Boletín Científico Vol.1 N - 2

UNIVERSIDAD RICARDO
PALMA
Laboratorio de Microbiologa
Volumen 1, N1
Diciembre, 2014
Boletn
Cientfico
http://www.urp.edu.pe/biologia/index.php?urp=Laboratorios
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Volumen 1, n2
Boletn Cientfico
Decano
Dr. Toms Agurto Saenz
Director
Blgo. Alcides Guerra Santa Cruz
Editor General
Santiago Justo Arvalo
Editor de Estilo
Paola Nunja Huamn
Editor Cientfico
Marlon Morales Moisela
Comit Editor
Tania Churasacari Vinces
Cindy Cajachagua Pucuhuaranga
Diego Santiago Bravo
Carla Saldaa Serrano
Luis Pabn Rodrguez
Miguel Gonzles Olivos
Mario Aguayo Cerna
Pavel Pastrana Sumari
Miguel Morales Campos
Claudia Monge Pimentel
Miguel Montero Orozco
Roma Ballena Palomino
1 ed., 1 impresin, diciembre 2014

Hecho el Deposito Legal en la Biblioteca Nacional del Per N 2014-19353
Editado por:
Santiago Justo Arvalo
Av. Malecon Asent. H. Nuevo Luriin Mz. A5 Lt. 01, LurinLima
Impreso en:
Impreso en la Universidad Ricardo Palma,
Av. Benavides 5440, Santiago de Surco
Diciembre, 2013
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Volumen 1, n2
Contenido
Editorial
Presentacin.03
Editorial....04
Actividades del Laboratorio

Difusin y Exposicin de Trabajos de Investigacin
URP presente en el IV CONCIMAR .......05
Encuentro Cientfico de invierno internacional 2014 (ECI) .....05
Curso-Taller de Redaccin Cientfica .............06
Ciclo de conferencias: Inmunidad y Cncer........07
Proyeccin Social con alumnos del Colegio EUROAMERICANO........08
Reunin de Integracin con los Padres de Familia..............09
Primera capacitacin de Interciclo-2014 ........10
Integrantes Demuestran lo Aprendido en Importantes Laboratorios.....11
Visita de estudios a Petrams: Empresa 100% Peruana......12
Artculos de Divulgacin
Virus contra Bacterias... ........13

Protenas Recombinantes.. ........14
Artculos de Investigacin
Actividad antimicrobiana del extracto acetona-agua de Macrocystis pyrifera (C.
Agardh 1820) en bacterias de importancia clnica ....15
Determinacin de Gneros Bacterianos en el Mar de la Playa Cantolao - La Punta Callao ...20
Efecto antibitico de Piocianina de Pseudomonas aureginosa sobre Escherichia coli y
Staphylococcus aureus .............24
MiniReview
Aspectos generales de la crianza de Cuy y su agente infeccioso: Salmonella....28
Fundamentos bsicos de PCR convencional y sus variantes.......34
Integracin de la Biotecnologa Bacteriana y la Ingeniera Gentica de Plantas......43
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Volumen 1, n2
Editorial
Presentacin
Les presentamos el segundo nmero del Boletn Cientfico del Laboratorio de
Microbiologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Ricardo
Palma. En esta nueva edicin tenemos el placer de informarles acerca de las
actividades realizadas en el presente ao, donde se incluyen cursos,
capacitaciones, artculos de divulgacin, trabajos de investigacin y artculos de
revisin; todo esto realizado por integrantes del laboratorio con el nico deseo
de hacer la mejor ciencia posible. Actualmente, la intedisciplinariedad de la
ciencia hace necesario que trabajemos en conjunto con otras reas, es por esto
que el divulgar e informar sobre las actividades que se realicen en un
determinado lugar no solo sirve para dar a conocer las labores de un equipo,
sino pretende adems ampliar horizontes a travs de la formacin de nuevos
nexos con otras instituciones y equipos para as mejorar e integrar los
conocimientos adquiridos; as, si cada uno aporta de un punto de vista diferente,
los logros se hacen ms completos y tiles. Les reiteramos nuestros saludos y
les deseamos mucho xito en todas las reas que se desempeen y trabajos que
realicen, recuerden que todo esfuerzo tiene su recompensa.
Equipo de Investigacin del Laboratorio de Microbiologa
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Volumen 1, n2
Editorial
El Microbilogo
Dr. Toms Agurto Senz
Decano de la Facultad de Ciencias Biolgicas
Profesor Principal en la Ctedra de Microbiologa
En un libro titulado los cazadores de microbios se
relata de los trabajos de cientficos que querrn
saber y demostrar el porqu de las enfermedades del
humano, en animales y plantas. Robert Koch,
postulaba que una infeccin es producida por un
agente a quien hay que encontrarlo y este agente
debe reproducir el mismo mal al ser inoculado en un
animal, eso es lo que se hace ahora, se mira cara a
cara a las colonias crecidas en una placa Petri y bajo
el microscopio se puede definir su forma,
coloracin; as como mediante pruebas bioqumicas
y moleculares se puede determinar su composicin
qumica y su metabolismo, logrando una mejor
identificacin de bacterias, hongos, y virus que
pueblan el mundo, en el suelo, agua, aire. Existen
especies no patgenas, en las que se explora sus
actividades metablicas para transformar y elaborar
una serie de productos que se industrializan, los

antibiticos que ocupan un alto lugar en produccin
industrial; los alimentos, cada vez ms
transformados, conservados, para que sean idneos
e inocuos. En los ciclos biolgicos intervienen las
bacterias y en la cadena alimenticia son las
iniciadoras de los procesos metablicos, as, se
puede decir que los microrganismos son los
verdaderos responsables para que la vida exista y
este en desarrollo continuo y aqu en el laboratorio
de microbiologa un grupo entusiasta, activo,
guardan por ser maestros en dar accin a los
microorganismo
con
sendos
trabajos
de
investigacin ya al paso de crear el curso y la
especializacin en gentica bacteriana.
Jvenes sigan adelante, el xito depende de ustedes.
Dr. Toms Agurto Senz
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Volumen 1, n2
Actividades
Difusin y Exposicin de
Trabajos de Investigacin
Con la finalidad de difundir y discutir los resultados de las
ltimas investigaciones relacionadas a los diversos aspectos de
las ciencias del Mar realizadas por investigadores y estudiantes
universitarios en nuestro pas, se llev cabo el IV Congreso de
Ciencias del Mar (IV CONCIMAR). Este importante evento,
realizado en el mes de Junio en la Universidad Peruana
Cayetano Heredia, estuvo dirigido a la comunidad acadmica,
cientfica y empresarial nacional e internacional, as como al
sector pesquero y a sus representantes.
El equipo de investigacin del Laboratorio de Microbiologa se
hizo presente con
el tema Determinacin de Gneros
Bacterianos en el Mar de la Playa Cantolao La Punta
Callao, el cual tuvo el principal objetivo de expandir y motivar
los trabajos en el rea de microbiologa marina para sus
aplicaciones ecolgicas y biotecnolgicas.
ENCUENTRO CIENTIFICO
DE INVIERNO
INTERNACIONAL 2014
(ECI)
URP presente en el IV
CONCIMAR
Santiago Justo Arvalo y Luis David

Pabn presentando el panel
Determinacin de gneros bacterianos
en el Mar de la Playa Cantolao
En este invierno 2014 la Facultad de Ciencias Biolgicas

tuvo el honor de ser la sede de la sesin de Biologa del ECI
2014. Esta se llev a cabo en el auditorio Biotempo con la
direccin del Prof. Alcides Guerra. Nuestro laboratorio
manifest su presencia a travs de la presentacin de 3
trabajos de investigacin: Determinacin de Gneros
Bacterianos en el Mar de la Playa Cantolao La Punta
Callao, Extraccin y Actividad Antimicrobiana del
Pigmento Piocianina de 8 cepas de Pseudomonas
aeruginosa y Actividad Antibacteriana del Extracto
Acetona-Agua de Macrocystis pyrifera (C. Agardh 1820) en
Bacterias de Importancia Clnica
La jornada se realiz con xito con la presencia de
estudiantes de varias universidades del pas, adems en toda
nuestra universidad se expusieron trabajos de investigacin
relacionados a otras reas de la ciencia.
Marlon Morales Moisela en su exposicin del

tema: Actividad antibacteriana del Extracto
Acetona-Agua de Macrocystis pyrifera (C. Agardh
1820) en Bacterias de Importancia Clnica
En el ao 2015 se realizar el ECI de Verano en las fechas 2

al 6 de Enero donde seguiremos participando con
investigaciones que venimos realizando gracias al esfuerzo de
todos los integrantes abocados a la ciencia en la Facultad de
Ciencias Biolgicas.
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Volumen 1, n2
Actividades
Curso-Taller de
Redaccin Cientfica
El 30 de mayo, 6 y 13 de
Junio del presente ao se
organiz el Curso-Taller de
Redaccin Cientfica, el cual
cont con la participacin de
ponentes de la Direccin
Cientfica Acadmica de
ONCOSALUD AUNA:
Joseph Pinto, Claudio Flores
y
Priscila
Valdivieso,
quienes expusieron y dieron
importantes pautas sobre
cmo redactar de manera
ordenada y organizada un
artculo de investigacin
cientfica, cmo presentarlo
a una revista para que evale
su publicacin, adems de
dar a conocer aspectos
generales para tomar en
cuenta en la edicin de una
revista cientfica, el proceso
editorial para la evaluacin
de trabajos y cmo mejorar
la calidad y contenidos de esta.

