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D. Fitoqumica

D. FITOQUMICA
1. INTRODUO ................................................................................................................... 25
2. EXPERIMENTAL ............................................................................................................... 32
2.1. Mtodos cromatogrficos.............................................................................................. 32
2.1.1. Cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC)..................................... 32
2.1.2. Cromatografia em coluna ....................................................................................... 33
2.2. Estudo das folhas de Smallanthus sonchifolius............................................................. 35
2.2.1. Origem do material vegetal .................................................................................... 35
2.2.2. Extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130 ................................................. 35
2.2.3. Isolamento de LSTs do extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130 ........... 36
2.2.4. Extratos de folhas com e sem tricomas glandulares de S. sonchifolius #101......... 38
2.2.5. Coleta de tricomas glandulares de folhas............................................................... 39
2.2.6. Anlise dos extratos glandulares por meio de CLAE ............................................ 39
2.3. Identificao e elucidao estrutural ............................................................................. 40
2.3.1. Mtodos espectroscpicos e espectromtricos....................................................... 40
2.3.1.1. Espectrometria de massas................................................................................ 40
2.3.1.2. Espectroscopia na regio do IV....................................................................... 41
2.3.1.3. Espectroscopia de RMN.................................................................................. 41
2.3.2. Elucidao estrutural automatizada via SISTEMAT ............................................. 41
2.3.3. Confrmeros de baixa energia................................................................................ 42
3. RESULTADOS E DISCUSSES ................................................................................... 43
3.1. Extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130 ........................................................ 43
3.1.1. Isolamento de terpenides da fase hidrometanlica de S. sonchifolius #130......... 43
3.1.2. Identificao e elucidao estrutural ...................................................................... 46
3.1.2.1. LST 1 (Enidrina) ............................................................................................. 46
3.1.2.2. LST 2 (Uvedalina)........................................................................................... 54
3.1.2.3. LST 3 (Sonchifolina)....................................................................................... 59
3.1.2.4. LST 4 (Fluctuanina) ........................................................................................ 62
3.1.2.5. LST 5............................................................................................................... 68
3.1.2.6. LST 6............................................................................................................... 72
3.1.2.7. LST 7............................................................................................................... 76
3.1.2.8. LST 8 (Polimatina B) ...................................................................................... 82
3.1.2.9. LST 9............................................................................................................... 90
3.1.2.10. LST 10 (Dmero de melampolidos) .............................................................. 97
3.1.2.11. Dados de RMN 1H de todas LSTs............................................................... 111
3.1.3. Caractersticas dos metablitos secundrios isolados .......................................... 113
3.1.3.1. LST 1 (Enidrina) ........................................................................................... 113
3.1.3.2. LST 2 (Uvedalina)......................................................................................... 114
3.1.3.3. LST 3 (Sonchifolina)..................................................................................... 115
3.1.3.4. LST 4 (Fluctuanina) ...................................................................................... 116
3.1.3.5. LST 5............................................................................................................. 117
3.1.3.6. LST 6............................................................................................................. 118
3.1.3.7. LST 7............................................................................................................. 119
3.1.3.8. LST 8 (Polimatina B) .................................................................................... 120
3.1.3.9. LST 9............................................................................................................. 121
3.1.3.10. LST 10 (Dmero de melampolidos) ............................................................ 122
3.2. Avaliao espectroscpica de extratos de folhas com e sem tricomas glandulares .... 124
3.3. Extrato glandular de S. sonchifolius e caracterizao dos picos ................................. 125
4. BIBLIOGRAFIA................................................................................................................ 127

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D. Fitoqumica

1. INTRODUO
Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson, subtribo
Melampodiinae, tribo Heliantheae (Bremer, 1994) foi originalmente
classificada como Polymnia por Linnaeus em 1715. Blake, em 1917 e
1930, fez a primeira reviso do gnero e Wells (Wells, 1965) manteve o
termo Polymnia. Mais recentemente, Robinson (Robinson, 1978) dividiu
o gnero Polymnia em dois: Polymnia e Smallanthus, mantendo ambos
em Melampodiinae. A partir de ento, yacn passou a pertencer ao
gnero Smallanthus. Embora a classificao de Robinson seja bem aceita, a antiga ainda
muito utilizada. A espcie Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson sinonmia Polymnia sonchifolia Poepp. & Endl, uma das 21 espcies deste gnero
americano, o qual apresentado na tabela D1 (Grau e Rea, 1999).
A espcie possui inmeros nomes populares em espanhol (yacn, llamn, arboloco,
puhe, jcama e jquima), em ingls (yacon, jiquima e yacon strawberry), em francs (poir de
terre Cochet), em alemo (Erdbirne) e em italiano (polimnia) (Nieto, 1991). No Brasil, a
espcie popularmente conhecida como yacn.
Tem origem na regio andina, onde foi encontrada em tumbas Incas do Peru e hoje
cresce livremente principalmente na Venezuela, Colmbia, Equador, Bolvia, Peru e noroeste
da Argentina. Desenvolve-se a princpio em regies de 880 a 3500 m de altitude, embora
esteja se adaptando muito bem ao nvel do mar (Valentov e Ulrichov, 2003).
As espcies de Smallanthus parecem ter preferncia por locais de distrbio ecolgico,
como por exemplo, em locais de desmatamento, beira de rios e estradas. Assim, em funo da
agricultura baseada em desmatamento e queimadas, o yacn foi tornando-se cada vez mais
freqente como erva daninha, que aos poucos foi chamando a ateno pelas caractersticas de
suas razes tuberosas. Ento essa erva passou a ser cultivada, o que deve ter ocorrido nas
regies norte da Bolvia e central do Peru. O primeiro registro sobre o yacn data de 1615,
quando Felipe Guaman Poma de Ayala cita-o em uma lista de 55 plantas cultivadas pelos
povos andinos. Depois o cronista Padre Barnab Cobo, em 1653, deixa registrado em um
livro a descrio do yacn, dizendo que uma fruta que se come cru, que tem sabor muito
bom e ainda melhor se exposta ao sol, tambm disse que uma fruta maravilhosa para
transporte em embarcaes, pois dura muito, como no original: "Comense crudas por frutas y
tienen muy buen sabor, y mucho mejor si se passan al sol. Es maravillosa fruta para
embarcada, porque dura mucho tiempo" (Valentov e Ulrichov, 2003; Zardini, 1991). H
muito que o yacn chegou na Europa, na Itlia foi bastante cultivado nos idos de 1930, mas o

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D. Fitoqumica

cultivo no resistiu segunda guerra mundial (Grau e Rea, 1999). Atualmente o yacn vem
conquistando o mercado internacional (Zardini, 1991), sendo cultivado na Itlia, Frana,
Alemanha, EUA, Repblica Tcheca, Rssia, Japo e Brasil (Valentov et al., 2001; Valentov
e Ulrichov, 2003). Sua produo aumentou durante um grande perodo de seca na regio
andina nos anos de 1982-1983, quando a produo de batata inglesa foi muito afetada. O
problema da sua marginalizao est conectada ao fato de no haver uma tcnica de produo
intensiva, talvez por no ser ainda costumeiramente consumida em reas urbanas, embora
vrios estudos tenham sido realizados na rea agrcola (Estrella e Lazarte, 1994; Grau e Rea,
1999; Nieto, 1991; Zardini, 1991).
S. sonchifolius (Fig. D1) uma planta herbcea perene que multiplica-se por rizomas
(Nieto, 1991). Os caules areos so cilndricos, de colorao esverdeada, apresentam
pilosidade em toda a superfcie e chegam a medir at 2,5 m de altura. As folhas brotam de
gemas do caule areo, so opostas, delgadas, apresentam as bordas lobuladas e formam uma
ala de cada lado do pecolo. Apresentam vrias estruturas secretoras, tais como tricomas,
idioblastos e hidatdios (Dip., 1986). As flores esto agrupadas nas extremidades dos ramos e
so de dois tipos: as liguladas, que se encontram nos bordos, e as tubulares, na parte central da
inflorescncia.

27

D. Fitoqumica

C
Figura D1. Partes areas de Smallanthus sonchifolius. A e B mostram fotografias feitas no campo de
cultivo do CERAT, UNESP em Botucatu, SP, e C foi obtida na internet.

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D. Fitoqumica

Suas razes tuberosas, suculentas e translcidas, so descritas como pras ou mas,

com odor que lembra a melancia (Ohyama et al., 1990; Valentov e Ulrichov, 2003). O
sistema subterrneo (Fig. D2) constitudo de trs partes distintas: os tubrculos que so
ricos em frutanos e fibras no digerveis dos quais originam-se gemas que formaro uma
nova planta, as razes de absoro e fixao, e as razes tuberosas ou de reserva, tambm ricas
em frutanos, que chegam a pesar at 2 kg, sendo as preferidas para o consumo humano.

Figura D2. Razes tuberosas de Smallanthus sonchifolius.

A maioria das razes tuberosas em Asteraceae possui a capacidade de armazenar

amido, polmero de glicose. Entretanto, o yacn um enorme reservatrio de inulina, um
polmero de frutose com um resduo de glicose (Carvalho et al., 2004). Tambm armazenam
vrios carboidratos como frutose, glicose, sacarose, oligossacardeos de baixa polimerizao e
traos de amido. A inulina de alta polimerizao comum em espcies de Asteraceae, como
Helianthus e Dahlia, mas no yacn est em baixa quantidade. Porm os oligofrutanos de
baixa polimerizao, de at doze graus, chegam a perfazer 67 % da matria seca da batata do
yacn, e o tipo de ligao de polimerizao mostra que so do tipo existente na inulina (Grau
e Rea, 1999). Os oligofrutanos auxiliam no desenvolvimento de bfido bactrias benficas no
intestino, na assimilao de clcio, tm efeito favorvel na diminuio do colesterol, de
triglicrides e de microorganismos putrefativos (Carvalho et al., 2004). Assim o yacn pode
prover reduo de calorias e as fibras necessrias para o combate ao estresse da vida
sedentria, que geralmente vem associado ao consumo de muito carboidrato e gordura.
A sntese e degradao destes carboidratos ocorrem por meio de um sistema
multienzimtico. A enzima sacarose-sacarose-frutosiltransferase transfere um resduo de

29

D. Fitoqumica

frutose de uma molcula de sacarose, acar comum, para outra, resultando em um trisacardeo, chamado de cetose, e mais um resduo de glicose livre. A seguir, a enzima frutanofrutano-frutosiltransferase transfere outros resduos de frutose para a cetose, promovendo a
polimerizao da cadeia (Carvalho et al., 2004).
A afirmao do Padre Barnab quanto melhora do sabor das razes quando expostas
ao sol foi confirmada por meio de estudos bromatolgicos (Carvalho et al., 2004; Nieto,
1991). As investigaes demonstram que com a exposio das razes ao sol por 15 dias, o
contedo de acar aumenta nove vezes (Nieto, 1991). Neste caso ocorre a despolimerizao
da molcula de inulina por meio da enzima frutano-hexohidrolase, o que acarreta o acmulo
de frutose e de glicose. O processo de despolimerizao da inulina gera energia para o
processo de respirao e transpirao celular.
A batata do yacn tambm rica em minerais como potssio, fsforo, ferro, zinco,
magnsio, sdio, clcio e cobre, alm de caroteno, retinol, vitamina C, niacina e riboflavina
(Grau e Rea, 1999).
S. sonchifolius tem um alto potencial para tornar-se um importante alimento diettico,
uma vez que a inulina no hidrolisada por complexos enzimticos de humanos (Alfaro e
Melgarejo, 2005). A batata do yacn comercializada na Europa, em feiras livres, como
alimento funcional e suplemento alimentar, especialmente para idosos, diabticos e mulheres
no climatrio. Nos mercados locais da regio andina o yacn vendido como fruta,
juntamente com ma, abacaxi, abacate, etc (Valentov e Ulrichov, 2003). A sua aparncia
pode parecer um pouco estranha, pois vendida quando a pele da batata est enrugada. Tal
fato ocorre porque a batata exposta ao sol, processo para aumentar o seu sabor doce. O
yacn consumido cru, em saladas de frutas, cozido, frito em fatias finas, grelhado e at
como suco. As folhas so utilizadas para alimentao bovina, mas a presena de LSTs na
superfcie das mesmas altera a sua palatabilidade (Grau e Rea, 1999).
As folhagens de S. sonchifolius so utilizadas na medicina popular na forma de infuso
para tratamento de diabetes (Valentov et al., 2001). Estudos realizados com animais normais,
diabticos e com diabetes induzida demonstram que alm de normalizar os nveis de glicose
no sangue, um infuso de folhas de yacn parece aumentar a concentrao plasmtica da
insulina (Aybar et al., 2001). O extrato aquoso e o ch de folhas de yacn reduzem a produo
de glicose por meio da diminuio da gliconeognese e da glicogenlise em hepatcitos, alm
de atuar de forma similar insulina e proteger contra danos oxidativos (Valentov et al.,
2003; Valentov et al., 2004). A enidrina (1), a LST de maior concentrao nos extratos de
folhas de S. sonchifolius, foi administrada oralmente a ratos a 100 mg/kg com 1,5 mg/kg de

30

D. Fitoqumica

glicose. Os resultados mostram que esta substncia possui atividade antidiabtica, pois os
valores de glicose no sangue foram de 140,8 mg/dL para os ratos tratados e de 216,8 mg/dL
para os controles (Kawashima et al., 2001). Alm disso, a enidrina apresenta as atividades
antiinflamatria (Hwang et al., 1996), antifngica e antimicrobiana (Inoue et al., 1995).
De S. sonchifolius foram isolados quatro diterpenides do tipo caurano (Kakuta et al.,
1992), flavonides, vrios derivados do cido cinmico como os cidos cafico, cumrico,
ferlico e clorognico (Simonovska et al., 2003), alm de vrias LSTs do tipo melampolido,
dentre outros metablitos secundrios. O nmero de LSTs isoladas do gnero Smallanthus
apresentado na tabela D1.
Tabela D1. Espcies do gnero Smallanthus, sua localizao e nmero de LSTs (melampolidos) isoladas.
Espcies
Melampolidos isolados
Localizao geogrfica
S. apus (Blake)
S. connatus (Spreng.)
Brasil, Paraguai, Uruguai, Argentina
S. fruticosus (Benth.)
5 (Bohlmann et al., 1980) Colmbia, Equador, Peru
S. glabratus (DC.)
1 (Bohlmann et al., 1985) Chile, Equador, Peru
S. jelksii (Hieron.)
Peru
S. latisquamus (Blake)
Costa Rica
S. lundellii
Guatemala
S. macroscyphus (Baker ex.
8 (DePedro et al., 2003)
Bolvia, Argentina
Martius) A. Grau
S. maculatus (Cav.)
Mxico, Guatemala, Honduras, Salvador,
Costa Rica, Nicargua
S. macvaughii (Wells)
4 (Castro et al., 1989)
Mxico
S. meridensis (Steyerm.)
Venezuela, Colmbia
S. microcephalus
Equador
S. oaxacanus (Sch. Bip. ex Klatt) Mxico, Guatemala, Honduras
S. parviceps (Blake)
Peru, Bolvia
S. pyramidalis (Triana)
Venezuela, Colmbia, Equador
S. quichensis (Coult.)
Costa Rica, Guatemala
S. riparius (H.B.K.)
Mxico, Bolvia
S. siegesbeckius (DC.)
Peru, Bolvia, Brasil, Paraguai
S. sonchifolius (Poepp. & Endl.) 7 (Inoue et al., 1995; Lin Venezuela, Colmbia, Equador, Peru, Bolvia
et al., 2003; Valentov et
al., 2003)
S. suffruticosus (Baker)
Venezuela
S. uvedalius (L.) (Mackenzie)
7 (Bohlmann et al., 1985) Estados Unidos

O yacn ainda possui uma caracterstica interessante de manchar as mos de quem

manuseia suas folhas, o que causado por peroxidases.
A espcie conhecida por sua alta resistncia a pragas (Hashidoko et al., 1993; Inoue
et al., 1995; Kakuta et al., 1992; Takasugi e Masuda, 1996), o que foi relacionado presena
de tricomas glandulares (Hashidoko et al., 1993; Inoue et al., 1995), especialmente porque
estas so estruturas que armazenam LSTs, substncias alergnicas e amargas.
A localizao de LSTs em tricomas glandulares de espcies de Heliantheae
possibilitou a otimizao de estudos fitoqumicos, reduzindo custos, tempo de anlise e

31

D. Fitoqumica

consumo de material (Spring, 1991; Spring e Buschmann, 1994). Isso foi possvel atravs do
emprego da tcnica denominada microamostragem de tricomas glandulares. A metodologia
analtica consiste em coleta manual de tricomas glandulares, preparo do extrato glandular e
anlise por meio da CLAE (Da Costa et al., 2001; Spring, 1991). Geralmente os metablitos
presentes nos tricomas podem ser indiretamente identificados por meio da comparao de
seus dados cromatogrficos com os de substncias previamente conhecidas, cujos dados so
compilados na forma de um banco de dados. A metodologia preparativa uma adaptao da
anterior. Ela compreende a obteno de extrato glandular com grande nmero de tricomas,
sendo, portanto necessria a lavagem das superfcies ntegras das folhas ou das flores do
vegetal. O extrato tambm analisado em CLAE e seus metablitos so isolados em escala
preparativa. Estes metablitos so posteriormente submetidos anlise espectroscpica para
sua elucidao estrutural.
Neste trabalho, o intuito foi isolar quantidades suficientes de LSTs para que fossem
utilizadas em ensaios biolgicos.

