ULEAM

CIENCIAS DEL MAR

CULTIVO DE
MICROALGAS
8vo

CATEDRATICO : Blgo J.NAPA

ESTUDIANTE: EDISON RAUL MOREIRA
ZAVALA

Contenido
INTRODUCCION...................................................................................................... 2
Crecimiento de una Poblacin Algal....................................................................3
Fase de retardo o declinacin.-...........................................................................3
Fase estacionaria.-.............................................................................................. 4
Formas de Cultivo............................................................................................... 4
Cultivo intensivo:............................................................................................. 4
Cultivos contnuos:.......................................................................................... 4
Cultivos semicontinuos:................................................................................... 5
Cultivos axnicos:............................................................................................ 5
Cultivos monoespecficos (clonales):...............................................................5
Cultivo inicial:.................................................................................................. 5
Cultivo intermedio:.......................................................................................... 5
Cultivo masivo:................................................................................................ 6
Contenido Nutricional de las Microalgas.............................................................7
Aislamiento y Purificacin...................................................................................8
Rayado en agar................................................................................................ 10
Mtodos de Purificacin....................................................................................11
Desinfectantes no voltiles...............................................................................13
Medida del crecimiento.................................................................................... 15
Consideraciones:........................................................................................... 16
Microalgas en contaminacin..............................................................................17

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INTRODUCCION

Para el crecimiento y desarrollo de la mayora de las etapas larvales de diversos

organismos acuticos, las microalgas se han considerado importantes; al igual
que para otras especies diminutas (coppodos, rotferos y Artemia), larvas de
moluscos gasterpodos (caracoles) y bivalvos (almejas, mejillones, ostiones y
callos de hacha), camarones (blanco, azul y caf), ranas (toro), peces marinos
(pargos, botetes) y dulceacucolas (carpas, tilapias y de ornato). Hoy en da se ha
considerado un xito en nuestro pas el cultivo de camarn blanco (Litopenaeus
vannamei). Debido al inters comercial que despierta principalmente por la
domesticacin en cautiverio (granjas), se han obtenido juveniles en laboratorios
de produccin masiva para su distribucin en las diferentes granjas
camaroncolas, ubicadas en la zonas costeras del Pacfico, Caribe y golfos de
Mxico y California. Otro ejemplo es el cultivo de tilapias (Oreochromis spp.),
cuya produccin y comercializacin se han incrementado sobre todo en reas
aledaas a ros o arroyos y en algunos casos en zonas costeras; incluso, en el
estado de Sinaloa diversas instituciones de investigacin cientfica y productores
locales estn cultivando tilapias de agua dulce en condiciones marinas. Estos
xitos en los cultivos estn relacionados con una adecuada tcnica de
alimentacin para obtencin de las larvas a base de alimento vivo, que consiste
en la produccin de diferentes especies de microalgas y otros ejemplares
diminutos; la demanda de esta produccin toma en cuenta las primeras fases de
desarrollo de los organismos en cultivo (Fig. 1). Se ha comprobado, adems, que
las microalgas verdes son ricas en carbohidratos y que las diatomeas contienen
ms lpidos, los cuales son aprovechados por los organismos en cultivo Los
productores han considerado los alimentos artificiales como un complemento, no
como un sustituto de los alimentos vivos utilizados en la produccin de larvas, y
reconocen que el uso adecuado de las microalgas incrementa la supervivencia,
desarrollo y crecimiento de las larvas de moluscos, crustceos, ranas y peces,
principalmente..

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Crecimiento de una Poblacin Algal

Fases del crecimiento.- En un cultivo de algas del tipo batch (ciclo), el
crecimiento se presenta con cinco fases o etapas de desarrollo como se ve en la
figura 3.1

Fase de ajuste.- Es la etapa de adaptacin que sufren

las algas a las nuevas condiciones del cultivo. Esta fase es corta y no hay
incremento neto de la poblacin. Fase exponencial.- Aqu las clulas se duplican
sucesivamente en intervalos iguales de tiempo. En esta fase, K es constante.

donde K es la constante de reaccin o tasa especfica de crecimiento (1/das), log

es el logaritmo en base 2, N es la medida de la biomasa o nmero de clulas y T
es el tiempo.

