INDICEBIORREMEDICION

DE

METALES

PESADOS

EN

AGUAS RESIDUALES
INDICE
I

INTRODUCCIN

La contaminacin es uno de los problemas ambientales ms importantes que afectan a nuestro mundo y surge
cuando se produce un desequilibrio, como resultado de la adicin de cualquier sustancia al medio ambiente, debido a
los diferentes procesos productivos del hombre (fuentes antropognicas) y actividades de la vida diaria, causando
efectos adversos en el hombre, animales y vegetales; problemtica a la que el Per no es ajeno.
En nuestro pas entre los principales agentes contaminantes identificados tenemos: el plomo, mercurio, aluminio,
arsnico, magnesio, manganeso, hierro, cobre, cianuro. Agregndose a estos metales pesados el dixido de azufre,
y el cido sulfrico (R.M. N R.M. N 525-2005/MINSA).

La fitorremediacin es la descontaminacin de los suelos, ladepuracin de las aguas residuales o la

limpieza
del
aire
interior,
usando plantas
vasculares, algas (ficorremediacin)
u hongos (micorremediacin), y por extensin ecosistemasque contienen estas plantas. As pues, se
trata de eliminar o controlar las diversas contaminaciones. La degradacin de compuestos dainos
se acelera mediante la actividad de algunos microorganismos.
La fitorremediacin acutica, el fundamento de este tipo de tratamiento consiste en que los
compuestos presentes en el agua son absorbidos del agua favoreciendo la restairacion de la calidad
de la misma. La fitorremediacin acutica es una alternativa ecolgica y econmicamente viable.

II

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1 DETERMINACIN DEL PROBLEMA
Contaminacin por plomo en el Callao.
1.2 FORMULACIN DEL PROBLEMA (EXPRESADO EN PREGUNTA)
Es posible reducir la contaminacin por plomo con la Fitoremediacin acutica con Salvinia
Minima en El Callao?
1.3 JUSTIFICACIN E IMPORTANCIA
En el Callao, el problema por contaminacin por plomo se ha relacionado con la presencia de los
depsitos de concentrados de plomo y otros metales pesados, al inadecuado transporte del mineral
de los depsitos al puerto, a los robos cotidianos del mismo de los camiones que transportan este
concentrados desde los depsitos cerrados al puerto y pasivos ambientales (plomo en el suelo),
adems de plomo en el material participado proveniente del parque automotriz.
La fitorremediacin acutica, el fundamento de este tipo de tratamiento consiste en que los
compuestos presentes en el agua son absorbidos del agua favoreciendo la restairacion de la
calidad de la misma. La fitorremediacin acutica es una alternativa ecolgica y
econmicamente viable.
En el ao 1993. Srivastav y colaboradores demostraron que Salvinia minima tiene la capacidad de
remover entre el 70-90% de plomo y de zincen dos das cuando la expusieron a concentraciones
de los metales de 1 a8 mg/l. por otro lado, Olgun y colaboradores (2005) demostraron que la
planta era capaz de remover hasta un 89.7% de Pb
una concentracin de plomo de 11.77 mg/l.

III

OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION

2+

en solo 24 horas, habiendo sido expuesta a

2.1 OBJETIVOS
2.2 OBJETIVO GENERAL:
Disminuir la concentracin por Plomo en aguas residuales del callao mediante la
Fitoremediacin acutica con Salvinia minima.
2.3 OBJETIVOS ESPECIFICOS.
Determinar la eficacia de la Salvinia minima como mtodo de Fitoremediacin acutica de
plomo en un medio controlado.
Lograr el crecimiento, estabilizacin y desarrollo de Salvinia minima en un medio con
condiciones controladas, rico en nutrientes y metales pesados.
Cuantificar la concentracin de Plomo absorbido por Salvinia minima.

IV

HIPTESIS Y VARIABLES

3.1. HIPTESIS
Reduccin de la concentracin plomo mediante la tcnica de fitorremediacin utilizando
Salvinia mnima.
3.2. VARIABLES DE LA INVESTIGACIN
3.1.1. Variables dependientes
X =Acumulacion de Plomo en la biomasa de S . minima

Y =Mecanismos de adsorcion y acumulacion intracelular de Pb

+2

3.1.2. Variables independientes

Z =Concentracionde Pb+2
La variable Y depende de tres factores muy importantes:
Y 1=Biomasa
Y 2=Intensidad luminosa
Y 3=Temperatura

3.3. DEFINICIN CONCEPTUAL DE VARIABLES

a) FITORREMEDIACIN: ACUMULACION DE PLOMO EN LA BIOMASA DE
S. MINIMA

Consiste en que los compuestos presentes en el agua son adsorbidos e incorporados dentro de la
estructura de las plantas, logrando eliminar la contaminacin del agua y favoreciendo la
restauracin de la calidad de la misma.
En la rizofiltracin, los metales son adsorbidos y/o absorbidos por las races de las plantas. Se
basa exclusivamente en hacer crecer, en cultivos hidropnicos, races de plantas terrestres con
alta tasa de crecimiento y rea superficial para absorber, concentrar y precipitar metales pesados
de aguas residuales contaminadas
b) CONCENTRACIN DE PLOMO
El plomo es el metal pesado ms abundante en la naturaleza. Disminuye la fotosntesis,
disminuye la actividad de las enzimas y disminuye el transporte mitocondrial de los electrones.
Se sabe adems, que el plomo no es esencial para el crecimiento de las plantas y es considerado
txico para ellas a la concentracin de 30-300 g/g en sus tejidos.
A lo largo de los experimentos S. minima se expuso a diferentes concentraciones de plomo (CPb),
en un rango de 0.58 a 27.58 mgPb/l.
c) MECANISMO DE ADSORCIN Y ACUMULACIN INTRACELULAR DE
PLOMO
Las plantas tienen diferentes mecanismos de respuesta ante la presencia de compuestos txicos
como los metales pesados. Los procesos de destoxificacin que usualmente se conocen son la
adsorcin y bioacumulacin.
Las estrategias para evitar que los metales pesados aumenten en las plantas son diversas.
Extracelularmente se incluyen las micorrizas, la pared celular y exudados extracelulares. La
tolerancia puede adems involucrar la membrana plasmtica y el citosol. Dentro del protoplasto
existe una variedad de mecanismos potenciales, por ejemplo, para la reparacin de los daos de
estrs se ha involucrado a proteinas de choque trmico o a las metalotionenas, as como la
quelacin de metales por cidos orgnicos, aminocidos o pptidos, o su compartamentalizacin
a procesos metablicos para el transporte dentro de la vacuola.
d) BIOMASA
Se refiere a la cantidad en peso necesario de S. mnima para lograr la remocin de Pb +
en los experimentos.
e) INTENSIDAD LUMINOSA
-2 -1
Se expuso a diferentes intensidades luminosas: en rangos de 109 a 810 molm s .
f) TEMPERATURA
Se expuso a diferentes temperaturas: 23.44 a 32.26C .

3.4. DEFINICIN OPERACIONAL DE LAS VARIABLES

- La variable independiente Y expresada en funcin de sus tres variables dependientes
sera:

Y F (Y

,Y 2 ,Y 3)

- La variable independiente X expresada en funcin de sus dos variables dependientes