32

D. Fitoqumica

2. EXPERIMENTAL
2.1. Mtodos cromatogrficos
2.1.1. Cromatografia em camada delgada comparativa (CCDC)
As CCDCs foram realizadas em placas de vidro com 10 ou 20 x 20 cm. Estas eram
recobertas com slica gel 60 GF254, Merck (0,25 mm) com auxlio de um espalhador do tipo
Desaga. Tambm foram empregadas placas de alumnio pr-fabricadas Merck, recobertas
com o mesmo tipo de slica. As amostras foram solubilizadas em solvente apropriado e
aplicadas nas placas com auxlio de capilares de vidro ou por meio de cmara de aplicao de
amostras. As placas foram eludas em diferentes sistemas de fases mveis, contendo
geralmente hexano, acetona, AcOEt, CHCl3 e HAc. As manchas referentes s substncias
foram detectadas por meio de luz UV a 254 e 366 nm, assim como por meio de reveladores
qumicos. Estes, como o anisaldedo sulfrico, eram borrifados nas placas e estas eram ento
aquecidas at 100 C, a fim de que houvesse a revelao, ou seja, o desenvolvimento de
colorao atravs de reaes qumicas promovidas pelo calor.
O aplicador de amostras consiste em aparelho Camag Automatic TLC Sampler 4
acoplado a um computador com software winCATS, detetor Camag Reprostar 3 e Camag
TLC Scanner 3. As amostras eram solubilizadas em pequeno volume de solvente em frascos
apropriados. Alguns microlitros de amostra eram aplicados sobre a placa, na forma de bandas
muito finas e pr-determinadas.
Vale ressaltar que os reveladores empregados corriqueiramente no estavam sendo
efetivos para as amostras analisadas. Foi realizada ento uma pesquisa sobre reveladores
especficos para LST, conforme a tabela D2. Observa-se na CCDC (Fig. D3) que a amostra
(frao 130.6, ver item D2.2.3) possui basicamente duas substncias predominantes, sendo
uma delas a enidrina (1), a de rf maior (0,70). O revelador base de vanilina sulfrica, mais
concentrada do que a normalmente utilizada (Tab. D2), foi escolhido para utilizao posterior,
em funo da facilidade de obteno da vanilina em relao ao p-dimetilaminobenzaldedo. O
revelador com sulfato crico amoniacal no revelou as LSTs.

D. Fitoqumica

33

Enidrina (rf = 0,70)

Figura D3. Amostra (10 g da frao 130.6) com enidrina em CCDCs eludas em CHCl3/acetona 6:1.
A: revelado com p-dimetilaminobenzaldedo; B: revelado com vanilina sulfrica.

Revelador
Quantidade
Preparo
Fase mvel
Cor da mancha
(10 g amostra)

Tabela D2. Reveladores para LSTs.

p-dimetilaminobenzaldedo sulfato crico amoniacal
vanilina sulfrica
(Picman et al., 1980)
(Picman et al., 1980)
(Zamyatina e Shvets, 1995)
0,5 g
0,5 g
0,5 g
9 mL EtOH (95 %)
9 mL EtOH (95 %)
45 mL H2O
0,5 mL H2SO4
0,5 mL H2SO4
5 mL H2SO4
3 gotas HAc
3 gotas HAc
CHCl3/acetona 6:1
CHCl3/acetona 6:1
hexano/AcOEt/ CHCl3 3:4:3 com 2 % HAc
Azul forte, fundo amarelo marrom
no revelou

2.1.2. Cromatografia em coluna

Foram empregados os seguintes materiais e fases mveis:
a) cromatografia lquida a vcuo (CLV)
A tcnica apropriada para extratos brutos com massa menor que 1 g (Coll e Bowden,
1986), possibilitando anlises em tempo reduzido, de minutos at poucas horas. O
equipamento consiste de um funil de vidro com placa sinterizada e um balo coletor.
A fase estacionria, slica gel 60 H, Merck (0,040-0,063 mm), empacotada no funil
e, para forar a passagem do eluente, utiliza-se presso reduzida, gerada por uma
bomba de vcuo acoplada abaixo da coluna (Pelletier et al., 1986). A amostra
solubilizada em pequeno volume de solvente apropriado, adicionada de slica gel 60 e
misturada at total adsoro da amostra na slica, que ento depositada no topo da
coluna seca. A fase mvel utilizada foi em esquema de gradiente crescente de
polaridade, iniciando-se com 100 % de hexano at 100 % de AcOEt, e finalmente com
100 % de MeOH para a limpeza da coluna.

34

D. Fitoqumica

b) cromatografia flash
A tcnica constitui-se basicamente de cromatografia de adsoro em coluna, sendo que
a aparelhagem necessria consiste de uma coluna de vidro e uma vlvula controladora
de fluxo, onde a presso geralmente produzida com gs nitrognio, o qual
introduzido acima da coluna. A coluna possui aproximadamente 46 cm de altura, de
base achatada, com torneira de teflon e junta de vidro esmerilhado 24/40 na parte
superior. A seleo da fase mvel feita por meio de CCDC, sendo escolhida a fase
mvel que move o componente desejvel para um rf = 0,35, e a eluio sempre
isocrtica. Ao contrrio da CLV, nesta tcnica deve-se ter o cuidado de sempre manter
a fase estacionria coberta com solvente, pois a ausncia do mesmo no interior da
coluna danifica o empacotamento e, por conseguinte, a separao. A fase estacionria
geralmente utilizada a slica gel 60, Merck (0,040 0,063 mm). A maior vantagem
da cromatografia flash, alm de promover uma melhor eficincia na separao, quando
comparada com a cromatografia clssica em coluna de vidro, o tempo reduzido de
anlise, por vezes de apenas 15 minutos (Still et al., 1978). A fase mvel empregada
era composta de hexano, AcOEt, CHCl3 com HAc e fluxo de aproximadamente 5
cm/min. A amostra foi solubilizada em pequeno volume de fase mvel e
cuidadosamente depositada no topo da coluna.
c) cromatografia lquida a mdia presso (CLMP)
O sistema consiste em coluna de vidro de 550 mm de altura e 10 mm de dimetro,
empacotada com fase estacionria LiChroprep RP8 Merck (fase reversa, 25-40 m),
uma bomba Latek (modelo S 1990), cnulas de silicone, fases mveis pr-misturadas
em sistema gradiente, detetor Labomatic de UV regulvel, registrador Goerz
Metrawatt (modelo SE 120) com papel milimetrado a 12 cm/h e coletor automtico. A
amostra solubilizada em pequeno volume da fase mvel e aplicada no injetor. A
anlise pode durar de minutos at horas e estas dimenses de coluna so prprias para
amostras de at 200 mg. O fluxo regulvel, por exemplo, 1,6 mL/min ocasionam
presso de 0,07 MPa.
d) cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)
As anlises em CLAE foram realizadas em cromatgrafo Shimadzu, modelo SCL 10
AVP, equipado com trs bombas Shimadzu, modelo LC-10AD, detetor de arranjo de
diodos UV-Vis-DAD Shimadzu, modelo SPD-M10A, injetores manual e automtico e

35

D. Fitoqumica

sistema de integrao computadorizado com software CLASS-VP verso 5.02. Foi

utilizada coluna analtica C18 (4,6 x 250 mm; 5 m, 100 ) e coluna semipreparativa
C18 (20 x 250 mm; 15m, 100 ), Shimadzu. O padro externo para as anlises
cromatogrficas em CLAE foi o 2,5-dimetilfenol (DMP), Aldrich, injetado sempre
imediatamente antes da injeo da amostra.

2.2. Estudo das folhas de Smallanthus sonchifolius

2.2.1. Origem do material vegetal
Folhas de S. sonchifolius foram coletadas por K. Schorr. A estabilizao e secagem
foram realizadas em estufa de ar circulante a 50 C por 10 dias. Suas exsicatas foram
depositadas no herbrio da Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Ribeiro Preto da
Universidade de So Paulo sob cdigos SPFR conforme segue:
-

cdigo de coleta #101 (SPFR 07646): 12/1999 Departamento de Horticultura do Centro de

Razes Tropicais (CERAT) da Universidade Estadual Paulista (UNESP), campus Lajeado,
em Botucatu, SP;

cdigo de coleta #130 (SPFR 07645): 01/2002 Departamento de Horticultura do CERAT

da UNESP, campus Lajeado em Botucatu, SP.

2.2.2. Extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130

Em cuba metlica contendo CH2Cl2 foram lavadas individualmente, durante 20
segundos, 248 g ou 146 folhas (mdia de 1,76 g/folha) secas e inteiras de S. sonchifolius
#130. Optou-se por lavagem individual em funo do tamanho de cada folha, com mais de 20
cm de comprimento, visto que se as mesmas fossem despedaadas, causaria extravasamento
de metablitos presentes em outras organelas, ocasionando a extrao de substncias de pouco
interesse para este estudo. Esta lavagem foi efetuada com auxlio de pina e com a face
inferior das folhas voltada para baixo, uma vez que os tricomas glandulares localizam-se
justamente nesta face. O extrato obtido foi filtrado em papel de filtro e evaporado, resultando
em 2,6 g de extrato diclorometnico seco (1,05 % de peso seco da droga). O extrato seco foi
solubilizado em MeOH e o material graxo foi precipitado com um tero do volume de gua,
resultando em 2,2 g de fase hidrometanlica seca (0,89 % de peso seco da droga). Os extratos
foram submetidos espectroscopia na regio do IV.

D. Fitoqumica

36

2.2.3. Isolamento de LSTs do extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius

#130
Por meio de CLV foram obtidas dez fraes da fase hidrometanlica do extrato de
lavagem foliar de S. sonchifolius #130. A CLV foi feita com 110 g de slica gel 60 H em
coluna de 4,5 cm de dimetro e 10 cm de altura. A eluio foi feita em esquema de gradiente
crescente de polaridade de hexano a AcOEt e a coluna foi limpa com MeOH (Tab. D3). Todas
as amostras foram submetidas anlise espectroscpica na regio do IV. Por meio de CCDC
(hexano/AcOEt/CHCl3 3:4:3 com 2 % HAc) e de CLAE (MeOH/H2O, 55:45, 1 mL/min, C18) as fraes foram selecionadas para obteno dos espectros de RMN ou para um novo
fracionamento.
Tabela D3. CLV da fase hidrometanlica do extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130.
Solvente
Proporo Volume
Frao
Massa
(mL)
(mg)
hexano
250
130.1
9
hexano/AcOEt
80:20
250
130.2
6
hexano /AcOEt
70:30
250
130.3
62
hexano /AcOEt
65:35
250
130.4
148
hexano /AcOEt
30:20
250
130.5
321
hexano /AcOEt
55:45
250
130.6
942
hexano /AcOEt
50:50
500
130.7
594
hexano /AcOEt
30:70
250
130.8
167
AcOEt
500
130.9
263
MeOH
500
130.10
323

Conforme dados do espectro de RMN

H, a frao 130.2 compreende um

diterpenide, porm em funo do alto grau de impurezas presentes no foi possvel

identific-lo. J a frao 130.3 consiste na LST sonchifolina (3).
A frao 130.4 foi submetida a novo fracionamento em escala preparativa em CLAE
com MeOH/H2O 55:45, 9,5 mL/min em coluna semipreparativa C18, resultando em sete
subfraes, sendo seis LSTs puras (Tab. D4).
Tabela D4. Subfraes de 130.4 (CLAE escala semipreparativa em MeOH/H2O).
Subfrao Massa (mg)
LST
130.4.1
4,0
2
130.4.2
3,0
4
130.4.3
2,5
130.4.4
2,5
5
130.4.5
4,0
6
130.4.6
2,5
7
130.4.7
3,0
8

A frao 130.5 corresponde LST uvedalina (2).

37

D. Fitoqumica

A frao 130.6 foi selecionada para refracionamento por meio de cromatografia flash
com 30 cm de altura de slica gel 60 para flash seca em coluna de 4 cm de dimetro. A eluio
foi realizada com fase mvel hexano/AcOEt/CHCl3 5:2:3 com 2 % HAc e a coluna foi limpa
com acetona e MeOH. Foram obtidas 40 subfraes e avaliadas por meio de CCDC com fase
mvel hexano/AcOEt/CHCl3 3:4:3 com 2 % HAc, sendo reunidas em oito subfraes, de
130.6.1 a 130.6.8, sendo a subfrao 130.6.4 (200 mg) correspondente enidrina (1).
A frao 130.7 trata-se tambm da LST enidrina (1).
A frao 130.8 foi refracionada por meio de diferenas de solubilidade. A amostra
seca foi adicionada de AcOEt, solubilizando-se apenas uma poro da mesma. A parte
insolvel em AcOEt (subfrao 130.8.1, 36 mg) foi refracionada por meio de CLMP. A parte
solvel (subfrao 130.8.2, 130 mg) corresponde LST 9.
A subfrao 130.8.1 foi purificada por meio de CLMP com coluna de vidro (550 x 10
mm), fase estacionria LiChroprep RP8 Merck e as fases mveis foram inicialmente misturas
de MeOH/H2O 1:1 at MeOH apenas, com fluxo de 1,6 mL/min, durante quatro horas. Todas
as fraes (Tab. D5) foram analisadas por meio de CCDC com fase mvel
hexano/AcOEt/CHCl3 2,5:4,5:3 com 2 % de HAc. Foram isolados dois picos (10 mg) largos
parcialmente sobrepostos, porm ambos so referentes mesma substncia 10.
Tabela D5. CLMP da subfrao 130.8.1.
MeOH/H2O Subfrao LST
50:50
130.8.1.1
55:45
130.8.1.2
60:40
130.8.1.3
65:35
130.8.1.4
70:30
130.8.1.5
75:25
130.8.1.6
80:20
130.8.1.7
85:15
130.8.1.8
10
90:10
130.8.1.9
100 %
130.8.1.10

A frao 130.9 foi purificada em escala semipreparativa em CLAE com MeOH/H2O

55:45, 9,5 mL/min em coluna C18, resultando em 15 mg da LST 9.
A frao 130.10 foi tambm fracionada por meio de CLV. A CLV foi realizada com 5
cm de slica gel 60 H em coluna de 4,5 cm de dimetro e 12 cm de altura. A eluio foi feita
em esquema de gradiente crescente de polaridade de hexano a AcOEt e a coluna foi limpa
com MeOH, resultando em 15 subfraes, porm nenhum metablito secundrio foi
identificado.