Este evento se realiz con el
fin de promover la publicacin
de artculos cientficos en
estudiantes y profesionales de
nuestra
facultad,
contribuyendo en gran medida
al desarrollo cientfico.
Cabe agregar que en el evento
no
slo
participaron
estudiantes y profesionales de
nuestra casa de estudios, sino
tambin de otras universidades
como la Universidad Nacional
de Ingeniera, Universidad
Nacional Agraria, Universidad
Nacional Federico Villareal y
la
Universidad
Peruana
Cayetano Heredia.
Afiche de Presentacin del Curso-taller
Cierre del curso Taller de Redaccin
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Volumen 1, n2
Actividades
Ciclo de Conferencias:
Inmunidad y Cncer
En los ltimos aos las
ciencias biolgicas se han
desarrollado rpidamente, lo
que ha permitido el estudio
de mecanismos moleculares
de defensa de nuestro
sistema inmune frente a
seales de advertencia de un
mal funcionamiento celular.
El ciclo de conferencias
Inmunidad y Cncer tuvo
como objetivos actualizar a
los asistentes en las ltimas
investigaciones sobre la
inmunidad
del
cncer,
promover
nuevas
investigaciones, adems de
crear un foro de debate en
aspectos relacionados a los
avances en el tratamiento del
cncer.
Dicho evento fue realizado

con xito gracias a la accin
conjunta del Laboratorio de
Microbiologa URP y la
Direccin
Cientfico
Acadmica de ONCOSALUD
AUNA, el da 21 de Junio
del 2014 en el Auditorio Ccori
Wasi URP, el ciclo de
conferencias conto con la
participacin de destacados
ponentes en el rea tales como
el Dr. Alfredo Aguilar
Cartagena y representando a
nuestra casa de estudios el
Blgo. Alcides Guerra Santa
Cruz.
Afiche de Presentacin del Ciclo de

Conferencias
Cierre del Ciclo de Conferencias: Inmunidad y Cncer
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Volumen 1, n2
Actividades
Proyeccin Social con los alumnos de

Colegio EUROAMERICANO
El Colegio Euroamericano es una escuela situada
en el valle de Pachacmac, esta resaltante
institucin maneja un programa poco comn en
los centros educativos del pas, el IB o
Bachillerato Internacional, lo que permite que sus
alumnos egresen con un Diploma adicional que
les permite postular universidades de alto
prestigio internacional una vez terminados sus
estudios secundarios. Para contribuir a la
formacin de los alumnos de esta institucin, la
Universidad Ricardo Palma a travs del
Laboratorio de Microbiologa de la Facultad de
Ciencias Biolgicas y como parte de su programa
de Proyeccin Social, ha capacitado a alumnos
del ltimo ao del Bachillerato de Biologa en

tcnicas
experimentales
bsicas
de
la
microbiologa como Coloracin Gram, ELISA y
electroforesis.
Adems ha permitido que el alumno Rodrigo
Alcorta del Bachillerato de Biologa investigue el
efecto antimicrobiano de plantas del Per,
realizando su trabajo de graduacin del IB
asesorado por el Prof. Jefe de Laboratorio, Alcides
Guerra y los ayudantes de laboratorio.
Es as como se integran partes fundamentales de
la educacin y el progreso del pas: Colegios y
Universidades.
Alumnos del Colegio

Euroamericano en la
capacitacin de tcnicas
experimentales bsicas
de microbiologa
Alumna Tania Churasacari capacitando alumnos del

EUROAMERICANO
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Volumen 1, n2
Actividades
Reunin de Integracin con los Padres de

Familia
tambin de los proyectos que tenemos en curso; para
finalizar esta primera etapa de la reunin, tom la
palabra el ayudante principal, Santiago Justo, quien
a nombre de los dems integrantes, emiti una muy
emotiva y sincera perorata, donde agradeci la
asistencia de todos los presentes. Seguidamente los
padres fueron guiados al laboratorio y vieron
directamente el lugar de trabajo de sus hijos,
La bienvenida fue en el Auditorio Biotempo y la dio entonces pudieron intercambiar impresiones.
el Dr. Agurto, con su siempre jovial prosa,
adentrndolos en el panorama de nuestra carrera y la No nos queda ms que agradecer a nuestros padres,
microbiologa en la actualidad; luego tom la por haberse dado un momento para compartir con
palabra el Blgo. Alcides Guerra, Jefe de nuestro nosotros y siempre estar ah, apoyndonos en cada
laboratorio, enterndolos de todas nuestras etapa de nuestras vidas, por ser nuestros guas,
actividades realizadas hasta el momento as como consejeros y amigos.
El Laboratorio de Microbiologa, celebr en el
interciclo 2014 una reunin en la que el Dr. Toms
Agurto Senz, Decano de la Facultad de Ciencias
Biolgicas; el Blgo. Alcides Guerra, Jefe del
laboratorio e integrantes del mismo se reunieron con
los padres de familia, en una muy amena asamblea
donde los padres eran los invitados.
Visita de los padres a las

diferentes ambientes del
Laboratorio de
Microbiologa
Palabras del Decano a los padres
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Volumen 1, n2
Actividades
Primera Capacitacin
De Interciclo-2014
El Laboratorio de Microbiologa de la Universidad
Ricardo Palma conoce el entusiasmo y ganas de
aprender que tenemos los alumnos de la Facultad de
Ciencias Biolgcas, adems del espritu cientfico
que nos caracteriza, ante esta situacin se realiz
una capacitacin de un poco ms de un mes dirigida
a todas las personas que deseen compartir
conocimientos con los ayudantes del laboratorio
Microbiologa, esta inclua clases tericas, prcticas
y discusin de papers en temas desde los bsicos
hasta los ms actuales: medios de cultivo, pruebas
bioqumicas, antibiograma, extraccin de DNA
bacteriano, identificacin molecular de una bacteria,
transformacin bacteriana, purificacin de protenas
y electroforesis. La finalidad era que los asistentes
se sientan involucrados e identificados como
partcipes directos de cada tema desarrollado con la
intencin de motivarlos en el campo de la
investigacin, que conozcan que en cada laboratorio
El aprendizaje es
experiencia, todo lo dems
es informacin
Albert Einstein
Dime y lo olvido,
ensame y lo recuerdo,
involcrame y lo aprendo
Benjamin Franklin
de la facultad hay personas que les gusta la ciencia

tanto como a ellos. Pavel Pastrana, uno de los
participantes de la capacitacin nos comenta que:
Participar en el interciclo, del laboratorio de
microbiologa, ha sido una muy buena experiencia
tanto para mi vida profesional como personal; ya
que aparte de haber adquirido nuevos conocimientos
en el rea de la microbiologa tambin me ayud a
ser ms meticuloso con las tcnicas empleadas en un
laboratorio y ser ms organizado en el da a da. Por
otro lado me siento muy contento de haber
participado, pues lo aprendido y el material
complementario, me ha ayudado bastante en los
cursos que estoy actualmente llevando. Me siento
muy agradecido y cmodo en este ambiente, y
agradezco a los muchachos del laboratorio por
permitirme llevar este curso con ellos y brindarme
su conocimiento y su confianza.
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Volumen 1, n2
Actividades
Integrantes Demuestran lo Aprendido en

Importantes Laboratorios
El laboratorio de Microbiologa viene esforzndose
por ampliar las barreras del conocimiento. Es as que
dos ms de nuestros integrantes han obtenido la
oportunidad de realizar prcticas en laboratorios de
prestigio a nivel nacional e internacional.
Uno de ellos es Marlon Morales, quien termin
exitosamente su ciclo de prcticas en el Laboratorio
Mixto Internacional (LMI) del Institut de Recherche
pour le dveloppement (IRD), un instituto de
investigacin francs que se encuentra asociado a la
Universidad Peruana Cayetano Heredia que viene
dedicndose a la investigacin del aislamiento y
fraccionamiento de productos naturales de planta
nativas del Per con el fin de probar la capacidad de
estas contra bacterias, enfermedades como
Leishmania y Malaria, y hasta contra el mismo
cncer. Marlon expres que su formacin en el
laboratorio de Microbiologa le sirvi de base, pues
le permiti aportar con ideas claras sobre tcnicas
empleadas en pruebas de sensibilidad bacteriana y el
mecanismo de accin de los antibiticos conocidos,
adems de formarse con un concepto de
interdisciplinariedad en la ciencia, ya que el LMI
trabaja en conjunto con qumicos y farmacuticos en

busca de nuevas opciones para generar antibiticos.
Por su parte, Santiago Justo, integrante veterano del
Laboratorio de Microbiologa, ha conseguido la
oportunidad de practicar en el Instituto de Qumica
de la Universidad de Sao Paulo, en el rea de
Bioqumica. Durante seis meses, Santiago podr
acompaar al equipo de investigacin que se
encuentra liderado por el Dr. Shaker Chuck Farah,
adems tendr la oportunidad de afianzar sus
conocimientos en tcnicas moleculares como
clonacin, secuenciamiento de ADN, expresin y
purificacin de protenas recombinantes; y tcnicas
espectroscpicas como cristalografas, dicrosmo
circular y microscopias. Santiago opina que estar
encargado del laboratorio de Microbiologa, le ha
dado la capacidad de desenvolverse de manera
activa y constante en el rea y en las investigaciones
cientficas
De esta manera, el Laboratorio de Microbiologa
abre la puerta a sus integrantes en diferentes
instituciones de prestigio a nivel nacional e
internacional.
Santiago Justo
exponiendo en
Auditorio
Biotempo
Marlon Morales
trabajando con
extractos de
Pseudomonas
aeruginosa
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Volumen 1, n2
Actividades
Visita de Estudios a Petrams:

Empresa 100% Peruana
El da 14 de Julio del 2014, los integrantes del
Laboratorio de Microbiologa de la Facultad de
Ciencias Biolgicas realizamos una visita a la
primera empresa 100% peruana, productora de
energa elctrica a partir de residuos. La visita fue al
Relleno Sanitario Huaycoloro, siendo esta una de
las tres plantas procesadoras de residuos slidos de
la empresa Petrams ubicada en el distrito de San
Antonio, provincia de Huarochir. Durante el
recorrido se observ grandes extensiones de terreno,
las cuales estn destinadas a diferentes procesos en
el tratamiento de residuos, ya sea residuos slidos
orgnicos hasta residuos de alta peligrosidad. La
planta trabaja con el modelo de Desarrollo Limpio
de Residuos que consiste en la captura y combustin
del biogs generado en el relleno, la captura del gas
se dan en grandes pozos que estn conectados a un

gaseoducto que llevan el biogs a la Central
Trmica, la cual es una moderna estacin
automatizada de succin y quemado del gas
conectada a una moderna central generadora de
electricidad que finalmente se interconecta a redes
que abastecern de energa elctrica a diferentes
lugares de Lima.
La gran importancia que tiene esta planta
generadora de energa elctrica a partir de desechos,
es que reduce la cantidad de emisiones de gases
contaminantes al medio. Petrams gestiona uno de
los mecanismos ms limpios en el tratamiento de
residuos slidos contribuyendo a mitigar los efectos
que el calentamiento global causa al Per y a todo el
mundo.
Alumnos en Planta procesadora de Petrams
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Volumen 1, n2
Artculo de Divulgacin
Por Claudia Monge.
Virus contra Bacterias
En 1917 el microbilogo Flix dHerelle descubri

