Reao em Cadeia da Polimerase:

As DNA polimerases so enzimas responsveis pela sntese de novas

cadeias moleculares de DNA, que atuam emparelhando os
desoxirribonucleotdeos trifosfatados (dNTP) com os nucleotdeos
completmentares fita de DNA molde e, portanto, deve ocorrer a
transferncia de um grupo fosfato, onde sua 3-OH causa um ataque
nucleoflico sobre o fosfato alfa, situado mais prximo da desoxiribose
do desoxiribonucleotdeo 5 trifosfato que entra no extremo 3 da
cadeia de DNA, liberando Pi inorgnico e formando uma nova ligao
fosfodister, promovendo enlongao da cadeia. Estas polimerases
so capazes de adicionar at mil nucleotdeos por segundo, sempre
na direo 5-> 3, uma vez que necessrio ter o grupo 3-OH livre
como primer para o inicio da sntese visto que este realiza o ataque
nucleoflico no fosfato alfa do dNTP, portanto, o primer deve ser
sintetizado pela RNA primase.
Durante a replicao, as DNA polimerases so capazes de realizar
funes variadas, como por exemplo elongao da cadeia de DNA
est a atividade de exonuclease 3, conferindo-lhe a capacidade de
degradao do DNA e posterior sntese de reparo de leses fita de
DNA.
A reao em cadeia da polimerase(PCR) uma tcnica provinda das
inovaes em biologia molecular (1986) cuja principal funo a
amplificao, ou aumento, dos fragmentos de DNA existentes numa
da amostra ou fragmento gnico, at pouquissimos pares de base.
A tcnica PCR pode ser divida em etapas ou cclos, repetidos cerca de
30 vezes, pelas suas diferentes fases:
A fase de desnaturao, ocorre entre as temperaturas 94-96C, onde
a fita dupla de DNA desenrolada via quebra das pontes de
hidrognio entre suas bases pareveis (A-T ; G-C) e separao das
mesmas, onde os primers sero ligados especificamente s suas
sequncias homlogas correspondentes no DNA, caracterizando a
fase do Anelamento (50-54C).
O ltimo cclo a fase de extenso do DNA, com a temperatura
ocilando entre 72-76C, onde ocorre a sntese da nova fita
antiparalela sobre a fita previamente desnaturada, onde esta reao
catalizada pela enzima DNA-polimerase ou ento por uma enzima
de igual atividade sintetizada artificialmente ou extrada de bactrias(
ao exemplo da Thermus acquaticus polimerase, ou Taq-polimerase,
que uma enzima termoestvel).

PCR no artigo:
As tcnicas de biologia moleculares utilizadas no dado trabalho
possuem a funo de diagnstico do agente etiolgico das
dermatoses tropicais e tambm procuram identificar a de protenas e
polimorfismos nos genes dos microorganismos envolvidos na doena
e, tambm, do hospedeiro.
Para sucesso da PCR, as amostras de DNA podem provir tanto de
tecidos, sangue ou clulas isoladas, preferencialmente obtidas por
mtodos no-invasivos como a escarificao da borda da leso. No
estudo da Leishmaniose tegumentar americana, vlido usar a PCR
para o diagnstico etiologico da doena devido a existncia de uma
baixa amostra de parasita que existe quando se realiza a bipsia da
pele, principalmente da forma mucosa presente. Os primers usados
preferencialmente so os que amplificam sequncias especficas de
leishmnias, como os primers amplificadores de sequncias de DNA
dos kinetoplastos circulares (kDNA), presente em todas as formas de
leishmnia.
Entre os fatores genticos conhecidos do hospedeiro, relacionado
susceptibilidade e a resistncia aos parastas, destacado o gene
NRAMP1 o qual normalmente expressa uma protena de transporte
membranal, localizada na membrana e lisossomos dos macrfagos.
Logo, a PCR auxiliou a procura de polimorfismos neste gene, no seu
mtodo PCR-RFLP para uma amostra populacional da regio nordesde
do estado de So Paulo. Os resultados mostraram que o alelo C do
polimorfismo 274C/T est relacionado proteo para o
desenvolvimento da LTA, enquanto o gentipo TT do polimorfismo
823C/T mostrou-se associado forma mucosa da LTA.
Ainda, as tcnicas em biologia molecular ajudam o diagnstico etiolgico
nas formas paucibacilares da hansease, nos contactantes e quando houver
suspeita de recidiva. Usando vrios pares de primers utilizados no
diagnstico por PCR quando h supseita de recidiva se faz necessrios saber
se o bacilo vivel, no bastando apenas os fragmentos de DNA
encontrados na amostra.

http://www.scribd.com/doc/15362706/Reacao-em-cadeia-da-polimerase-PCR
http://www.biomolweb.kit.net/