D. Fitoqumica

38
A figura D4 apresenta um esquema resumido do fracionamento.
S. sonchifolius #130
fase hidrometanlica
CLV
grad. hexano - AcOEt
siligal gel 60H

130.2

130.3

mistura com diterpeno

130.4

3
130.4.2

130.4.4

130.6

flash

CLAE
C18 (20 x 250 mm)
MeOH/H2O 55:45
9,5 mL/min

(62 mg)

130.4.1

130.5

hexano/AcOEt/CHCl3
5:2:3+2 % HAc
silica gel 60

(321 mg)

130.4.5

130.4.6

130.4.7

130.6.4

(4 mg)

(3 mg)

(2,5 mg)

(4 mg)

(2,5 mg)

(3 mg)

(200 mg)

130.7

130.8

130.9

AcOEt
MeOH

(15 mg)

(594 mg)

130.8.1

130.8.2

CLMP
RP-8 (550 x 1 mm)
grad. MeOH/H2O

(130 mg)

10
(10 mg)

Figura D4. Fracionamento da fase hidrometanlica do extrato glandular de lavagem foliar de S.

sonchifolius #130.

2.2.4. Extratos de folhas com e sem tricomas glandulares de S. sonchifolius

#101
O extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #101 foi obtido como mostra o item
E2.1.2 (Schorr, 2001).
Cerca de 180 g de folhas lavadas secas (Schorr, 2001), ou seja, sem tricomas
glandulares, de S. sonchifolius #101, foram trituradas em liquidificador metlico. Cerca de
152 g do p foram colocados em Erlenmeyer de 3 L, sendo posteriormente adicionados 2 L de
gua fervente. A suspenso foi mantida por 20 min em chapa de aquecimento e sob agitao,
sendo ento colocada em uma coluna de vidro para percolao. O infuso foi escoado
inicialmente na velocidade de 84 gotas/min. Depois a velocidade caiu bem e o escoamento
total se deu aps dois dias. Obteve-se assim o extrato aquoso. O resduo de p foi ento
macerado com 2 L de EtOH por seis dias e ento escoado e evaporado em evaporador
rotativo, resultando em 6,9 g de extrato etanlico. Por meio de macerao do p residual com
2 L de CH2Cl2, seu escoamento e evaporao, obteve-se 2,2 g de extrato diclorometnico. O
resduo foi ento submetido macerao por seis dias com 1 L de hexano, escoado e
evaporado resultando em 12,4 mg de extrato hexnico. Todos os extratos foram submetidos
anlise espectroscpica na regio do IV.

39

D. Fitoqumica

A 1 g de p foram adicionados 10 mL de gua e a mistura foi fervida por 10 min,

produzindo um decoto. Um infuso foi preparado com 1 g de p, 50 mL de gua fervente e 20
min de repouso (Aybar et al., 2001).
Tambm foram preparados infuso e decoto com pedaos de folhas com tricomas
glandulares. As folhas foram controladas sob estereomicroscpio antes e aps o preparo dos
chs.

2.2.5. Coleta de tricomas glandulares de folhas

Para a coleta manual dos tricomas glandulares utilizou-se estereomicroscpio
Olympus, modelo SZ 6045-CHI. Os extratos glandulares foram preparados em tubos tipo
Eppendorf com capacidade para 1,5 mL. A centrifugao foi realizada em microcentrfuga
Sanyo, modelo Microcentaur.
Da face inferior das folhas de S. sonchifolius, com uma agulha de dissecao os tricomas
glandulares foram coletados e carregados para Eppendorf contendo 40 L de solvente para
dissoluo. Aproximadamente 60 glndulas foram sonicadas em MeOH por alguns segundos e,
aps adio de 40 L de gua, foram centrifugadas por 20 segundos em microcentrfuga. O
sobrenadante lmpido do extrato glandular foi analisado em CLAE.

2.2.6. Anlise dos extratos glandulares por meio de CLAE

As condies de trabalho incluem coluna analtica C18 fases MeOH/H2O (55:45; 1,0
mL/min) e CH3CN/H2O (35:65; 1,3 mL/min) e deteco simultnea a 225 e 265 nm
temperatura ambiente (22 a 25 C). Tais condies foram monitoradas adequadamente, o que
se reflete na estabilidade e reprodutibilidade do tempo de reteno do padro 2,5-dimetilfenol
(DMP, 20 L a 10-8M). Sendo dois sistemas de fase mvel, cada amostra corresponde ao
contedo glandular de aproximadamente 30 tricomas provenientes de um mesmo extrato, o
que proporcionou maior uniformidade dos resultados. As anlises dos extratos glandulares
ocorreram em seqncia para cada sistema de fase mvel, evitando assim eventuais alteraes
a que o sistema pudesse estar sujeito.
Uma vez obtidos os cromatogramas dos extratos glandulares a 225 e 265 nm, em 60
min de eluio, foram calculados, para cada pico, os seguintes dados:
-

tempo de reteno relativo ao padro interno no sistema 1 (MeOH/H2O) - trr1;

tempo de reteno relativo ao padro interno sistema 2 (CH3CN/H2O 3:7) - trr2;

40
-

D. Fitoqumica

comprimento de onda mximo no UV - mx (obtidos atravs do detetor de arranjo

de diodos).

Inicialmente expandiu-se a escala do eixo das ordenadas (mAU) do cromatograma

para visualizar a presena de picos com baixa intensidade de absoro. O tempo de reteno
obtido de cada pico foi dividido pelo tempo de reteno do padro DMP, injetado
imediatamente antes. A relao entre os dois tempos de reteno sempre constante para uma
mesma substncia (trr). O espectro na regio do UV de cada pico tambm pode ser
confrontado com os espectros das substncias presentes no banco de dados sobre LSTs
conhecidas e a porcentagem de similaridade pode ser considerada. O comprimento de onda de
absoro mxima na regio do UV, mx, pode ser utilizado como um dos critrios para
caracterizao de uma substncia.

2.3. Identificao e elucidao estrutural

2.3.1. Mtodos espectroscpicos e espectromtricos
2.3.1.1. Espectrometria de massas
Os espectros de massas foram obtidos por meio dos mtodos EI, CI, APCI e ESI.
-

Electron impact (EI) - substncias 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10:

Aparelho: Finnigan MAT 8200
Energia de ionizao: 70 eV
Fonte de ons: 230 C, 1 mA, 3kV

Chemical ionization (CI) - substncias 2, 4, 5, 6, 7, 8 e 9:

Aparelho: Finnigan TSQ 7000
Energia de ionizao: 250 eV
Fonte de ons: 200 C, 500 A
Gs reagente: isobutano (1205 mT)

Atmosphere pressure chemical ionization (APCI) - substncia 10:

Aparelho: Finnigan TSQ 7000

Electrospray ionization (ESI) - substncias 9 e 10:

Aparelho: Finnigan TSQ 7000
Energia de ionizao: 70 eV

41
-

D. Fitoqumica

Electrospray ionization (ESI)- substncia 10:

Aparelho: Finnigan LTQ-FT
Energia de ionizao: 250 eV
Fonte de ons: 250 C, 4-4,5 kV

2.3.1.2. Espectroscopia na regio do IV

Os espectros na regio do IV foram obtidos em espectrmetro Perkin-Elmer 1600.
Nesse espectrmetro utilizam-se pastilhas de KBr em micropastilhador para substncias
slidas e cela de NaCl onde se depositam as amostras (geralmente goma) solveis em CHCl3
ou EtOH, em forma de filme.
2.3.1.3. Espectroscopia de RMN
Os espectros de RMN foram registrados nos seguintes aparelhos:
-

Bruker DPX 300, operando em 300 MHz para 1H e em 75 MHz para 13C

Bruker DRX 400, operando em 400 MHz para 1H e em 100 MHz para 13C

Variant Unity 300, operando em 300 MHz para 1H e em 75 MHz para 13C
As amostras foram solubilizadas em solvente deuterado Aldrich, sendo que o sinal de

CDCl3 e de TMS serviram como referncia interna. As constantes de acoplamento (J) so

fornecidas em Hz e o deslocamento qumico () em ppm.

2.3.2. Elucidao estrutural automatizada via SISTEMAT

Os dados de RMN

13

C propostos foram analisados por meio do sistema especialista

SISTEMAT (Emerenciano et al., 1994). Este um sistema especialista que foi desenvolvido
para estudos das reas de quimiotaxonomia e elucidao estrutural automatizada de produtos
naturais. As estruturas propostas foram analisadas por meio dos programas SISCONST e
C13MATCH, sendo cada subestrutura analisada individualmente. No caso das LSTs, so
considerados subestruturas os steres, o anel lactnico, anis restantes e outras cadeias
laterais. Esta abordagem permite ao SISTEMAT propor substncias desconhecidas ao
sistema.
Os dados de RMN

13

C de cada LST foram fornecidos ao programa que procurou

estruturas com os deslocamentos qumicos fornecidos, com uma faixa tolervel de erro em
gradiente de 0,1 a 1,5 ppm.

42

D. Fitoqumica

2.3.3. Confrmeros de baixa energia

As frmulas estruturais foram desenhadas com o programa ChemDraw Ultra,
Chemical Structure Drawing Standard (CambridgeSoft Corporation).
Para todas as estruturas foi realizado um estudo para determinar seus confrmeros de
menor energia. Todas as minimizaes de energia foram realizadas com o programa
Molecular Modelling-System HyperChemTM Version 7.0 Professional (Hypercube, Inc.) em
um computador com sistema operacional Microsoft Windows XP, Home Edition, Version
2002, processador Intel Pentium, 1500 MHz.
A minimizao de energia foi efetuada com o HyperChemTM implementado com
campo de fora MM+ e com a utilizao do alogartmo Polak-Ribire. MM+ uma
modificao do campo de fora MM2 de N. L. Allinger (Allinger, 1977). A minimizao de
energia foi realizada por meio do mtodo semi-emprico AM1, Austin Model 1 (Dewar et al.,
1985; Dewar e Dieter, 1986).
Os clculos foram efetuados por meio da opo conformational search do
HyperChemTM. As geometrias iniciais foram fornecidas pelo HyperChemTM em campo de
fora MM+ sob um gradiente RMS < 0,01 kcal mol-1 -1. O prximo passo foi realizado com
a utilizao da opo usage directed search method, o que significa que cada confrmero de
baixa energia encontrado passou a ser utilizado como ponto de partida para a prxima
minimizao. Todas as ligaes passveis de rotao nos anis foram consideradas variveis.
Os testes de duplicata foram efetuados a partir das geometrias iniciais. Os steres no foram
inicialmente considerados na busca pelos confrmeros de menor energia porque o tempo de
clculo e o nmero de confrmeros aumentariam drasticamente. A minimizao de energia foi
calculada para 2500 geometrias para cada estrutura e 20 confrmeros foram selecionados. Os
steres foram adicionados aos confrmeros selecionados e a sua energia foi novamente
minimizada sob o campo de fora MM+ e pelo mtodo semi-emprico AM1.

D. Fitoqumica

43

3. RESULTADOS E DISCUSSES
3.1. Extrato de lavagem foliar de S. sonchifolius #130
O extrato diclorometnico de lavagem foliar da populao #130 foi avaliado quanto
absoro na regio do IV (Fig. D5). O espectro apresenta como principal caracterstica bandas
de absoro de estiramento de grupamento carbonila de -lactonas em torno de 1760 cm-1.
Esta caracterstica sugere a presena de LSTs. J no espectro da fase hidrometanlica, estas

120

100

100

80

80

40

40

20

20

60

1760

60

% transmitncia

120

1760

% transmitncia

bandas so mais intensas, sugerindo uma maior concentrao de LSTs.

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

-1

comprimento de onda (cm )

500

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

Figura D5. Espectros na regio do IV (filme em CHCl3) dos extratos de lavagem foliar de S. sonchifolius
#130; A: extrato diclorometnico; B: fase hidrometanlica.

3.1.1. Isolamento de terpenides da fase hidrometanlica de S. sonchifolius

#130
A fase hidrometanlica foi fracionada por meio de CLV. Posteriormente, as fraes
130.4, 130.6 e 130.8 foram refracionadas, levando ao isolamento de dez LSTs. Destas oito j
haviam sido isoladas anteriormente, sendo seis (1-4, 7-8, item D3.1.2.11 e Fig. D68) de S.
sonchifolius, tribo Heliantheae, (Inoue et al., 1995; Lin et al., 2003), uma (5) de Enydra
anagallis, tribo Heliantheae, (Bardn et al., 2001) e uma (6) de Grazielia intermedia, tribo
Eupatorieae, (Bohlmann et al., 1981b).
O primeiro grupo de fraes (130.1 a 130.10) foi submetido anlise por meio de
espectroscopia na regio do IV e os espectros so apresentados a seguir:

D. Fitoqumica

44

100

80

% transmitncia

% transmitncia

80

60

40

20

60

40

20

130.1

4000

3500

0
3000

2500

2000

1720

1720

100

1500

1000

500

130.2

4000

-1

3500

3000

comprimento de onda (cm )

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

100

100
80

40

20

3500

40

20

130.3

4000

60

3000

2500

2000

1500

1000

500

1770
1720

% transmitncia

1770

60

1720

% transmitncia

80

130.4

4000

3500

-1

comprimento de onda (cm )

3000

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

120
100

100

40

20

60

40

1770
1740

% transmitncia

80
60

1770
1740

% transmitncia

80

20
0

130.5

4000

3500

0
3000

2500

2000

1500
-1

comprimento de onda (cm )

1000

500

130.6

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

Figura D6. Espectros na regio do IV (filme em CHCl3) das fraes 130.1 a 130.6 provenientes da CLV com a fase
hidrometanlica do extrato glandular de lavagem foliar de S. sonchifolius #130.

D. Fitoqumica

120

100

100

80

80

60

40

20

3500

40

20

130.7

4000

60

0
3000

2500

2000

1760
1710

% transmitncia

120

1760

% transmitncia

45

1500

1000

500

130.8

4000

3500

-1

comprimento de onda (cm )

3000

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

120
100

100

% transmitncia

40

20

60

40

20

1760
1720

% transmitncia

60

130.9

4000

3500

3000

2500

2000

1760
1720

80

80

1500
-1

comprimento de onda (cm )

1000

500

130.10

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

500

-1

comprimento de onda (cm )

Figura D7. Espectros na regio do IV (filme em CHCl3) das fraes 130.7 a 130.10 provenientes da CLV
com a fase hidrometanlica do extrato glandular de lavagem foliar de S. sonchifolius #130.

Os espectros das fraes 130.1 e 130.2 apresentam basicamente bandas de absoro de

estiramento C-H entre 2.850 e 2.960 cm-1 e bandas de estiramento de carbonila em torno de
1.720 cm-1 (baixa intensidade). Este fato justifica o no isolamento de LSTs destas fraes,
uma vez que no foram observadas as j mencionadas bandas de estiramento de carbonila de
-lactonas.
Nos espectros das fraes 130.3 a 130.10 aparecem bandas de absoro de estiramento
de C-H entre 2.850 e 2.960 cm-1, de estiramento de carbonila de steres entre 1.720 e 1.740
cm-1, de grupos -OH de lcoois e fenis entre 3.600 e 3.200 cm-1 e bandas de absoro
caractersticas de estiramento de carbonila de -lactonas em 1.760 e 1.770 cm-1. Na frao
130.10, a banda de carbonila de lactonas de intensidade relativamente menor do que nos
espectros das outras fraes que a contm. Sendo assim, LSTs foram isoladas apenas destas
sete fraes.
A frao 130.1, as subfraes de 130.10 e de 130.6 (com exceo da 130.6.4) foram
submetidas anlise por meio de RMN, mas no foram detectadas substncias de interesse
para este estudo.

D. Fitoqumica

46

3.1.2. Identificao e elucidao estrutural

Os confrmeros de baixa energia calculados pelo HyperChemTM so apresentados no
incio da discusso sobre a identificao ou elucidao estrutural de cada susbtncia. Os
tomos de hidrognio no so mostrados. A cor cinza representa tomos de carbono e a cor
branca representa tomos de oxignio. A apresentao das molculas tridimensionais teve
como intuito fornecer mais uma possibilidade de se avaliar a estereoqumica, conformao ou
at algumas interaes atmicas, podendo desta forma facilitar a interpretao de alguns
dados dos espectros de RMN.
3.1.2.1. LST 1 (Enidrina)

1'''
2''
O

O
14

1''

5'

O
O

10

O
1'

2'
3'

8
5

3
4

4'

11

12

15

O
13

4,5-epxi-8-(2S,3S-epxi-angeloilxi)-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien6,12-olido-14-oato de metila
A substncia foi submetida a anlises atravs dos seguintes mtodos espectroscpicos:
UV, RMN 1H,

13

C e 1H1H COSY 45. A figura D8 apresenta o espectro na regio do UV,

onde o mximo de absoro ocorre em 212 nm. Vale ressaltar que para todas as outras LSTs
isoladas, os espectros na regio do UV so muito semelhantes a este.
300

10.09 min

200

mA
U

100

200

220

240

260

280

300

320

340

360

380

nm

Figura D8. Espectro na regio do UV para LST 1.