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Fase de retardo o declinacin.En esta etapa el tiempo requerido para duplicar la poblacin aumenta,
reduciendose la tasa de crecimiento. Esto se debe a que los nutrientes estn
disminudos en el medio, hay un aumento en la concentracin de los metabolitos
y una reduccin de la actividad fotosinttica por el incremento de la densidad de
la poblacin, que reduce la disponibilidad de luz por unidad de clula .

Fase estacionaria.Esta fase es corta y no hay un incremento neto de la poblacin. La tasa de

crecimiento se compensa con la de mortalidad celular, de tal modo que = d,
donde es la tasa de crecimiento y d es la tasa de mortalidad. Fase de muerte.Aqu la tasa de mortalidad supera a la tasa de multiplicacin celular, es decir que
d > . El crecimiento sostenido de una poblacin depende de la interaccin
mutua de factores fsicos, qumicos y biolgicos; dicho crecimiento se expresa
grficamente como el incremento en funcin del tiempo de la biomasa o nmero
de clulas dentro de un cultivo. El cambio diferencial se representa como :

donde F (N) expresa la tasa de cambio de la poblacin en el tiempo. Como esta

funcin depende de los factores fsicos y qumicos del medio externo, el
resultado cuando el espacio disponible y los nutrientes son limitados es una
curva sigmoidea. En condiciones constantes de crecimiento cuando la luz y los
nutrientes no cambian en el tiempo F (N) es proporcional al nmero de
organismos:

Formas de Cultivo
Por su naturaleza los cultivos se pueden clasificar en:

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Cultivo intensivo:
Aqu los factores de crecimiento se mantienen bajo un sistema controlado, de tal
manera que se pueda obtener una mxima respuesta en la produccin. Cultivo
extensivo: En esta clase de cultivo slo se controla las variables ms accesibles
en su manejo, tales como las caractersticas del medio y la densidad del cultivo.
Por la forma de cosechar los cultivos se pueden clasificar en:

Cultivos contnuos:
La poblacin algal, las caractersticas qumicas del medio, la temperatura y
finalmente la luz son mantenidas en un valor constante por perodos
prolongados, procurando un flujo sostenido de requerimientos y de salida del
producto. Cultivos batch: Estos cultivos son intermitentes, se implementan de
una sola vez y son cosechados completamente despus de que la produccin
algal alcance un nivel apropiado, medido en nmero de clulas por ml. En el
momento de la cosecha el cultivo debe estar en la fase exponencial.

Cultivos semicontinuos:
Aqu se cosecha una parte del medio segn la produccin y se renueva el
volumen cosechado por medio de un cultivo fresco.
Por la pureza del cultivo, ste se puede clasificar en:

Cultivos axnicos:
Son cultivos libres de bacterias y estriles, para mantener la productividad por
un perodo prolongado de tiempo. Estos cultivos son delicados y de cuidado.
Requieren todo el tiempo de material estril y asepcia.

Cultivos monoespecficos (clonales):

Aqu la poblacin de microalgas est parcialmente contaminada por otros
microorganismos como bacterias y protozoarios. Son empleados en cultivos del
tipo batch y extensivos. Procedimiento General en el Cultivo de las Microalgas
Mantenimiento de cepas: En esta etapa la cepas (stocks) de algas se mantienen
en fiolas o matraces de 250 cc con 100 ml de medio de cultivo y/o en placas con
agar. El medio de cultivo se prepara segn el procedimiento descrito para cada
caso y segn la especie, sea sta de mar o de agua dulce. Esta etapa tiene
carcter de cultivo axnico por lo que un mximo de cuidado se debe tener para
no contaminar las cepas. La intensidad de luz debe estar entre 500 y 1000 lux y
la temperatura de 15 grados centgrados constante. La cepa se mantiene en una
incubador que brinda todas estas facilidades. Las cepas tambin se mantienen
en tubos de ensayo con tapa rosca o de algodn de 20 cc.
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Cultivo inicial:
El cultivo inicial se desarrolla en fiolas o matraces de 500 cc con 250 ml de
medio. La inoculacin de las algas se realiza cuando las fiolas esterilizadas han
alcanzado la temperatura ambiente, transfiriendo aspticamente bajo una
campana de luz UV, un volmen de 1 a 5 ml de cepa al medio fresco. La boca de
estos recipientes se debe flamear para quemar microorganismos que pueden
ingresar al interior. Luego de la inoculacin las fiolas son puestas en la estantera
iluminada junto a uno de los matraces viejos para observar luego de uno a dos
das el crecimiento rpido del nuevo cultivo. Estos cultivos deben agitarse
manualmente en forma peridica y suavemente, a fin de variar la posicin de las
clulas. La intensidad de luz debe estar entre 1500 y 2000 lux .