sera:
X F(Z ,Y )
Operando las variables:
X =Y + Z
Y =Y 1 +Y 2 +Y 3

MARCO TERICO
3.1Antecedentes tericos vinculados a la investigacin

a. REMOCIN DE Pb(II) POR Salvinia minima NO VIABLE EN SISTEMAS POR

LOTE
Ha reportado que Salvinia minima es hiperacumuladora de Pb(II) y Cd(II) y que el
principal mecanismo de remocin de Pb(II) por biomasa viable de S. minima es la
adsorcin a la superficie en un medio libre de nutrientes (EDTA y fosfatos). Existen
abundantes reportes sobre el uso de bioadsorbentes a base de biomasa algal para la
remocin de metales, pero nada se ha descrito sobre el uso de biomasa no viable de S.
minima para tal propsito. El objetivo del presente trabajo fue evaluar la remocin de
Pb(II) por biomasa no viable de S. minima a diferentes concentraciones iniciales del
metal, pHs, cantidades de biomasa y tiempos de contacto en un sistema por lote.
b. CARACTERSTICAS FISICO-QUMICAS DE LA BIOMASA DE Salvinia minima Y
SU USO EN LA REMOCIN DE METALES.
Salvinia minima ha resultado ser mejor acumuladora de Pb(II) y Cd(II) que otras plantas
acuticas flotantes como las lemnceas, lo cual se refleja en sus mayores Factores de
Bioconcentracin. La adsorcin a la superficie, ha sido reportada como el principal
mecanismo de remocin de Pb(II) en S. minima en un medio libre de nutrientes. Dicho
mecanismo, depende en gran medida de las caractersticas fisicoqumicas de la
biomasa. Sin embargo, no existen reportes sobre dichas caractersticas en Salvinia
minima. El objetivo del presente trabajo fue realizar la caracterizacin fisicoqumica de
la biomasa viable y no viable de S. minima.
c. CARACTERIZACIN DEL SISTEMA DE DESCONTAMINACIN PRODUCTIVO DE
AGUAS SERVIDAS EN LA FINCA PECUARIA INTEGRADA DE LA UNIVERSIDAD
EARTH: I. LAS PLANTAS ACUTICAS
Las plantas acuticas han sido desde aos atrs una estrategia efectiva en sistemas de
descontaminacin de aguas residuales. En este estudio se analiz el sistema de
descontaminacin productiva de las aguas servidas de la Finca Pecuaria Integrada de
la Universidad EARTH, enfocndose hacia el papel que cumplen las plantas acuticas
en dicho sistema y as determinar su uso potencial. Para esto, se realiz la
identificacin taxonmica, adaptacin, anlisis de macro y micronutrientes y anlisis

bromatolgico de Eichhornia crassipes (Familia Pontederiaceae), Ipomoea acuatica

(Familia Convolvulaceae), Limnocharis flava (Familia Limnocharitaceae), Pistia
stratiotes (Familia Araceae) y Salvinia minima (Familia Salvinaceae), especies
presentes en los humedales artificiales de dicho sistema.

3.2 bases tericas

4.2.1. Metales Pesados
Los metales pesados son un grupo de elementos de alta prioridad, debido a su alta
toxicidad sobre la mayora de los organismos, a su ubicuidad y a que se pueden bioacumular a
travs de las cadenas trficas en ecosistemas acuticos y terrestres.
3

Los metales pesados tienen una densidad superior a 4,5 g/cm , y aunque algunos son
esenciales en el metabolismo de los seres vivos, como el cobalto, cobre, hierro, manganeso,
molibdeno, vanadio, estroncio, y zinc, en concentraciones muy elevadas stos son demasiado
txicos y pueden ocasionar daos irreversibles. Algunos otros como el cadmio y el mercurio son
muy txicos inclusive a concentraciones muy bajas. Los metales pesados adems tienden a
persistir en el ambiente, dada su resistencia a la degradacin qumica o biolgica (Salomons,
1995).
En cuerpos receptores de agua, los metales pueden originarse de fuentes naturales y/o
antropognicas. De los 59 elementos metlicos, 13 han sido incluidos en la lista de contaminantes
prioritarios por la Environmental Protection Agency (EPA).
Actualmente en Mxico, el agua se ha convertido en elemento central de la poltica
ambiental; su disponibilidad y distribucin condiciona la posibilidad de desarrollo de algunas
regiones del pas y su calidad es el factor determinante para la salud y bienestar de la humanidad.
Debido a ello, el aumento de la contaminacin en las aguas superficiales y marinas se est
convirtiendo en una amenaza de altas proporciones por la presencia de elevadas concentraciones
de metales pesados como el plomo, cadmio, cromo y nquel (Moreno-Snchez & Devars, 1999).
Esta problemtica se ha acrecentado debido al mal manejo de las descargas industriales y al
ineficiente tratamiento que se les da a las mismas.
Las enfermedades relacionadas con el agua contaminada son una tragedia humana que
cada ao cobra la vida de ms de 5 millones de personas, de acuerdo a la Organizacin Mundial
de la Salud (OMS: Organizacin Mundial de la Salud). Como resultado de esta problemtica, los
costos del cuidado de la salud causados por aguas contaminadas representan tres mil millones de
dlares anualmente a nivel mundial (Frenk, 1993). Adems La Organizacin de las Naciones
Unidas (ONU, 2006), ha reportado que el agua contaminada causa el 80% de las enfermedades
del mundo, la mayor parte de los que sufren estas enfermedades son nios menores a 5 aos de
acuerdo a la Organizacin de las Naciones Unidas para la Educacin, la Ciencia y la Cultura
(UNESCO, por sus siglas en ingls).

4.2.2. Toxicidad de metales pesados en las plantas

La toxicidad puede resultar de la unin de metales a grupos sulfhdricos en protenas,
conduciendo a una inhibicin de actividades o defectos en la formacin de la estructura de las
clulas, o desplazando un elemento esencial dando como resultado deficiencias en el
metabolismo de las plantas.
Adems, el exceso de metales pesados puede estimular la formacin de especies reactivas
de oxgeno, resultando en estrs oxidativo (Dietz, 1972). Las plantas tienen diversos mecanismos
potenciales a nivel celular que pueden estar involucrados en la detoxificacin y de esta manera en
la tolerancia a metales pesados.
Debido a las problemticas de contaminacin y toxicidad que pueden causar los metales
pesados, la Norma Oficial Mexicana (NOM-001-ECOL-1996) (Tabla 1), establece los lmites
mximos permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales en aguas y bienes
nacionales, considerando los cianuros y los siguientes metales pesados: arsnico, cadmio, cobre,
cromo, mercurio, nquel, plomo y zinc.

Tabla 1. Lmites mximos permisibles para metales pesados y cianuros.

Fuente: NOM-001-ECOL-1996
(*) Medidos de manera total.
P.D. = Promedio Diario
P.M. = Promedio Mensual
N.A. = No es aplicable
(A), (B) y (C): Tipo de Cuerpo Receptor segn la Ley Federal de Derechos.

4.2.3. Fuentes de metales pesados

Los metales son algunos de los elementos abundantes en la corteza de la Tierra. Los
minerales tales como los enlistados en la Tabla 2 representan la fuente original de los metales
encontrados en suelos y ambientes acuticos.
Las fuentes de metales urbanas e industriales han sido identificadas como la causa
principal de contaminacin por metales txicos. Los orgenes de estos compuestos txicos son
muy diversos. Las ms obvias son las operaciones industriales como son las fundiciones, fbricas
de acero, placas de metal, la elaboracin y fabricacin de metales, y de plantas mineras. Algunas
de las industrias que generan aguas residuales contaminadas por metales pesados entre otros
contaminantes son: azucarera, petrolera, cervecera, textil, celulosa y papel, acabados metlicos,
cobre y sus aleaciones, curtidura, alimenticias, hierro y acero. Estas fuentes son legalmente
clasificadas como focos puntuales de contaminacin, aunque el escurrimiento de estos complejos
es considerado como una fuente difusa.

Tabla 2: Fuentes naturales de metales y elementos en la lista de contaminantes prioritarios

Elemento
Antimonio
Arsnico
Berilio
Cadmio
Cromo
Cobre
Plomo
Mercurio
Nquel

Selenio
Plata
Talio
Zinc

Fuentes naturales de metales (metales minerales)

Sb2S3. Manantiales geotrmicos, minas.
Arsenito (HAsO2), gases volcnicos, manantiales geotrmicos.
Beril Be3Al2Si6O16
Carbonato de zinc y minerales de sulfuro, carbonato de cobre.
Cromita (FeCr2O), xido crmico (Cr2O3)
Metal libre (Cu), sulfuro de cobre (CuS2), calcopirita (CuFeS2), minas.
Galena (PbS)
Metal libre (Hg), cinabrio (HgS)
Minerales de ferromagnesio, minerales de sulfuro ferroso, xido de
nquel
(NiO2), hidrxido de nquel (Ni(OH)3)
Elemento libre (Se), Ferroselita (FeSe2), depsitos de uranio,
Metal libre (Ag), cloruro de plata (AgCl2), cobre, plomo, minerales de
zinc
Cobre, plomo, residuos de plata
Calamina (ZnCO3), minas
Fuente: Salomons y Frstner (1995).