que existan virus que eran capaces de parasitar
bacterias a los que llamo bacterifagos o fagos. Los
siguientes aos realiz los primeros estudios de
empleo de fagos para tratar la disentera. No obstante
recin en 1921 se estandarizaron tratamientos por
Richard Bruyboghe, al usar fagos para tratar
infecciones de estafilococos en la piel. Durante esa
poca los bacterifagos o tambin llamados fagos
fueron comercializados
para combatir diversas
infecciones. Especialmente durante la primera guerra
mundial, donde la fagoterapia fue utilizada para
combatir la disentera.
Con el paso de los aos debido a la aparicin de los
antibiticos las investigaciones en tratamientos de
fagoterapia fueron dejadas de lado. Sin embargo, la
aparicin de cepas bacterianas resistentes a un elevado
nmero de antibiticos obligaron a los cientficos a
encontrar nuevas formas de combatir las bacterias.
La especificidad del ataque de los bacterifagos
constituye por un lado una ventaja para la fagoterapia
frente a los antibiticos, ya que los fagos atacan
directamente a una determinada cepa de bacterias,
mientras que los antibiticos arrasan con todas las
bacterias: las patgenas

que causan alguna
infeccin pero tambin con las beneficiosas como
las de la flora bacteriana natural del cuerpo.
Adems dicha especificidad de los fagos es a su
vez una desventaja frente a los antibiticos puesto
que para combatir una infeccin de bacterias se
necesita conocer la cepa especfica mientras que
con los antibiticos no es necesario este
conocimiento por su amplio rango de ataque contra
bacterias.
Otra ventaja frente a los antibiticos es la
capacidad de los bacterifagos de tener mayor
alcance en los tejidos (puede incluso atravesar la
barrera hematoenceflica, a la cual los antibiticos
no tienen alcance)
Por ltimo una gran desventaja de la fagoterapia es
que algunos fagos pueden ser portadores de genes
de resistencia a antibiticos o de genes que
codifican toxinas y por lo tanto, pueden introducir
estos
genes a las bacterias otorgndoles
caractersticas no deseadas.
El laboratorio de microbiologa est en proceso de
estandarizacin de metodologas para el
aislamiento de
bacterifagos con miras a
posteriores investigaciones en fagoterapia.
Figura 1. Representacin grfica de

posicionamiento de un fago sobre la
superficie bacteriana
Fuente:
http://bacteriasactuaciencia.blogspot.com/2014/02/e
l-redescubrimiento-de-la-terapia-por.html
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Volumen 1, n2
Artculo de Divulgacin
Por Miguel Morales.
Protenas Recombinantes
Durante el siglo xx se lograron importantes avances,

uno de ellos fue determinar la estructura de doble
hlice del ADN. Esto les vali a Watson J y Crick F
el premio nobel en 1962, luego permiti conocer
como el ADN se transmite de una generacin a otra.
Adems se reconoci que un organismo desde el
ms simple al ms complejo tena el mismo cdigo
gnetico. Esto quiere decir que el ADN puede ser
interpretado y traducido por cualquier otro
organismo del planeta. Tambin se descubri que
esta informacin se traduce a protenas, molculas
imprescindibles para todo organismo. Como dijo el
qumico holands Mulder: sin protenas no hay
vida posible en nuestro planeta
(en este caso el gen de inters) y por ltimo se

ligaran con ayuda de la enzima, ADN ligasa, en el
vector, obteniendo ADN recombinante.
Para la produccin de protenas recombinantes se
siembra
bacterias
conteniendo
el
ADN
recombinante, luego se separa la protena
recombinante de las otras protenas bacterianas en
un proceso de purificacin (normalmente
cromatografas), en algunos casos es necesario tratar
a la protena para conseguir una forma estable que
pueda cumplir su funcin de manera ptima.
En el laboratorio de microbiologa se viene

trabajando en el diseo y construccin de plsmidos,
con el objetivo de producir protenas de inters
En el ao 1975 Nathans D y Smith H descubrieron biotecnolgico.
un tipo de enzimas (protenas que aceleran
reacciones qumicas) de virus y bacterias, las cuales
actualmente son de gran utilidad para el desarrollo
de las protenas recombinantes, dando origen a la
ingeniera gentica.
Una protena recombinante se genera al colocar un
fragmento de ADN en un organismo distinto al
original, ese fragmento se denomina ADN
recombinante y las protenas producidas a partir de
ese ADN: protenas recombinantes.
De manera bsica la metodologa de produccin de
protenas recombinantes es la siguiente: primero se
asla el ARNm que codifica la protena de inters,
por accin de las transcriptasas inversas se sintetiza
ADN a partir de ARN (normalmente la transferencia
de informacin, es de ADN a ARN y luego, a una
protena), el ADN obtenido se inserta en un vector
(transporte del gen de inters) cortado por unas
enzimas de restriccin denominadas endonucleasas
(tijeras moleculares que cortan los enlaces fosfato
de la cadena de ADN sin daar la secuencia de
nucletidos); as quedaran bases sin aparear que
estarn disponibles para aparearse con el fragmento
de ADN que contenga las bases complementarias
Figura 1. Metodologa general de generacin de protenas

recombinantes.
Fuente:
http://www.dfarmacia.com/farma/ctl_servlet?_f=37&id=13128906
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Volumen 1, n2
Artculo de Investigacin
Actividad antimicrobiana del extracto

acetona-agua de Macrocystis pyrifera (C.
Agardh 1820) en bacterias de importancia
clnica
Morales M*, Nunja P, Burga L, Justo S, vila J, Guerra A.
Laboratorio de Microbiologa, Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Ricardo Palma.
Laboratorio de Biologa Marina y Continental, Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Ricardo
Palma.
*Autor para la correspondencia: Morales Moisela, Marlon. mmarlon14o@hotmail.com
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Morales M, Nunja P, Burga L,
Justo S, vila J, Guerra A.
Actividad antimicrobiana del
extracto
acetona-agua
de
Macrocystis
pyrifera
(C.
Agardh 1820) en bacterias de
importancia clnica. Boletn
Cientfico. 2014. 1(2): 15-19.
Palabras claves: Macrocystis
pyrifera, Discos de Difusin.
Extracto acetona-agua.
R E S U M E N
Se evalu la actividad antibacteriana del extracto acetona-agua de
Macrocystis pyrifera. Se seleccionaron cuatro cepas de importancia clnica:
Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus y
Salmonella enterica del Laboratorio de Microbiologa. Los extractos fueron
obtenidos de los filoides, esporfilos y del alga entera de una muestra seca
de la especie; y, a su vez, de una muestra fresca. La prueba de sensibilidad
se realiz mediante discos de difusin cargados con 30 l de cada extracto;
se utilizaron discos con 10 mg de Gentamicina como control. Ningn
extracto present actividad antibacteriana en ninguna de las cepas
evaluadas; por otro lado, todas las cepas se mostraron sensibles ante la
accin de la Gentamicina. Se concluye que Macrocystis pyrifera no posee
actividad antimicrobiana ante las cepas de importancia clnica evaluadas.
1. Introduccin
Las bacterias se han adaptado a un sinfn de hbitats
con diferentes mecanismos de sobrevivencia.
Actualmente la resistencia bacteriana a antibiticos
es un problema de gran importancia en el rea
clnica. A raz de este fenmeno es que cada cierto
tiempo se necesita sintetizar nuevos antibiticos para
combatir a estos microorganismos.
Las algas marinas son consideradas una parte
importante en los ambientes acuticos, ya que
cumplen un nicho ecolgico fundamental
equilibrando los niveles de oxgeno en el agua, por
medio de fotosntesis; participando en las redes
trficas; y produciendo metabolitos secundarios que
poseen diferentes propiedades, entre ellas, la
actividad antimicrobiana. Macrocystis pyrifera es
una macroalga de importancia econmica a nivel
mundial. Pertenece a la divisin de las Phaeophytas,
conocidas como algas pardas, las cuales son

conocidas por producir sustancias como diterpenos,
florotaninos, fucoxantinas, acetogeninas, entre otros
metabolitos. De estos, los florotaninos son los que
han recibido mayor atencin en los ltimos 5 aos
por las diversas propiedades de inters biomdico
que poseen. No obstante, los estudios relacionados a
la actividad antibacteriana de extractos de algas
pardas no abundan en la literatura cientfica, y
menos an en Macrocystis pyrifera.
Partiendo del concepto que ciertas algas producen
sustancias bioactivas que impiden el crecimiento de
organismos patgenos en su hbitat natural resulta
interesante el uso de metabolitos obtenidos de dichos
organismos como antibiticos alternativos. En este
sentido, el presente trabajo busca evaluar la
actividad antibacteriana de dos extractos obtenidos
de diferentes partes anatmicas de Macrocystis
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Volumen 1, n2
pyrifiera en bacterias patgenas de importancia se ajust hasta una turbidez de 0.08 OD a 0.1 OD en
625 nm, usando cubetas esterilizadas con radiacin
clnica
U.V. Luego del ajuste del estndar las cepas fueron
sembradas en placas con Agar Mueller-Hinton e
2. Materiales y Mtodos
Se colectaron ejemplares juveniles flotantes de incubadas a 37C por 24 horas.
Macrocystis pyrifera (DMR<20 cm) de la baha de Los halos de inhibicin obtenidos fueron medidos
Pucusana (122838LS 764753LO) en los meses con vernier. La actividad antibacteriana se clasific
de enero y julio del 2014. Los ejemplares fueron como Resistente (R), Sensible (S) e Intermedia (I)
transportados en bolsas negras sin agua de mar al (Tabla 1). Este procedimiento se realiz con tres
Laboratorio de Biologa Marina y Continental de la repeticiones para cada uno de los extractos.
Universidad Ricardo Palma, donde se limpiaron de
epfitos y sales con agua de cao. Previo a la 3. Resultados
extraccin, las muestras (filoides, esporfilos y toda El extracto realizado a partir de toda el alga fresca
el alga) se secaron en una estufa a 60C hasta Tabla 1. Clasificacin de la actividad antibacteriana
obtener un peso constante, 1g se macer en con Gentaminica.
oscuridad por 1 hora en 10 ml de acetona: agua
Clasificacin
Dimetro del halo de
(7:3) a temperatura ambiente con agitacin cada 15
inhibicin formado por
minutos. Se realiz un tratamiento ms utilizando
Control
10 g de alga fresca siguiendo el procedimiento antes
12mm DHI
Resistente (R)
mencionado. El extracto se filtr en papel filtro
(Rundfilter 125 mm), luego se evapor el solvente
12mm DHI < 14mm
Intermedia (I)
en estufa, se resuspendi en agua destilada y,
DHI 15mm
Sensible (S)
finalmente, se filtr a 0.22 m (Merck Millipore).
Para relacionar la actividad antibacteriana con el DHI: dimetro de inhibicin de la sustancia evaluar.
contenido de polifenoles de los extractos, estos se
cuantificaron usando el mtodo de Folin-Ciocalteu
(AF) tuvo el mayor CTF (contenido total de
usando como estndar floroglucinol. El contenido
fenoles), lo cual fue estadsticamente mayor en
de fenoles totales (CFT) fueron expresados en mg
comparacin al resto de extractos (Tabla 2).
equivalentes de floroglucinol/100 g de alga seca
De los extractos evaluados, ninguno present una
(mg PGE/100 g).
actividad antimicrobiana. El control present un
La actividad antimicrobiana se evalu empleando la
dimetro de inhibicin esperado lo que permite
tcnica del antibiograma por el mtodo de discos de
validar la prueba, adems segn dicho dimetro, las
difusin en agar (INS, 2002). Se usaron discos de
cepas fueron clasificadas como sensibles a
papel de filtro Whatman N 42 y se cargaron
gentamicina (Tabla 3).
aspticamente con 30 l del extracto algal. Se
cargaron discos con 10 mg de Gentamicina que se 4. Discusin
us como control y se dej en absorcin durante 2-3 La actividad antibacteriana de distintas algas
horas.
pertenecientes al grupo de las Phaeophytas se ha
Se usaron 4 cepas bacterianas aisladas de diferentes evaluado constantemente en diferentes laboratorios
hospitales de Lima: Staphylococcus aureus, alrededor del mundo. Las sustancias bioactivas de
Escherichia
coli,
Salmonella
enterica
y estas algas les permiten defenderse en su medio
Pseudomonas aeruginosa. Cada cepa fue reactivada natural, contra organismos microbianos y epfitos;
en Caldo CASO; posteriormente, se procedi con la entre estas sustancias se encuentran los florotaninos,
preparacin del estndar para el inculo. El inculo los cuales son los responsables de la alta actividad
Pgina
17
Volumen 1, n2
Tabla 2. Contenido Total de Fenoles (CTF) de los

