INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE

CIENCIAS BIOLGICAS.

Prctica 5: Cintica Enzimtica.

Prctica 5.1: Curva Tipo de Azcares Reductores.
Autores:
Grupo: 4QV2 Seccin: 1
Introduccin.
La cintica qumica estudia la
velocidad
de
las
reacciones
catalizadas por enzimas y las
condiciones que las modifican, as
como sus mecanismos de reaccin.
La enzima es un catalizador de las
reacciones biolgicas, aumentan la
velocidad en la que se alcanzar el
equilibrio sin afectar el equilibrio
final de la reaccin. Proporcionan
una ruta con menor energa libre de
activacin para transformar el
sustrato a un producto. Estas son
de alta especifidad, y su actividad
puede verse modificada por factores
como:
temperatura,
pH,
concentracin
de
enzima,
concentracin de sustrato, etc.
Una enzima es una protena
globular,
cuya
estructura
tridimensional presenta una zona
llamada sitio activo, donde se une a
su sustrato. Algunas enzimas son
protenas
simples
formadas
exclusivamente de aminocidos y
otras protenas conjugadas. Su
actividad depende, adems de su
estructura
proteica,
de
otras
estructuras
no
proteicas
denominadas cofactores.
La
invertasa
(-Dfructofuranosidasa,
-Dfructofuransido,
fructohidrolasa)
cataliza la hidrlisis de restos
terminales no reductores -Dfructofuranosdicos
de
fructofuransidos.

enzima se designe con el nombre

de sacarasa. La denominacin trivial
de invertasa, con la que tambin se
conoce, hace referencia al hecho de
que los productos de la reaccin
son conocidos desde antiguo como
azcar invertido ya que mientras la
sacarosa es dextrorrotatoria, la
mezcla equimolecular de glucosa y
fructosa que resulta de su hidrlisis
es levorrotatoria, por lo que en el
proceso se origina un cambio de
signo (de positivo a negativo) del
valor de rotacin ptica.
Objetivos:

Resultados.

Grfica 1. Curva tipo del azcar reductor

Tabla 1. Absorbancia dada de

acuerdo a la concentracin del
azcar reductor

Entre los sustratos sobre los que

acta el ms significado es, sin
duda, la sacarosa, de ah que el

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fueron los ideales pues se obtuvo
una grfica lneal, considerando que
esta dentro de un intervalo
aceptable de error.
Con los datos obtenidos se realiz
la grfica de tendencia lineal
correspondientes a partir de las
absorbancias y las concentraciones
conocidas ( curva tipo de azcar
reductor ) ajustndose a los datos,
el R2 obtenido para la ecuacin de
la recta fue de 0.997 (Ver Grfica 1)
teniendo en cuenta que el R 2 es
cercano a 1, los datos obtenidos
son aceptables se puede considerar
que se tiene una mayor precisin
entre los ellos.
Conclusiones.
La
absorbancia
es
directamente proporcional a
la concentracin de azcar
reductor.
La curva de calibracin se
basa en la existencia de una
relacin en principio lineal
entre un carcter medible
(la absorbancia) y la variable
a
determinar
(la
concentracin).
Al modificar alguno de los
factores
usados
en
la
realizacin de esta prctica,
obtuvimos un estndar para
comparar como cambia la
accin de la enzima sobre el
analito.
Una curva no sirve de
referencia para determinar el
comportamiento
de
una
muestra incgnita mediante
interpolacin.

Anlisis de resultados.
Para la determinacin de la
actividad de la enzima invertasa se
utiliz un ensayo indirecto en el que
los productos de reaccin se
detectaron
espectrofotomtricamente despus
de que se convirtieron en derivados
coloreados. La extensin de la
hidrlisis enzimtica de sacarosa en
glucosa ms fructosa se valor
mediante el mtodo del cido 3,5dinitrosaliclico (DNS), el cual se
basa en la reduccin del DNS (de
color amarillo) por la glucosa u otro
azcar reductor al cido 3-amino-5nitrosaliclico (de color rojo ladrillo)
(Chaplin, 1986)
Se prepararon una serie de tubos ,
incluyendo un blanco siendo aquel
tubo donde no existe la presencia
de productos utilizado para calibrar
el espectrofometro utilizado para
obtener la cantidad de absorbancia
de cada tubo.
Se agregaron glucosa y sacarosa
en diferentes volmenes dado que
estos son los resultados de la
hidrolisis enzimtica. La presencia
de un regulador de acetatos fue
para mantener el pH optimo en la
reaccin de la solucin de
invertasa , mientras que en el caso
de la sacarosa , presenta un cierto
grado de absorbancia y dado que
siempre esta presente en la
hidrolisis se le agrego el mismo
volumen a todos los tubos; al ajustar
la absorbancia con una dilucin , se
observo el poder reductor del
azcar por medio de la formacin de
un compuesto colorido en los tubos.
Como se puede observar en la
grfica 1 los resultados obtenidos

Referencias.
Ting, S.V. 1956.
Rapid
Colorimetric Methods for
Simultaneous Determination
of Total Reducing Sugars and
Fructose in Citrus Juices.

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CIENCIAS BIOLGICAS.
Agric. Food Chem. Vol. 4(3)
263-266.
Captulo 5: Anlisis de
regresin.
http://www.ugr.es/~bioestad/_private
/cpfund5.pdf . Fecha de consulta:
28/Feb/2014.
Extraccin y ensayo de la
actividad
invertasa
de
levadura de panadera .

http://www.uco.es/dptos/bioq
uimica-biolmol/pdfs/31%20INVERTASA
%20ENSAYO.pdf. Fecha de
consulta: 28/Feb/2014.

Azcares - Docencia UAM-I

docencia.izt.uam.mx/lyanez/analisis
/practicas/azucares.rtf . Fecha de
consulta: 28/Feb/2014.