400

420

47

D. Fitoqumica

O espectro de RMN 1H apresenta em 6,33 e 5,84 sinais caractersticos de

hidrognios de dupla exocclica de anel -lactnico ,-insaturado. Esses sinais so dubletos
referentes aos H13a/b que acoplam com o sinal em 3,01, referente ao H7, com constantes de
acoplamento iguais ou maiores do que 3,0 Hz. A magnitude deste acoplamento indica que o
anel lactnico transide, uma vez que em cis-lactonas esta magnitude menor do que 3,0
Hz. No espectro de 1H1H COSY possvel observar que o sinal de H7 ainda acopla
fracamente com um sinal em 6,71, um duplo dubleto caracterstico para H8 ligado a um
carbono substitudo por um tomo de oxignio. Em funo da pequena magnitude da
constante de acoplamento entre H7 e H8, conclui-se que os mesmos formam um ngulo
diedro pouco menor que 90, o que indica que os mesmos esto em relao ciside. Assim, se
H7 est orientado em , caracterstico de trans-lactonas, ento H8 tambm deve possuir a
mesma orientao em . Observa-se a sobreposio de outros dois sinais sobre o de H7.
Portanto, a orientao do ster epxi-angelato deve ser , de acordo com o esperado para a
tribo Heliantheae (Bohlmann, 1990). A presena deste ster foi confirmada devido
observao de um multipleto para H3 em 3,01, um dubleto para H4 em 1,17 e um
singleto para H5 em 1,45.
Um dubleto em 5,87 que acopla com o sinal de H8, o duplo dubleto em 6,71, foi
atribudo ao H9. Com base no valor deste deslocamento, conclui-se que C9 est tambm
substitudo por alguma funo oxigenada, alm de ser allico. A magnitude deste acoplamento
(8,5 Hz), observado tambm no espectro de 1H1H COSY, indica que H8/H9 devem estar em
relao transide. Logo, se o H8 est orientado em , o H9 deve estar em .
O deslocamento paramagntico de H8 ( 6,71) causado pela orientao de um grupo
carbonlico do substituinte que o deixa no mesmo plano da ligao, causando sua
desblindagem, o que comum em outros melampolidos que possuem o mesmo padro de
substituio. Assim, entende-se que o substituinte no C9 tambm um ster, o qual est
orientado em , fato confirmado pela presena do sinal caracterstico dos hidrognios da
metila de um acetato em 2,05.
Um sinal de uma metoxila em 3,83, a ausncia de sinais que indicam a presena de
uma metila em C14 e a presena de um sinal para um carbono carbonlico no espectro RMN
13

C em 165,5, indica a presena de um ster metlico (COOCH3) no C10. Os outros trs

sinais de carbonos carbonlicos observados no espectro fazem parte do ster epxi-angelato

no C8 ( 170,3), do grupo acetato no C9 ( 168,0) e do C12 ( 168,3) no anel lactnico.

D. Fitoqumica

48

A ausncia de sinal para o H10, o deslocamento paramagntico de H1 ( 7,15, dd) e a

presena de quatro sinais para carbonos sp2, sendo dois deles correspondentes ao C11 e C13,
indicam que h uma insaturao na ligao C1(10). Os deslocamentos qumicos dos carbonos
1 e 10 so, respectivamente, 149,5 e 130,0.
Um singleto largo integrado para 3H em 1,71 caracterstico de hidrognios de
grupo metila sobre carbono substitudo por alguma funo oxigenada ou insaturado. Em
funo do valor do deslocamento qumico do sinal de H5 ( 2,68, d), que est acoplado
apenas com H6 (9,6 Hz), entende-se que o mesmo no olefnico. Sinais para quatro
carbonos oxigenados aparecem entre 59 e 63 no espectro de RMN

13

C. Como dois destes

carbonos so conhecidos por fazerem parte do grupamento epxido do ster epxi-angelato,

os outros dois sinais correspondem a um outro grupamento epxido entre C4 e C5. A
magnitude da constante de acoplamento entre H5 e H6 (9,6 Hz) indica que estes esto em
relao transide, portanto H5 est em posio axial, uma vez que se trata de trans-lactona,
estando H6 em posio axial. Este fato leva concluir que a ligao entre o tomo de
oxignio do epxido e C5 est em equatorial. Ento a orientao mais esperada para a
ligao do oxignio com o C4 tambm equatorial, portanto . A estereoqumica do
grupamento epxido entre C4 e C5 foi comprovada por cristalografia (Tak et al., 1994).
Os multipletos em 2,47 e 2,39 so atribudos a H2a e H2b. J os sinais de H3a e H3b
apresentam-se em 3,00 e 1,20, em funo do primeiro estar dentro do cone de desblindagem
da ligao C4O.
Os dados dos espectros de RMN 1H e RMN

13

C foram comparados com aqueles da

literatura (Inoue et al., 1995), comprovando tratar-se da enidrina, uma LST do tipo
melampolido anteriormente isolada de S. sonchifolius. Os seus dados de RMN esto na tabela
D6 e os espectros nas figuras D10-12.

D. Fitoqumica

49

O confrmero de menor energia (Fig. D9) encontrado por meio do HyperChemTM para
a enidrina (1) condiz com a estrutura molecular determinada via cristalografia (Tak et al.,
1994).

Figura D9. A: Confrmero de menor energia e B: estrutura molecular determinada por

cristalografia (Tak et al., 1994) para LST 1 (Enidrina).

D. Fitoqumica

50

Tabela D6. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 1, (ppm), J (Hz).
Enidrina
1'''
2''
O

O
14

1''

5'

O
O

10

5
4

15

H (* 400 MHz)
7,15 dd (10,6; 7,6)
2,47 m (13,8)
2,39 m (13,8)
3,00 m (11,8)
1,20 m (11,8)

1
2a
2b
3
3
4
5
2,68 d (9,6)
6
4,28 t (9,6)
7
3,01 m
8
6,71 dd (8,5; 1,2)
9
5,87 d (8,5)
10
11
12
13a
5,84 d (3,2)
13b
6,33 d (3,5)
14
15
1,71 sl
1
2
3
3,01 m (5,4)
4
1,17 d (5,4)
5
1,45 s
1
2
2,05 s
1
3,83 s
*: observado

1'

2'
3'

O
13

4'

11

Posio

12

H (Inoue et al., 1995) 13C (* 100MHz)

7,15 dd (10,8; 7,5)
149,5
2,46 m
24,7
2,35 m

2,67 d (10)
4,28 dd (10)
3,00 m
6,71 dd (9,1; 1,3)
5,87 d (9,1)

5,81 d (3,3)
6,34 d (3,0)
1,71 s
3,00 m
1,17 d (5,0)
1,45 s
2,05 s
3,83 s

13

C (Inoue et al., 1995)

147,4
24,7

35,3

39,4

59,3
62,7
75,9
45,4
71,1
70,4
130,0
133,2
168,3

58,9
62,7
75,8
45,5
71,3
70,7
130,3
134,4
168,5

122,9

121,7

165,5
52,5
168,0
59,4
59,8
13,5
19,0
170,3
20,8
17,45

165,5
51,8
167,9
59,1
59,5
13,6
19,1
170,2
20,2
17,4

51

10

D. Fitoqumica

52
11

D. Fitoqumica

53

12

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

54
3.1.2.2. LST 2 (Uvedalina)
1'''
2''

O
14

10

5'

O
1'

8
5

1''

2'
3'

4'

13
11

15

12

8-(2S,3S-epxi-angeloilxi)-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido14-oato de metila
A LST 2 foi analisada atravs de espectroscopia de RMN 1H, de

13

C e de

espectrometria de massas. O espectro de massas EI (Fig. D14) apresenta o fragmento do on

molecular m/z 448 [M]+, alm de um fragmento m/z 43 caracterstico para o grupo acetato
[C2H3O]+. J o espectro de massas CI (Fig. D15) apresenta um fragmento m/z 449
representando o on quasimolecular [M + H]+. Alm deste, h ainda um outro fragmento m/z
405 que indica o on molecular sem o grupo acetato [M - C2H3O]+, alm de um outro m/z 389
[M - C2H3O2]+. Esses dados (Fig. D13) mostram que a LST 2 tem a frmula molecular de
C23H28O9 e massa molecular de 448, portanto com apenas um tomo de oxignio a menos do
que a LST 1.
[C21H25O8]
m/z 405
O

O
O
O
O

[C2H3O]
m/z 43
O

O
O

Figura D13. Fragmentaes da LST 2 (Uvedalina).

D. Fitoqumica

55
100

Base M/z=43. 100%

43
90
80

Intensity (%age)

70
272

60
50
213
40
30
83

20

71

240
105 115 128 154 175 185

[M]+

259

229

291
348

10

448

356

0
100

50

150

200

250
300
Low Resolution M/z

350

400

450

500

Figura D14. Espectro de massas EI da LST 2 (Uvedalina).

100

[M+H]+

Base M/z=449. 100%

449
90
80

Intensity (%age)

70
60
273

40
30

79
85

349 361

291

405

465

289

20
10

389

333

50

117
105

241
145

185

213 229

257

491

371

313

0
100

150

200

250

300
Low Resolution M/z

350

400

450

500

Figura D15. Espectro de massas CI da LST 2 (Uvedalina).

Os espectros de RMN da LST 2 so muito semelhantes aos da LST 1. Porm, alguns

sinais tiveram um deslocamento paramagntico considervel, como ocorreu com os sinais de
H5, H6 e dos hidrognios da metila ligada ao C4. Um singleto largo integrado para 6H em
1,94 caracterstico de hidrognios de grupo metila sobre carbono quaternrio substitudo por
funo oxigenada ou insaturado. Entretanto, neste caso 3H so referentes metila do grupo
acetato, C2. Em funo do deslocamento qumico de um nico sinal para H5 ( 4,89, d) que
est acoplado apenas com H6 ( 5,04, dd), conclui-se que os outros 3H do sinal em 1,94 so
relativos uma metila ligada a um carbono insaturado, o C4.

D. Fitoqumica

56

Dois multipletos em 2,60 e 2,34 devem-se presena de H2 e H2,

respectivamente. H3/ aparecem em 2,40 e 1,98, uma vez que, nesta molcula, eles no
sofrem o efeito do cone de desblindagem do oxignio do epxido, como na LST 1.
Os demais sinais apresentam deslocamentos qumicos semelhantes queles da LST 1.
Os dados de RMN desta LST so apresentados na tabela D7 e os espectros nas figuras D16 e
D17.
Tabela D7. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 2, (ppm), J (Hz).
Uvedalina
1'''
2''

O
14

10

O
1'

8
5

5'

1''

2'
3'

13

4'

11
15

1
H (* 400 MHz)
Posio
1
6,94 dd (10,3; 7,8)
2
2,60 m (12,6; 10,3; 2,2)
2
2,34 m (12,6; 2,0)
3
2,40 m (10,0 2,0)
3
1,98 m (10,0)
4
5
4,89 d (10,3)
6
5,04 dd (10,3; 9,8)
7
2,72 m (9,8; 1,5)
8
6,59 dd (8,3; 1,5)
9
5,34 d (8,3)
10
11
12
13a
5,66 d (3,0)
13b
6,19 d (3,5)
14
15
1,94 s
1
2
3
2,96 q (5,3)
4
1,12 d (5,3)
5
1,40 s
1
2
1,94 s
1
3,73 s
*: observado

12

H (Inoue et al., 1995) 13C (* 100MHz)

7,05 dd (10,3; 7,5)
148,8
2,43
26,5

4,95 d (10,8)
5,11 t (10)
2,79 m
6,66 dd (8,5; 1,3)
5,41 d (8,5)

5,73 d (3,3)
6,26 d (3,3)
2,01 s
3,02 ddd (5,3)
1,19 d (5,3)
1,47 s
2,01 s
3,81 s

13

C (Inoue et al., 1995)

148,1
26,1

37,3

36,8

131,0
126,5
75,6
51,3
71,4
71,5
134,8
139,1
169,5

131,1
126,9
74,9
51,1
71,3
71,1
135,5
137,9
168,6

122,0

120,6

166,3
17,4
168,9
59,8
60,3
14,0
19,6
170,7
21,4
52,8

165,7
17,0
168,7
59,2
59,6
13,7
19,3
170,0
20,3
51,8

57
16

D. Fitoqumica

58
17

D. Fitoqumica

59

D. Fitoqumica

3.1.2.3. LST 3 (Sonchifolina)

1''

O
5'

14

10

1'

8
5

2'
3'

13

4'

11
15

12

8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
A LST 3 foi submetida espectroscopia de RMN 1H. O espectro de RMN 1H
apresenta em 6,16 e 5,50 sinais caractersticos de hidrognios de dupla exocclica de anel
lactnico ,-insaturado. Esses sinais so dubletos referentes aos H13a/b (3,0 e 3,5 Hz) que
acoplam com o sinal em 2,54, referente ao H7. Este, por sua vez, acopla fracamente com um
sinal em 6,22, um duplo dubleto caracterstico para H8 ligado a um carbono substitudo. Em
funo da pequena magnitude de acoplamento entre H7 e H8, conclui-se que os mesmos esto
em relao ciside. Um ster do tipo angelato, com sinais caractersticos de um qudruplo
quadrupleto em 6,03 (1,5 e 7,3 Hz) para H3, duplo quadrupleto para H4 em 1,90 (1,5 e
7,3 Hz) e quintupleto para H5 em 1,78 (1,5 Hz), est ligado ao carbono 8 em posio .
Dois sinais de multipleto em 1,97 e 2,78, que acoplam entre si como hidrognios
geminais, caracterizam-se como H9/. O sinal em 1,97 acopla com o sinal de H8 em 6,22
com constante de acoplamento de 10,6 Hz. J com o sinal em 2,78 o acoplamento menor
(7,8 Hz), indicando que o H8 e o sinal em 1,97 esto em relao transide, ou seja, o sinal
em 1,97 est em e o sinal em 2,78 em .
Um singleto largo integrado para 3H em 1,83 caracterstico de hidrognios de
grupo metila sobre carbono substitudo por funo oxigenada ou insaturado. Em funo do
deslocamento qumico de um nico sinal integrado para 2H em 5,03, que representam H5 e
H6, entende-se que H5 est ligado a carbono sp2. A ausncia de sinal para o H10 e o
deslocamento paramagntico de H1 ( 6,76 dd) indicam que h uma insaturao na ligao
C1(10), como na maioria dos melampolidos isolados da subtribo Melampodiinae.