Cultivo intermedio:
Esta etapa se desarrrolla en fiolas o matraces de 1000 a 2000 cc, con medios del
60 al 65% de la capacidad total. Se transfieren los antiguos cultivos que hacen
de stock (cultivo inicial) de 4 a 7 das. Esta inoculacin se hace bajo el mismo
esquema del caso anterior evitando que las algas sedimentadas pasen al nuevo
medio. Se transfieren aproximadamente del 80 al 90% del volumen total. Los
nuevos recipientes son agitados con aire filtrado a mximo 1m. La temperatura
se puede mantener a 18 grados centgrados, igual que para la etapa anterior. La
intensidad de luz puede ajustarse entre 2000 y 2500 lux. Cultivo de 10 a 20 l.
(Carboys): Los cultivos intermedios son empleados como inculo para los
recipientes de 10 a 20 litros, (ver fig. 3.2). El agua de mar antes de ser
enriquecida con los nutrientes es bien filtrada a 1m y esterilizada con UV. Dejar
en reposo el agua por una hora para reducir los perxidos generados, fertilizar e
inocular. Estos perxidos afectan los pigmentos fotosintticos de las algas.
Flamear la boca de cada recipiente y tomar las precauciones del caso para
prevenir la contaminacin, evitando adems transferir las algas sedimentadas de
los cultivos intermedios. La intensidad luminosa se ajusta entre 2000 y 5000 lux.
La temperatura se mantiene entre 18 y 20 grados centgrados. En cultivos batch
las poblaciones algales alcanzan densidades mayores a los 4 millones de clulas
por ml. Filtrar el aire como en el caso anterior.

Cultivo masivo:
El grado de contaminacin bacteriana es mayor en esta etapa. La iluminacin
por lo general se coloca en la parte superior de los recipientes y la intensida
puede estar entre 4000 y 5000 lux. Los recipientes para estos cultivos son
blancos en su parte interior o son transparentes en su totalidad. Los inculos son
obtenidos de la etapa anterior que presentan un crecimiento rpido y carecen de
sedimento. En los cultivos masivos la aireacin no es filtrada y generalmente se
desarrolla externamente, aprovechando la iluminacin del sol. (Fig. 3.2)

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Algas Comunes que se Cultivan en Laboratorios Muchas son las especies de

algas que se cultivan y usan en laboratorios de larvas, siendo la ms frecuente
las diatomeas y los flagelados. Ellas son reconocidas mundialmente como
especies adecuadas por su fase de cultivo y elevado valor nutricional. La tabla VI
muestra algunas especies de uso comn en laboratorios de produccin de larvas.

Contenido Nutricional de las Microalgas

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Los niveles nutricionales de las algas que se cultivan con los diferentes medios
enriquecidos y consecuentemente el poder alimenticio de una especie algal
depende de las condiciones generales de crecimiento dadas en el laboratorio. La
nutricin de las larvas y juveniles depende del contenido y naturaleza de los
constituyentes bioqumicos de las algas, los que representan la base para la
formacin de los nuevos tejidos, restauracin de aquellos que han sido afectados
y para el metabolismo normal de los organismos de cra. Una combinacin de
algas como dieta brinda un mayor valor nutritivo debido a que contienen un
surtido de la mayora de los requerimientos nutricionales necesarios para el
crecimiento de las larvas, sean estas de camarn, moluscos y peces. Ver tabla IV.
Los componentes qumicos de las microalgas no siempren son constantes,
refirindose a aquellas que se cultivan. Estos niveles dependern del tipo y
contenido de nutrientes usados en el medio enriquecido, de la condicin de la
cepa de alga cultivada, de las condiciones de iluminacin y temperatura, de la
fase de crecimiento en que las algas son cultivadas y de la calidad del agua de
mar empleada en el cultivo. Anormalidades en alguno(s) de estos factores
alterarn significativamente la composicin bioqumica de las microalgas
cultivadas. Un cultivo algal considerado viejo ya no aportar con mayores
ventajas nutricionales para una cra larvaria.

