PRCTICA NRO 6: DIAGNSTICO DE LAS PRINCIPALES

MICOSIS OPORTUNISTAS

OBJETIVO:
Al finalizar la prctica el estudiante estar en la capacidad de:

diferentes agentes de micosis oportunistas.

Las micosis oportunistas son infecciones fngicas

que se presentan en

pacientes inmunocomprometidos, causadas por hongos que viven como

saprfitos en la naturaleza o en cavidades de seres humanos.
Cualquier hongo saprfito, que sea termotolerante, puede transformarse en
patgeno secundario en el husped inmunocomprometido.
Entre los principales agentes causales de micosis oportunistas se
encuentran:

Candida sp
Cryptococcus neoformans
Aspergillus sp
Zygomicetos
Pneumocystis jirovecci
Penicillium sp
CANDIDOSIS:
Micosis primaria o secundaria ocasionada por levaduras endgenas y

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

Establecer las diferencias macroscpicas y microscpicas de los

oportunistas del gnero Candida, que pueden afectar piel, mucosas, estructuras
profundas y rganos internos.
DIAGNSTICO: Ver esquema diagnstico en prctica de micosis
superficiales.
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CRIPTOCOCOSIS:
Es una micosis que afecta tanto a hombres como a animales, es
ocasionada por las tres variedades de la levadura capsulada Cryptococcus
neoformans:

Las variedades grubii y neoformans han sido aisladas de la naturaleza en

casi todo el mundo, en asociacin con excrementos de aves, especialmente
palomas. La variedad Gatti ha sido aislada de la naturaleza en asociacin con
detritos, flores y oquedades de numerosos rboles, entre ellos, los eucaliptos,
acacias, ficus y almendros.
El hombre adquiere la enfermedad por la inhalacin de blastoconidias poco
capsuladas (2-3 m) presentes en el ambiente. En el hospedero este patgeno
desarrolla una cpsula polisacrida protectora. Se establece un foco primario
pulmonar que puede ser asintomtico en hospederos inmunocompetentes o
diseminada

en

inmunocomprometidos.

Las

presentaciones

clnicas

ms

frecuentes de la criptococosis son la meningitis y la meningoencefalitis, aunque en

menor frecuencia se pueden observar lesiones en vsceras, hueso, piel, rion y
prstata.
La criptococosis es de distribucin mundial, afecta a ambos sexos y todas
las edades, aunque es poco frecuente en nios, y aquellos con enfermedad de
base que comprometan tanto la inmunidad celular como la humoral.

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

C. neoformans var. grubii, serotipo A

C. neoformans var. neoformans serotipo D y C
C. neoformans var. gatti serotipo B

DIAGNSTICO
Muestra:

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LCR
Esputo, lavado broncoalveolar
Orina
Biopsias
Sangre, mdula sea
Exudado de ulceras, material purulento
Secrecin prosttica.

Observacin entre lmina y laminilla

Tinta china o nigrosina
Coloraciones histolgicas (HE, PAS, plata metenamina, mucicarmina de
Meyer, Azul de Alcin)
Al realizar una tincin negativa con la tinta china, se observan
blastoconidias provistas de una pared bien definida y una cpsula refringente, con
o sin gemacin, redondas u ovaladas de 4-6 m de dimetro y hasta de 12-20
m, dependiendo del tamao de la cpsula (Figura 40). En las preparaciones en
fresco, para observar la cpsula, se baja el condensador, se cierra el diafragma y
se observa con poca luz.

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

Examen directo:

Figura 40: Levaduras encapsuladas de Cryptococcus

neoformans
(flechas
azules).
Tinta
china.
http://sameens.dia.uned.es/Trabajos9/Trab_Publicos/
Trab_2/Garcia_Torrecillas_2/01_criptococosis.html

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En los estudios histopatolgicos, la intensidad de la respuesta inflamatoria

va a depender del rgano y de las caractersticas del hospedero. Hay formacin de
granulomas con necrosis.
Cultivo:
Se realiza en Agar Sabouraud u otros medios de cultivo sin cicloheximida,
ya que inhibe su crecimiento. Se incuba a una temperatura de 32 a 37 C,
desarrolla en 48 horas, son blancas o amarillentas, lisas y brillantes, a los cinco
das toman un aspecto mucoide que recuerdan el aspecto de la leche
condensada. Por ser el C. neoformans el nico gnero que utiliza la enzima
fenoloxidasa, crece en medios con semillas pulverizadas de Guizotia abyssinica
(medio de Staib o agar de semillas de niger o agar cido cafeico), donde adopta
un color ocre. Tambin se puede sembrar en un medio a base de semillas de
girasol.