D. Fitoqumica

60

Dois multipletos em 2,26 e 2,07 devem-se presena de H2a/b. J os sinais de H3a/

apresentam-se em 2,27 e 2,07.
Os dados dos espectros de RMN 1H foram comparados com aqueles da literatura,
comprovando sua identidade. Os dados de RMN desta LST so apresentados na tabela D8 e o
espectro na figura D18.
Tabela D8. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 3, (ppm), J (Hz) .
Sonchifolina
1''

O
5'

14

10

1'

8
5

2'
3'

4'

13
11

15

Posio

H (* 400 MHz)
6,76 dd (9,8; 7,3)
2,07 m
2,26 m
2,07 m
2,27 m

1
2a
2b
3a
3b
4
5
5,03 m
6
5,03 m
7
2,54 m
8
6,22 ddd (10,6; 7,8; 1,8)
9
2,78 m (12,6; 7,8)
9
1,97 m (10,6)
10
11
12
13a
5,50 d (3,0)
13b
6,16 d (3,5)
14
15
1,83 sl
1
2
3
6,03 qq (7,3; 1,5)
4
1,90 dq (7,3; 1,5)
5
1,78 quin (1,5)
1
3,71 s
*: observado

12

H (Inoue et al., 1995)

6,83 dddl (10,0; 7,5; 1,6)
2,12 tl (12,0)
2,36 m
2,06 tl (10,0)
2,31 m
5,09 m
5,11 m
2,61 m
6,31 dddl (9,8; 7,5; 1,0)
2,86 m
2,03 tl (10,4)

13

C (Inoue et al., 1995)

142,0
25,4
37,0
137,8
125,5
75,8
49,5
66,4
30,0
131,2
135,2
169,5

5,56 dl (3,5)
6,23 dl (3,5)
1,89 s
6,10 ql (7,5)
1,98 dl (7,5)
1,85 s
3,78 s

120,0
167,0
17,0
166,2
127,0
139,0
15,5
20,5
52,0

61

18

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

62
3.1.2.4. LST 4 (Fluctuanina)
1'''
2''

O
14

10

5'

O
1'

3'

4'

13
11

O
15

2'

8
5

1''

12

4,5-epxi-8-angeloilxi-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien-6,12-olido-14-oato
de metila
Da LST 4 foram obtidos espectros de RMN 1H, 13C, 1H-1H COSY 90-45 e espectros
de massas. O espectro de massas EI (Fig. D20) apresenta o fragmento do on molecular m/z
448 [M]+, um fragmento m/z 388 [M - C2H4O2]+ e um fragmento m/z 83 caracterstico para o
grupo angelato [C5H7O]+. J o espectro de massas CI (Fig. D21) apresenta um fragmento m/z
449, representando o on quasimolecular [M + H]+. Alm deste, h ainda um fragmento m/z
389 [M - C2H3O2]+ e um fragmento m/z 83 para o ster angelato [C5H7O]+. Esses dados (Fig.
D19) indicam que a LST 4 tem a frmula molecular de C23H28O9 e massa molecular de 448.

[C21H25O7]
m/z 389
[C5H7O]
m/z 83
O

O
O
O
O

Figura D19. Fragmentaes da LST 4 (Fluctuanina).

D. Fitoqumica

63
100

Base M/z=83. 100%

83
90
80

Intensity (%age)

70
60

55

50

348

40

388

30
20

[M]+

69
105 115

10

129 149

167 179 201 229 245 256 279 289

0
50

100

150

200

417

356
(*5)
350

250
300
Low Resolution M/z

448

400

450

500

Figura D20. Espectro de massas EI da LST 4 (Fluctuanina).

100

Base M/z=389. 100%

389
90

[M+H]+

80

449

Intensity (%age)

70
60
50
40
30

349

83

289

20

245

10

227 229

149

257

275

331
313

359

316

429 431

375

487

0
100

150

200

250
300
Low Resolution M/z

350

400

450

500

Figura D21. Espectro de massas CI da LST 4 (Fluctuanina).

Os espectros de RMN da LST 4 so praticamente idnticos aos da LST 1, com

exceo apenas dos deslocamentos qumicos referentes aos sinais para os hidrognios e
carbonos do ster ligado ao C8. Na LST 1, este ster o epxi-angelato, mas na LST 4 o
angelato. Os deslocamentos qumicos dos sinais de angelato so bem mais desblindados em
funo da dupla ligao entre C2 ( 126,5) e C3 ( 140,2 e 6,02, qq). Os sinais para as duas
metilas tambm aparecem mais desblindadas no espectro de RMN 1H ( 1,71 e 1,88). O
espectro de 1H-1H COSY foi importante para a confirmao das correlaes entre os

D. Fitoqumica

64

hidrognios, especialmente do ster. Os dados de RMN desta LST so apresentados na tabela

D9 e figuras D22-24.
O sistema especialista SISTEMAT foi capaz de propor uma estrutura para a LST 4, a
partir dos deslocamentos qumicos dos seus carbonos, o que confirma a estrutura proposta.

Tabela D9. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 4, (ppm), J (Hz).
Fluctuanina
1'''
2''

O
14

10

Posio
1
7,08 dd (10,5; 7,4)
2a
2,91 m (11,3)
2b
2,39 m
3a
2,28 m
3b
2,28 m
4
5
2,61 d (9,8)
6
4,21 t (9,8)
7
2,91 m
8
6,66 dd (8,8; 1,2)
9
5,79 d (8,8)
10
11
12
13a
5,85 d (3,2)
13b
6,28 d (3,5)
14
15
1,65 s
1
2
3
6,02 qq (7,3; 1,5)
4
1,88 dq (7,3; 1,5)
5
1,71 quin (1,5)
1
2
1,94 s
1
3,76 s
*: observado

2'

15

H (* 400 MHz)

1'

3'

13

4'

11

8
5

5'

1''

12

H (Lin et al., 2003)

13

7,15 dd (9,0; 7,5)

2,98 m
2,34 m
2,44 m
1,24 m

149,3

149,3

22,7

24,7

31,9

35,4

59,4
62,9
76,0
45,7
70,7
69,3
130,2
133,4
168,3

59,4
62,9
76,2
45,6
70,7
69,3
130,0
133,3
168,4

123,0

123,1

165,5
17,6
165,9
126,5
140,2
15,8
20,4
170,3
20,7
52,5

165,5
17,6
165,9
126,5
140,2
15,8
20,7
170,3
20,4
52,5

2,68 m
4,29 dd (10,0; 9,5)
2,98 m
6,74 dl (9,0)
5,86 d (8,5)

5,92 d (3,5)
6,35 d (3,5)
1,70 s
6,09 dq (7,0; 1,5)
1,94 m
1,79 m
2,01 s
3,84 s

C (* 75 MHz)

13

C (Lin et al., 2003)

65

22

D. Fitoqumica

66
23

D. Fitoqumica

67
24

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

68
3.1.2.5. LST 5
1'''
2''

O
14

10

4'

O
1'

8
5

1''

2'
3'

13
11

15

12

8-metacriloilxi-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de
metila
Da LST 5 foram obtidos espectros de RMN 1H e de massas. O espectro de massas EI
(Fig. D26) apresenta o fragmento do on molecular m/z 418 [M]+, um fragmento m/z 358 [M C2H4O2]+, um fragmento m/z 69 caracterstico para o grupo metacrilato [C4H5O]+ e um
fragmento m/z 43 caracterstico para o grupo acetato [C2H3O]+. J o espectro de massas CI
(Fig. D27) apresenta um fragmento m/z 419 representando o on quasimolecular [M + H]+.
Alm deste, h ainda um fragmento m/z 359 [M - C2H3O2]+. Estas informaes (Fig. D25)
indicam que a LST 5 tem a frmula molecular de C22H26O8 e massa molecular de 418.

[C20H23O6]
m/z 359
O

[C4H5O]
m/z 69
O

[C2H3O]
m/z 43
O

O
O

Figura D25. Fragmentaes da LST 5.

D. Fitoqumica

69

100

Base M/z=69. 100%

69
90
80

Intensity (%age)

70

43

60

272

50
40
213
30
20

73

93
112

10

149

129
142

240 256
167 185 206

[M]+

284

418

358

0
50

100

150

200

250
Low Resolution M/z

300

350

400

450

Figura 26. Espectro de massas EI da LST 5.

100

Base M/z=285. 100%

285

359

90
80
Intensity (%age)

70
331

60
50

257

40

239

30

275

20

293

229
215

10

[M+H]+

313

245

327

419

342
369 383 391 405

465

0
150

200

250

300
350
Low Resolution M/z

400

450

500

Figura D27. Espectro de massas CI da LST 5.

O espectro de RMN 1H da LST 5 praticamente idntico ao da LST 2, com exceo

apenas para os deslocamentos qumicos dos sinais para os hidrognios do ster ligado ao C8.
Na LST 2, este ster o epxi-angelato, mas na LST 5 o metacrilato. O ster metacrilato
no possui a metila 5, portanto o espectro apresenta dois sinais para os 2H da dupla ligao
H3a/b ( 5,96 e 5,51, sl). O sinal para a metila 4 aparece em 1,98. Os dados de RMN desta
LST so apresentados na tabela D10 e figura D28.

D. Fitoqumica

70

Tabela D10. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 5, (ppm), J (Hz).
1'''
2''

O
14

10

4'

O
1'

8
5

1''

2'
3'

13
11

15

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
3a
3b
4
1
2
1

H (* 400 MHz)
6,94 dd (10,1; 7,3)
2,59 m
2,44 m
2,39 m
2,28 m

12

H (Bardn et al., 2001)

7,00 dd (10,0; 7,2)
2,65 dddd (12,4; 12,4; 10,4; 2,0)
2,44 dddd (12,0; 8,0; 6,0; 2,0)
2,39 ddd (12,0; 6,0; 2,0)
2,03 tl (11,6)

13

C (Bardn et al., 2001)

148,3

26,1
36,9

4,96 dl (10,4)
5,11 t (10,0)

130,6
126,3
75,3

2,76 dddd (10,0; 3,2; 2,8; 1,2)

50,9

6,62 dd (8,8; 1,4)

5,43 d (8,4)

70,2
71,1
134,3
138,5
170,2

4,89 dl (10,3)
5,05 dd (10,3)
2,70 dddd (10,3; 3,5; 3,0;
1,5)
6,56 dd (8,5; 1,7)
5,37 d (8,5)

5,75 d (3,0)
6,20 d (3,2)

6,26 d (3,2)
5,81 d (3,2)

1,83 s

1,89 s

5,96 sl
5,51 sl
1,98 sl

6,02 sl
5,57 t (1,6)
1,93 s

2,03 s
3,76 s
*: observado

2,03 s
3,79 s

121,8
170,2
16,9
165,9
135,4
126,6
18,3
165,9
20,8
52,3

71
28

D. Fitoqumica

72

D. Fitoqumica

3.1.2.6. LST 6
H

O
5'

14

10

1'

2'

8
5

3'

4'

13
11

15

12

8-angeloilxi-14-oxo-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido
A LST 6 foi submetida espectroscopia de RMN 1H e espectrometria de massas. O
espectro de massas CI (Fig. D30) apresenta um fragmento m/z 345 representando o on
quasimolecular [M + H]+. Alm deste h ainda um fragmento m/z 245 [M - C5H7O2]+ e um
fragmento m/z 83 caracterstico para o grupo angelato [C5H7O]+. O espectro de massas EI
(Fig. D31) apresenta o fragmento m/z 244 [M C5H8O2]+ e um fragmento m/z 83 [C5H7O]+.
Esses dados (Fig. D29) mostram que a LST 6 tem a frmula molecular de C20H24O5 e massa
molecular de 344.

[C15H17O3]
m/z 245
[C5H7O]
m/z 83
O

O
O

Figura D29. Fragmentaes da LST 6.

D. Fitoqumica

73

100

[M+H]+

Base M/z=345. 100%

345

90
80
Intensity (%age)

70

245

60
50

83

40
30
391

20
10

84

199

149

227

273 291

313 333

359

421

449
450

0
100

150

200

250
300
Low Resolution M/z

350

400

450

500

Figura D30. Espectro de massas CI da LST 6.

100

Base M/z=83. 100%

83
90
80

Intensity (%age)

70
60
50

55

40
30
20
10

43

69

91 105
118 134

147

215

244
256 272

0
50

100

150

200
Low Resolution M/z

250

300

350

Figura D31. Espectro de massas EI da LST 6.

O espectro de RMN 1H da LST 6 praticamente idntico ao da LST 3. Porm,

constata-se a ausncia do sinal para a metoxila em 3,70. Entretanto, o espectro apresenta um
sinal integrado para 1 H em 9,3, indicando a presena de um grupo aldedo. Isto mostra que
nesta molcula existe um grupamento aldedo em C14 ao invs do ster metlico. Os
deslocamentos qumicos foram comparados com dados da literatura (Bohlmann et al., 1981a).
Os dados de RMN desta LST so apresentados na tabela D11 e figura D32.

D. Fitoqumica

74

Tabela D11. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 6, (ppm), J (Hz).
H

O
5'

14

10

1'

8
5

2'
3'

13

4'

11
15

12

1
1
H (Bohlmann et al., 1981a)
Posio H (* 400 MHz)
1
6,55 ddd (9,8; 7,0; 1,7)
6,62 ddd (10,0; 7,0; 2,0)
2a
2,27 m
2,29 ddl (13,0; 2,0)
2b
2,27 m
2,50 m
3a
2,27 m
2,12 ddl (13,0; 2,0)
3b
2,27 m
2,40 ddd (13,0; 6,0; 2,0)
4
5
5,00 m
5,08 m
6
5,00 m
5,08 m
7
2,43 m
2,50 m
8
6,41 ddd (10,1; 7,5; 2,0)
6,49 ddd (10,0; 7,0; 2,0)
9
2,76 m
2,84 dd (14,0; 10)
9
2,08 m
1,98 m (1,5)
10
11
12
13a
5,53 d (3,0)
5,60 d (3,0)
13b
6,17 d (3,5)
6,25 d (3,5)
14
9,30 s
9,49 d (1,5)
15
1,85 sl
1,93 s
1
2
3
6,03 qq (7,0; 1,5)
6,10 qq
4
1,98 dq (7,0; 1,5)
1,98 dq
5
1,77 quin (1,5)
1,85 dq
** derivado isovalerato da LST 6. *: observado

13

C (Kijoa et al., 1993)*

153,9
26,1
37,1
42,9
126,3
75,3
49,3
65,5
28,8
135,1
137,7
169,4
120,9

195,3
16,9
171,6*
43,3*
25,7*
22,3*
22,3*

75
32

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

76
3.1.2.7. LST 7
1''

O
4'

14

10

1'

8
5

3
4

2'

3'

13
11

15

12

8-metacriloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
Da LST 7 foram obtidos espectros de RMN 1H, 13C, 1H-1H COSY 90-45 e de massas.
O espectro de massas EI (Fig. D34) apresenta o fragmento do on molecular m/z 360 [M]+, um
fragmento m/z 291, que indica o on molecular sem o ster metacrilato [M - C4H5O]+ e um
fragmento m/z 69 caracterstico para o grupo metacrilato [C4H5O]+. J o espectro de massas
CI (Fig. D35) apresenta um fragmento m/z 361 representando o on quasimolecular [M + H]+.
As informaes (Fig. D33) mostram que a LST 7 tem a frmula molecular de C20H24O6 e
massa molecular de 360.

[C16H19O5]
m/z 291

[C4H5O]
m/z 69
O

O
O

Figura D33. Fragmentaes da LST 7.

D. Fitoqumica

77

100

Entries=888. Base M/z=69. 100%

69

90
80

Intensity (%age)

70
60
50

83

40
30
20

55

300

242
214

43

105 118 134 147 152 169 186 197

10

224

256 272

100

150

329

291

0
50

[M]+

274

(*5)
300

200
250
Low Resolution M/z

360

350

400

Figura D34. Espectro de massas EI da LST 7.

100

[M+H]+

Base M/z=361. 100%

361
90
80

Intensity (%age)

70
60
275

50
40
30
20
10

79 85

215

179

243
229

257

433

288
300 316 329

343

373

0
100

150

200

250
300
Low Resolution M/z

350

400

450

500

Figura D35. Espectro de massas CI da LST 7.

O espectro de RMN 1H da LST 7 praticamente idntico ao da LST 3, com exceo

apenas para os deslocamentos qumicos dos sinais dos hidrognios do ster ligado ao C8. Na
LST 3, este ster o angelato, mas na LST 7 o metacrilato. O ster metacrilato no possui a
metila 5, portanto o espectro apresenta dois sinais para os 2H da dupla ligao H3a/b ( 5,98
e 5,51, sl). O deslocamento do sinal para a metila 4 de 1,84. Os dados experimentais de
RMN, assim como os dados da literatura desta LST so apresentados na tabela D12 e figuras
D36-38.

D. Fitoqumica

78

O sistema especialista SISTEMAT foi capaz de propor uma estrutura para a LST 7 em
funo dos deslocamentos qumicos dos carbonos fornecidos, confirmando a estrutura
proposta.