Aislamiento y Purificacin
La aplicacin de los siguientes mtodos para una colecta natural de algas
microscpicas produce cultivos monoespecficos o axnicos. Aunque tales
mtodos son sencillos sin embargo, la preparacin de cultivos axnicos requieren
paciencia y perserverancia. Los medios enriquecidos usados para fines de
aislamiento y purificacin pueden ser aquellos que se revisan en el siguiente
captulo para agua dulce y salada. Las condiciones de iluminacin y temperatura
son las mismas descritas para el cultivo intermedio. Entre los mtodos de
aislamiento ms usados se nombran:
1.- Pipeta capilar (simplificado).
2.- Rallado en agar.
3.- Aislamiento en agar.
4.- Rociado en plato.
Entre los mtodos de purificacin ms conocidos tenemos:
1.- Lavado.
2.- Antibiticos.
3.- Potasio telurito.

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Instrumentos pticos requeridos:

Estereo-microspio con iluminacin de abajo hacia arriba.
Microscopio ptico compuesto.
Equipos:
Incubador iluminado con control de temperatura.
Campana estril.
Cmara de Neubauer.
Implementos:
Mechero de gas.
Asa de platino con gancho de 4 mm.
Tacho para desechos de vidrio.
Recipiente para pipetas usadas.
Vidrios y plasticos:
Tubos de ensayo con tapa rosca (18 x 150 mm).
Pipetas Pasteur de 9" tapadas con algodn en la boca ancha.
Goteros de caucho para usarlos con las pipetas Pasteur.
Envase metlico con tapa para guardar pipetas Pasteur
Platos Petri de vidrio o plsticos de 100 x 15 mm.
Fiolas para 125 ml.
Los mtodos de aislamiento y purificacin a describirse son generales y
aplicables a muchas especies algales, no estan dirigidos para especies
especficas. Las fuentes de algas para aislamiento slo incluyen muestras
planctnicas y se refieren a colecciones naturales. Metodos de aislamiento. Es
necesario el aislamiento de una unidad algal y la colocacin de la misma en un
medio de cultivo adecuado para su multipliacin, a fin de establecer un cultivo
unialgal (monoespecfico). El trmino unidad se refiere a cualquier clula,
colonia, filamento, pieza o parte del talo y cuerpo reproductivo. Un cultivo
unialgal establecido es necesario para preparar un cultivo axnico. De todos los
mtodos nombrados para aislamiento el de pipeta capilar y el de rayado en agar
son los ms empleados para este fin. Las algas menores a 10 difcilmente son
aisladas con pipeta capilar. Filamentos pueden aislarse con pipeta capilar . Pipeta
capilar (simplificado) La tapa de un plato Petri invertido se emplea como rea
para aislamiento:

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a) Coloque de 10 a 15 gotas de una coleccin natural en el centro de la tapa

invertida.
b) Coloque 8 gotas de un medio de cultivo adecuado en 8 posiciones rodeando la
coleccin natural. Marque primero con nmero la posicin de cada gota por la
cara interior de la tapa.
c) Usando una pipeta Pasteur nueva estirada y estril, transfiera las algas
deseadas de la coleccin natural a la gota nmero 1 del medio de cultivo.
d) Transfiera una sola alga desde la gota nmero 1 hasta la gota nmero 2.
e) Repita este proceso de transferencia con el resto de las gotas del medio de
cultivo hasta asegurarse que una sola unidad algal requerida est presente en
una gota.
f) Transfiera esta unidad algal a tubos de ensayos que contienen el medio de
cultivo esterilizado. Como precaucin, esta unidad algal en una gota puede ser
transferida primero a un fragmento de un cubreobjeto que descansa en un
portaobjeto, para examinarla con el microscopio compuesto. El fragmento con la
gota y la unidad es entonces transferido al tubo de ensayo con el medio de
cultivo para su desarrollo. De esta manera se asegura que una sola unidad algal
es aislada y que efectivamente va al medio de cultivo.
g) Coloque los tubos bajo condiciones favorables para crecimiento. (Fig. 3.3)

Rayado en agar
Este mtodo brinda mayor facilidad para aislar algas de tamao igual o menor a
10 m de dimetro. Tambin produce cultivos axnicos.

a) Prepare platos Petri (vidrio o plstico) de 100 x 15 mm, conteniendo medio de

cultivo solidificado con 1 a 1,5% de agar.
b) Coloque dos gotas de coleccin natural cerca de la periferia en el medio
solidificado. Con el asa de platino (punta esterilizada sumergida en alcohol y
quemada), bajo criterio de asepsia, rayar en paralelo la muestra de la coleccin
en el agar.
c) Cubra el plato, inviertalo e incubar de 4 a 8 dias bajo adecuada condicin de
crecimiento.
d) Pasado este tiempo observar directamente en el estereomicroscopio el rayado
y seleccione las colonias deseadas que estn libres de otros organismos.