Otras fuentes importantes de contaminacin por metales en las zonas urbanas son: los
tejados metlicos, canalones y bajantes, tuberas metlicas oxidadas, tuberas de plomo viejas,

depsitos de automviles y vertederos de basura y desechos slidos (muchos de ellos insalubres y

que emiten contaminantes).
4.2.4. Plomo
4.2.4.1. Caractersticas fsicas y qumicas
El plomo (Pb, N.A. 82) es el metal pesado ms abundante en la naturaleza, tiene una
densidad relativa o gravedad especfica 11.4 a 16C.
Fsicamente el plomo es de color azuloso, se empaa para adquirir un color gris mate, es
flexible, inelstico y se funde con facilidad. Su punto de fusin es 327.4C y el de ebullicin es
1725C. Las valencias qumicas normales son 2+ y 4+.
Qumicamente, combinado con otros elementos forma compuestos con caractersticas
nicas y altamente tiles, tiene la capacidad de formar muchas sales, xidos y compuestos
organometlicos.
4.2.4.2. Toxicidad del plomo
Posner y colaboradores, Rosen y Sorell y Chang y colaboradores, examinaron el consumo
principal y los efectos del plomo, sobre las personas. Altas concentraciones de plomo que son
txicas algunas veces provienen de la actividad humana como extraer y fundir adhesivos, de
utensilios hechos de peltre (aleacin de plomo), soldadura de plomo, cermica, plomo-vidrioso, y
ventanas de cristal de colores, de tubos de plomo e instalacin de caeras, de descomponer
pinturas basadas en plomo, y donde hay automviles que usan gasolinas con aditivos de plomo
(Moreno-Snchez & Devars, 1999). A pesar de sus numerosas aplicaciones beneficiosas, el
plomo se define como un peligro a la salud humana en concentraciones relativamente pequeas
dentro del cuerpo, que se pueden adquirir por ingestin de alimento y agua o inhalando partculas
aerotransportadas.
La intoxicacin aguda por plomo resulta en una disfuncin en los riones, el sistema
reproductor, hgado, cerebro, y sistema nervioso central, resultando en enfermedades o la muerte
(Manahan, 1984). Otros efectos crnicos incluyen la anemia, la fatiga, problemas
gastrointestinales y anorexia (Jain, Vasudevan, & Jha, 1989). Los indicadores de calidad de agua
potable para el plomo en la mayora de los pases desarrollados y para la Organizacin Mundial
de Salud (OMS) establecen un contenido mximo de 0.05mg /l (Van der Leeden, 1990).
Needleman y colaboradores (1979) confirm que los efectos venenosos del plomo para el
sistema neurolgico ocurren incluso con la exposicin al plomo en niveles muy bajos, los cuales
han sido ligados a la disminucin de inteligencia y de la funcin cognoscitiva, as como al

comportamiento delincuencial en nios (Schwartz, 1994; Jacobs, 1996; Needleman, Schell,

Bellinger, & Leviton, 1990). Niveles de plomo en la sangre humana tan bajos como 0.1ppm (10
microgramos por decilitro= 10 g/dl) ahora son considerados causa para intervencin por las
agencias pblicas tales como Centres for Disease Control (CDC) y Environmental Protection
Agency (EPA) (National Research Council, 1993).
En cuanto a las plantas, el plomo disminuye la fotosntesis, disminuye la actividad de las
enzimas y disminuye el transporte mitocondrial de los electrones (Moreno-Snchez & Devars,
1999). Se sabe adems, que el plomo no es esencial para el crecimiento de las plantas y es
considerado txico para ellas a la concentracin de 30-300 g/g en sus tejidos (Roos, 1994).
Aunque se ha reconocido por muchos siglos que el plomo es un contaminante
potencialmente peligroso para la salud y el ambiente, la utilizacin del mismo ha aumentado con
el aumento de la actividad industrial.
4.2.4.3. Fuentes generadoras de plomo
El plomo se distribuye como elemento traza en aire, agua, y tierra (Kesler, 1978). La
galena (sulfuro de plomo) es el mineral dominante de plomo.
El uso ms amplio del plomo, como tal, se encuentra en la fabricacin de acumuladores.
Otras aplicaciones importantes son la fabricacin de tetraetilo de plomo, forros para cables,
elementos de construccin, pigmentos, soldadura suave, municiones, plomadas para pesca y
tambin en la fabricacin de juguetes.
El plomo tiene un amplio uso en la construccin, en particular en la industria qumica ya
que es resistente al ataque por parte de muchos cidos porque forma su propio revestimiento
protector de xido. Sin embargo, es atacado por las bases nitrogenadas, como consecuencia de
esta caracterstica ventajosa, el plomo se utiliza mucho en la fabricacin y el manejo del cido
sulfrico, cido ntrico, ciertos elementos halgenos y el vapor de azufre. Adems, durante
mucho tiempo, el plomo se ha empleado como pantalla protectora para las mquinas de rayos X.
En virtud de las aplicaciones cada vez ms amplias de la energa atmica, se han vuelto
cada vez ms importantes las aplicaciones del plomo como blindaje contra la radiacin. Su
utilizacin como cubierta para cables, ya sea la de telfono, de televisin, de internet o de

Electricidad, sigue siendo una forma de empleo. La ductilidad nica del plomo lo hace
particularmente apropiado para esta aplicacin, porque puede estirarse para formar un forro
continuo alrededor de los conductores internos.
Las fuentes de exposicin al plomo han cambiado en los aos recientes, con la
declinacin de la gasolina plomada y de la soldadura del plomo en latas de alimentos (Jacobs,
1996). Sin embargo, an existen otras fuentes que causan efectos negativos e impactos al
ambiente.
4.2.5. Fitorremediacin
La fitorremediacin puede definirse como una tecnologa sustentable que se basa en el
uso de plantas para reducir in situ la concentracin o peligrosidad de contaminantes orgnicos e
inorgnicos en agua, suelo y aire; a partir de procesos bioqumicos realizados por las plantas y
microorganismos asociados a su sistema de raz que conducen a la reduccin, mineralizacin,
degradacin, volatilizacin y estabilizacin de los diversos tipos de contaminantes (Flathman &
Lanza, 1998; EPA, 2000)

La fitorremediacin de metales pesados ha mostrado competitividad frente a los mtodos

ms convencionales, especialmente para la remocin de bajas concentraciones de estos
componentes. Asimismo, es una tecnologa de bajo costo, eficiente, no requiere personal
especializado para su manejo ni consumo de energa, no produce contaminantes secundarios y se
pueden reciclar recursos (agua, biomasa, metales), entre muchas otras ventajas (Polprasert, 1996).
4.2.6. Fitorremediacin acutica
El fundamento de este tipo de tratamiento consiste en que los compuestos presentes en el
agua son adsorbidos e incorporados dentro de la estructura de las plantas, logrando eliminar la
contaminacin del agua y favoreciendo la restauracin de la calidad de la misma (Olgu, 1994).
Las lagunas con plantas acuticas para el tratamiento de aguas residuales, se basan en
principios ecolgicos, en donde los efluentes son tratados eficientemente mediante relaciones
mutuas y coordinadas de flujo de energa y nutrientes, entre las plantas acuticas y los
microorganismos degradadores.

Adems, con base en los estudios de remocin de compuestos txicos por plantas
acuticas, se pueden considerar a los sistemas de fitorremediacin acutica como una alternativa
ecolgica y econmicamente viable, no slo para el tratamiento de los efluentes municipales sino
tambin para efluentes industriales (Olgu, 1994).
En la rizofiltracin, los metales son adsorbidos y/o absorbidos por las races de las
plantas. Se basa exclusivamente en hacer crecer, en cultivos hidropnicos, races de plantas
terrestres con alta tasa de crecimiento y rea superficial para absorber, concentrar y precipitar
metales pesados de aguas residuales contaminadas (Cunningham & Ow, 1996b; nez & Meas,
2004; Raskin & Salt, 1997).
4.2.7. Salvinia minima
4.2.7.1. Aspectos Generales
S. minima es un helecho acutico de libre flotacin. Pertenece a la familia Salviniaceae,
crece en aguas estancadas con aporte de materia orgnica, habitando en regiones tropicales y
subtropicales. Sus hojas flotantes son orbiculares de forma oval y su longitud oscila entre 0.4 a 2
cm (Figura 2). La superficie axial de las hojas flotantes est provista de vellosidades (tricomas).
Su crecimiento es rpido y la fragmentacin ocurre fcilmente, favoreciendo su amplia extensin
(Cook, 1974; Palacios & Rico, 1992)
Salvinia ha colonizado diversas partes del mundo, notablemente frica e India (Cook,
1974) y ha tenido una buena tasa de crecimiento bajo condiciones ambientales favorables.
S. minima resulta un modelo muy adecuado para su uso en fitorremediacin, dadas las
siguientes consideraciones: es de amplia distribucin geogrfica, soportando temperaturas de 3C
y 43C (Whiteman, 1991) su crecimiento es rpido (Cook, 1974) su velocidad especfica de
crecimiento es mayor que la de las lemnceas (Olgun & Snchez-Galvn, 2007).
Adems, se ha reportado que S. minima es hiperacumuladora de plomo y cadmio en
comparacin a otras macrofitas acuticas. En una investigacin para determinar las caractersticas
fsico-qumicas de S. minima, Snchez-Galvn y colaboradores (2008) demostraron que tiene un
2

rea superficial muy alta (264 m /g DW), la cual es similar a las reportadas para otras macrofitas
acuticas, como Salvinia herzogii (270 m/g) y Eichhornia crassipies (250 m/g) (Scheneider &

Rubio, 1999).
+

Tambin, posee un alto contenido de grupos funcionales carboxlicos (0.95 mmol H /g de

biomasa). stas propiedades hacen muy til el uso de ste helecho acutico para la
fitorremediacin de aguas contaminadas con metales pesados.