Tabela D12. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 7, (ppm), J (Hz).
1''

O
4'

14

10

1'

2
5

3
4

2'

3'

13
11

15

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
3a
3b
4
1

12

H (* 400 MHz)
6,76 ddd (9,6; 7,2; 2,3)
2,06 m
2,06 m
2,27 m
2,27 m

5,03 m
5,03 m
2,53 m
6,21 ddd (7,6; 5,5; 1,7)
1,95 m
2,77 ddd (7,6; 5,3; 2,3)

5,11m
5,12 m
2,60 m
6,28 ddd (9,6; 7,7; 1,8)
2,03 tl (10,4)
2,84 ddd (13,9; 7,5; 2,1)

H (Lin et al., 2003)

6,83 ddd (9,6; 7,5; 2,2)
2,36 m
2,12 tl (12,0)
2,06 tl (10,0)
2,31 m

5,49 d (3,2)
6,16 d (3,4)

5,56 d (3,4)
6,23 d (3,4)

1,85 sl

1,91 s

5,98 sl
5,51 sl
1,84 sl
3,70 s
*: observado

6,06 sl
5,58 quin (1,5)
1,93 m
3,78 s

13

C (* 75 MHz)
142,4

13

C (Lin et al., 2003)

142,4

25,7

25,7

37,1

37,1

137,7
75,8
49,7
67,3

137,9
126,0
75,8
49,7
67,3

30,9

30,2

131,2
134,4
169,5

131,1
135,6
169,5

120,5

120,5

167,4
17,0
166,0
135,4

167,4
17,0
166,4
135,8

126,1

126,1

18,3
52,0

18,3
52,0

79

36

D. Fitoqumica

80

37

D. Fitoqumica

81

38

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

82
3.1.2.8. LST 8 (Polimatina B)
1'''
2''

O
14

10

O
1'

8
5

5'

1''

2'
3'

4'

13
11

15

12

8-angeloilxi-9-acetoilxi-germacra1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
A LST 8 foi submetida espectroscopia de RMN 1H,

13

C, gHSQCR, gHMBCR e

espectrometria de massas. O espectro de massas CI (Fig. D40) apresenta o fragmento do on

molecular m/z 433 representando o on quasimolecular [M + H]+, um fragmento m/z 83
caracterstico para o grupo angelato [C5H7O]+, alm de um fragmento m/z 373 [M - C2H3O2]+.
O espectro de massas EI (Fig. D41) apresenta tambm um fragmento m/z 83 [C5H7O]+ e um
fragmento m/z 43 referente a um ster acetato [C2H3O]+. Os dados (Fig. D39) dos espectros
indicam que a LST 8 tem a frmula molecular de C23H28O8 e massa molecular de 432.

[C21H25O6]
m/z 373

[C5H7O]
m/z 83
O

O
O

Figura D39. Fragmentaes da LST 8 (Polimatina B).

D. Fitoqumica

83

100

[M+H]+

Base M/z=433. 100%

433

90
80

Intensity (%age)

70
60
50
40
30

373

83
273

20
10

291

241

91

333

475

375

0
150

100

200

250

300
350
Low Resolution M/z

400

450

500

550

Figura D40. Espectro de massas CI da LST 8 (Polimatina B).

100

Base M/z=83. 100%

83
90
80

Intensity (%age)

70
60
50
55

40
30
20

69

272

43

10

105

119 131

169

213
185

219 240

273

0
50

100

150

200
250
Low Resolution M/z

300

350

400

Figura D41. Espectro de massas EI da LST 8 (Polimatina B).

O espectro de RMN 1H da LST 8 praticamente idntico ao da LST 2, com exceo

apenas para os deslocamentos qumicos dos sinais para os hidrognios do ster ligado ao C8,
que na LST 8 o angelato. Os deslocamentos qumicos dos sinais referentes aos tomos do
ster angelato sofrem um efeito paramagntico em relao aos do ster epxi-angelato. Os
espectros de gHSQCR e gHMQCR serviram para confirmar as conexes e correlaes entre
os hidrognios e os carbonos da molcula, concordando inclusive com a estereoqumica
obtida para o confrmero de menor energia calculado por meio do HyperChemTM. No

D. Fitoqumica

84

espectro de gHSQCR foram observados quatro sinais de conexo de hidrognios com

carbonos tipo CH3, sete do tipo CH e mais sete do tipo CH2. No espectro gHMQCR foram
observadas as correlaes dos hidrognios com os carbonos distantes duas ou mais ligaes
(Fig. D42). Os dados experimentais de RMN, assim como os dados da literatura desta LST
(Inoue et al., 1995), so apresentados na tabela D13 e figuras D43-46.

O
O
O

O
O
C

Figura D42. Correlaes entre C e H observadas via gHMQCR (300 e 75 MHz), LST 8. As setas apontam
sempre a correlao entre C e H no sentido C
H.

D. Fitoqumica

85

Tabela D13. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 8, (ppm), J (Hz).
Polimatina B
1'''
2''

O
14

10

O
1'

8
5

5'

1''

2'
3'

13

4'

11
15

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
3
4
5
1
2
1

H (* 400 MHz)
6,94 dd (10,3; 7,5)
2,57 m
2,39 m
2,31 m
1,96 m

H (Inoue et al., 1995)

7,01 dd (10,3; 8,3)
2,41 m
2,41 m

12

13

C (* 75 MHz)
148,2

13

C (Bardn et al., 2001)**

148,3

26,1

26,1

36,9

36,9

4,87 dd (10,1; 1,1)

5,04 dd (10,1; 9,8)
2,71 dddd (9,8; 3,2; 3,0;
1,5)
6,61 dd (8,5; 1,5)
5,34 d (8,5)

4,96 d (10,8)
5,11 t (10,0)

138,6
126,2
75,5

130,6
126,3
75,3

2,78 m

51,0

50,9

6,68 dd (8,6; 1,3)

5,41 d (8,6)

69,1
71,2
130,7
134,5
169,4

70,2
71,1
134,3
138,5
170,2

5,74 d (3,2)
6,21 d (3,2)

5,81 d (3,0)
6,28 d (3,0)

121,7

121,8

1,92 s

1,96 s

6,01 qq (7,3; 1,5)

1,87 dq (7,3; 1,5)
1,76 quin (1,5)

6,08 ddd (7,1; 1,5)

1,95 dd (7,1; 1,3)
1,96 s

170,1
16,9
166,2
126,9
138,5
15,7
20,4
166,0
20,8
52,2

170,2
16,9
165,9*
135,4*
126,6*
18,3*

1,89 s
3,74 s
3,81 s
** Derivado metacrilato da LST 8.*: observado

165,9
20,8
52,3

86
43

D. Fitoqumica

87
44

D. Fitoqumica

88
45

D. Fitoqumica

89
46

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

90
3.1.2.9. LST 9
HO

O
5'

14

10

1'

8
5

2'
3'

13

4'

11
15

12

cido 8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-ico
A LST cida 9, ainda no descrita na literatura, semelhante LST 6, que possui
funo aldedo no C14. A LST 9, por sua vez, apresenta na mesma posio a funo cido. A
estrutura referente a esta substncia foi elucidada mediante anlise de espectros de RMN 1H,
13

C, 1H-1H gCOSY e espectros de massa. O espectro de RMN 1H no apresenta sinal para o

C14, nem para metoxila e nem para hidrognio de aldedo. Porm, todos os outros sinais
condizem com a descrio para a LST 6 (Inoue et al., 1995). O sinal para o C14 (ster
metlico) aparece geralmente em 165,0 no espectro de RMN

13

C, mas no espectro de 9 o

sinal para C14 aparece em 171,1. Os dados dos espectros de RMN so apresentados na
tabela D14 e figuras 47-49.
Mais uma vez o confrmero de menor energia calculado pelo HyperChemTM
praticamente idntico s outras LSTs isoladas, o que mostra a reprodutibilidade das anlises.
Alm disso, o sistema especialista SISTEMAT foi capaz de propor uma estrutura para a LST
9, o que confirma a estrutura proposta a partir dos deslocamentos qumicos dos carbonos.

D. Fitoqumica

91

Tabela D14. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 9, (ppm), J (Hz).
HO

O
5'

14

10

1'

8
5

2'
3'

13
11

15

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
3
4
5

H (* 400 MHz)
6,92 tl (7,3)
2,26 m
2,02 m
2,33 m
2,02 m
5,04 m
5,04 m
2,59 m
6,27 dd (8,7; 7,9)
2,02 m
2,80 m (7,9)

12

13

C (* 75 MHz)
144,8

25,9
37,0
137,8
126,0
76,0
49,8
66,5
31,9
130,6
135,5
169,5

5,54 d (2,7)
6,18 d (3,2)
1,84 s
6,04 qq (7,3; 1,5)
1,92 dq (7,3; 1,5)
1,78 quin (1,5)

*: observado

120,7
171,1
17,1
166,5
127,1
139,5
15,9
20,6

4'

92
47

D. Fitoqumica

93
48

D. Fitoqumica

94
49

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

95

O espectro de massas CI (Fig. D51) apresenta fragmento m/z 361 relativo ao on

quasimolecular [M + H]+, m/z 261 [M - C5H7O2]+, m/z 101 relativo ao ster angelato e uma
molcula de gua [C5H7O + H2O]+e m/z 83, caracterstico do ster angelato [C5H7O]+. O
espectro EI (Fig. D52) apresenta o fragmento m/z 83 [C5H7O]+. As fragmentaes so
apresentadas na figura D50. O espectro de massas de alta resoluo ES (Fig. D53) revela a
frmula molecular de C20H24O6 com fragmento m/z 361,164565 [M + H]+. Desta forma, a
estrutura proposta pde ser confirmada.
HO

[C15H17O4]
m/z 261
[C5H7O]
m/z 83
O

O
O

Figura D50. Fragmentaes da LST 9.

100

[M+H]+

Base M/z=361. 100%

361
90
80

261

Intensity (%age)

70
60
50
40

83

243

30
20
79

285

101

10

215

165

143

244

279

301

313

343

399

0
100

150

200

250
Low Resolution M/z

300

Figura D51. Espectro de massas CI da LST 9.

350

400

450

D. Fitoqumica

96

100

Base M/z=83. 100%

83

90
80

Intensity (%age)

70
60
50
55

40
30
20
10

43

81

105

214 232 242 260

134

384

0
50

100

150

200
250
Low Resolution M/z

300

Figura D52. Espectro de massas EI da LST 9.

[M+H]+

Figura D53. Espectro de massas de alta resoluo ES da LST 9.

350

400

D. Fitoqumica

97
3.1.2.10. LST 10 (Dmero de melampolidos)
1'''

14

1
2

10

1''''

2''''

4''''

3''''

5'

14

11

13

O
15

2''

OH

B
5

5''''

1''

12
1

10

5
4

1'

2'
3'

13

4'

11
15

12

4,5-epxi-8-[2S-hidrxi-3R-xi-(8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12olido)]-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien-6,12-olido-14-oato de metila
A LST 10, tambm ainda no descrita na literatura, um dmero de melampolidos. A
estrutura foi elucidada por meio da anlise de espectros de massas, de RMN 1H e de 13C (Tab.
D15, Fig. D55 e D56). A conectividade entre os sinais de 1H e

13

C foi determinada por

gHSQCR (Fig. D57) e as demais correlaes de 13C e 1H foram confirmadas pela inspeo de
1

H-1H gCOSY (Fig. D60) e gHMQCR (Fig. D58 e D59). Os espectros de RMN

13

C e de

gHSQCR apresentam sinais para 43 carbonos, sendo 21 -CH ou -CH3, sete -CH2 e 15
quaternrios. O espectro de RMN 1H apresenta quatro dubletos, integrados para 1H cada, em
6,26, 5,69, 6,14 e 5,83 que foram atribudos, respectivamente, a dois grupos (anis A e B)
de hidrognios de dupla exocclica H13a e H13b, caractersticos de -lactonas ,-insaturadas.
Um multipleto em 2,42, acoplado aos sinais da dupla exocclica do anel A caracteriza H7,
que tambm est acoplado com o duplo duplo dubleto em 6,25, que foi atribudo ao H8. O
sinal de H7 ainda acopla com um sinal em 5,05, integrado para 2H, sendo caracterstico para
H6 e H5 de melampolidos, quando o C5 insaturado. O sinal de H8 ( 6,25) acopla com dois
sinais tpicos de H9 e em 2,78 e 1,94, respectivamente. Atravs do espectro 1H-1H
COSY, observa-se o acoplamento entre um dos H9 e o H1, o qual est ligado a um carbono
insaturado, cujo sinal aparece em 6,63. Este ltimo sinal est conectado ao sinal para
carbono em 143,8, conforme pode ser observado no espectro gHSQCR. O sinal para o

D. Fitoqumica

98

H1(C1, 143,8) do anel A correlaciona-se tambm com o sinal da carbonila ou C14 em

165,3, que por sua vez est correlacionado com um quadrupleto em 5,17. Este quadrupleto
est correlacionado com dois outros carbonos em 13,9 (C4) e 22,5 (C5), sinais
referentes a dois grupamentos metila. Os sinais da primeira metila est correlacionada com
um sinal de carbono quaternrio em 75,7, o qual est ligado a um tomo de oxignio. O
sinal dos hidrognios da segunda metila, em 22,5, est correlacionado com um carbono
carbonlico de ster em 174,2. Este ltimo sinal correlaciona-se, por sua vez, com um duplo
dubleto em 6,56. No espectro de 1H-1H COSY observa-se que o sinal em 6,56 acopla com
o duplo duplo dubleto em 2,91, e este acopla com os sinais tpicos de dupla exocclica, H13a
e H13b do anel B. Assim conclui-se que o sinal em 6,56 corresponde ao H8 e o sinal em
2,91 ao H7, ambos do anel B. H8 acopla por conseguinte com um sinal em 5,82, que por sua
vez correlaciona-se com o sinal para carbono carbonlico de grupo acetato, alm de dois sinais
para carbonos insaturados, um em 149,6 e outro 127,1. Logo, o H9 est ligado a um tomo
de carbono que possui tambm um grupamento acetato. O sinal em 149,6 est conectado ao
sinal em 7,13, que por sua vez correlaciona-se ao sinal de carbono carbonlico em 165,5,
que tambm correlaciona-se ao sinal de metoxila em 3,81. Portanto, os sinais em 149,6 e
7,13 caracterizam a posio 1 do anel B e o sinal em 165,5 refere-se ao C14.
As correlaes entre C e H observadas via gHMQCR so apresentadas na figura D54.
O

OH

O
O

A
O

O
O
Figura D54. Correlaes entre C e H observadas via gHMQCR de 5 e 8 Hz (300 e 75 MHZ), LST 10. As
setas apontam sempre a correlao entre C e H no sentido C
H.

D. Fitoqumica

99

Tabela D15. Dados experimentais e da literatura de espectros de RMN 1H e 13C - LST 10, (ppm), J (Hz).
1'''

14

1
2

10

2''
1''''

2''''

OH
4''''

3''''

B
5

5''''

1''

15

5'

14

11

13
12
1

10

1'

2'
3'

13

4'

11
15

12

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
1
1
2
3
4
5

Anel B
H
7,13 dd (10,3; 7,3)
3,05 ddm (13,1; 11,9)
2,42 m (13,1)
2,31 m
2,11 m
1

13

C
149,6

25,9
35,4

2,59 d (9,7)
4,30 t (9,7)
2,91 ddd (9,7; 3,3; 1,2)
6,56 dd (8,5; 1,2)

59,0
63,2
76,0
44,7
73,0

5,82 d (8,5)

70,8
130,0
133,3
167,8

5,83 d (3,3)
6,14 d (3,3)
1,72 s
2,04 s
3,81 s
5,17 q (6,4)
1,25 d (6,4)
1,27 s

122,1
165,5
17,4
170,2
20,9
52,5
174,2
75,7
73,3
13,9
22,5

Posio
1
2a
2b
3a
3b
4
5
6
7
8
9
9
10
11
12
13a
13b
14
15
1
2
3
4
5

Anel A
H
6,63 tl (7,3)
2,31 m
2,11 m
2,42 m (13,7)
1,21 tl (13,7)
1

5,05 d (7,6)
5,05 dd (10,3; 7,6)
2,42 m
6,25 ddd (7,0; 1,8; 1,2)
2,78 ddd (14,3; 7,0; 1,8)
1,94 m

13

C
143,8

24,7
36,9
138,3
125,8
76,1
49,9
66,2
30,1
127,1
135,2
169,7

5,69 d (3,0)
6,26 d (3,3)
1,89 sl
6,09 qq (7,3; 1,5)
1,97 dq (7,3; 1,5)
1,85 quin (1,5)

121,2
165,3
17,0
166,4
131,0
139,2
15,9
20,5

100

55

D. Fitoqumica

101

56

D. Fitoqumica

102

57

D. Fitoqumica

103

58

D. Fitoqumica

104

59

D. Fitoqumica

105

60

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

106

O espectro de massas APCI (Fig. D62) apresenta um fragmento m/z 842 relativo ao on
molecular e uma molcula de gua [M + H2O]+. No espectro ESI (Fig. D63) aparecem
fragmentos como m/z 847, para o on molecular e um tomo de sdio [M + Na]+. No espectro
expandido (Fig. D64), aparecem os picos m/z 765 [M - C2H3O2]+ e m/z 747 [M + Na C5H8O2]+. O espectro EI (Fig. D65) apresenta um fragmento m/z 724 [M - C5H8O2]+, m/z 83,
caracterstico para o grupo angelato [C5H7O]+ e m/z 43, relativo ao grupo acetato [C2H3O]+. O
espectro de massas de alta resoluo ES (Fig. D66) revela a frmula molecular de C43H52O16,
com fragmentos m/z 825,33281 [M + H]+ e m/z 847,31476 [M + Na]+. Algumas
fragmentaes so apresentadas na figura abaixo.