diferentes extractos evaluados.
Extracto
CTF (mg PGE/100 g alga

seca)
AF
385.128.13a
201.8720.87b
373.874.93c
327.570.94d
A: Extracto de alga entera seca. E: Extracto de los esporfilos

de una muestra seca. F: Extracto de Filoides de una muestra
seca. AF: Extracto de una alga fresca. Las letras indican
diferencias significativas (p<0.01).
Tabla 3. Promedio del dimetro de los halos de

inhibicin formados en el ensayo con los extractos
acetona-agua de Macrocystis pyrifera
*C: Control (Gentamicina). A: Extracto de alga entera seca.

E: Extracto de los esporfilos de una muestra seca. F:
Extracto de Filoides de una muestra seca. AF: Extracto de una
alga fresca.
antibacteriana de varias algas pardas, tal como lo

report Jeong L (2014) en su trabajo con Eisenia
byciclis. La mayora de algas pardas a las que se les
atribuye actividad antibacteriana lo realizan
mediante los florotaninos. En nuestro trabajo se us
Macrocystis
pyrifera,
la
cual
posee
aproximadamente 34,4 mg/g de taninos en pocas de
verano y 0.547 mg/g en pocas de invierno del total
de polifenoles que existen en el alga, lo cual influye
en su capacidad antibacteriana (Castro M.1993).
Por otro lado, la accin de los solventes en los
extractos de algas tambin influye de alguna manera
en los resultados que se obtienen. Es as que la

extraccin acuosa de algas como Sargassum
wigthiiy Padina tetrastromatica presentaron
actividad antimicrobiana ante cepas patgenas tales
como Staphylococcus aureus, Escherichia coli y
Pseudomonas aeruginosa y en cepas patgenas de
peces como Vibrio fischeri, Vibrio alginolithycus.
(Johnsi G. 2011).
El mtodo por discos de difusin es uno de los ms
usuales cuando se realiza un antibiograma y se
encuentra actualmente estandarizado por el Instituto
Nacional de Salud del Per (2002), en la cual se
recomienda el uso de antibiticos obligatorios segn
las cepas que se evalan. Entre estos, la gentamicina,
es uno de los antibiticos de uso oftlmico que se
usan para todas las cepas que se evaluaron en este
trabajo. Adems se ha usado esta sustancia como
control en cultivos de Escherichia coli a una
concentracin de 2 mg/ml, tal como se realiza en
nuestro trabajo.
Los discos de difusin fueron cargados con 30 l del
extracto algal y colocados en el medio de cultivo. En
otros estudios, se usaron 20 l de extracto acuoso en
los discos, los cuales presentaron un resultado
positivo de actividad antimicrobiana ante cepas
clnicas (Johnsi G. 2011). Sin embargo, tambin
existe el mtodo de pocillos de 6 mm en el medio de
cultivo, los cuales fueron cargados con 50 l del
extracto algal, permitiendo tambin la obtencin de
resultados positivos (Magallanes C. 2003). El uso de
ambos mtodos permite la difusin de los extractos.
Finalmente, varias especies emparentadas con
Macrocystis pyrifera presentan una actividad
antibacteriana tratadas con diferentes mtodos de
extraccin y de antibiograma. No obstante, nuestra
especie no present ningn resultado positivo
durante la investigacin, tal como un trabajo
realizado en nuestro pas donde trabajaron con
extractos etanlicos de M. pyrifera evaluado
mediante el mtodo de pocillos, sin encontrar
actividad antibacteriana en cepas clnicas y no
clnicas. Estos resultados los atribuyeron a que
posiblemente existe una concentracin mnima de
sustancias bioactivas en estas algas las cuales son
Pgina
18
Volumen 1, n2
solubilizadas en el ambiente acutico (Magallanes vitro antibacterial and synergistic effect of
C. 2003).
phlorotanins isolated from edible brown seaweed
Eisenia bicyclis against acne-related bacteria. Algae.
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5. Conclusiones
El extracto acetona-agua de los filoides, esporfilos,
y del alga entera seca y fresca de Macrocystis Jhonsi G, Lipton A, Aishwarya M, Sakira A,
pyrifera no posee actividad antibacteriana ante las Udayakumar A. 2011. Antibacterial activity of
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Volumen 1, n2
Pgina
20
Volumen 1, n2
Determinacin de Gneros Bacterianos en

el Mar de la Playa Cantolao La Punta
Callao
Justo S*, Churasacari T, Saldaa C, Cajachagua C, Pabn L, Gnzales M, Santiago D, Guerra A.
Laboratorio de Microbiologa. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Ricardo Palma.
*Autor para la correspondencia: Justo Arvalo, Santiago. santiago.jus.are@gmail.com
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Justo S, Churasacari T,
Saldaa C, Cajachagua C,
Pabn L, Gonzles M,
Santiago D, Guerra A.
Determinacin de Gneros
Bacterianos en el Mar de la
Playa La
Punta-Callao.
Boletn Cientfico. 2014.
1(2): 22-25
Palabras Claves: Bacterias

Marinas, Esquemas de Das
S et al (2007) y Oliver J
(1982), Pruebas bioqumicas
R E S U M E N
Los ocanos albergan una gran diversidad biolgica, hasta el momento
relativamente poco explorada por el humano. Con el objetivo de ampliar los
conocimientos en la biodiversidad bacteriana del mar peruano, se realizaron
muestreos aleatorios en el mar de Playa Cantolao-La Punta-Callao
(120406 S 771010O), en total se tomaron 5 muestras en frascos
estriles a una profundidad de 3m utilizando una vara de madera
acondicionada a una jeringa de 20ml. Para el aislamiento se utiliz el mtodo
de dispersin en placa en Agar Marino, se trabaj con diluciones sucesivas
para obtener colonias aisladas. Para la identificacin se realizaron pruebas
bioqumicas que incluan determinacin de citocromo oxidasa, motilidad,
produccin de H2S, produccin de indol, metabolismo de glucosa, produccin
de pigmento, luminiscencia, catalasa y desarrollo en anaerobiosis; adems de
las coloraciones Gram y de espora. Los esquemas propuestos por Das S et al.
(2007), Oliver J (1982) y el Bergeys Manual 2da y 7ma edicin fueron
utilizados para la determinacin de gneros. Se logr el aislamiento de 20
cepas bacterianas. Los gneros encontrados fueron: Moraxella, Bacillus,
Acinetobacter, Vibrio, Aeromonas, Photobacterium, Alteromonas,
Alcaligenes, Streptococcus y Chromobacterium.
1. Introduccin
Los ocanos comprenden aproximadamente el 70%
de la superficie terrestre; la diversidad de sus
ambientes permite que se desarrolle gran cantidad de
formas de vida; adems tienen importancia como
regulador de la temperatura global y como sumidero
de carbono
De esta primera idea se desprenden dos principales:
la diversidad de especies y la importancia ecolgica
de los ecosistemas marinos.
En primer lugar, la diversidad biolgica marina
comprende todo tipo de organismos que habiten en
los mares, un grupo importante con poca
consideracin en nuestro pas son las bacterias;
estudios recientes en otras partes del mundo han