Figura 2. Esquema de S. minima

ETODOLOGIA
4.1 Condiciones de cultivo de la biomasa de S. minima
La biomasa de S. minima que sirvi de inculo para los experimentos fue cosechada
despus de 7 das de cultivo.

Las plantas fueron crecidas en contenedores de plstico con capacidad de 101

conteniendo 61 de Medio sinttico Hutner modificado 1/10 preparado con agua de llave,
de acuerdo a Vermaat y Hanif, (1998). TABLA 3

La biomasa creci bajo condiciones controladas de temperatura e intensidad luminosa de

-2 -1

25 + 2 C y 133 + 3 molm s , respectivamente.

El pH inicial fue de 6.0 + 0.2.

4.1.1 Composicin del medio de cultivo para S. minima y experimentos de remocin de

plomo.
En la Tabla 3, se muestra la composicin del medio que se utiliz para cultivar la biomasa
de S. minima, as como para los experimentos en donde las plantas se expusieron a diferentes
concentraciones de plomo. Cabe sealar que para estos ltimos, el medio se prepar sin la
adicin de K2HPO4 ni de EDTA con agua destilada. Adems, el pH del medio fue ajustado a 6.0
+ 0.2 con HNO3 al 10% o NaOH.
Tabla 3. Composicin del Medio sinttico modificado Hutner 1/10
Nutriente
NH4NO3
K2HPO4
MgSO4* 7H20
FeSO4*7H20
MnSO4*7H2O
ZnSO4*7H20
H3BO3
NaMoO4 *H20
CuSO4*5H20
Na2EDTA *H2O
CoSO4*H20
CaCl2*H20

mg/lt
20
40
50
2.5
1.5
6.5
1.5
2.5
0.4
50
0.1
16.2

Fuente: (Vermaat y Hanif, 1998)

NOTA: Ya que Vermaat y colaboradores (1998) no mencionan la concentracin del CaCl2*H2O

en el medio, se decidi adicionar la misma concentracin que en el medio Huebert (16.2mg/l)

4.2 Caractersticas de diferentes tipos de biomasa de S. minima

4.2.1 Biomasas de S. minima y de Lyngbya sp. para experimentos en sistemas por lote

Para poder determinar el tipo de biomasa de S. minima a utilizar en los experimentos en

sistemas continuos, se decidi realizar un experimento previo en sistema por lote, en el cual se
utilizaron los siguientes tipos de biomasa de S. minima:

a) Sin lavar: La biomasa se sac de los contenedores donde creci y no se pas bajo la corriente
de agua de la llave.
b) Lavada: La biomasa se sac del medio anterior donde creci, se coloc en una coladera y
estuvo una vez bajo la corriente de agua de la llave durante 5 minutos.

Biomasa de Lyngbya sp.:

Para la recoleccin de la microalga, se tomaron 20 gramos de base hmeda (gbh) de S.

minima sin lavar con Lyngbya sp. adherida a la planta, y se depositaron en 600ml de medio
Hutner modificado 1/10 en un matraz erlenmeyer de 1 litro en un agitador orbital a 200 rpm.
Dicho procedimiento se realiz por triplicado. Posteriormente, se retiraron los matraces del
agitador y se coloc cada matraz sobre una placa de agitacin con un magneto durante 5 minutos
y posteriormente se retir la biomasa de S. minima, para conservar slo la microalga.
4.3 Parmetros para cuantificacin de la biomasa
Determinacin de peso fresco en S. minima:
Se tom la biomasa de S. minima con una coladera, se dej escurriendo 5 minutos y se
coloc durante 15 minutos sobre papel filtro doblado por la mitad, posteriormente la cantidad
pesada ese report como gramos de base hmeda (gbh).
Determinacin de clorofila en Lyngbya sp. asociada a S. minima:
A lo largo de las resiembras de los cultivos de S. minima en condiciones controladas de
luz y temperatura tanto en medio Hutner como en medio Huebert, se ha observado la presencia

de una microalga rizosfrica identificada como Lyngbya sp., la cual se adhiere a las pseudo-races
de la planta y a la parte posterior de la fronda.
Se determin clorofila de acuerdo a Lorenzen (1967), Golterman (1970) y Holm-Hansen
(1978), utilizando metanol como agente extractante. Las muestras fueron ledas en un
Espectrofotmetro marca Hach modelo DR-4000.
4.5 Unidades y condiciones experimentales:

4.5.1 Determinacin del tipo de biomasa de S. minima a utilizar en los experimentos en

sistema continuo:

Para el experimento en sistema por lote con plomo, las unidades experimentales fueron
lagunas de plstico (0.15 m ancho x 0.19 m largo x 0.09 m alto) conteniendo 1.5 litros de medio.
Se montaron 3 unidades experimentales por cada tratamiento, y una tina adicional de cada
tratamiento para cuantificar la clorofila al final del experimento. Como controles se utilizaron 2
unidades experimentales conteniendo solamente medio con plomo y sin planta, para poder
cuantificar el posible plomo adherido a las paredes de la laguna y/o precipitacin del metal.

Las lagunas se ubicaron en la cmara de crecimiento de 25C con una intensidad luminosa
2 -1

controlada de 105 molm- s . A cada unidad experimental se le colocaron 20 gbh de inoculo de

2

S. minima, que corresponde a 42.85 gbs/m de biomasa para el inculo, lavado y sin lavar, y la
cantidad de microalga que se desprendi de 20 gbh de planta en 1.5 l de medio.
4.5.2 Experimentos en sistema continuo:

Para realizar los experimentos en sistema continuo, se utilizaron lagunas de acrlico con
dimensiones de 1 x 0.1 x 0.5 m conteniendo un volumen til de 20 l. Las unidades
experimentales se expusieron a las condiciones de intensidad luminosa y temperatura de la planta
piloto de fitorremediacin (PPF) de la Unidad de Biotecnologa Ambiental del Instituto de
Ecologa. Se montaron 2 unidades experimentales por cada tratamiento. Cabe sealar que los
experimentos se realizaron a lo largo de varios meses, por lo que se monitorearon las dos
variables que afectaron los experimentos de manera ms importante, al estar expuestas las
lagunas a condiciones exteriores: la intensidad luminosa y temperaturas. Las lagunas fueron
alimentadas continuamente a travs de bombas peristlticas marca Cole-Parmer. Todos los

experimentos se realizaron a un TRH (Tiempo de Retencin Hidrulica) de 20 horas, ya que en

un trabajo previo (Prez-Prez, 2006), se observ que a un TRH de 30 horas la planta presentaba
clorosis y que a un TRH de 10 horas, el proceso de remocin no alcanzaba el equilibrio.
El flujo requerido para un TRH=20 horas fue de un litro por hora, y se calcul de acuerdo a la
siguiente ecuacin (Perry y Green, 1992):
Q= V / TRH
Donde:
Q= flujo o caudal
V= Volumen til (20 l)
TRH= Tiempo de Retencin Hidrulica (20 hrs)

Las bombas estuvieron conectadas a depsitos de alimentacin de 150 litros, conteniendo

medio sinttico Hutner modificado 1/10 sin EDTA y sin K 2HPO4, conteniendo diferentes
concentraciones de plomo (mg/l) dependiendo del experimento. Adems, para cada concentracin
se cont con un control que contena el medio con metal pero sin biomasa de S. minima, con el
fin de evaluar la posible precipitacin u adsorcin del metal a las paredes de las lagunas.
En consideracin a que los experimentos tuvieron una duracin de 52 horas, fue necesario
reponer la solucin de medio Hutner modificado con plomo en los depsitos de alimentacin.
Desafortunadamente, en algunos casos, la concentracin de plomo no fue exactamente la misma
que en la primera alimentacin. En la seccin de resultados, se presenta la concentracin
promedio de plomo, resultado de 2 o hasta 3 cambios en el depsito de alimentacin.
4.6 Monitoreo
4.6.1 Experimento en sistema por lote con plomo
-

Al inicio del experimento, es decir antes de adicionar la planta al medio con plomo, se
tomaron las muestras correspondientes al tiempo cero (triplicados de 20 ml de medio), para
determinar la concentracin promedio de cada unidad experimental.

