la elusin de un grupo distinto de
compuestos orgnicos, lo que hace posible la separacin de la muestra
en compuestos con grupos funcionales comunes.
27- Cmo se agregan los disolventes en una columna cromatografica:
los disolventes se aaden en orden creciente de polaridad o constante
dielctrica para disolver los compuestos en orden de polaridad,
tambin, creciente.
28- Zeolitas: las zeolitas naturales y artificiales han sido muy
utilizadas en el ablandamiento de aguas por intercambio del Ca +2 y Mg
+2
del agua con Na+ de la zeolita. Las zeolitas (silicatos de aluminio y
sodio) tienen propiedades similares a las arcillas.
29- Estructura de una resina tipo:

30- Resinas de intercambio catinico: en estas resinas el grupo

funcional suele ser un acido. Por sulfonacin, se puede introducir un
grupo
SO3H en toso los anillos bencnicos de la resina. Se obtiene
as un cambiador catinico de formula
Res (SO3H), donde Res
representa la matriz y (SO3H) los grupos cidos introducidos. Con cidos
carboxlicos pueden obtenerse resinas similares de formula Res COOH.
31- Resinas de intercambio aninico: se rigen por el mismo
mecanismo que las de intercambio catinico. en gral, los grupos
funcionales son aminas o sales de amonio cuaternario. la formacin, de
una resina aninica puede ser res nh3oh y la reaccin de intercambio.
Res NH2OH + ClRes NH2Cl + OH
De esta forma se eliminan aniones de soluciones acuosas, que son
sustituidos de soluciones acuosas, que son sustituidos por OH -.
Utilizando una resina que sea una mezcla de resinas catinica y
aninica, es posible intercambiar los cationes y aniones del agua por H+
y OH-, respectivamente. De esta forma se obtiene agua, con frecuencia,
ms pura que la destilada.
32- Principios que gobiernan el intercambio inico: la velocidad de
intercambio de un in est controlada por la ley de accin de masa.

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

Todos los iones presentes en la columna compiten por los grupos

funcionales; los grupos funcionales son saturados por aquellos iones que
poseen ms afinidad por el grupo. La afinidad de los distintos iones
puede obtenerse de las reglas siguientes:
(1)- el ion de carga ms elevada posee la mayor afinidad, es decir:
Na+ < Ca+2 < La+3
(2)- el ion de mayor tamao tiene la afinidad ms elevada; esto es:
Li+ < Na+ < K+ < Cs+ < Be+2 < Mg+2 < Cu+2 < Sn+2
33- Aplicaciones analticas de la cromatografa de intercambio inico:
Se cit como ejemplo de aplicacin la eliminacin del agua de
cationes y aniones utilizando una mezcla de resinas de intercambio
catinico y aninico.
Las columnas de intercambio inico pueden utilizarse para
concentrar los componentes que interesan de una muestra.
Para recuperar el oro, se trata la columna con una pequea cantidad
de acido fuerte como HCl. As pues, el oro que inicialmente se
encontrara disuelto en varios galones de agua, se encuentra ahora
concentrado en 100ml de acido.
El contenido total catinico de la muestra puede conocerse con un
cambiador en forma acida y valorando los H + que intercambia con
los iones metlicos presentes. Igualmente puede conocerse el
contenido aninico total con un cambiador que libere OH - y
posterior valoracin de los mismos.
En la qumica orgnica, la posibilidad de separar aminocidos en
grupos, utilizando una resina apropiada. Aadiendo acido o base se
ajusta el pH de la disolucin de cada grupo.
Comercialmente, las resinas de intercambio son muy utilizadas en el
ablandamiento de aguas, as como en la extraccin de elementos
traza en agua de mar.
34- Electrocromatografia: este campo es una combinacin de la
cromatografa solido-liquido y del efecto de un campo elctrico sobre
una partcula cargada. Como soporte para la muestra y el disolvente se
emplea una lamina de papel u otro sustrato adecuado. Los componentes
de la muestra se separan por desplazamiento hacia abajo, como en una
cromatografa normal. Simultneamente, se aplica un campo elctrico
perpendicular a la direccin de desplazamiento.
35- Equipo utilizado para la Electrocromatografia:

7
ESCUDERO, Mara Anglica

Qumica Analtica

36- Aplicaciones analticas de la Electrocromatografia: con esta

tcnica pueden detectarse cambios en la composicin del suero
humano. Tambin puede utilizarse para separa colorantes o purificarlos.
La Electrocromatografia permite la separacin de mezclas de iones
metlicos as como de los aniones. Es necesario un cuidadoso control
del pH, ya que los cambios de pH afectan sensiblemente la carga sobre
los iones metlicos. Por otra parte los agentes acomplejantes modifican
las caractersticas de flujo de los componentes. As por ejemplo, la
separacin de dos metales que, en condiciones normales, sean difciles
de separar puede lograrse acomplejando uno de ellos y dejando el otro
en su estad normal.

7
ESCUDERO, Mara Anglica