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6, 1500-1503, 2009
Artigo
VALIDATION OF METHODOLOGY FOR THE CHEMICAL CHARACTERIZATION OF SUGAR CANE BAGASSE. In this
work, a methodology for the characterization of sugar cane bagasse was validated. Bagasse pre-treated with steam in a 5000 L
reactor at a pressure of 15.3 kgf/cm2, during 7 min, was used to test the methodology. The methodology consisted of the hydrolysis
of the material with H2SO4 at 72% v/v, for the quantification of carbohydrates, organic acid, furfural and hydroxymethylfurfural by
HPLC; insoluble lignin and ash by gravimetry; and soluble lignin by spectrophotometry. Linearity, repeatability, reproducibility and
accuracy of the results obtained in two Research Laboratories were determined, and were considered to be suitable for the validation
of the methodology.
Keywords: bagasse; HPLC; validation.
INTRODUO
Materiais lignocelulsicos na forma de biomassa de plantas,
como o bagao de cana-de-acar, so os mais abundantes complexos orgnicos de carbono e so constitudos, principalmente, de trs
componentes: celulose, hemicelulose e lignina.1 O bagao de canade-acar, para a maior parte dos pases tropicais, um dos principais
materiais lignocelulsicos utilizados para a bioconverso em etanol,
j que estes materiais apresentam alta concentrao de carboidratos,
baixo contedo relativo de lignina, fcil utilizao, baixo custo de
colheita, transporte e armazenagem.2
A metodologia utilizada para a determinao da composio qumica do material de extrema importncia em estudos de valorizao
de materiais lignocelulsicos. Em particular, o desenvolvimento de
processos para a produo de etanol a partir da biomassa da canade-acar envolve a otimizao, de forma integrada, de diversas
etapas: pr-tratamento, hidrlise e fermentao dos hidrolisados.
Para a avaliao da eficincia de diferentes processos alternativos,
fundamental uma caracterizao precisa da composio qumica da
biomassa durante a sua converso nas diferentes etapas envolvidas.
Para a caracterizao qumica de lignocelulsicos geralmente
utilizada uma hidrlise cida com cido sulfrico. Assim, ocorre uma
despolimerizao do polissacardeo, formando oligmeros e seus
acares constituintes, isto , suas unidades repetitivas. No caso da
hemicelulose, as maiores fraes so de xilose, cido actico e furfural. J para a celulose, so formados glicose e hidroximetilfurfural
(HMF) que, por sua vez, pode ser convertido a cido frmico.3
O objetivo deste trabalho foi a validao da metodologia para
a caracterizao qumica de bagao de cana-de-acar, quanto aos
teores de celulose, hemicelulose e lignina. A metodologia analtica
aqui avaliada foi descrita por Rocha et al.4 e tem sido utilizada rotineiramente nos laboratrios do Departamento de Biotecnologia da Escola
de Engenharia de Lorena (EEL/USP) para anlises de gramneas, tais
como bagao e palha de cana-de-acar. No presente trabalho, esta
metodologia foi validada, atravs da anlise de resultados de caracterizao de uma mesma amostra de bagao obtidos por 2 laboratrios:
pelo Departamento de Biotecnologia da EEL e pelo Laboratrio
*e-mail: estergouveia@gmail.com
destilada. Os erlenmeyers foram fechados com papel alumnio e autoclavados por 30 min a 121C. Aps a descompresso da autoclave, os
frascos foram retirados e resfriados temperatura ambiente, sendo a
frao slida separada da frao lquida por filtrao em papel de filtro
qualitativo. A frao lquida foi transferida para balo volumtrico de
500 mL, o qual teve o seu volume posteriormente completado com
gua destilada. A soluo foi armazenada para anlises posteriores de
carboidratos, cidos orgnicos, furfural, HMF e lignina solvel.
Determinao de lignina insolvel na frao slida
Lignina insolvel foi determinada de acordo com o mtodo
Klasson modificado por Rocha et al..4 O material retido no papel de
filtro foi lavado com 1500 mL de gua destilada, transferido para
pesa-filtros para secagem em estufa a 100 C at massa constante. A
percentagem de lignina insolvel foi calculada em relao massa
de amostra seca conforme a Equao 1:
(1)
1501
(3)
Clig = 4,187*10-2(AT-Apd)-3,279*10-4
(2)
A validao do mtodo de caracterizao foi obtida pela determinao dos parmetros: linearidade, repetibilidade, reprodutibilidade
e exatido, utilizando os Programas Microsoft Office Excel 2007 e
Microcal Origin 6.0. A anlise da varincia tambm foi realizada
utilizando estes programas.
RESULTADOS E DISCUSSO
Linearidade
Gouveia et al.