Se determin la concentracin de Lyngbya sp., as como el pH y la clorofila a los tiempos 0, 5,

6 y 7hrs, de cada unidad experimental.

La concentracin de plomo en la columna de agua se determin con triplicados de 20 ml de

medio a los tiempos 0, 0.5, 1, 2, 4, 8 y 24 hrs.

Al final del experimento (tiempo 24 horas), la biomasa de cada unidad experimental se

recolect y se lav con 150 ml de EDTA, cuidando que la relacin entre la concentracin de
EDTA y de plomo fuera 12. Posteriormente la biomasa se lav con 400 ml de agua
desionizada. De dichos lavados, se tomaron 20 ml de medio para determinar el plomo
adherido a la superficie de la biomasa.

En el caso de la microalga, al final del experimento se separ la microalga del medio,

eliminando el exceso de medio por decantacin y filtrando a la microalga sobre papel filtro
Whatman No. 4 previamente ajustado a peso constante. Posteriormente, se realizaron los
lavados siguiendo la misma metodologa que se us para la biomasa de S. minima, utilizando
un menor volumen de EDTA y agua desionizada (150 y 100 ml respectivamente). De estos
lavados se tomaron 20 ml de muestra por triplicados.

Nota: Todas las muestras de medio fueron tomadas con una pipeta automtica de 5 ml y
preservadas en frascos de plstico de 30 ml de capacidad.
4.6.2 Experimentos en sistema continuo:

Para cada experimento, se monitore la intensidad luminosa y la temperatura de la planta

piloto de fitorremediacin a tres diferentes horas del da (10:00a.m, 14:00 p.m y 17:00p.m)
durante todo el experimento para obtener un promedio de cada variable.

A lo largo de los experimentos S. minima se expuso a diferentes concentraciones de plomo

(CPb), en un rango de 0.58 a 27.58 mgPb/l. Asimismo, la planta se expuso a diferentes
-2 -1

intensidades luminosas y temperaturas en rangos de 109 a 810 molm s y 23.44 a 32.26C

respectivamente.
-

La concentracin del metal remanente en la columna de agua, as como el pH, se determinaron

muestreando cada dos horas durante las primeras 8 horas y posteriormente cada 4 horas, hasta
un total de 52 horas. Las muestras fueron tomadas con una pipeta automtica de 5 ml a la
salida de las lagunas. Slo se tomaron muestras en la entrada de las lagunas a los tiempos 0, 20
y 44 horas para obtener una concentracin promedio, ya que el recipiente que alimentaba a las
lagunas con medio, se le colocaba nuevo medio cuando este se vaciaba.
Nota: Todas las muestras de medio fueron tomadas con una pipeta automtica de 5 ml y
preservadas en frascos de plstico de 30 ml de capacidad.

Al inicio y al final de cada experimento se tomaron fotografas de la biomasa de S. minima

para observar los posibles cambios de la apariencia de la biomasa (frondas y races).

Al final de cada experimento la biomasa se recolect de cada laguna con una coladera de plstico
y dejndola escurrir durante 5 minutos, posteriormente se coloc la biomasa en papel filtro de
poro medio doblado por la mitad durante 15 minutos para absorber el exceso de medio. Se pes
toda la biomasa para obtener el peso fresco total. Una vez obtenido el peso fresco, se tomaron 20
gbh para ser lavada con EDTA y agua desionizada al igual que en el experimento en sistema por
lote, y de igual manera se tomaron 20 ml de muestra por triplicados de cada lavado.
Posteriormente, la biomasa se sec en una estufa a 45C hasta obtener su peso constante y se
digiri de acuerdo a Olgun et al. (2005).

Al final de los experimentos se realiz un conteo de frondas daadas de S. minima para

observar el posible dao superficial que la biomasa presentara al estar expuesta a las diversas
concentraciones de plomo. Para ello, se tom como base la gua para diferenciar daos en las
frondas de S. minima expuesta a plomo (Anexo 2).
4.7 Cuantificacin de plomo en la fase lquida.

El anlisis y cuantificacin de Pb se realiz por un mtodo espectrofotomtrico de

acuerdo a Clesceri y colaboradores (1998), utilizando un espectrofotmetro de absorcin
atmica (EAA) de aspiracin directa Back Scientific modo 210 VGP, usando flama de aireacetileno, lmpara de Pb; A=283.2 nm y lmpara correctora de deuterio. El lmite de deteccin
del equipo es de 0.l ppm, y el lmite de cuantificacin 0.5 ppm. Las muestras, en caso
necesario, fueron diluidas para quedar dentro del rango ptimo de calibracin.
Curva estndar de plomo:
a) A partir de la solucin Stock estandarizada (Aldrich TM atomic adsoption Standards, 1000
mg Pb/l) se preparan soluciones en un intervalo de concentraciones de 1 a 20 mgPb/l,
utilizando una solucin de cido ntrico grado ultra puro Ultrex-II (1.5ml/l) en agua
desionizada.
b) Se calibra el equipo con las soluciones preparadas, para obtener una curva de calibracin
2

con un coeficiente de regresin lineal r =O.9996 o superior.

c)

Posteriormente, se leen regularmente (cada 15 muestras) los estndares, para confirmar la

calibracin y la estabilidad del equipo.

Observaciones: Todo el material a utilizarse se lav como se indica a continuacin:

a) Extrn libre de fosfatos (sol. al 2% v/v en agua tibia) durante 1 hora.
b) Posteriormente, se enjuag con abundante agua destilada.
c) Se coloc el material en acido ntrico GR (sol. Al 10% en agua destilada) durante 12 horas.
d) Por ltimo, se enjuaga nuevamente con agua destilada.

Equipo de seguridad: Se utiliz el equipo de seguridad adecuado (mascarilla contra vapores y

gases cidos, guantes resistentes a cido, gafas de proteccin) y se trabajo bajo la campana de
extraccin de humos.
4.8 Factores de Bioconcentracin (FBC), de Adsorcin (FAD) y Acumulacin Intracelular
(FAI)
Con el objeto de poder cuantificar la concentracin de plomo (CPb) acumulada
intracelularmente y adsorbida a la superficie de S. minima y de Lyngbya sp., se procedi a
realizar lavados con EDTA con el siguiente procedimiento de acuerdo a Olgun y colaboradores
(2005a):
a) Se removi la biomasa de cada unidad experimental y se coloc en un matraz Erlenmeyer de
250 ml conteniendo 150 ml de una solucin de EDTA con una relacin molar EDTA/Pb = 12.
b) Posteriormente se colocaron los matraces en un agitador orbital a 200 rpm durante 1 hora, al
finalizar este tiempo se retir la biomasa y se pas a otro matraz Erlenmeyer de 500 ml
conteniendo 400 ml de agua desionizada. Se agit suavemente para quitar restos de la
solucin de EDTA.
c) Se sac la biomasa y se dej escurrir por 15 minutos sobre papel filtro doblado por la mitad
para absorber el exceso de agua.
d) Se pes la biomasa para determinar el peso fresco. Esto se realiz en frascos de plstico los
cuales haban sido pesados previamente. El peso seco se determin secando la planta dentro
de la cmara de 25C colocando los frascos con las muestras de manera horizontal y sin la
tapa.
e) Se tomaron muestras de la solucin de EDTA y agua desionizada despus de cada lavado de

la biomasa. ** Esta concentracin corresponde a una relacin molar de EDTA/Pb igual a 12