hallado bacterias marinas con propiedades que van
desde la produccin de pigmentos utilizables (Yada
S et al. 2008) hasta bacterias que sintetizan
nanopartculas de oro a partir de otros compuestos
(Shama N et al. 2012), adems de bacterias
ampliamente estudiadas como Marinobacter
hydrocarbonoclasticus capaz de producir enzimas
que degradan hidrocarburos aromticos, Vibrio
fischeri que tiene en su genoma el operon LUX
(biolumniscencia)
o
Pseudomonas
pseudoalcaligenes productora de enzima que
degrada el cianuro.
En segundo lugar, el bacterioplancton tiene un
Pgina
21
Volumen 1, n2
papel significativo como principal contribuyente en
los procesos biogeoqumicos de los ambientes
marinos, y representa un componente fundamental
en las redes alimentarias . En los ltimos aos, el
concepto de red trfica clsica ha cambiado a un
modelo alternativo ms complejo denominado
"bucle microbiano", basado en la capacidad de las
bacterias hetertrofas de reciclar la materia orgnica
disuelta y de hacerla circular mediante diversas
interacciones ecolgicas a travs de los otros
componentes del plancton y, en forma indirecta,
tambin a travs de los niveles trficos superiores
del ecosistema marino (Schauer M et al. 2011).
Aislamiento de bacterias:
Se utiliz el mtodo de dispersin en placa con
medio marino (fig. 1).Para esto se tom 1ml de la
muestra y se coloc en un tubo con 9ml de agua de
mar esterilizada y filtrada obteniendo la dilucin 101
, se repiti este procedimiento obteniendo 3
diluciones (hasta 10-3). Las placas fueron incubadas
a T ambiente (20-25C) durante 48h. Al cabo de
este tiempo se seleccionaron las colonias aisladas y
fueron reaisladas en tubos con Agar Marino. Estas
fueron incubadas nuevamente a T ambiente hasta
observar crecimiento visible y luego fueron
En los ocanos, los microorganismos son los almacenadas a 4C hasta el momento de la
responsables del 98% de la produccin primaria e caracterizacin bioqumica.
intervienen en todos los ciclos de la materia, con un
papel fundamental, a su vez, en el destino de los
contaminantes en zonas altamente antropizadas.
Adems los organismos hetertrofos como las
bacterias consumen entre el 18% y 77% de carbono
orgnico disuelto en el mar (Azam F et al. 1983).
Por lo tanto el estudio de las bacterias en los
ambientes marinos de nuestro pas nos permitir
aumentar nuestros conocimientos en la ecologa y
buscar nuevos recursos aprovechables. El presente
estudio tiene como objetivo identificar los gneros
bacterianos presentes en el mar de Playa Cantolao- Figura 1 Aislamiento por diluciones sucesivas en medio
Marino.
Callao como base para futuros estudios ecolgicos y
biotecnolgicos.
Determinacin Bioqumica:
Se realizaron las siguientes pruebas bioqumicas:
coloracin gram, citocromo oxidasa, motilidad,
Recoleccin de muestras: Se realizaron muestreos
produccin de H2S, produccin de indol,
aleatorios en el mar de la playa Cantolao-La Puntametabolismo de glucosa, produccin de pigmento,
Callao (120406 S 771010O). Se tomaron 5
luminiscencia, catalasa, desarrollo en anaerobiosis,
muestras, a una profundidad de aproximadamente 3
coloracin de esporas. (fig.2)
metros utilizando una vara de madera acondicionada
Los esquemas propuestos por Das S et al. (2007),
con jeringas estriles de 20ml. Adems se colectaron Oliver J (1982) y el Bergeys Manual 2da y 7ma
3 litros de agua de mar para la preparacin de los edicin fueron utilizados para la determinacin de
medios de cultivo. Las muestras de agua fueron gneros
transportadas al Laboratorio Microbiologa de la
Universidad Ricardo Palma en un cooler refrigerado 3. Resultados
En total se obtuvieron 20 cepas, de las cuales 17
a 4C.
lograron ser identificadas hasta la categora de
Pgina
22
Volumen 1, n2
Figura 2: A; Prueba de catalasa, B; Citocromo oxidasa,

C; SIM, D; Agar P (pigmentacin), E; Agar Marino
(Anaerobiosis), F; HughLeifson
(metabolismo de
glucosa).
gnero; 3 no tuvieron crecimiento suficiente para su

identificacin.
Se encontraron 10 gneros. De los cuales, 8 fueron
bacilos gramnegativos y slo 2 grampositivos, un
bacilo y un coco (tabla 1).
4. Discusiones
Pelln et al. (2001) en su trabaj con muestras de 2
moluscos bivalvos cultivados en Pucusana y el
Callao: Argopecten purpuratus concha de abanico
y Crassostrea gigas ostra logran identificar 6

gneros bacterianos: Vibrio (40%), Aeromonas
(15%), Flavobacterium (10%), Pseudomonas (5%),
Moraxella (5%), Flexibacter (5%) y no identificados
(20%), Len et al (2010) por su parte en su trabaj
con muestras de 5 invertebrados intermareales
recolectados en la Baha de Ancn: Phymactis
clematis anmona, Tetrapygus niger erizo de
mar, Heliaster helianthus estrella de mar, peje
sapo y Tegula atra caracol logra identificar 4
gneros: Vibrio (50%), Pseudomonas (10%),
Flavobacterium (20%) y Actinomycete (20%), el
presente trabajo reporta la presencia en el ambiente
marino de 10 gneros bacterianos entre ellos
Aeromonas, Moraxella y Vibrio sin embargo no se
encontr cepas de Flavobacterium, Flexibacter ni
Actynomicetes lo que sugiere que estos gneros
podrin estar ms relacionados a organismos que
gneros como Bacillus, Photobacterium y
Alteromonas que no fueron encontrados en los
trabajos mencionados anteriormente pero s en este.
Pelln et al. (2001) y Len et al. (2010) determinan
que la cepa ms abundante es la correspondiente a
Vibrio sin embargo en este trabajo la cepa ms
abundante fue la de Moraxella, esto puede ser a
Tabla 1. Resultados de las Pruebas Bioqumicas realizadas a las cepas aisladas
CAT=Catalasa; OXID=Oxidacin; MOT=Motilidad; PIG= Pigmentacin; ANAEROB=Anaerobiosis; H.F= HughLeifson;

Ab=Aerobio, Cer=Anaerobio; NP=. No hay presencia de espora; N= No se realiz la prueba.
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23
Volumen 1, n2
causa de que hay mayor asociacin de Vibrio con
invertebrados que el gnero Moraxella. Adems en
un estudio realizado en Argentina, en la zona
costanera de Comodoro se reporta en muestras de
sedimentos y agua marina 6 de los gneros hallados
en este trabajo (Acinetobacter, Aeromonas, Vibrio,
Moraxella,
Bacillus,
Photobacterium),
adicionalmente determinan que la mayor cantidad
de cepas halladas fueron grampositivas a diferencia
del presente trabajo que encuentra que el 80% de
los gneros y el 90% de las cepas aisladas fueron
gramnegativas, esto sugiere y afirma que las
grampositivas estn mayormente asociados a los
suelos y que las gramnegativas ms bien habitan
asociadas a la columna de agua.
5. Conclusiones
Se determin la presencia de 10 gneros
bacterianos, estos fueron: Moraxella (23,5%),
Bacillus (5,88%), Acinetobacter (5,88%), Vibrio
(11,76%), Aeromonas (11,76%), Photobacterium
(5,88%), Alteromonas (11,76%), Alcaligenes
(5,88%),
Streptococcus
(5,88%)
y
Chromobacterium (11,76%).
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Pgina
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Volumen 1, n2
Efecto antibitico de Piocianina de

Pseudomonas aureginosa sobre Escherichia coli y
Staphylococcus aureus.
Justo S, Churasacari T, Elas C, Guerra A.
*Autor para la correspondencia: Justo Arvalo, Santiago. santiago.jus.are@gmail.com
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Justo S, Churasacari T,
Elias C. Efecto Antibitico
de
Piocianina
de
Pseudomonas aeruginosa
sobre Escherichia coli y
Staphylococcus
aureus.
Boletn Cientfico. 2014.
1(2): 26-29.
Palabras
Claves:
Pseudomonas aeruginosa,
Piocianina, antibitico
R E S U M E N
Pseudomonas aeruginosa es una bacteria gramnegativa, patgeno oportunista
de importancia clnica pues causa gran cantidad de enfermedades
intrahospitalarias. Adems este es un organismo ubicuo debido
principalmente a su alta capacidad para metabolizar variedad de sustratos.
Esta bacteria tiene la capacidad de producir varios pigmentos extracelulares,
uno de ellos, la piocianina es una exotoxina perteneciente al grupo de las
fenazinas que cuenta con la capacidad de inhibir el desarrollo de organismos
competidores. Se utilizaron 8 cepas de Pseudomonas aeruginosa, 2
ambientales, 5 nosocomiales y 1 cepa de referencia (ATCC 27853). Para
estimular la produccin de piocianina las cepas fueron incubadas por 7 das a
37C en caldo P. La extraccin de Piocianina se realiz por el mtodo
propuesto por Knight et al. (1978) que const de una extraccin
clorofrmica, seguida de una extraccin con HCl. No se observ diferencias
en el efecto de la piocianina de cepas nosocomiales y ambientales frente a
Staphylococcus aureus, sin embargo slo la piocianina de la cepa de muestra
respiratorio mostr un leve efecto sobre Escherichia coli.
1. Introduccin
Psedudomonas sp. es un gnero cosmopolita, este
grupo es capaz de utilizar y metabolizar un amplio
rango de sustratos, ya sean orgnicos o inorgnicos,
por ello puede vivir bajo muy diversas condiciones,
poseen tambin gran plasticidad gnica (Ruiz L,
2007); encontrndose en suelos y aguas, tanto
continentales como marinas (Baumann L et al.
1971), Pseudomonas aureginosa es el patgeno ms
importante de este gnero, debido a que es un
patgeno oportunista (Francis K y Brown P, 2012)
siendo el ms importante en humanos debido al
nmero, tipo de infecciones y mortalidad asociadas
(Ruiz L, 2007), as mismo es tambin conocido por
su capacidad de sintetizar diferentes pigmentos