1502
Quim. Nova
Laboratrio B
Celobiose
3,44106
1,000
3,43106
3,34103
0,997
Glicose
3,1210
0,999
2,8110
9,1910
0,997
Xilose
2,9410
1,000
2,7710
4,1310
0,997
Arabinose
3,2510
1,000
2,8110
2,4910
0,998
cido frmico
1,20105
0,999
9,67104
9,18102
0,997
cido actico
1,8410
0,999
1,4810
9,5710
0,996
HMF
1,2410
0,990
310
1,0210
1,000
Furfural
1,6910
0,998
510
3,9110
1,000
5
5
5
5
5
5
5
5
3
3
2
3
Analista 2
Celulose (%)
Hemicelulose (%)
Celulose (%)
Hemicelulose (%)
49,99
8,06
33,55
50,42
7,93
34,93
48,00
7,86
33,84
49,63
7,89
34,85
46,50
8,09
34,63
48,94
8,00
33,98
Mdia
48,16
8,00
34,01
49,66
7,94
34,59
1,43
0,10
0,46
0,60
0,04
0,43
CV
2,97
1,28
1,34
1,22
0,57
1,24
Hemicelulose
(%)
Lignina Total
(%)
48,2
8,8
34,9
47,3
9,8
34,5
47,6
8,2
33,5
Mdia
47,7
8,9
34,3
0,37
0,66
0,59
CV
0,78
7,39
1,72
Experimentos
Reprodutibilidade
A reprodutibilidade designa a fidelidade entre laboratrios,
geralmente obtida em anlises colaborativas. A principal funo da
reprodutibilidade confirmar se determinada metodologia pode ou
no ser transferida de um laboratrio para outro, gerando resultados
confiveis dentro dos critrios estabelecidos. Assim, enquanto o termo
repetibilidade se refere preciso intralaboratorial, a reprodutibilidade se refere preciso interlaboratorial.6
A reprodutibilidade foi avaliada entre ambos os laboratrios pela
anlise da varincia (Tabela 4). O nvel de significncia, no presente
trabalho considerado 95%, a probabilidade de se rejeitar a hiptese
que as medidas no sejam significativamente diferentes, quando
a probabilidade (p-valor) for menor ou igual a 0,05.8 Como pode
ser observado na Tabela 4, as medidas de celulose, hemicelulose e
lignina na amostra de bagao pr-tratado com vapor, realizadas nos
dois laboratrios, no foram significativamente diferentes, uma vez
que as probabilidades (p-valor) foram maiores que 0,05.
Os termos Entre Grupos e Dentro dos Grupos referem-se forma
como foram analisados os dados, ou seja, a comparao das medidas em cada laboratrio (Dentro dos Grupos) e as medidas entre os
laboratrios (Entre Grupos). Nas medidas da celulose, as variaes
em cada laboratrio e entre os laboratrios foram semelhantes. No
caso da hemicelulose, as variaes tambm foram semelhantes, tanto
em cada laboratrio, como entre os laboratrios, mas cerca de quatro
vezes menores, que aquelas encontradas nas medidas da celulose. As
variaes das medidas da lignina foram cerca de trs vezes menores
em cada laboratrio que as variaes nas medidas da celulose. Por
outro lado, as variaes entre os laboratrios foram cerca de quatorze
vezes menores em variaes que as medidas da celulose.
Exatido
A exatido expressa a concordncia entre o valor encontrado
1503
Tabela 4. Reprodutibilidade obtida para celulose, hemicelulose e lignina total entre ambos laboratrios
Fonte de variao
Soma quadrtica
Graus de liberdade
Mdia quadrtica
p-valor
CELULOSE
Entre grupos
6,32
3,16
7,65
1,27
Entre grupos
1,86
0,93
1,34
0,22
2,48
0,16
HEMICELULOSE
4,14
0,07
0,68
0,54
LIGNINA TOTAL
Entre grupos
0,50
0,25
2,22
0,37
REFERNCIAS
Laboratrio A
Analista 1
Laboratrio B
Analista 2
Analista
98,20
99,88
97,4
96,30
98,97
97,1
95,82
97,52
95,0
CONCLUSES
O mtodo de caracterizao do bagao de cana-de-acar apresentou excelente linearidade, repetibilidade, reprodutibilidade e exatido,
sendo possvel a sua utilizao em dois diferentes laboratrios. A
validao deste mtodo traz um importante avano para as pesquisas
com materiais lignocelulsicos, como a produo de etanol a partir
do bagao de cana-de-acar.
1. Badhan, A. K.; Chadha, B. S.; Kaur, J.; Saini, H. S.; Bhat, M. K.; Bioresour. Technol. 2007, 98, 504.
2. Pandey, A.; Soccol, C. R.; Nigam, P.; Soccol, V.; Bioresour. Technol.
2000, 74, 69.
3. Palmqvist, E.; Hahn-Hagerdal, B.; Bioresour. Technol. 2000, 74, 25.
4. Rocha, G. J. M.; Silva, F. T.; Curvelo, A. A. S; Arajo, G. T.; Resumos
do 5th Brazilian Symposium on the Chemistry of Lignins and Other Wood
Components, Paran, Brasil, 1997.
5. Ohgren, K.; Bura, R.; Saddler, J.; Zacchi, G.; Bioresour. Technol. 2007,
98, 2503.
6. Lanas, M.; Validao de mtodos cromatogrficos de anlise, Rima:
So Paulo, 2004.
7. http://www.epa.gov/SW-846/pdfs/methdev.pdf, acessada em Dezembro
2007.
8. Rodrigues, M. I.; Iemma, A. F.; Planejamento de Experimentos e
Otimizao de Processos, Casa do Po: So Paulo, 2005.
9. Rocha, G. J. M.; Silva, J. S.; Resumos do XVI Congresso Brasileiro de
Engenharia Qumica, So Paulo, Brasil, 2006.