(Noraho y Gaur, 1996.
A continuacin, se realiz el mtodo de digestin modificado de acuerdo al Standard
Methods (1998), para lo que se pesaron 0.05g de muestra seca y se colocaron en tubos del
digestor AIM 500-C a los cuales se les adicion 10 ml de HNO 3 concentrado (grado reactivo) y
se dejaron reposar toda la noche.
Despus de 24 horas, se digirieron las muestras a una temperatura de 150C durante 60
minutos hasta desaparicin de vapores pardos, con esta temperatura estos vapores desaparecen a
los 15 minutos de la digestin.
Se agreg HNO3 hasta que la muestra se aclar. Las muestras digeridas fueron diluidas al
volumen adecuado con agua desionizada (50 ml). Posteriormente, las muestras fueron ledas en
un espectrofotmetro de absorcin atmica (EAA) de aspiracin directa Back Scientific modo
210 VGP
Por ltimo, se calcularon los Factores de Acumulacin Intracelular (FAI) y de Adsorcin
(FAD), de acuerdo a Snchez-Galvn y colaboradores (2008), utilizando las siguientes frmulas:

FAI= Concentracin del metal acumulado intracelularmente en el tejido de S. minima (mg/kg)

Concentracin promedio del metal en el medio acuoso (mg/l)

FAD= Concentracin del metal adsorbido en la superficie de S. minima (mg/kg)

Concentracin promedio del metal en el medio acuoso (mg/l)
El Factor de Bioconcentracin (FBC), fue calculado de acuerdo a Zayed y colaboradores (1998):

FBC= Concentracin del elemento traza en el tejido de la planta cosechada

(mg/kg) Concentracin promedio del elemento en la solucin (mg/l)

4.9 Porcentaje de Remocin:

El porcentaje de remocin se calcul de acuerdo a la siguiente frmula:

% Remocin= Ci - Cf * 100
Ci
Donde:
Ci= Concentracin inicial (mg/l)
Cf= Concentracin final (mg/l)
4.10 Plomo adsorbido y acumulado en la biomasa de S. minima
-El plomo adsorbido a la superficie de S. minima se calcul de acuerdo a la siguiente ecuacin:
mg Pb adsorbidos/kg biomasa= (mg Pb en 0.15 l EDTA + mg Pb en 0.40 l de H2O
desionizada) *1000 * peso biomasa seca (gps)
-El plomo acumulado intracelularmente a la biomasa de S. minima se calculo de acuerdo a la
siguiente ecuacin:

mg Pb acumulados/kg biomasa= (mg Pb en biomasa lavada total seca) *1000

peso biomasa seca

5. RESULTADOS Y DISCUSIN

5.1 Determinacin del tipo de biomasa de S. minima a utilizar en los experimentos en

sistema continuo

En investigaciones previas (Olgun et al., 2005), se demostr que S. minima present una
microalga adherida a sus pseudo-races, la cual fue identificada como Lyngbya sp. Adems, se
realizaron experimentos en sistema por lote, comparando la capacidad de remocin de plomo por
dos tipos de biomasa de S. minima (lavada y sin lavar) y Lyngbya sola cultivadas en medio
Hutner. Los resultados mostraron que la presencia de Lyngbya sp., no contribuy de manera
significativa a la remocin de plomo.

En consideracin a que en los experimentos en sistemas continuos la cantidad de biomasa

de S. minima a utilizar es mucho mayor que en el caso de los experimentos previos en lote (108
gbh vs 20 gbh), se realizaron experimentos orientados a determinar la influencia de Lyngbya sp
sobre el tipo de biomasa de S. minima a utilizar, es decir con microalgas del gnero Lyngbya sp
(sin lavar) o sin microalgas (lavada). En estos experimentos, se cuantific la concentracin de la
microalga adherida a la biomasa de S. minima. Para tener una visin ms amplia del proceso de
remocin del metal, se calcularon el Factor de Adsorcin (FAD) y el Factor de Acumulacin
Intracelular (FAI), as como el Factor de Bioconcentracin (FBC=FAD + FAI).

En relacin a la cintica de remocin de plomo en los tres tipos de biomasas (Figura 3), se
observ que Lyngbya sp. tiene una capacidad de remocin muy alta durante la primera hora de
exposicin al plomo. Despus de la primera hora se observ un incremento en la concentracin
de plomo en la columna de agua, la cual se debi a una posible desorcin del metal.
Posteriormente el sistema se estabiliz alrededor del 60% de remocin durante el resto del
perodo experimental. Por el contrario, el porcentaje de remocin en el caso de los dos tipos de
biomasa de S. minima, aument gradualmente y alcanz su mximo a las 8 horas (72.56%
biomasa sin lavar y 76.93% biomasa lavada). Posteriormente, se estabiliz aproximadamente en
un 80% de remocin. No se encontraron diferencias significativas entre los dos tipos de biomasa

de S. minima (lavada y no lavada) despus de 24 horas. Ambas biomasas de S. minima mostraron

porcentajes de remocin significativamente mayores (p<0.05) que Lyngbya sp. (80 % vs 60%).

Por otro lado, el control que contena slo metal preparado con agua desionizada mostr
una ligera remocin; la posible causa es que el plomo se haya precipitado o porque se qued
adherido a las paredes del contenedor.

,Figura 3. Cintica de remocin de Pb

2+

por S. minima y Lyngbya sp. en medio Hutner

modificado 1/10 con CPb de 12.59 + 0.04 mg Pb/l en condiciones controladas de

-2 -1

temperatura e intensidad luminosa de 25 + 2C y 105 molm s , respectivamente, y pH=6

+ 0.02.

Los resultados de este trabajo son similares a los reportados por Olgun y colaboradores
(2005a), quienes observaron una remocin de 89.7% de Pb

2+

en slo 24 horas, cuando biomasa

de S. minima fue expuesta a una concentracin relativamente alta de 11.77 mgPb/l en sistemas
por lote.

La biomasa de Lyngbya sola registr el mayor porcentaje de remocin en el menor

tiempo. Estos resultados son similares a los reportados previamente por Olgun y colaboradores
(2005c). Esto se puede explicar debido a que las algas tienen grandes reas superficiales, poseen
alta tolerancia a metales pesados y adems poseen una alta capacidad para remover este tipo de
contaminantes. Adems, las paredes celulares de las algas juegan un papel importante en este
proceso, gracias a los grupos funcionales que se encuentran presentes es estas, tales como
carboxilos, fosfatos, hidroxilos, amino, sufuros, tioles, etc. (Holan y Volesky, 1994).

Con el objeto de cuantificar la concentracin de Lyngbya asociada a S. minima, se

determin la concentracin de clorofila (g/l) a los dos tipos de biomasa de la planta, as como a
la microalga sola al inicio y al final de este experimento. La Tabla 4 muestra que el contenido de
Lyngbya sp. disminuy despus de 5 min de lavado. Sin embargo, la diferencia entre la biomasa
lavada y sin lavar de S. minima, no es significativa.

Al final del experimento (24 horas), en ninguna de las biomasas se encontr presencia de
clorofila, debido a que al estar en presencia del metal y removerlo, la biomasa de Lyngbya sp.
pudo haberse lisado. Se ha reportado que la acumulacin de metales pesados es responsable del
decremento parcial o total de la concentracin de clorofila (Abdel-Basset et al., 1995; Manios et
al., 2003).
Tabla 4. Concentracin de clorofila presente en biomasa de S. minima y Lyngbya sp. en medio
Hutner modificado 1/10 con CPb de 12.59 + 0.04 mg Pb/l
Tipo de biomasa

Concentracin de clorofila (g/l)

0 horas

24 horas

S. minima sin lavar

505.2 + 280.64

S. minima lavada

284.1 + 265.50

Lyngbya sp.

473.6 + 48.22

Posteriormente, se procedi a realizar el clculo de los factores de acumulacin

intracelular (FAI) y de adsorcin (FAD), de acuerdo a Snchez y colaboradores (2008), as como
el factor de bioconcentracin (FBC) calculado de acuerdo a Zayed y colaboradores (1998) (Tabla
5). Se puede observar que para el caso de los dos tipos de biomasa de S. minima, los valores ms
altos fueron los obtenidos para el Factor de Adsorcin (FAD), alcanzando valores de 1485+64 y

1633 + 166 para la biomasa sin lavar y lavada, respectivamente.

No se encontraron diferencias significativas entre dichos factores. Por el contrario, para el

caso de Lyngbya sp., el FAI fue significativamente mayor (p< 0.05) que el FAD, alcanzando un
valor de 6621.27 + 1418.16, el cual es aproximadamente ocho veces mayor que los obtenidos por
las biomasas de S. minima. Adems, el FAD reportado para la microalga fue significativamente
mayor (p< 0.05) que los reportados para S. minima.