hidrosolubles extracelulares entre los que se destaca
un pigmento verde fluorescente, pioverdina (Merino
L, 2007) que acta como siderforo en condiciones
mnimas de Fe (III) y actan como inhibidores del
crecimiento de microorganismos patgenos en
plantas (Bello D et al, 2006) y un pigmento azul,
piocianina (Young G, 1947), perteneciente a las
fenazinas, soluble en cloroformo.
Se ha demostrado que este pigmento posee actividad
antibacteriana (Merino L, 2007), y que su
produccin es activada principalmente bajo efecto
de quorum sensing (Williams P y Cmara M, 2009).
Pgina
25
Volumen 1, n2
El objetivo del presente trabajo es determinar la
actividad antibacteriana del pigmento piocianina
sobre una cepa de Escherichia coli y una cepa de
Staphylococcus aureus.
Obtencin de Cepas de Pseudomonas
Se trabaj con 8 cepas de Pseudomonas aeruginosa
(Tabla 1); 5 fueron aislamientos nosocomiales, 1
aislada a partir de eyecciones de paloma, 1 de un
manantial ubicado en la costa verde, adems de la
cepa ATCC 27853 de Pseudomonas aeruginosa.
Para la confirmacin de las cepas se utilizaron
pruebas bioqumicas que consistan en metabolismo
de glucosa, degradacin de citrato, motilidad,
produccin de Indol y produccin de pigmentos.
Obtencin de Pigmentos
Las ocho cepas aisladas fueron sembradas en 5ml de
caldo CASO por 18 horas a 37 C, luego se ajust la
turbidez del caldo hasta una OD de entre 0.10 y 0.08
a 625nm; por ltimo se tom una alcuota de 1ml y
se sembr en 50 ml de caldo P los cuales fueron
incubados por 7 das a 37C, agitndose
manualmente dos veces al da para favorecer la
oxigenacin del medio.
Extraccin de Piocianina
Transcurridos los 7 das se tomaron muestras de 10
ml de Caldo P, se centrifugaron a 3000 rpm por 10
minutos y se transfiri el sobrenadante a un tubo
limpio; se realiz una primera extraccin con
cloroformo seguido de una extraccin con HCl
0.2N. La fase cida fue neutralizada con NaOH 0.2N
hasta observar el cambio de coloracin. Una vez ms
se realiz la extraccin clorofrmica y a partir de
esta se cargaron discos de 6 mm de papel filtro
Whatman N 42 con 10ul del extracto.
Prueba de Sensibilidad
Para esta prueba se utiliz una cepa de Escherichia
coli ATCC 25922 y una cepa de Staphylococcus
aureus ATCC 25923. Se ajust la turbidez del caldo
CASO, donde fueron previamente inoculadas, entre
0.10 y 0.08 de OD a 625nm. Cada extracto fue
probado por triplicado en placas con agar Muller
Hinton, como control positivo se utiliz discos de
gentamicina.
Anlisis estadsticos
Se realiz la prueba de ANOVA para determinar
diferencias significativas entre los efectos
inhibitorios de los extractos de piocianina de las
diferentes cepas utilizadas.
3. Resultados
No se observ diferencias significativas entre los
halos de inhibicin del extracto de piocianina frente
a la cepa de Staphylococcus aureus (Tabla 2).
Slo la piocianina de la cepa aislada de muestra
respiratorio (Tabla 1) mostr un leve efecto
inhibitoria sobre Escherichia coli.
Tabla 1. Cepas de Pseudomonas aeruginosa

utilizadas.
Cdigo
Origen
Descripcin
Aislamiento de
eyecciones de
palomas
Manantial de la Costa
Verde en Playa La
Estrella
Aislamiento del
Hospital Grau
Heridas epiteliales
aislada en el HNGAI
Heridas epiteliales
aislada en el HNGAI
Heridas epiteliales
aislada en el HNGAI
Muestra respiratoria
aislada en el HNGAI
ATCC
27853
-----
Donacin del aisladas

en el HNGAI
N= Nosocomial, A=Ambiental. HNGAI= Hospital Nacional

Guillermo Almenara Irigoyen
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26
Volumen 1, n2
Tabla 2. Mediciones de Halos de Inhibicin de concentracin y se necesita mayores concentraciones
Piocianina
frente
a
Escherichia
coli
y para inhibir el crecimiento de bacterias
gramnegativas.
Staphylococcus aureus
Esto se confirma con el trabajo de Knight et al.
Cdigo
Escherichia
Staphylococcus
(1978) que utilizando el mtodo de pocillos en agar,
una metodologa conocida por ser ms directa que
coli
aureus
los discos de difusin, reportan efecto inhibitorio de
15.79
A
la piocianina sobre Proteus morganii sugiriendo que
16.02
B
altas concentraciones del pigmento no permiten el
18.00
C
desarrollo bacteriano.
.1513
D
Por ltimo, de manera muy interesante ninguno de
14.37
E
los trabajos mencionados anteriormente reportaron
16.00
F
8.61
16,70
G
un efecto inhibitorio de la piocianina sobre cepas de
14.07
ATCC 27853
Pseudomonas sugiriendo la existencia de un
21.30
21.30
Gentamicina
mecanismo que contrarreste la accin de la
*Los resultados mostrados son la media de tres ensayos expresados
piocianina.
en mm.
4. Discusin
Stephen et al (1981) realizan un ensayo similar
con piocianina donde una cantidad de 2.5 ug por
disco resulta en un halo de inhibicin de 17 mm
para Staphylococcus aureus. Un resultado similar
se evidencia en la cepa G la cual tambin mostr
halo de inhibicin frente a Staphylococcus aureus
esto sugiere que las concentraciones obtenidas
pueden haber sido inferiores en los otros casos a
los 2.5ug por disco.
Baron S y Rowe J (1981) encuentran que la
actividad antibacteriana de Pseudomonasa
eruginosa no se manifiesta frente a cepas como
Proteus vulgaris, Enterobacter aerogenes otras
Pseudomonas ni frente a Escehrichia coli; sin
embargo otros autores como Young G (1947) y
Nowroozi J et al (2012) han determinado que la
Piocianina s tiene efecto contra Escherichia coli e
incluso Nowroozi et al (2011) menciona que las
nanopartculas de plata tienen un efecto sinrgico
inhibitorio tanto en Escherichia coli como en
Staphylococcus aureus. En este trabajo se utilizan
discos cargados con 2 ug, nuestro trabajo tambin
report efecto inhibitorio sobre E. coli, esto
demuestra que al parecer el efecto de
antibacteriano de la piocinana es dependiente de la
5. Conclusiones
La cepa de Staphylococcus auereus se mostr
sensible frente al extracto de piocianina de todas las
cepas obtenidas de Pseudomonas aureginosa, por el
contrario Escherichia coli se mostr sensible solo
frente al extracto de piocianina producido por la
muestra G, aislada de HNGAI.
Estudios bibliogrficos no muestran efecto
inhibitorio de la Piocianina sobre Pseudomonas
aeruginosa lo que sugiere un mecanismo de
proteccin frente al efecto de este pigmento.
Baron S y Rowe J. 1981. Antibiotic action of
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Volumen 1, n2
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28
Volumen 1, n2
Mini-Review
Aspectos generales de la crianza del Cuy y

su agente infeccioso: Salmonella
Justo, S.
Correo Electrnico: santiago.jus.are@gmail.com
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Justo S. Aspectos Generales
de la Crianza del Cuy y Su
Agente
Infeccioso:
Salmonella.
Boletn
cientfico. 2014. 1(2): 3035.
Palabras
Claves:
Cuy,
Salmonella, Produccin.
R E S U M E N
Actualmente la demanda de cuy para consumo, tanto al interior como al
exterior del pas, viene en aumento. La distribucin y crianza de esta especie
con fines de comercio est restringido a 4 pases Sudamericanos: Ecuador,
Colombia, Bolivia y Per; siendo Per el pas con la mayor poblacin. Los
sistemas de crianza del cuy se clasifican segn su finalidad y la cantidad de
individuos criados. Debido principalmente a deficiencias en la tcnicas de
crianza y falta de investigacin; la produccin del cuy atraviesa graves
problemas por enfermedades infecciosas las cuales diezman a gran parte de la
poblacin en los criaderos. Salmonella se ha identificado como el agente
infeccioso bacteriano ms importante por ocasionar altos ndices de
mortalidad y morbilidad; los sistemas de control empleados actualmente no
han sido suficientes para atenuar este mal. A nivel mundial se han desarrollado
vacunas contra Salmonella pero estas estn diseadas para su principal uso en
aves de corral; los estudios existentes en vacunas contra Salmonella para
cuyes son escasos y muy pocos enfocados realmente a proteger al cuy de la
Salmonella. En conclusin, se necesita de mayor cantidad y rigurosa
investigacin cientfica tanto en el agente infeccioso como en el cuy y los
sistemas de crianza para mejorar la produccin de cuy en el pas.
Introduccin
Cavia porcellus denominado comnmente como
cuy, cobayo, curi, conejillo de indias y en ingls
Guinea pig es un mamfero roedor originario de la
regin andina, se ha estimado que su domesticacin
en el Per se inici hace 2500 a 3600 aos por restos
de abundantes excretas de cuy encontrados en el
templo
del Cerro Sechn (Departamento de
Ancash); en el perodo de Paracas Cavernas entre
700 a 500 a.C se han encontrado indicios de
alimentacin con carne de cuy en los pobladores,
adems en el Perodo de Paracas Necrpolis casi
todas las casas tenan un espacio de crianza de cuyes
(500 a.C 200 d.C.)(Moreno A, 1989). El cuy ha
constituido desde esas pocas una importante fuente
proteica, se ha estimado que en Lima Metropolitana
se consume anualmente 0.1 kg de carne de cuy por

persona anualmente y en la Sierra del Per 1.8 kg
(INEI, 2009), alcanzando las 116500 toneladas
consumidas anualmente en todo el Per (Chauca L,
1995). Actualmente viene aumentando la demanda
del cuy para la exportacin es as que en el ao 2000
se exportaron solo 145,00Kg de carne de Cuy pero
para el ao 2006 las cifras se haban incrementado
hasta 7762,73Kg con un valor total de 56794,66
dlares americanos siendo el principal pas de
destino Estados Unidos (MINAG, 2014).
Aunque la distribucin del cuy no est restringida al
Per, este presenta la mayor poblacin de cuyes
alcanzando los 23 240 846 animales, estando el 92%
de la poblacin en la sierra y solo el 6% en la costa
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29
Volumen 1, n2
Mini-Review
(MINAG, 2003). Tanto en Per como en Ecuador la
distribucin del cuy es amplia, encontrndose casi
en la totalidad del territorio, a diferencia de otros
pases como Colombia y Bolivia donde la
distribucin
est
restringida
a
algunos
departamentos y por lo tanto presentan poblaciones
menores. (Chauca L, 1997).
En la crianza del cuy se han reportado diversas

enfermedades infecciosas ocasionados por bacterias
como Bortedella bronchiseptica, Diplococcus
pneumoniae,
Yersinia
pseudotuberculosis,
Streptococcus
pyogenes,
Pasteurella
spp.,
Escherichia coli, Clostridium sp., Klebsiella
pneumoniae,
Diplococcus
pneumoniae,
Corynebacterium
pyogenes,
Shigella
sp.,
Produccin del cuy segn los sistemas de crianza

