B0217505

B0217506

O.F. Medio Basal de Hugh

& Leifson
Uso
Medio de cultivo utilizado en las pruebas bioqumicas de identificacin bacteriana en base al metabolismo oxidativo-fermentativo de
las bacterias Gram negativas, a la movilidad y produccin de gas.

FRMULA (en gramos por litro)

Triptena...................................................................................................................................... 2.0 .
Cloruro de sodio.......................................................................................................... 5.0.
Fosfato dipotsico...................................................................................................0.30.
Azul de bromotimol...............................................................................................0.03.

Fundamento
El medio basal O.F. fue desarrollado por Hugh y Leifson para evidenciar la importancia del significado taxonmico del metabolismo
oxidativo-fermentativo de los hidratos de carbono por las bacterias
Gram negativas.
Cuando un microorganismo es inoculado en 2 tubos del medio O.F.
conteniendo el mismo hidrato de carbono, y uno de los 2 tubos es
sellado con vaselina o parafina antes de la incubacin, se puede
diferenciar correctamente el metabolismo oxidativo o fermentativo
as como la no utilizacin de un hidrato de carbono por la bacteria
en estudio.
En el medio de cultivo, el agregado del hidrato de carbono en concentracin al 1%, permite que los microorganismos utilicen para su
desarrollo dicha sustancia, evitando que bacterias aerbicas metabolicen la triptena presente con la consecuente produccin de
reaccin alcalina, la que se neutraliza por la ligera acidez producida
por un microoganismo oxidativo.
El fosfato dipotsico agrega capacidad reguladora, el cloruro de
sodio mantiene el balance osmtico, y el azul de bromotimol es el
indicador de pH que vira al color amarillo en medio cido luego de
la oxidacin o fermentacin del hidrato de carbono. El contenido
de agar otorga la propiedad de ser un medio semislido y permite
determinar la movilidad y la distribucin de los productos cidos.
La glucosa es el hidrato de carbono mas frecuente que se agrega
al medio basal O.F., pero tambin pueden agregarse otros azcares
(lactosa, sacarosa, maltosa, manitol o xilosa) segn el metabolismo
del microorganismo en estudio.
Contenido y composicin
Cdigo B0217505: envase x 100 g.
Cdigo B0217506: envase x 500 g.

Agar................................................................................................................................................2.50.
pH final: 7.1 0.2

Instrucciones
Suspender 9.8 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar
5 minutos. Calentar con agitacin frecuente y hervir 1 minuto para
disolucin total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en
autoclave a 121C durante 15 minutos. Agregar de manera asptica el hidrato de carbono en estudio en concentracin final al 1%.
Distribuir en tubos estriles y dejar solidificar en posicin vertical.

Nota: alternativamente agregar el hidrato de carbono previo a
la esterilizacin. En este caso se debe esterilizar en autoclave a
118C durante 10 minutos.
Caractersticas del producto
Medio de cultivo deshidratado: color beige verdoso, homogneo,
libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color verde azulado.
Almacenamiento
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 C.
Medio de cultivo preparado a 2-8 C.
Procedimiento
Siembra
Inocular, por cada hidrato de carbono que se use y para cada microorganismo en estudio, 2 tubos conteniendo el medio O.F. y el mismo
hidrato de carbono. Rotular un tubo con la inscripcin: Abierto y
otro tubo con la inscripcin: Cerrado (sellado).
A partir de un cultivo puro de 18-24 horas del microorganismo en

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estudio, preparar un inculo poco denso y sembrar utilizando aguja
de inoculacin. Picar hasta aproximadamente 0.6 mm del fondo.
Agregar al tubo cerrado (sellado) 1 o 2 ml de vaselina o parafina
fundida estril, para excluir el oxgeno.
Luego, tapar ambos tubos con las tapas apropiadas.

Microorganismos

Escherichia coli

Se debe informar: produccin de cido (A), cido con gas (AG),

alcalino (K) o sin cambio (-).

OF con

OF con

(Tubo abierto)

(Tubo Cerrado)

(Tubo Abierto)

(Tubo cerrado)

AG

AG

AG

AG

1% de glucosa 1% de glucosa

ATCC 8739
P. aeruginosa
ATCC 27853
Shigella flexneri
ATCC 12022

Interpretacin de los resultados

El uso del hidrato de carbono, ya sea por fermentacin u oxidacin,
produce acidez en el medio, con el consecuente viraje del color
verde al amarillo.
Microorganismos oxidativos del hidrato de carbono en estudio: producen una reaccin cida solo en el tubo abierto. Presentan poco o nulo desarrollo y ausencia de produccin de cido en el
tubo cerrado.
Microorganismos fermentadores del hidrato de carbono en
estudio: producen una reaccin cida en ambos tipos de tubos.
Microorganismos que no utilizan el hidrato de carbono en estudio: no producen cambios ninguno de los 2 tubos, los cuales
permanecen verdes.

OF
Medio Basal

ATCC 25922
Escherichia coli

Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 48 horas.
Algunos microorganismos requieren hasta 4 das, y otros hasta 14
das de incubacin.

OF
Medio Basal

A. baumannii
ATCC 19606

A: reaccin cida: medio color amarillo.

K: reaccin alcalina: medio color verdo o verde azulado.
G: produccin de gas.

CONTROL DE ESTERILIDAD

RESULTADO

Medio sin inocular Sin cambios

Materiales necesarios no provistos

Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales segn requerimiento.

Las reacciones tpicas son las siguientes:

Tubos con

Tubo

Tubo

reaccin

Abierto

cerrado

Oxidacin

Abierto

Amarillo (A)

Verde (-)

Fermentacin

Cerrado

Amarillo

Amarillo (A)

Cerrado

Amarillo (AG)

Amarillo (AG)

Ninguna

Azul o Verde

Verde

(-)

(-)

Reaccin

Sin oxidacin
o fermentacin

Control de Calidad
Medio de cultivo basal (sin hidratos de carbono) y suplementado
con 1% de glucosa.

Precauciones
- Solamente para uso diagnstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase est abierto o daado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminacin o deterioro, as como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidadas por el laboratorio.

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- Las caractersticas del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo segn reglamentaciones vigentes.

Indicaciones al consumidor
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Conservar el producto segn las indicaciones del rtulo.

02/2010 - REV .00

Referencias
- Hugh, R. and Leifson, E. 1953. The taxonomic significance of fermentative versus oxidative metabolism of carbohydrates by various
Gram negative bacteria. J. Bacteriol. 66:24.

- MacFaddin. 1985. Media for isolation-cultivation-identificationmaintenance of medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
- MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identification of medical
bacteria, 3rd ed. Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.

SMBOLOS UTILIZADOS

DIAGNSTICO
IN VITRO

CDIGO N

ELABORADOR

LABORATORIOS BRITANIA S.A.

LOS PATOS 2175 (C1283ABI)
CABA - ARGENTINA
TEL/FAX 54 11 4306 0041

ESTRIL

N DE
DETERMINACINES

LOTE N

FECHA DE
VENCIMIENTO

LMITE DE
TEMPERATURA

INSTRUCCIONES
DE USO

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