Tabla 5. Factor de Acumulacin Intracelular (FAI), Factor de Adsorcin (FAD) y Factor de

Bioconcentracin (FBC) de dos tipos de biomasa de S. minima y Lyngbya sp. en medio
Hutner modificado 1/10 con CPb de 12.59 + 0.04 mg Pb/l.
Tipo de biomasa
S. minima sin lavar
S. minima lavada
Lyngbya sp. sola

FAI
812.5 + 13
775.18 + 28
6621.27 + 1418.16

FAD
1485 + 64
1633 + 166
4689.25 + 1647.73

FBC
2297.56 + 52.05
2408.21 + 188.23
11,491.22 + 1517.05

El promedio de FBC para los dos tipos de biomasa de S. minima alcanz un valor de
2,352.88; estos resultados son similares a los reportados por Olgun y colaboradores (2005a) en
donde observaron valores de FBC similares, en el orden de 2000 en sistemas por lote.

Adems, con los resultados anteriores se confirma que en sistemas por lote la adsorcin es
el mecanismo predominante para S. minima (Olgun et al., 2005), debido posiblemente a las
caractersticas que presenta este helecho acutico, las cuales favorecen el mecanismo de
adsorcin, tales como tener un rea superficial muy alta as como una elevada concentracin de
grupos carboxilo (Snchez-Galvn et al., 2008).
Por otro lado, el mecanismo predominante para Lyngbya sp. fue la acumulacin
intracelular, debido posiblemente a que al estar la microalga sola tiene ms superficie disponible
para la acumulacin as como para la adsorcin del metal. Se sabe adems, que los iones
metlicos son adsorbidos a la superficie de las clulas por las interacciones entre los iones
metlicos y algunos grupos funcionales metlicos tales carboxilos, fosfatos, hidroxilos, amino,
tioles, etc., los cuales se encuentran presentes en las paredes celulares. Se ha demostrado que la

acumulacin de metales pesados en las algas, induce la sntesis de fitoquelatinas (Gekeler et al.
1988), las cuales se unen a los metales pesados con gran afinidad y favorecen los incrementos en
la acumulacin de los metales. En otros estudios, Howe y Merchant (1992) reportaron un
incremento en el contenido de glutatin de la microalga Chlamydomonas al estar expuesta a
mercurio. Asimismo, Tsuji et al. (2003) mostraron que Dunaliella tertioleca tiene un alto
contenido de fitoquelatinas, a lo cual se le atribuye la capacidad para hiperacumular Zn y Cd.

En consideracin a la posibilidad de que Lyngbya sp. pueda presentar un alto contenido

de fitoquelatinas que expliquen su alta capacidad para acumular Pb, se recomienda que se
investigue este factor en futuros trabajos.

De acuerdo a los resultados obtenidos en este experimento, y al observar que no hubo

diferencias significativas de la remocin de plomo entre la biomasa lavada y sin lavar, se decidi
utilizar biomasa de S. minima lavada, para todos los experimentos en sistema continuo.
5.2 Porcentaje de remocin de Pb

2+

por S. minima
2+

Al final de los experimentos (52 horas), se calcularon los porcentajes de remocin de Pb por S.
minima para todos los experimentos a las diferentes condiciones ambientales probadas (Figura 4).

140/23.88

422/24.5 650/25.33

810/32.26

Figura 4. Porcentajes de remocin de plomo por S. minima bajo diferentes condiciones

ambientales probadas y a diferentes concentraciones promedio de plomo.

El mximo valor del porcentaje de remocin se observ en el grupo de experimentos dentro

-2 -1

del rango de I.L. y temperaturas bajas (109-160 molm s ), cuando se prob una CPb de plomo
tambin baja (1.24 + 0.38 mg Pb/l), alcanzando un punto mximo de remocin de 77.68%. Por otro
-2 -1

lado, dentro de este mismo grupo (140 molm s ), se observ el mnimo valor de porcentaje de
remocin (19.62%) cuando la biomasa de S. minima se encontraba expuesta a la mxima
concentracin probada (24.29 + 6.86 mgPb/l) dentro de este grupo de experimentos.

Para el resto de las condiciones probadas de luz/temperatura (Grupo 2 y 3), se observ la

misma tendencia que en el grupo anterior, es decir, que a medida que increment la concentracin
del metal, se redujo el porcentaje de remocin, independientemente de las condiciones
ambientales probadas.
5.2.5. Cambios del valor del FBC de plomo en S. minima en todas las condiciones probadas

En la Figura 15 se muestran los resultados de los FBC promedio para S. minima cuando
estuvo expuesta a diferentes concentraciones promedio de metal y a diferentes condiciones de

C FB

intensidad luminosa/temperatura.

Figura 15. Resumen de los FBC en S. minima expuesta a diferentes concentraciones

de plomo y diferentes intensidades luminosas

El efecto de la intensidad luminosa/temperatura (I.L./temp.) sobre el FBC fue variable

dependiendo del rango de I.L./temp. y de la concentracin de plomo en que se expusieron las
plantas (Figura 15). En un rango llamado bajo (Tabla 6) en el que se realizaron los
experimentos del grupo 1, la concentracin del metal tuvo efecto sobre el FBC, ya que a la menor
CPb de plomo probada se observ el mayor valor de FBC (p<0.05).
El mximo valor del FBC se observ a una CPb de 12.87 + 1.31 mg/l y a una I.L/temp. en
-2 -1

el rango denominado medio (650 molm s /25.33C). Cuando la I.L/temp. aument al rango
-2 -1

denimonado alto (810 molm s y 32.26C), ya no aument el valor del FBC, a pesar de que
las concentraciones de Pb fueron menores a las probadas anteriormente (3.22 + 0.27 y
10.56 + 1.37mg Pb/l).
5.2.6. Bioadsorcin de plomo en mg/kg de biomasa a la superficie de S. minima.
Para tener un dato ms especfico del metal que se adsorbi en relacin al peso de la
biomasa de S. minima, se decidi realizar un nuevo anlisis con los mismos datos, pero ahora
calculando los mg de plomo por cada Kg de biomasa de la planta.
-2 -1

En la Figura 16 se puede observar que para el grupo 1 (140 molm s ), el mnimo valor
obtenido en mg Pb adsorbidos/kg biomasa, fue para la menor concentracin probada dentro de
este grupo de experimentos (1.24 mg Pb/l). Al incrementar la concentracin del metal a 4.9 mg
Pb/l, se obtuvo un valor aproximado de 20,000 mg Pb adsorbidos/kg biomasa.

Cuando se increment la concentracin a 12.98 mg Pb/l, se observ que el plomo

adsorbido a la superficie de S. minima no vari significativamente del resultado anterior (Figura
16). Sin embargo, cuando la concentracin casi se duplic (24.29 mg Pb/l), la planta logr
adsorber la mayor cantidad de plomo en comparacin a las dems concentraciones del Grupo 1,
obteniendo un valor aproximado de 60,000 mg Pb adsorbidos/kg biomasa (p<0.05). El
comportamiento anterior sugiere que a una concentracin mxima de plomo (dentro del rango
probado), ocurre una adsorcin mxima (en trminos de mg Pb/kg biomasa) dentro de este rango
de I.L./temp. que se ha denominado bajo.

Figura 16. Plomo adsorbido a la superficie de la biomasa de S. minima (mg Pb/kg

biomasa) a diferentes intensidades luminosas y diferentes concentraciones
promedio de plomo.
Por otro lado, se puede observar que a una intensidad y temperatura medias (422
-2 -1

molm s ) y a la concentracin de metal ms alta probada (27.58 mg Pb/l) dentro de este grupo,
se obtuvo el valor ms alto de adsorcin, alcanzando un valor aproximado de casi 70,000 mg
Pb/kg de biomasa de S. minima.

Se ha reportado que la adsorcin de elementos contaminantes por plantas combina las

ventajas de grandes reas superficiales con la alta afinidad de receptores qumicos (Dushenkof et
al. 1997; Heaton et al. 1998). Adems, Snchez y colaboradores (2008) demostraron que S.
2

minima tiene una gran superficie especfica (264 m /g peso seco), lo cual favorece al mecanismo
de adsorcin ya que al tener mayor rea superficial la planta posee una mayor cantidad de sitios
activos disponibles para la bioadsorcin (Tien, 2002).