La produccin del cuy se puede clasificar en tres
niveles de acuerdo al sistema de crianza (Chauca L,
1997): el sistema familiar, el familiar-comercial y el
comercial. El sistema familiar se caracteriza por
desarrollarse fundamentalmente como sustento para
la alimentacin de la familia, los cuyes son criados
por los miembros de la familia y los alimentan con
malezas, residuos de cosecha y residuos de cocina,
se cran entre 20 a 50 cuyes por lugar de crianza
(Zaldivar M et al, 1990); este sistema se encuentra
en departamentos como Cajamarca, Junn y Lima
(Per), Nario (Colombia), La Paz y Cochabamba
(Bolivia) y el 90% de la crianza en Ecuador (Chauca
L, 1997; Caycedo, 1981; Chauca L, 1991; INIA,
1999; Moncayo R, 2000). El sistema familiarcomercial nace siempre de los sistemas familiares en
reas rurales cercanas a la ciudad, donde el criador
puede fcilmente comercializar su producto; los
productores invierten recursos monetarios para
infraestructura, tierra para la siembra de forrajes y
mano de obra para el manejo de la crianza (Chauca,
L 1995), en este sistema se mantienen entre 50 y
1000 cuyes, y se encuentra en departamentos como
Cajamarca, Junn y Lima (INIA, 1999). Por ltimo
el sistema comercial se presenta mayormente en
empresas agropecuarias, se mantienen reas de
cultivo para la siembra del forraje, se utiliza adems
alimento balanceado; este sistema mantiene por lo
menos 1000 cuyes, Lima es el principal
departamento con este sistema, adems de Cuzco y
Arequipa (Pea S, 2007).
Salmonella en cuyes
Tabla 1. Lugares de Crianza y Nmero de Cuyes

Criados segn el Tipo de Sistema.
Sistema de Lugares
Nmero de
Crianza
donde
se cuyes
encuentra
criados
Familiar
Cajamarca,
De 20 a 30
Junn, Lima
(Per),
Nario
(Colombia),
La
Paz,
Cochabamba
(Bolivia),
Ecuador.
Familiar
Cajamarca,
De 50 a
Comercial
Lima, Junn, 1000
Ancash
(Per)
Comercial
Cuzco,
Arequipa,
Lima (Per)
De 1000 a
ms
Streptococcus zooepidermicus, y especialmente el

gnero Salmonella (Morales S, 2012; Correa R,
2000).
Salmonella es un gnero de bacterias gramnegativas
perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, este
gnero est dividido en dos especies Salmonella
enterica
y Salmonella bongori, S. enterica
comprende ms de 2500 serotipos que estn
ordenados en 7 grupos: I, II, IIIa, IIIb, IV, VI y VII.
Existe una gran diversidad en este gnero.
Actualmente los serotipos de Salmonella pueden
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30
Volumen 1, n2
Mini-Review
infectar un amplio rango de hospederos, desde posteriores; aunque en muchos casos los animales
reptiles y aves hasta mamferos incluyendo humanos mueren sin mostrar sntoma alguno (Layme A,
(Gamazo C e Irache J, 2007)
2010). En los casos crnicos se presenta un
Salmonella es el principal agente infeccioso en los adelgazamiento paulatino, pelaje deslucido y
cuyes, durante largo tiempo se ha observado una aumento del volumen abdominal (Evans A, 2005).
gran susceptibilidad a la salmonelosis en los cuyes,
sin embargo an son escasos los reportes con datos Control de Salmonella en cuyes
exactos que permitan tener una idea clara de la
Actualmente, la mayora de criaderos realiza el
realidad de la salmonelosis en cuyes, algunos de
control de la Salmonelosis utilizando antibiticos
estos reportes son el de Legua P (1993) que seala
como
Sulfatrimetoprim,
enrofloxacina,
que hasta el 95% de muertes de la morbilidad
estreptomicina,
amoxicilina,
cloranfenicol,
general es generada por este agente causal variando
fosfomicina. Matsuura A et al (2010) determinaron
los efectos segn el estado de desarrollo del cuy
que de 40 cepas de Salmonella aisladas a partir de
(52.70% en adultos y 19.83% en lactantes), Morales
cuyes el 100% fueron sensibles los 4 primeros
S et al (2007) quien menciona que Salmonella
antibiticos mencionados, el 97,5% a gentamicina y
provoca brotes de mortalidad y abortos de hasta el
cloranfenicol, y el 92,5% a fosfomicina. Estos
65%, Matsuura A et al (2010) quin reporta en un
antibiticos son administrados por va oral a travs
criadero de Ancash una prevalencia de 61.5% y
del alimento balanceado. Adems como ya se
Ramrez A (1972) una prevalencia de 65.5%.
coment lneas arriba, las buenas prcticas de
Aunque no existe referencias exactas de cul es el manejo como: el control de roedores y aves, el
serotipo causante de la Salmonelosis en los cuyes, se ingreso controlado del personal, el aislamiento de
ha reportado mayormente presencia de S. enteritidis cuyes enfermos, el control de sanidad de los
(Correa R, 2000; Matsuura A et al, 2010) y S. alimentos, la limpieza constante del criadero, entre
thiphymurium (Correa R, 2000; Guamn M, 2014), otros permitirin prevenir hasta cierto punto el brote
adems de S. typhi (Dima V et al, 1989) y S. dublin de enfermedades. Sin embargo se sigue requiriendo
(Wagner J y Manning P, 1976)
de mtodos de prevencin ms efectivos que
La principal va de infeccin es la oral a travs de permitan desarrollar un sistema de crianza con
alimentos contaminados, esto ocasionado en gran menores ndices de morbilidad y mortalidad.
medida por las malas prcticas de manejo, deficiente Una forma bastante estudiada para el control de la
nivel de bioseguridad que ocasiona presencia de Salmonella son las vacunas, sin embargo la mayora
roedores y aves contaminados, ingreso no de vacunas producidas actualmente estn destinadas
controlado de personal, estrs en los cuyes (Figueroa a la industria de aves de corral (Desin T et al, 2013)
I y Verdugo A, 2005). Adems se ha determinado y hasta la fecha son pocos los estudios realizados en
que las variaciones de temperatura y humedad
cuyes, adems resulta interesante recalcar que gran
predisponen a la aparicin de infecciones (Ramrez
parte de la informacin acerca de vacunas contra
A, 1972).
Salmonella probadas en cuyes se ha realizado con el
La salmonelosis en cuyes se puede manifestar de objetivo de utilizarlas en otros animales y no en el
dos formas: crnica o aguda, siendo esta ltima la cuy (el cuy es utilizado como animal modelo). Esto,
que mayor mortalidad causa presentndose como un por lo tanto, no ha permitido que se desarrollen
cuadro septicmico agudo que genera muertes en 24 trabajos continuos enfocados a desarrollar una
a 48 horas, los signos ms frecuentes son vacuna ideal para cuyes, en cambio se han probado
decaimiento, postracin, anorexia, adelgazamiento, vacunas contra cepas y serotipos de Salmonella de
pelos speros y erizados, y parlisis de los miembros
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31
Volumen 1, n2
Mini-Review
Tabla 2. Reportes de Vacunas Probadas en Cuyes.

Serovar*
S. Abortusequi
S. Abortusequi
Comentario
htrA- mutante, permite 80-100% de
proteccin.
aroA-htrA- 100% de proteccin hasta
luego de 11 meses.
Va de
Administracin
Oral,
Intravaginal y
parental.
Oral,
intravaginal,
subcutnea.
S. Dublin
Cepa avirulenta HB 1/17, 46% de

proteccin con S. Dublin y 26% contra
S. Tyhphimurium.
--------------------
S. Typhi
Probado en cuyes recin nacidos, se

comprob produccin de anticuerpos.
Oral
S. Typhimurium
Cepa atenuada con 0.5% de formalina,

se comprob produccin de
anticuerpos.
Subcutnea
S. Typhimurium
Bacterina Cuadruple Inactivada, en

venta.
Intramuscular
Referencia
Singh B et al.
2005.
Singh B. 2005.
Cameron C y
Fuls W. 1975.
Dima V et al.
1989.
Barakat A et al.
1984.
Laboratorios
Llaguno.
*Ejemplo de Nomenclatura: Salmonella enterica Serovar Abortusequi = S. Abortusequi.
poca importancia para la crianza de cuyes como S.

Typhi (Dima V et al, 1989), S. Dublin (Cameron C y
Fuls W, 1975; Smith W y Halls S, 1966), S.
Abortusequi (Singh B et al, 2005), aunque en
algunos casos llegando a una efectividad del 100%.
La informacin se resume en la tabla 2.
tomarse en caso de un brote y por sobretodo no

existen medidas preventivas bien definidas que nos
permitan evitar el desarrollo de la enfermedad. En
pocas palabras se requiere de rigurosa
investigacin cientfica para poder tener la
posibilidad de mejorar la produccin del cuy en el
pas.
Conclusiones
Actualmente la demanda del cuy viene en aumento
tanto al interior del pas como en el exterior, sin
embargo se atraviesan serios problemas y prdidas
por causa de enfermedades infecciosas, siendo una
de las ms importantes la salmonelosis. A pesar de
existir investigaciones que muestren a los serovars
Typhi y Enteritidis como los agentes causales de esta
enfermedad; an no hay evidencia cientfica
suficiente para poder determinar cules son los
procesos de la Salmonelosis en el cuy, cules deben
ser las principales medidas de sanidad que deben
tomarse, cuales son las formas de control que deben
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Volumen 1, n2
Mini-Review
Fundamentos bsicos de PCR

convencional y sus variantes
Mdico, A.
Correo Electrnico: aldhairmedico@gmail.com
Laboratorio de Microbiologa. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Ricardo Palma .
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Medico A. Fundamentos
bsicos
de
PCR
convencional
y
sus
variantes.
Boletn
Cientfico. 2014. 1(2): 3644.
Palabras Claves:
PCR,
Cebadores, Fundamentos y
aplicaciones
R E S U M E N
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es una tcnica de biologa
molecular, desarrollada por Kary Mullis en 1986, utilizada para amplificar a
partir de una o unas pocas copias una secuencia de ADN, generando miles a
millones de copias de esa secuencia de ADN. Esta tcnica involucra tres pasos
principales: desnaturalizacin, hibridacin y extensin, los cuales se repiten en
ciclos para lograr la amplificacin; es necesario dar nfasis al diseo de
cebadores y sus consideraciones bsicas, ya que esto aporta la especificidad a
la tcnica. Por ltimo, en la actualidad el PCR es una tcnica comn e
indispensable en los laboratorios de investigacin biolgica debido a su gran
variedad de aplicaciones; la diversidad de aplicaciones que existen han
permitido que se generen variantes de la tcnica clsica: Nested PCR, Real
Time PCR, RT-PCR, Inverse PCR. Este artculo es un corto repaso de los
fundamentos bsicos de un PCR convencional y algunas de sus variantes.
Introduccin
Es indiscutible la importancia de la replicacin del
ADN desde niveles tan simples como el celular
hasta niveles ecolgicos, ya que con ella la clula es
capaz de continuar su divisin celular. Por este
mismo motivo es importante en el estudio del
cncer, que ocasiona casi 15 millones de muertes al
ao en todo el mundo, de las cuales solo en el Per
se presentan aproximadamente 31 mil nuevos casos
por cada ao (Ramos W et al, 2013).
En 1957 los bilogos estadounidenses Matthew
Meselson y Franklin Stahl utilizando cultivos
bacterianos de Escherichia coli, demostraron que el
ADN celular se replica
de la forma,
semiconservativa, propuesta por Watson y Crick
(Watson J y Crick F, 1953). Estos investigadores
utilizaron el elemento nitrgeno (N) presente en la
molcula de ADN, con el 14N natural y la