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e) Remueva las colonias seleccionadas usando una pipeta Pasteur estirada

estril o el asa de platino y colquelas en una gota de medio de cultivo estril
sobre un cubreobjeto. En un microscopio compuesto observe las unidades de
algas deseadas y que sean de la misma especie.
f) Repita el procedimiento de rayado de una sola zona, constatar y nuevamente
incubar para que se formen las colonias. Este segundo rayado reduce la
contaminacin por bacterias y asegura agrupaciones de unidades algales de la
misma especie.
g) Transfiera las unidades algales de una colonia a un medio lquido (tubo de
ensayo) o solidificado. (Fig. 3.4)

Mtodos de Purificacin
Unidades algales aisladas con pipeta capilar pueden presentar contaminantes
asociados como bacterias. Tambin el manejo prolongado de cepas de algas
pueden contaminarse en un momento con microorganismos que utilizan los
mismos nutrientes del medio y cuando se desarrollan pueden afectar las algas.
La presencia de microorganismos y bacterias contaminantes pueden detectarse
con el microscopio compuesto o mediante prueba y anlisis microbiolgico
conocido. Entonces es necesario eliminar o inhibir el crecimiento de dichos
microorganismos in situ mediante procedimientos qumicos. Se asume que todo
aparato, equipo, implemento o medio de cultivo estn esterilizados antes de ser
usados. Tratamiento con antibiticos Puede usarse un antibitico o una
combinacin de stos para eliminar o inhibir el crecimiento de microorganismos

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que se adhieren a las clulas algales. El presente procedimiento corresponde a

uno descrito por J. R. Stein en su texto Handbook of phycological methods:
a) Preparar la solucin de antibiticos, disolviendo primero 100 mg de penicilina
G y 50 mg de sulfato de estreptomicina juntos en 10 ml de agua destilada.
Agregar a este preparado 10 mg de cloranfenicol que ha sido disuelto primero en
1 ml de ethanol al 95% y agitar bien.
b) Filtrar esta solucin rpidamente con filtro de membrana (0.2 - 0.45 ).
c) Colocar 1ml de cultivo algal contaminado en cada uno de los seis Erlenmeyer
(fiolas) de 125 ml que contienen 50 ml de medio de cultivo estril.
d) Agregar uno de los siguientes volmenes de la solucin de antibitico en cada
fiola: 3, 2, 1, 0.5, 0.25, 0.125 ml. Esto provee concentraciones de penicilina de
aproximadamente 20 a 500 mg/l. y los niveles que corresponden a los otros 2
antibiticos.
e) Las fiolas debidamente tapadas son puestos bajo condiciones favorables de
crecimiento.
f) Despus de 24 - 48 horas aspticamente transfiera algunas unidades algales
de cada fiola a tubos de ensayo conteniendo medio de cultivo estril y libre de
antibiticos. Hacer esto por triplicado en cada intervalo de tiempo.
g) Colocar estos tubos en condiciones favorables de crecimiento. Chequear los
tubos y hacer pruebas de contaminacin bacteriolgica despus de 2 y 3
semanas, ver fig. 20 En ocasiones las algas pueden contaminarse con otras
especies algales como las verde - azules y estas pueden ser eliminadas usando
antibiticos. Medios de cultivo conteniendo 25 ppm. de estreptomicina pueden
resultar efectivos. El uso de antibiticos requiere cuidado en la concentracin de
los agentes qumicos y en la duracin del tiempo en que las algas son expuestas
al tratamiento. (Fig. 3.5)

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Otros antibiticos pueden ser usados para purificacin como las sulfonamidas.
Para comprobar la presencia de los contaminantes se puede recurrir a la directa
observacin en el microscopio de contraste de fase:
1. Aspticamente tome muestras del cultivo de algas.
2. Colquelas en lminas portaobjetos estriles y si es necesario agregar medios
de cultivo estriles a las muestras.
3. Cbralos con laminillas cubreobjetos estriles.
4. Observe al microscopio equipado con iluminacin de contraste de fase.
5. Usando el mayor aumento posible: 20X/10X /40 aumento, buscar la presencia
de microorganismos en la muestra.