Para el caso de la otra concentracin probada a esta intensidad luminosa (0.58 mg Pb/l),
se logr adsorber muy poco metal a la superficie de la planta, debido posiblemente a que al ser
una concentracin muy pequea de metal, el plomo se pudo haber adherido en las paredes de las
lagunas o incluso en las mangueras que alimentaban a las mismas y por lo tanto no se logr

observar un efecto real de esta concentracin mnima probada. En contraste a lo anterior, para el
-2 -1

segundo caso del Grupo 2 (intensidades y temperaturas medias de 650 molm s y 25.33C),
cuando la biomasa de S. minima estuvo expuesta a dos diferentes concentraciones promedio de
plomo (4.9 y 12.87 mg Pb/l) se obtuvieron valores similares entre ellos (aprox. 35,000 y 40,000
mg Pb adsorbidos/kg biomasa, respectivamente).

Para el Grupo 3 de experimentos en donde se registr la mayor intensidad luminosa y

-2 -1

temperaturas probadas (810 molm s

y 32.26C respectivamente), se observaron valores del

FBC alrededor de los 35,000 mg Pb adsorbidos/kg biomasa, cuando se probaron dos

concentraciones promedio de plomo (3.22 y 10.56 mg Pb/l).

Cabe sealar que los valores del plomo adsorbido a la superficie de S. minima para las dos
concentraciones probadas no son diferentes significativamente entre ellos, lo que puede indicar
que a estas condiciones de luz y temperatura, la concentracin del metal no tenga una relacin
directa con la bioacumulacin de plomo a la planta.

Anteriormente, se ha reportado que la adsorcin de Pb

2+

a la superficie de las pseudo-

races en ausencia de nutrientes, es un mecanismo rpido y reversible que predomina sobre un

mecanismo ms lento e irreversible de acumulacin en sistemas por lote (Olgun et al, 2004).
Tambin se conoce que la dinmica entre los mecanismos de adsorcin y acumulacin
intracelular, as como la compartamentalizacin del Pb

2+

estn afectados por la presencia de

nutrientes y de factores ambientales tales como la intensidad luminosa y la temperatura (Olgun

et al, 2005a).

Desafortunadamente, no hay reportes en la literatura cientfica que expliquen la influencia

que la intensidad luminosa tiene sobre la adsorcin de plomo a la biomasa de plantas acuticas en
sistemas continuos de fitorremediacin.

5.2.7 Acumulacin intracelular de plomo en mg/kg a la biomasa de S. minima

En la Figura 17 se puede observar que para una de las concentraciones de metal ms altas
-2 -1

probadas, (12.87 + 1.31 mg Pb/l), expuesta a una IL= 650 molm s , la cantidad de plomo en la
biomasa es mucho mayor que a las otras concentraciones de plomo e I.L. probadas, alcanzando
un valor aproximado de 45,000 mg Pb/kg biomasa de S. minima.

Figura 17. Plomo acumulado intracelularmente a la biomasa de S. minima

(mg Pb/kg biomasa), a dos diferentes intensidades luminosas y dos diferentes
concentraciones promedio de plomo.

Se ha reportado que la bioacumulacin de metales depende de numerosos factores

biticos y abiticos, tales como la temperatura, el pH y los iones disueltos en el agua (Lewander
et al., 1996; Demirezen, 2002). Se sabe tambin que la acumulacin (en trminos de adsorcin)
de elementos traza es una combinacin de procesos fisicoqumicos, incluyendo quelacin,
intercambio inico y precipitacin qumica (Maine et al., 2000) y que la presencia de
aminocidos en las plantas parece jugar un papel importante en la adsorcin de los metales
debido a que los grupos amino (NH 2) y -carboxilato (COOH) son capaces de quelar
compuestos (Haider et al., 1983). Mishra y colaboradores (2006) reportaron que la produccin de
fitoquelatinas es importante para la detoxificacin de plomo, por Ceratophyllum demersum y que
la concentracin de fitoquelatinas es mayor cuando incrementa la concentracin promedio del
metal.

La acumulacin de fitoquelatinas en las plantas ante la presencia de metales pesados, es

uno de los mecanismos ms reportados en la literatura cientfica. Las fitoquelatinas forman
complejos al interior de las clulas, por ejemplo en vacuola y cloroplastos, para reducir el efecto
del deterioro de las clulas por la exposicin a iones metlicos (De-Knecht et al., 1994;
Mendoza-Czatl et al., 2006). El secuestro de metales por glutatin y fitoquelatinas son de los
mecanismos ms conocidos de detoxificacin de Pb

2+

en plantas (Sharma y Shanker, 2005).

Olgun y colaboradores, (2002; 2005), as como Hoffmann y colaboradores (2004),

comprobaron la gran capacidad de S. minima para acumular plomo dentro de sus tejidos.
Por otro lado, en un reciente estudio (Estrella-Gmez et al., 2009) expusieron a S.
minima a 40 M Pb (NO 3)2 durante 120 horas y evaluaron la relacin entre la acumulacin de
Pb

2+

y la activacin del mecanismo de secuestro del metal mediante la produccin de

fitoquelatinas. Los resultados mostraron que en respuesta a la exposicin de plomo, la

produccin de fitoquelatinas se increment ms en las races de S. minima que en las frondas de
la misma, observando que este helecho acuatico acumul mayor concentracin de plomo en las
races que en sus frondas.
En resumen, Estrella-Gmez y colaboradores (2009) sugieren que la acumulacin de FQs en S.
minima es una respuesta directa a la acumulacin de Pb y que las FQs participan como uno de
los mecanismos de tolerancia a la presencia de dicho metal. Por lo anterior, la alta capacidad que
presenta S. minima para acumular y/o tolerar altas concentraciones de plomo en sus clulas,
podra estar relacionada a la sintesis de fitoquelatinas.
Tomando en consideracin los resultados tanto de adsorcin como de acumulacin
intracelular de Pb en S. minima, es claro que Salvinia mostr una gran capacidad para adsorber
plomo y que eso depende altamente de la intensidad luminosa y la temperatura en el ambiente.
Adems, es notorio que la concentracin del plomo tambin es un factor que influye en la
adsorcin y la acumulacin de este ion en la biomasa de S. minima. Los valores mximos
observados en adsorcin fueron de 64,216.47 + 6,899.9 mg Pb/kg biomasa seca y un valor
mximo de 45,300 + 8,162.59 mg Pb/kg biomasa para acumulacin intracelular. Cabe sealar
que el mecanismo de adsorcin predomin para la mayora de las concentraciones probadas,
excepto en el rango de 0.58 a 3.22 mg Pb/l.

VII. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

En el siguiente diagrama se muestra la estrategia que se sigui para realizar todos los
experimentos en sistema continuo.
Inculo de S. minima en medio Hutner modificado 1/10 libre de fosfatos y EDTA.
TRH= 20horas
Colocar 104 gbh en cada laguna expuestas a la intensidad y temperatura del invernadero de la
Unidad de Biotecnologa Ambiental.
Control sin biomasa, Slo medio con metal.
Biomasa lavada durante 5 minutos.

Determinar Pb

2+

y pH en el medio acuoso al tiempo 0, 2, 4, 6, 8, 20, 22,24, 28,32, 44, 48 y 52.

Al tiempo 52 retirar la biomasa de las lagunas, poner a escurrir en coladeras durante 5 min.
Transcurrido este tiempo colocar la biomasa en papel filtro doblado por la mitad durante 15
min.; posteriormente pesar 20gbh de cada laguna.

Lavar la biomasa con 150 ml de EDTA (en una relacin de 12 respecto a la concentracin de
plomo (CPb); agitar una hora.

Tomar muestras de los lavados (20 ml)

Digerir 0.05g de biomasa seca y determinar la concentracin de metal en la planta

Anlisis de Datos

2+

4.13 Diagrama de flujo de lagunas con S. minima expuestas a medio con Pb , operando en
siste

Biomasa de S. minima + Pb

2+

CONTROL (sin biomasa)

Recipiente de alimentacin 1 concentracin de metal (mg Pb/l) capacidad de 15
Recipiente de alimentacin 2 concentracin de metal (mg Pb/l) capacidad 2+
de 15
Biomasa de S. minima + Pb

Bombas peristlticas para un flujo mnimo de 8ml/min.

5
Tubera de silicn (15mm de dimetro)*
CONTROL (sin biomasa)

Biomasa de S. minima + Pb

2+

Biomasa de S. minima + Pb

2+

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APENDICE
ANEXOS