Estudio inmunolgico:
Por el estado de inmunodeficiencia de los pacientes y por la escasa
antigenicidad de la cpsula que rodea al hongo, no se han obtenido antgenos
adecuados para detectar hipersensibilidad retardada en los pacientes.
El diagnstico inmunolgico de criptococosis se establece mediante el uso
de la tcnica de aglutinacin de partculas de ltex, la cual permite detectar
antgenos polisacridos capsulares en las muestras clnicas.

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temperaturas mayores o iguales a 40 C inhiben su crecimiento. La colonia se

ASPERGILOSIS
Bajo este trmino se incluyen una serie de enfermedades clnicamente
diferentes, pero producidas por especies de mohos hialinos septados, del genero
Aspergillus. Este grupo de hongos se caracteriza por tener distribucin mundial y
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ser ubicuos en la naturaleza; sin embargo, se presentan con mayor frecuencia en

ambientes hmedos, asociados con todo tipo de material orgnico como plantas,
tierras, telas, condimentos y filtros de aire acondicionado.
La clasificacin clnica de aspergilosis es muy compleja y extensa, se
consideran tres grupos de enfermedades, basados en la asociacin establecida
entre el hongo y el hospedero: Aspergilosis por hipersensibilidad, colonizacin por

DIAGNSTICO
Muestra:

Escamas, detrito subungueal

Esputos, lavado broncoalveolar
Material purulento o necrtico
Biopsias
Hemocultivos (raramente positivos)

Examen directo:

En fresco, entre lmina y laminilla

KOH al 10-20% con tinta
Negro de clorazol E
Calcofluor
Coloraciones histolgicas (HE, PAS, plata-metenamina)

Al examen directo se observan hifas hialinas, septadas, con un dimetro de

3-6 m, de pared lisa y gruesa, con ramificaciones dicotmicas en ngulo de 45. A
veces se observan clamidoconidias. Las hifas proliferan en el tejido con arreglo
radial o paralelo a este; ocasionalmente las hifas exiben caractersticas
morfolgicas atpicas y se ven globosas, distorsioonadas y ms amplias que lo
usual, hasta de 12 m de dimetro, con escaso o ningn septo, por lo que pueden

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

Aspergillus y Aspergilosis invasiva.

confundirse con las de zigomicetos.

En algunas muestras, especialmente en aquellas provenientes de otitis y
aspergiloma pulmonar y nasal, pueden encontrarse cabezas aspergilares. En los

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casos de aspergiloma, en las cavidades pulmonares y de senos (paranasal,

etmoidal y maxilar), se observan masas o bolas del hongo, constitudas por hifas
septadas dicotmicas, con proyeccin radiada. Las hifas no invaden la pared de la
cavidad o caverna.
En las biopsias de aspergilosis invasora, se observan numerosas hifas con
tendencia a proyectarse en forma radial. Las hifas, por crecer en la luz de los
inflamatorio

constitudo

principalmente

por

leucocitos

polimorfonucleares

neutrfilos y grados variables de necrosis.

Cultivo:
Se realiza en Sabouraud con y sin antibiticos, Lactrimel o Czapek. Es un
hongo de crecimiento rpido, 3 4 das, son de color blanco, verde amarillo, caf
o rojizo y puede haber difusin del pigmento al medio de cultivo. Son de aspecto
aterciopelado, granuloso, pulverulento. Las caractersticas tanto macro como
microscpicas dependern de la especie de Aspergillus (Figura 41).

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vasos y perforarlos, se ven rodeadas de reas hemorrgicas e infiltrado

Figura 41: Principales estructuras morfolgicas del gnero Aspergillus.

www.uprm.edu/.../Lab/Aspergilosis.htm
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Estudio inmunolgico:
Las pruebas serolgicas para la determinacin de anticuerpos son tiles en
pacientes alrgicos y las pruebas de antgenos lo son en las formas invasivas.
Pueden realizarse IDD, Inmunoelectroforesis, contrainmunoelectroforesis, ELISA y

ZIGOMICOSIS:
Bajo este trmino se agrupan una variedad de infecciones oportunistas
producidas por varios gneros de mohos aceptados, pertenecientes a la clase
Zygomycetes, orden mucorales. Son hongos termotolerantes, saprfitos, que se
aslan con frecuencia de suelos y de materia orgnica en descomposicin;
tambin son contaminantes de alimentos y vendajes almacenados en ambientes
hmedos.
Las infecciones ms frecuentes producidas por estos hongos, pueden ser
clasificadas de acuerdo con su ubicacin anatmica en rinocerebral, pulmonar,
gastrointestinal, subcutnea y sistmica, pero tambin pueden manifestarse en un
rgano aislado como cerebro, rin y corazn.
La

mucormicosis

es

de

distribucin

mundial,

no

son

factores

predisponentes la edad, el sexo y el tamao del inculo.