Desinfeccin y Esterilizacin
Los trminos desinfeccin y esterilizacin parecen sinnimos, sin embargo hay
diferencias fundamentales entre ellos. Desinfeccin significa la reduccin del
nmero de bacterias hasta un nivel aceptable: bacteriosttico. Esterilizacin
significa el proceso en el cual se asegura la total inactivacin de todos los
microorganismos:
actericida. A continuacin se exponen mecanismos para desinfeccin y
esterilizacin:

Desinfectantes no voltiles

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El uso de estos compuestos est confinado a la reduccin de la carga

microbiana de los instrumentos y superficies. Los siguientes desinfectantes son
ms comnmente usados, ellos pueden ser aplicados directamente sobre las
superficies o los implementos pueden ser sumergidos en ellos:
a) Lisol al 3,5 % (v/v): Acta rpidamente sobre clulas vegetativas (en
capacidad de reproducirse). No es efectivo contra las esporas. Puede quemar la
piel al tener contacto con este desinfectante.
b) Cloro (hipoclorito): Usado en solucin a una concentracin de 400 ppm, como
cloro activo. El
compuesto ms usado en nuestro medio es el HTH. Como hipoclorito es efectivo
contra las esporas entre 15 y 70 minutos de accin. La preparacin de esta
solucin de hipoclorito corroe los instrumentos metlicos.
c) Formaldehdo: En solucin al 5% es considerado efectivo a temperatura
ambiente. Requiere de 24 horas para ser efectivo. Pequeas cantidades de
materia orgnica restringen mucho su accin. Es irritante a los ojos y a la
mucosa nasal.
d) Alcohol: Como etanol al 70% ( v/v ). No es un buen desinfectante, por lo que
es ms usado por su efecto antes que por su eficiencia.
Mecanismos de esterilizacin
El calor hmedo es la forma ms usada para producir esterilizacon. Es aplicable
a todos los medios y materiales que pueden resistir temperaturas de 100 a 120
grados centgrados.
a) Autoclavado (olla a presin): La esterilizacin se logra por autoclavado a 121
grados centgrados en vapor puro y saturado a 15 lb / plg2 de presin.
Asegurarse que todo el aire del interior sea removido. El tiempo requerido para
lograr una esterilizacin correcta vara segn el volmen a ser tratado: 100 ml
requieren 10 minutos, 2 litros requieren 20 y 5 litros requieren 35 minutos
aproximadamente.
b) Bao en agua hirviendo: En un recipiente de acero inoxidable ponga a hervir
agua destilada (100 grados centgrados). Coloque aqu el medio o los
instrumentos aesterilizarse, dejndo que se caliente por 10 minutos. Este
mtodo elimina clulas vegetativas, pero no las esporas. Es un mecanismo
empleado slo en emergencias.
c) Filtracin: Grandes volmenes de medio pueden filtrarse a travs de papel
filtro de mayor dimetro (125mm.), bajo presin normal y sin vaco. Aunque el
vaco puede emplearse tambin, el efecto de la presin normal simplifica el
filtrado de grandes volmenes de lquido, ver fig. 3.6 Volmenes de medio para
cultivos iniciales eintermedios pueden esterilizarse con unidades de filtracin al
vaco y membrana microporosa de 0.5 . Usar 5 lb. De presin cuando se filtra
con estas membranas. (Fig. 3.7) (Escuela Superior Politcnica del Litoral)

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Medida del crecimiento

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El objetivo de contar algas no es slamente establecer la poblacin (densidad)

de clulas por mililitro que hay en un recipiente, sino tambin determinar
numricamente el grado de divisin celular en un determinado tiempo. Los
resultados permiten estimar en cierto modo la situacin de un cultivo y
relacionarlo con la curva de crecimiento de esa poblacin algal.
El mtodo empleado para contar algas es sencillo.
Implica el uso de un dispositivo que permita el contaje. De todos los dispositivos
conocidos el ms usado en los laboratorios marinos comerciales de nuestro
medio es el hemocitmetro. Para fines de investigacin tambin se usa la
cmara de Sedgwick-Rafter.