[C5H7O]
m/z 83
O
OH

O
O

B
O

[C38H45O14]
m/z 725

O
O
O

[C2H3O]
m/z 43
O

O
O

Figura D61. Fragmentaes da LST 10.

D. Fitoqumica

107

100

[M + H2O]+

Base M/z=842. 100%

842

90
80

Intensity (%age)

70
60
50
40
30
20

926

10

725

858

796

900

965

983

0
500

400

600

700
Low Resolution M/z

800

900

1000

Figura D62. Espectro de massas APCI da LST 10.

100

[M + Na]+

Base M/z=847. 100%

847
90
80
Int
en
sit
y
(%
ag
e)

70
60
50
40
30
725

20
10

289

707

349

801

863 905926 9621005

1113

0
200

300

400

500

600
700
800
Low Resolution M/z

900

1000

Figura D63. Espectro de massas ESI da LST 10.

1100

1200

D. Fitoqumica

108

Base M/z=747. 100%

100

747
90
80
Int
en
sit
y
(%
ag
e)

765

70
60
50
597

40
30

500

399

20

383
255

10

272 314 329

417

355

431

474

585

703

487

787 803

650 679

0
200

300

400

500
600
Low Resolution M/z

700

800

900

Figura D64. Espectro de massas expandido ESI da LST 10.

100

Base M/z=83. 100%

83
90
80

Intensity (%age)

70

724

55

60

43

50

725

678

40
30

242

20

115

10

623
547

215
257

128 187

289

331

349

0
0

100

200

300

400
Low Resolution M/z

646

585

500

(*20)

600

Figura D65. Espectro de massas EI da LST 10.

700

(*1)
800

109

D. Fitoqumica

[M+H]+

Figura D66. Espectro de massas de alta resoluo ES da LST 10.

S. sonchifolius biossintetiza LSTs de um subgrupo tpico no gnero, os melampolidos,

mas a primeira vez que um dmero isolado do gnero Smallanthus. Alm disso, os dmeros
so raros na tribo Heliantheae, assim como na subtribo Melampodiinae. A figura D67
apresenta uma proposta para a biossntese deste dmero. Para formar a estrutura do dmero 10,
possvel que o ster de uma LST como a 4 sofra uma oxidao, mais precisamente uma
epoxidao, formando a LST 1. Essa reao seria catalisada por uma monoxigenase na
presena de NADPH e oxignio. A partir disto o grupo epxido do ster de cadeia lateral da
LST 1 poderia ser aberto de forma antiperiplanar por catlise cida originando o diol
correspondente. Uma vez que o epxido trans, a abertura do mesmo gera um produto com
dois centros quirais, S e R. O carbono carbonlico do grupo carboxlico de um melampolido
como 9 poderia sofrer um ataque nucleoflico pela hidroxila estericamente menos impedida
do grupo diol, levando assim formao do dmero 10 por esterificao.

D. Fitoqumica

110
O

O
O
B
O
O

LST 4

O
a) NADP-H, O2
Monoxigenase
b) H3O+
O

+ H
O

O
O
B
O
O
LST 1

H2O

O
O

OH

O
O

B
O
O

R
O

CoAS
O

H
OH

LST 9

O
O

OH

O
O

B
O
O

O
O

A
O

LST 10
O
O

Figura D67. Proposta de biossntese para o dmero de melampolidos 10.

D. Fitoqumica

111
3.1.2.11. Dados de RMN 1H de todas LSTs

Para facilitar a comparao, os dados de RMN 1H de todas as LSTs foram compilados

em uma nica tabela D16. Abaixo so apresentadas as estruturas das LSTs isoladas neste
trabalho.
1'''
2''
O

O
14

1''
O

10

4'

12

15

O
13
11

2'
3'

8
5

O
1'

5'

O
O

O
O

HO

O
O

O
O

1'''

14

1
2

10

2''''

4''''

3''''

5'

14

11

13

O
15

1''''

OH

7
6

2''

B
5

5''''

1''

12
1

10

1'

3'

13
11

15

2'

12

10
Figura 68. Estruturas das LSTs isoladas.

4'

112

Tab

D. Fitoqumica

D. Fitoqumica

113

3.1.3. Caractersticas dos metablitos secundrios isolados

As estruturas foram numeradas conforme nomenclatura usual e em negrito de acordo
com sistema IUPAC.
3.1.3.1. LST 1 (Enidrina)
1'''
2''
O

O
14

10

32

1''

5'

O
O

6
9

O
1'

2'
3'

3
4

10b 5

1a

15

10a

11

6
O

7 7a

O
13

4'

11 8
12

9
O

4,5-epxi-8-(2S,3S-epxi-angeloilxi)-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien6,12-olido-14-oato de metila
Massa isolada

794 mg

Nome IUPAC

(1aR,6S,7S,7aR,10aS,10bS,E)-methyl 6-acetoxy-7-[(2S,3S)-2,3-

(em ingls)

dimethyloxirane-2-carbonyloxy]-1a-methyl-8-methylene-9-oxo1a,2,3,6,7,7a,8,9,10a,10b-decahydro-11-oxa-bicyclo[8.1.0]undeca1(10),4-dieno[9,8-b]furan-5-carboxylate

Frmula molecular

C23H28O10

Massa molecular

464

Forma macroscpica

Slido branco

Ponto de fuso

144 148 C

trr1 (CLAE)

0,67

trr2 (CLAE)

1,75

UV mx

212 nm

RMN H

Tab. D6, Fig. D10 pg. 51

RMN 13C

Tab. D6, Fig. D11 pg. 52

Fig. D12 pg. 53

H-1H COSY

D. Fitoqumica

114
3.1.3.2. LST 2 (Uvedalina)
1'''
2''

O
14

7
8
9

6
10

5
9

10

O
1'

8
5

5'

1''

3'

3a

11
11a

15

1O

2'

13
11

4'

12

8-(2S,3S-epxi-angeloilxi)-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido14-oato de metila
Massa isolada

325 mg

Nome IUPAC

(3aS,4S,5S,6E,10E,11aR)-methyl 5-acetoxy-4-[(2S,3S)-2,3-

(em ingls)

dimethyloxirane-2-carbonyloxy]-10-methyl-3-methylene-2-oxo2,3,3a,4,5,8,9,11a-octahydrocyclodeca[b]furan-6-carboxylate

Frmula molecular

C23H28O9

Massa molecular

448

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

1,32

trr2 (CLAE)

3,12

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D7, Fig. D16 pg. 57

RMN 13C

Tab. D7, Fig. D17 pg. 58

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 449 [M + H]+ (100), 405 [M - C2H3O]+ (23), 389

[M - C2H3O2]+ (47)
EM - EI

m/z (intensidade): 448 [M]+ (3), 43 [C2H3O]+ (100)

D. Fitoqumica

115
3.1.3.3. LST 3 (Sonchifolina)
1''

O
5'

14

7
8

10

10

1'

8
5

93

11

3'

3a

13

11a

15

1O

2'

11

4'

12

2
O

8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
Massa isolada

62 mg

Nome IUPAC

(3aR,4R,6E,10E,11aR)-methyl 10-methyl-4-[(Z)-2-methylbut-2-

(em ingls)

enoyloxy]-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11aoctahydrocyclodeca[b]furan-6-carboxylate

Frmula molecular

C21H26O6

Massa molecular

374

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

1,40

trr2 (CLAE)

1,84

UV mx

210 nm

RMN H

Tab. D8, Fig. D18 pg. 61

D. Fitoqumica

116
3.1.3.4. LST 4 (Fluctuanina)
1'''
2''

O
14

4
3
2

10

2
3

1''

5'

O
1'

10b 5

1a
15

10a

11

3'

7a

13
11

2'

4'

12

9
O

4,5-epxi-8-angeloilxi-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien-6,12-olido-14-oato
de metila
Massa isolada

3 mg

Nome IUPAC

(1aR,6S,7S,7aR,10aS,10bS,E)-methyl 6-acetoxy-1a-methyl-7-[(Z)-

(em ingls)

2-methylbut-2-enoyloxy]-8-methylene-9-oxo1a,2,3,6,7,7a,8,9,10a,10b-decahydro-11-oxa-bicyclo[8.1.0]undeca1(10),4-dieno[9,8-b]furan-5-carboxylate

Frmula molecular

C23H28O9

Massa molecular

448

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

1,54

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D9, Fig. D22 pg. 66

RMN 13C

Tab. D9, Fig. D23 pg. 67

Fig. D24 pg. 68

H-1H gCOSY

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 449 [M + H]+ (64), 389 [M - C2H3O2]+ (100), 83

[C5H7O]+ (23)
EM - EI

m/z (intensidade): 448 [M]+ (1), 388 [M - C2H4O2]+ (5), 83

[C5H7O]+ (100)

D. Fitoqumica

117
3.1.3.5. LST 5
1'''
2''

O
14

7
8
9

10

10

4'

O
1'

8
5

1''

11

3'

3a

13

11a

15

1O

2'

11

12

8-metacriloilxi-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de
metila
Massa isolada

2,5 mg

Nome IUPAC

(3aS,4S,5S,6E,10E,11aR)-methyl 5-acetoxy-4-(methacryloyloxy)-

(em ingls)

10-methyl-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11aoctahydrocyclodeca[b]furan-6-carboxylate

Frmula molecular

C22H26O8

Massa molecular

418

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

2,03

UV mx

210 nm

RMN H

Tab. D10, Fig. D28 pg. 72

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 419 [M + H]+ (16), 359 [M - C2H3O2]+ (93), 285

(100)
EM - EI

m/z (intensidade): 418 [M]+ (3), 358 [M - C2H4O2]+ (2), 69

[C4H5O]+ (100), 43 [C2H3O]+ (61)

D. Fitoqumica

118
3.1.3.6. LST 6
H

O
5'

14

7
8
9

6
10

5
9

10

1'

8
5

11

3'

3a

13

11a

15

1O

2'

11

4'

12

2
O

8-angeloilxi-14-oxo-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido
Massa isolada

4 mg

Nome IUPAC

(Z)-[(3aR,4R,6E,10E,11aR)-6-formyl-10-methyl-3-methylene-2-

(em ingls)

oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11a-octahydrocyclodeca[b]furan-4-yl] 2methylbut-2-enoate

Frmula molecular

C20H24O5

Massa molecular

344

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

2,26

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D11, Fig. D32 pg. 76

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 345 [M + H]+ (100), 245 [M - C5H7O2]+ (57), 83

[C5H7O]+ (43)
EM - EI

m/z (intensidade): 244 [M - C5H8O2]+ (8), 83 [C5H7O]+ (100)

D. Fitoqumica

119
3.1.3.7. LST 7
1''
O

O
4'

14

7
8
9

6
10

5
9

10

1'

3
4

11

3a

13

11a

15

3'

1O

2'

11

12

2
O

8-metacriloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
Massa isolada

2,5 mg

Nome IUPAC

(3aR,4R,6E,10E,11aR)-methyl 4-(methacryloyloxy)-10-methyl-3-

(em ingls)

methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11a-octahydrocyclodeca[b]furan-6carboxylate

Frmula molecular

C20H24O6

Massa molecular

360

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

3,46

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D12, Fig. D36 pg. 80

RMN 13C

Tab. D12, Fig. D37 pg. 81

Fig. D38 pg. 82

H-1H gCOSY

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 361 [M + H]+ (100)

EM - EI

m/z (intensidade): 360 [M]+ (1), 291 [M - C4H5O]+ (1), 69 [C4H5O]+

(100)

D. Fitoqumica

120
3.1.3.8. LST 8 (Polimatina B)
1'''
2''

O
14

7
8
9

6
10

5
9

10

5'

O
1'

8
5

1''

11

3'

3a

13

11a

15

1O

2'

11

4'

12

2
O

8-angeloilxi-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-oato de metila
Massa isolada

3 mg

Nome IUPAC

(3aS,4S,5S,6E,10E,11aR)-methyl 5-acetoxy-10-methyl-4-[(Z)-2-

(em ingls)

methylbut-2-enoyloxy]-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11aoctahydrocyclodeca[b]furan-6-carboxylate

Frmula molecular

C23H28O8

Massa molecular

432

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

3,48

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D13, Fig. D43 pg. 87

13

RMN C

Tab. D13, Fig. D44 pg. 88

gHSQCR

Fig. D45 pg. 89

gHMQCR

Fig. D46 pg. 90

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 433 [M + H]+ (100), 373 [M - C2H3O2]+ (26), 83

[C5H7O]+ (21)
EM - EI

m/z (intensidade): 83 [C5H7O]+ (100), 43 [C2H3O]+ (11)

D. Fitoqumica

121
3.1.3.9. LST 9
HO

O
5'

14

7
8
9

10

10

1'

8
5

11

3'

3a

13

11a

15

1O

2'

11

4'

12

cido 8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12-olido-14-ico
Massa isolada

145 mg

Nome IUPAC

(3aR,4R,6E,10E,11aR)-10-methyl-4-[(Z)-2-methylbut-2-enoyloxy]-

(em ingls)

3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11a-octahydrocyclodeca[b]furan6-carboxylic acid

Frmula molecular

C20H24O6

Massa molecular

360

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

4,12

UV mx

210 nm

RMN 1H

Tab. D14, Fig. D47 pg. 93

13

RMN C

Tab. D14, Fig. D48 pg. 94

Fig. D49 pg. 95

H-1H gCOSY

EM - CI (Iso)

m/z (intensidade): 361 [M + H]+ (100), 261 [M - C5H7O2]+ (70),

101 [H2O + C5H7O]+ (10), 83 [C5H7O]+ (28)

EM - EI

m/z (intensidade): 83 [C5H7O]+ (100)

EM alta resoluo - ES

m/z (intensidade): 361.164565 [M + H]+

D. Fitoqumica

122
3.1.3.10. LST 10 (Dmero de melampolidos)
1'''

14

10b

7a

2''

1''''

11

O
15

5'

14

8
7
O

12

4''''

3''''

2''''

13

10a
11

OH

5''''

1''

10

4
3

8
9

1
2

6
10

5
9

10

3a

1O

2'
3'

11
11a

15

1'

13
11
12

4'

2
O

4,5-epxi-8-[2S-hidrxi-3R-xi-(8-angeloilxi-germacra-1(10)Z,4E,11(13)-trien-6,12olido)]-9-acetoilxi-germacra-1(10)Z,11(13)-dien-6,12-olido-14-oato de metila
Massa isolada

10 mg

Nome IUPAC

(1aR,6S,7S,7aR,10aS,10bS,E)-methyl 6-acetoxy-7-{(3R)-2-

(em ingls)

hydroxy-2-methyl-3-[(3aR,4R,6E,10E,11aR)-10-methyl-4-((Z)-2methylbut-2-enoyloxy)-3-methylene-2-oxo-2,3,3a,4,5,8,9,11aoctahydrocyclodeca[b]furan-6-carbonyloxy]-butanoyloxy}-1amethyl-8-methylene-9-oxo-1a,2,3,6,7,7a,8,9,10a,10b-decahydro-11oxa-bicyclo[8.1.0]undeca-1(10),4-dieno[9,8-b]furan-5-carboxylate

Frmula molecular

C43H52O16

Massa molecular

824

Forma macroscpica

Slido branco

trr1 (CLAE)

2,66

UV mx

225 nm

RMN H

Tab. D15, Fig. D55 pg. 101

RMN 13C

Tab. D15, Fig. D56 pg. 102

gHSQCR

Fig. D57 pg. 103

gHMQCR

Fig. D58 e D59 pg. 104 e 105

123
1

H-1H gCOSY

D. Fitoqumica

Fig. D60 pg. 106

EM - APCI

m/z (intensidade): 842 [M + H20]+ (100)

EM - EI

m/z (intensidade): 724 [M - C5H8O2]+ (3), 83 [C5H7O]+ (100), 43

[C2H3O]+ (47)
EM - ESI

m/z (intensidade): 847 [M + Na]+ (100), 765 [M - C2H3O2]+ (66),

747 [M + Na - C5H8O2]+ (100)

EM alta resoluo - ES

m/z (intensidade): 825.33281 [M + H]+ (100), 847.31476 [M + Na]+

D. Fitoqumica

124

3.2. Avaliao espectroscpica de extratos de folhas com e sem

tricomas glandulares
120

glandulares pulverizadas foram submetidos

100

anlise espectroscpica na regio do IV (Fig.