DIAGNSTICO
Muestra:

Biopsias (se debe obtener material abundante y de buena calidad)

Tejidos necrticos
Secreciones
Aspirado de senos nasales y paranasales
Esputos, lavado broncoalveolar.

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

fijacin de complemento.

Examen directo:

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En fresco, entre lmina y laminilla

KOH al 10% con o sin tinta
Negro de clorazol E
Calcofluor
Coloraciones histolgicas (PAS, HE, plata-metenamina).

Se observan hifas anchas, de 7-15 m de dimetro, aceptadas o

infrecuentemente septadas, que se ramifican en ngulo de 90. Son de paredes
falsos septos o de ramificaciones en diferentes ngulos y de cintas ms que de
cilindro.
Las tinciones usuales de las biopsias, tambin permiten la visualizacin de
los elementos micticos. Se observa edema y necrosis tisular. El infiltrado celular
es escaso y est constituido principalmente por polimorfonucleares neutrfilos.
Cultivo:
Se realiza en agar Sabouraud sin cicloheximida y se incuban a 37 C. El
crecimiento es rpido (12 a 48 horas), las colonias son elevadas y cubren toda la
superficie del medio de cultivo. Para demostrar su patogenicidad se deben
realizar cultivos repetidos y observar la presencia del hongo en todos los tubos
sembrados. Las caractersticas macro y microscpicas van a depender de la
especie involucrada.
NEUMOCISTOSIS:
Neumona ocasionada por el hongo Pneomocystis jiroveci (P. carinii). Es
una infeccin cosmopolita oportunista muy bien reconocida y estudiada en los
pacientes infectados con el VIH. La infeccin se adquiere por va area. En
hospederos inmunodeficientes la infeccin cursa casi siempre con una neumonitis

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

delgadas y flexibles por lo que se doblan y colapsan, dando la apariencia de

bilateral con infiltrados intersticiales difusos. La taquipnea con disnea progresiva,

la tos seca y la cianosis son los sntomas habituales. Desde el pulmn el hongo
puede diseminarse a otros rganos como ganglios linfticos, bazo, hgado,

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corazn, medula sea y con menor frecuencia a cerebro, pncreas, timo, tiroides,
retina, coroides, odo y piel, entre otros.
DIAGNSTICO

Lavado broncoalveolar
Cepillado bronquial
Esputos inducidos
Biopsias

Examen directo:

Giemsa, Wright
Diff-Quik
Plata-metenamina
Azul de toluidina O
Calcofluor

Se observan trofozotos (ascosporas) y quistes (ascas) de P. jiroveci (P.

carinii). Los trofozotos tienen un dimetro de 1-3 m, su ncleo es redondeado y
su citoplasma es de contornos irregulares. Los quistes constituyen solo el 1% de
los microorganismos, tienen 4-7 m de dimetro y su forma vara de redonda a
ovoide, observndose tambin formas colapsadas. Poseen una gruesa pared
celular y estn provistos de una u ocho ncleos dependiendo de su estado de
maduracin.
El cuadro histolgico tpico en cortes teidos con HE se caracteriza por un
exudado intra-alveolar eosinfilo, espumoso, con aspecto de panal de abejas, lo
cual se considera diagnstico an en ausencia de la demostracin de P. jirovecci
(P. carinii) mediante coloraciones especiales. En preparaciones teidas con Platametenamina, se aprecian claramente quistes y trofozotos.

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

Muestra.

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Cultivo: Aun no se ha podido recuperar en cultivo.

Otros mtodos diagnsticos: Amplificacin del ADN por PCR.

Prctica nmero 6: Diagnstico de las principales Micosis Oportunistas

Figura 41: Quistes de Pneumocystis jiroveci en pulmn (flechas).

Coloracin histological Plata-metenamina. Disponible
en:
student.ccbcmd.edu/.../lab9/u1fig32d.html

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ACTIVIDAD PRCTICA
Dibuje las estructuras observadas al microscopio de los principales agentes

Candida spp

Cryptococcus
neoformans

Aspergillus spp

Hifas no septadas

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de micosis oportunistas.

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