Por lo general estos dispositivos son bien usados para contar algas que se
cultivan en recipientes, pero no necesariamente son muy convenientes para
contar poblaciones naturales.Los mtodos para estimar biomasa de algas de
ambientes naturales generalmente requieren de la sedimentacin del plancton.
Equipos y accesorios:
Microscopio estandard.
Hemocitmetro 0.1 mm deep (Improved Neubauer) con cubre objeto No. 2
Pipetas Pasteur con bulbo (gotero) para llenar la cmara.
Piceta con agua destilada para limpieza de accesorios.
Tubos de ensayo, preferentemente con tapa rosca, para las muestras de algas.
Fijativos para inmovilizar algas mtiles con el lugol o la formalina al 5%.
Uso del hemocitmetro:
Coloque el cubreobjeto bien limpio sobre los pilares de soporte de la cmara.

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Usando una pipeta Pasteur que contiene la muestra de algas, en ngulo de 45

grados, deposite una gota en cada ranura del hemocitmetro para llenar el
espacio.
Es conveniente esperar por tres minutos antes de proceder al contaje en el
microscopio,para dejar que las unidades algales se asienten debidamente. Use
objetivos de 20X o 40X segn cul le sea ms claro y cmodo para proceder.
Mantenga un orden en la secuencia del contaje para evitar errores de suma. No
considere las clulas que estn asentadas justo en medio de cualquier lnea de
los cuadros, sean de las internas o de los laterales, aunque este criterio no se
aplica cuando apenas es un 25% del cuerpo de la clula el que est topando la
lnea. (Fig. 3.8)

Consideraciones:
Es necesario homogenizar el cultivo y seleccionar el dispositivo indicado para el
conteo, en el que las algas se distribuyan adecuadamente.
Si el alga crece adherida al recipiente (bnticas por ejmplo), la muestra puede
ser tomada raspando un area y homogenizandola luego para tomar nuevamente
la muestra.
Hay cultivos que no se pueden contar y demandan otros mecanismos que no
implican el uso de las cmaras de contaje.
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Cuando una clula se encuentra en franco proceso de divisin (fisin binaria), la

unidad se cuenta como dos por que representa el material de dos clulas. Si las
divisiones se presentan en un alto nmero entonces habr que cambiar la hora
del contaje.
La seleccin del disposotivo a usarse depende de la densidad del cultivo, del
tamao y forma de la clula y de la presencia de algn material celular que
pueda influir en el llenado de la cmara. Despus de seleccionado el dispositivo,
su limpieza es importante, incluyendo los accesorios, para lograr una correcta
distribucin de las clulas en la cmara.
Es conveniente dejar que las clulas se asienten por unos tres minutos en la
cmara y luego proceder a contar. (Escuela Superior Politcnica del Litoral)

Microalgas en contaminacin
El fitoplancton (microalgas) es considerado el mayor indicativo de alerta
temprana en las caractersticas ecolgicas de los cuerpos de agua (esteros,
estanques, charcas, riachuelos), provocados principalmente por productos
qumicos. Es la base de las cadenas alimenticias acuticas y se caracteriza por
responder de manera rpida y previsible ante diversos agentes contaminantes.
Su sensibilidad ante las variaciones en los niveles de nutrientes podra ser
catalogada como un indicador de eutrofizacin (enriquecimiento de nutrientes
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inorgnicos: nitrgeno y fsforo) en los sistemas acuticos.4 Las diatomeas han

sido utilizadas para diagnosticar los cambios rpidos en el ambiente debido a
que responden de inmediato a los cambios qumicos, fsicos y biolgicos que se
producen en su entorno acutico.
Otro de los usos de las microalgas como indicadores de contaminacin es la
determinacin y diagnosticar concentraciones significativas de petrleo
mediante ensayos en ecosistemas acuticos, que han evidenciado disminuciones
en el contenido de clorofila y en el nmero de clulas de las microalgas. Esto
corrobora que existen muchas microalgas que podran ser empleadas para
determinar el impacto que provocan ciertas sustancias qumicas en el ambiente
acutico y evaluar la toxicidad de sustancias que se incorporan al mercado y que
son autorizadas por las instituciones responsables de salud y ecologa. (Valdez,
2012)

Bibliografa
Escuela Superior Politcnica del Litoral, 1. (s.f.). FOLLETO DE ALGAS.
Recuperado el 26 de ENERO de 2015, de http://mailcenaim.espol.edu.ec/publicaciones/algas/capitulo_3.pdf
Valdez, m. j. (Julio y Agosto de 2012). Biodiversitas. Recuperado el 26 de ENERO
de 2015, de Biodiversitas medina jasso A.p.pia Valdez:
http://www.biodiversidad.gob.mx/Biodiversitas/Articulos/biodiv103art1.pdf

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