80

Nos

trs

extratos,

etanlico,

hexnico,

observa-se

diclorometnico
bandas

de

absoro

caractersticas

de

60

40

1730

D69).

% transmitncia

Os extratos de folhas sem tricomas

20

estiramento de carbonila de steres e bandas

-1

de estiramento C-H entre 2.850 e 2.960 cm .

4000

3500

3000

2500

2000

1500

1000

500

1000

500

1000

500

-1

No espectro do extrato etanlico aparece uma

comprimento de onda (cm )

banda de estiramento do grupo -OH de lcoois

e fenis entre 3.600 e 3.200 cm-1.

100

carbonila de lactonas no foram observadas,

80

uma vez que essas so compartimentalizadas

nos tricomas glandulares. Essa comprovao
pode ser mais um indicativo de que as LSTs
participam

positivamente

das

% transmitncia

Bandas de absoro de estiramento de

1730

120

60

40

20

atividades

biolgicas do ch das folhas. O infuso ou

4000

3500

3000

2500

2000

1500
-1

decoto preparados com as folhas ntegras so

comprimento de onda (cm )

processos que promovem a extrao do

glandular.

Isso

se

comprovou

100

observando as folhas sob estereomicroscpio

processos. Os tricomas glandulares foram
totalmente solubilizados na gua quente em
ambos os casos. A anlise do infuso e decoto
por meio de CLAE tambm comprovou este
fato,

uma

vez

que

os

cromatogramas

apresentaram perfis semelhantes aos daqueles

dos extratos glandulares, ou seja, apesar da
compartimentalizao os chs possuem LSTs.

80

% transmitncia

antes e aps serem submetidas a estes

1730

contedo

60

40

20

0
4000

C
3500

3000

2500

2000

1500
-1

comprimento de onda (cm )

Figura D69. Espectros na regio do IV (filme em CHCl3) de

extratos de folhas de S. sonchifolius sem tricomas
pulverizadas. A: extrato etanlico; B: extrato
diclorometnico; C: extrato hexnico.

D. Fitoqumica

125

3.3. Extrato glandular de S. sonchifolius e caracterizao dos picos

Tricomas glandulares de folha de S. sonchifolius #101 foram manualmente coletados
sob estereomicroscpio, solubilizados em MeOH/H2O e perfis cromatogrficos analticos
foram obtidos por meio de CLAE em coluna de fase reversa (Fig. D70). No perfil
cromatogrfico possvel identificar as LSTs isoladas do extrato de lavagem foliar da
populao #130. Alguns dados cromatogrficos foram calculados e apresentados na tabela
D17.
25

25

1
20

20

15

15

mAU

2
10

10

3
9

10

10

20

30
Minutos

40

50

60

15

15

B
1
10

mAU

10

2
5

10

20

30
Minutos

40

50

60

Cromatograma D70. Cromatogramas dos tricomas glandulares de folhas de S. sonchifolius A, sistema 1MeOH/H2O 55:45; 1 mL/min; 225 nm; coluna C-18; DMP = 14,421 min; B, sistema 2 CH3CN/H2O
35:65; 1,3 mL/min; 225 nm; coluna C-18; DMP = 15,306 min.

126

D. Fitoqumica

Tabela D17. Dados cromatogrficos e espectroscpicos das LSTs do extrato glandular de S. sonchifolius
#101.
trr1/trr2
LST
UV mx
0,67/1,75
210
1
1,32/3,12
210
2
1,40/1,84
210
3
1,54
210
4
2,03
210
5
2,26
210
6
3,46
210
7
3,48
210
8
4,12
210
9
2,66
225
10

Os resultados confirmam mais uma vez que as LSTs so compartimentalizadas, porm

isso no impede a sua extrao mesmo por formas simples de preparo como decoto e infuso.

D. Fitoqumica

127

4. BIBLIOGRAFIA
Alfaro, M.E.C. e Melgarejo, S.A.V., 2005. El Yacn: Una Nueva Alternativa en la
Prevencin y Tratamiento de la Salud. Urbanizacin Parque Industrial

Manzana,Trujillo, Per.
Allinger, N.L., 1977. Conformational analysis .130. MM2 - hydrocarbon force-field utilizing
V1 and V2 torsional terms. Journal of the American Chemical Society. 99: 81278134.
Aybar, M.J.; Riera, A.N.S.; Grau, A.; Sanchez, S.S., 2001. Hypoglycemic effect of the water
extract of Smallantus sonchifolius (yacon) leaves in normal and diabetic rats. Journal
of Ethnopharmacology. 74: 125-132.

Bardn, A.; Cardona, L.; Cartagena, E.; Catalan, C.A.N.; Pedro, J.R., 2001. Melampolides
from Enydra anagallis. Phytochemistry. 57: 125-130.
Bohlmann, F., 1990. Chemistry of the Heliantheae (Compositae). Plant Systematics and
Evolution. 67-75.

Bohlmann, F.; Jakupovic, J.; Schuster, A.; King, R.M.; Robinson, H., 1985. Homogeranyl
nerol derivatives and a melampolide from Smallanthus glabratus. Phytochemistry.
24: 1309-1313.
Bohlmann, F.; Zdero, C.; King, R.M.; Robinson, H., 1981a. Germacranolides, a guaianolide
with

b-lactone

ring

and

further

constituents

from

Grazielia

species.

Phytochemistry. 20: 1069-1075.

Bohlmann, F.; Zdero, C.; King, R.M.; Robinson, H., 1981b. Naturally-occurring terpene
derivatives .318. Germacranolides, a guaianolide with a beta-lactone ring and further
constituents from Grazielia species. Phytochemistry. 20: 1069-1075.
Bohlmann, F.; Ziesche, J.; King, R.M.; Robinson, H., 1980. Naturally-occurring terpene
derivatives .260. New melampolides from Smallanthus fruticosis. Phytochemistry.
19: 973-974.

128

D. Fitoqumica

Bremer,K., 1994. Asteraceae - cladistics and classification. Timber Press. Portland, Oregon.
Carvalho, S.; Toledo, I.; Arajo, F.; Pereira, G., 2004. Fructans in the tuberous roots of yacon
(Smallanthus sonchifolius Poepp. & Endl.) exposed to sunlight and stored under
natural conditions. Agro-Ciencia. 20: 17-23.
Castro, V.; Jakupovic, J.; Dominguez, X.A., 1989. Melampolides from Melampodium and
Smallanthus species. Phytochemistry. 28: 2727-2729.

Coll, J.C.; Bowden, B.F., 1986. The application of vacuum liquid chromatography to the
separation of terpene mixtures. Journal of Natural Products. 49: 934-936.
Da Costa, F.B.; Schorr, K.; Arakawa, N.S.; Schilling, E.E.; Spring, O., 2001. Infraspecific
variation in the chemistry of glandular trichomes of two Brazilian Viguiera species
(Heliantheae; Asteraceae). Journal of the Brazilian Chemical Society. 12: 403-407.
DePedro, A.; Cuenca, M.R.; Grau, A.; Catalan, C.A.N.; Gedris, T.E.; Herz, W., 2003.
Melampolides from Smallanthus macroscyphus. Biochemical Systematics and
Ecology. 31: 1067-1071.

Dewar, M.J.S.; Dieter, K.M., 1986. Evaluation of AM1 calculated proton affinities and
deprotonation enthalpies. Journal of the American Chemical Society. 108: 80758086.
Dewar, M.J.S.; Zoebisch, E.G.; Healy, E.F.; Stewart, J.J.P., 1985. A new general purpose
quantum mechanical molecular model. Journal of the American Chemical Society.
107: 3902-3909.
Dip., M.R., 1986. Conferncia:Estruturas secretoras de rgos vegetativos de yacon
(Polymnia sonchifolia - Asteraceae).

Emerenciano, V.P.; Rodrigues, G.V.; Macari, P.A.T.; Vestri, S.A.V.; Borges, J.H.G.;
Gastmans, J.P.; Fromanteau, D.L.G., 1994. Applications d'intelligence artificielle dans
la chimie organique. XVII. Nouveaux programmes du projet SISTEMAT.
Spectroscopy. 12: 91-98.

129

D. Fitoqumica

Estrella, J.E.; Lazarte, J.E., 1994. In vitro propagation of jicama (Polymnia sonchifolia
Poeppig and Endlicher) - a neglected Andean crop. Hortscience. 29: 331-331.
Grau,A.; Rea,J., 1999. Yacon. Smallanthus sonchifolius (Poepp. & Endl.) H. Robinson. In
Promoting the conservation and use of underutilized and neglected crops. 199-

242.
Hashidoko, Y.; Urashima, M.; Yoshida, T.; Mizutani, J., 1993. Decarboxylative conversion of
hydroxycinnamic acids by Klebsiella oxytoca and Erwinia uredovora, epiphytic
bacteria of Polymnia sonchifolia leaf, possibly associated with formation of microflora
on the damaged leaves. Bioscience Biotechnology and Biochemistry. 57: 215-219.
Hwang, D.; Fischer, N.H.; Jang, B.C.; Tak, H.; Kim, J.K.; Lee, W., 1996. Inhibition of the
expression of inducible cyclooxygenase and proinflammatory cytokines by
sesquiterpene lactones in macrophages correlates with the inhibition of MAP kinases.
Biochemical & Biophysical Research Communications. 226: 810-818.

Inoue, A.; Tamogami, S.; Kato, H.; Nakazato, Y.; Akiyama, M.; Kodama, O.; Akatsuka, T.;
Hashidoko, Y., 1995. Antifungal melampolides from leaf extracts of Smallanthus
sonchifolius. Phytochemistry. 39: 845-848.

Kakuta, H.; Seki, T.; Hashidoko, Y.; Mizutani, J., 1992. Ent-kaurenic acid and its relatedcompounds from glandular trichome exudate and leaf extracts of Polymnia
sonchifolia. Bioscience Biotechnology and Biochemistry. 56: 1562-1564.

Kawashima, S.; Sakato, M.; Terada, S.; Koide, Y.; Tanaka, M.; Ko, M., 2001. Antidiabetic
agents containing lactones. JP 2001247461. Kokai Tokkyo Koho, Japo.

Kijoa, A.; Bastos, M.M.S.M.; Gedris, T.E.; Herz, W., 1993. Melampolides and
germacranolides from Blainvillea gayana. Phytochemistry. 32: 383-385.
Lin, F.Q.; Hasegawa, M.; Kodama, O., 2003. Purification and identification of antimicrobial
sesquiterpene lactones from yacon (Smallanthus sonchifolius) leaves. Bioscience
Biotechnology and Biochemistry. 67: 2154-2159.

130

D. Fitoqumica

Nieto, C., 1991. Agronomic and bromatological studies in jicama (Polymnio sonchifolia,
Poepp et Endl). Archivos Latinoamericanos de Nutricion. 41: 213-221.
Ohyama, T.; Ito, O.; Yasuyoshi, S.; Ikarashi, T.; Minamisawa, K.; Kubota, M.; Tsukihashi,
T.; Asami, T., 1990. Composition of storage carbohydrate in tubers of yacon
(Polymnia sonchifolia). Soil Science and Plant Nutrition. 36: 167-171.
Pelletier, S.W.; Chokshi, H.P.; Desai, H.K., 1986. Separation of diterpenoid alkaloid mixtures
using vacuum liquid chromatography. Journal of Natural Products. 49: 892-900.
Picman, A.K.; Ranieri, R.L.; Towers, G.H.N.; Lam, J., 1980. Visualization reagents for
sesquiterpene lactones and polyacetylenes on thin-layer chromatograms. Journal of
Chromatography. 189: 187-198.

Robinson, H., 1978. Studies in the Heliantheae (Asteraceae). XII. Re-establishment of the
genus Smallanthus. Phytologia. 39: 47-53.
Schorr,K., 2001. Tese/Diss.: Perfil fitoqumico de tricomas glandulares de espcies de
Viguiera e Polymnia sonchifolia (Asteraceae): uso como ferramenta para
quimiotaxonomia e controle de qualidade de plantas. Faculdade de Cincias

Farmacuticas de Ribeiro Preto da Universidade de So Paulo.

Simonovska, B.; Vovk, I.; Andrensek, S.; Valentova, K.; Ulrichova, J., 2003. Investigation of
phenolic acids in yacon (Smallanthus sonchifolius) leaves and tubers. Journal of
Chromatography A. 1016: 89-98.

Spring,O., 1991. Trichome microsampling of sesquiterpene lactones for the use of systematic
studies. In Recent advances in Phytochemistry, Modern Phytochemical Methods.
Plenum Press. New York. Ed. 1. 319-345.
Spring,O.; Buschmann,H., 1994. A chemotaxonomic survey of sesquiterpene lactones in the
Helianthinae (Compositae). In Compositae: systematics. Proceedings of the
International Compositae Conference. Kew, UK. Ed. 1. 307-311.
Still, W.C.; Kahn, M.; Mitra, A., 1978. Rapid chromatographic technique for preparative
separations with moderate resolution. Journal of Organic Chemistry. 43: 2923-2925.

D. Fitoqumica

131

Tak, H.Y.; Fronczek, F.R.; Vargas, D.; Fischer, N.H., 1994. Assignments of the

13

C NMR

spectra of enhydrin and 2',3'-dehydromelnerin A and the molecular structure of

enhydrin. Spectroscopy Letters. 27: 1481-1488.
Takasugi, M.; Masuda, T., 1996. Studies on stress metabolites .22. Three 4'hydroxyacetophenone-related

phytoalexins

from

Polymnia

sonchifolia.

Phytochemistry. 43: 1019-1021.

Valentov, K.; Cvak, L.; Muck, A.; Ulrichov, J.; Simanek, V., 2003. Antioxidant activity of
extracts from the leaves of Smallanthus sonchifolius. European Journal of Nutrition.
42: 61-66.
Valentov, K.; Frcek, J.; Ulrichov, J., 2001. Yacon (Smallanthus sonchifolius) and maca
(Lepidium meyenii), traditional Andean crops as new functional foods on the European
market. Chemicke Listy. 95: 594-601.
Valentov, K.; Moncion, A.; de Waziers, I.; Ulrichov, J., 2004. The effect of Smallanthus
sonchifolius leaf extracts on rat hepatic metabolism. Cell Biology and Toxicology.

20: 109-120.
Valentov, K.; Ulrichov, J., 2003. Smallanthus sonchifolius and Lepidium meyenii prospective Andean crops for the prevention of chronic diseases. Biomedical Papers.
147: 119-130.
Wells, J.R., 1965. A taxonomic study of Polymnia (Compositae). Brittonia. 17: 144-159.
Zamyatina, A.Y.; Shvets, V.I., 1995. The synthesis of 1-O-(2-N-stearoyl-D-erythrosphinganine-1-phosphoryl)-2-O-

(alpha-D-mannopyranosyl-D-myo-inositol:

fragment of the naturally occurring inositol-containing glycophosphosphingolipids.

Chemistry and physics of lipids. 76: 225-240.

Zardini, E., 1991. Ethnobotanical notes on yacon, Polymnia sonchifolia (Asteraceae).

Economic Botany. 45: 72-85.