incorporacin del istopo de 15N radiactivo,
pudieron demostrar que cuando el ADN se replica,
una de sus cadenas pasa a las clulas hijas sin
cambiar (14N) y es la que acta como molde o
patrn, para as formar una segunda hebra
complementaria (15N) y completar las dos cadenas
del ADN (Watson J et al, 2006) (Ochman H et al,
1988). La replicacin del ADN consta de tres
etapas: iniciacin, elongacin y terminacin. Otras
caractersticas de la replicacin son la
secuencialidad y bidireccionalidad desde un punto
fijo llamado origen de replicacin. Este proceso se
desarrolla formando horquillas. In vivo necesita
varias protenas y enzimas tales como la helicasa,
topoisomerasa, protenas SSB, ADN polimerasa I y
III, ARN primasa y ADN ligasa (Karp G, 2011).
Con la tcnica de la reaccin en cadena de la
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polimerasa (PCR) todas estas enzimas, a excepcin los enlaces puente de hidrgeno son enlaces dbiles,
de las ADN polimerasa I y III, son reemplazadas por lo tanto se rompen cuando se le aplica calor;
mientras que los enlaces fosfodister no se ven tan
por variaciones de temperatura (Tabla 1).
afectados por este ya que son enlaces covalentes
fuertes. En la dcada de los 80, un problema que se
Tabla 1. Lista de reactivos necesarios para
tuvo fue conseguir una ADN polimerasa que no
realizar cada proceso. Se aprecia que la
fuera termolbil, porque la ADN polimerasa comn
variacin de temperatura reemplaza a varias
se desnaturalizaba a altas temperaturas, entonces
enzimas necesarias in vivo.
despus de cada ciclo del PCR se deba agregar
nuevamente, haciendo de este proceso muy lento y
costoso (Erlich H et al, 1991). El uso de una ADN
polimerasa termoestable, obtenida de Thermus
aquaticus (Fig. 2), signific un mayor rendimiento
en el proceso (Erlich H et al, 1991) (Saiki R et al,
1988).
Para desarrollar un ptimo PCR se necesitan
excelentes cebadores ya que estos les dan
especificidad al proceso. Pero debemos saber
primero dos cosas: qu son? (Apartado 1) y con
qu criterio se disean? (Apartado 2).
PCR: Por qu temperatura?
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) es
una tcnica que fue desarrollada en 1986 por Kary
Mullis. Por el desarrollo de esta tcnica Mullis
recibi el Premio Nobel de Qumica en 1993
(Bartlett J y Stirling D, 2003). Sin embargo,
Gobind Khorana en 1971 ya haba descrito el
principio bsico de la replicacin de una cadena de
ADN utilizando dos cebadores complementarios a
los extremos de la secuencia a amplificar.
Lamentablemente el progreso se vio limitado por la
sntesis de cebadores y la purificacin de la
polimerasa (Kleppe K et al, 1971).
El objetivo del PCR es amplificar ADN hasta
obtener un gran nmero de copias de una secuencia
molde. Pero, cul es el factor que determina que la
temperatura sea una gran herramienta en la
amplificacin de secuencias?
Para esto debemos analizar la estructura del ADN
(Fig. 1). El primer objetivo del PCR es
desnaturalizar las cadenas sin que se afecte la
secuencia de nucletidos. Esto es posible ya que
Figura 1. Esquema general de tipos de enlaces en el ADN.

(Tomada de: GeneMol: http://genemol.org/ y modificada
por el autor del artculo).
Fue muy difcil en los primeros experimentos

determinar las temperaturas idneas para la
desnaturalizacin, hibridacin y elongacin; es ms,
los primeros experimentos de PCR se hicieron a
bao Mara. Hoy en da se realiza este proceso en
un equipo denominado termociclador de manera
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Apartado 1. Cebadores.
Los cebadores son cadenas cortas de ADN artificiales
de no ms de cincuenta nucletidos (mayormente de
18 a 25 pares de bases) que son complementarios al
principio y al final del fragmento de ADN blanco
(Rahman M et al 2013). Luego de hibridarse es
donde la ADN polimerasa acta y comienza la
sntesis de la nueva cadena en direccin 5 a 3 (Fig.
3). El fragmento de ADN a ser amplificado se
delimita por los cebadores utilizados.
Figura 2. Micrografa de Thermus aquaticus, bacteria
Gram-negativa identificada por Thomas Brock (Tomada de
http://www.musee-frappier.qc.ca/images/site/large/thermusaquaticus-dianemontpetitagc.jpg y modificada por el autor).
controlada y programada. En este se pueden realizar

las variaciones secuenciales repetitivas de
temperatura llamadas ciclos con la confianza de que
la temperatura del ADN y el tiempo en cada paso sea
el correcto.
Pasos de un ciclo de PCR
Cada ciclo consta de tres pasos (Fig. 4); todos estos
ciclos son precedidos de un inicio donde el ADN es
desnaturalizado por un tiempo de, aproximadamente,
5 minutos a 94-96 C para asegurarse de que tanto
el ADN molde y los cebadores estn separados
completamente; este proceso es necesario para ADN
polimerasas que necesitan activacin por calor.
Y a su vez todos los ciclo son seguidos de un paso de
elongacin final, generalmente de 10 minutos a una
temperatura de entre 70 y 74 C, con esto se asegura
que cualquier ADN de cadena simple restante sea
totalmente ampliado (Haras D yAmoros J, 1994).
1. Desnaturalizacin (1-4 minutos): El ADN molde
de doble cadena debe ser calentado hasta los 94-96
C, dependiendo de la cantidad de G/C que tenga, con
el fin de separar las hebras. El calor rompe los
enlaces puente de hidrgeno que une a las bases
nitrogenadas.
2. Hibridacin (30-2 minutos): Despus de
separar las hebras de ADN, la temperatura se reduce
de modo que los cebadores pueden adherirse a las
hebras individuales de ADN. La temperatura de esta
Figura 3. Representacin de cebadores forward y

reverse y su complementariedad de bases con la
cadena molde. (De
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Primers_RevComp.s
vg y modificada por el autor del artculo de revisin)
etapa depende del Tm, tamao de los cebadores y

del contenido de G/C de cada uno de ellos y es de
50- 60 C generalmente. La temperatura
incorrecta durante la etapa de hibridacin puede
resultar en cebadores que no se unen al ADN
molde en lo absoluto, o la unin inespecfica.
3. Extensin (30-2 minutos): La ADN
polimerasa se adhiere a la cadena tomando como
punto de referencia al cebador;
aade los
desoxinucletidos trifosfatados (dNTPs) mientras
se abre camino a lo largo de la cadena de ADN. El
tiempo y la temperatura dependen tanto de la
fidelidad y rendimiento de la ADN polimerasa
como de la longitud del fragmento de ADN
blanco.
,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,
Despus de todo el proceso se puede colocar la
muestra a temperaturas de 4 a 15 si es que se
desea conservar a corto plazo (expuesto a accin de
nucleasas pero no a formacin de cristales de
hielo); a -20, si se desea a mediano plazo y a -70
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marcador de ADN, que contiene fragmentos de
ADN de tamao conocido. Hay dos formas de
hacer electroforesis, puede ser de forma vertical u
horizontal. El gel por lo general es de
poliacrilamida (+ resolucin) o de agarosa para
ADN/ARN y protenas (Fig. 5).
Figura 4. Cambios de temperatura (C) y tiempo (minutos)

controlados en la desnaturalizacin, hibridacin y extensin
en
un
ciclo
PCR.
(Tomado
de
http://cs412725.vk.me/v412725833/76db/hsbC98fWTs4.jpg)
o -80 si se quiere a largo plazo (expuesto a

formacin de cristales pero no a accin de
Figura 5. Resultados de una corrida de electroforesis con la
nucleasas).
Anlisis de resultados
El mtodo ms comn y sencillo consiste en la
tincin del producto de ADN amplificado con un
colorante qumico, como por ejemplo el bromuro
de etidio (compuesto aromtico altamente txico y
cancergeno), que se intercala entre las dos hebras
del ADN (Garibyan L y Avashia N, 2013).
Previamente se realiza una electroforesis.
La electroforesis en gel es un procedimiento que
consiste en inyectar ADN en gel y luego aplicarle
una corriente elctrica continua. Como resultado da
una migracin del ADN a travs del gel del polo
negativo al polo positivo (esto porque el ADN tiene
carga negativa por los grupos fosfato que son
atrados al polo positivo), as las cadenas ms
pequeas de ADN se mueven ms rpido que las
cadenas ms grandes por su menor masa. En el
caso de ADN simple y ARN, para evitar que se
plieguen de manera indeseada se le agregan
sustancias como la betamida y la formamida que
rompen los enlaces puente de hidrgeno
manteniendo la regla de que la velocidad de
migracin es inversamente proporcional al tamao
(Karp G, 2011).
El tamao del producto de PCR se puede
determinar mediante la comparacin con un
escalera de ADN a la izquierda. (Tomado de

http://www.cepazahar.org/recursos/file.php/46/Proyectos/Bi
otecnologia/resultado_electroforesis_adn.jpg).
Grfica de amplificacin del PCR

Puede ser dividida en tres fases (Fig. 6):
1. Fase exponencial: Esta fase se caracteriza
porque la polimerasa est en su mxima actividad y
la cantidad de reactivos restantes es alta; adems
en cada ciclo, la cantidad de producto se duplica
(suponiendo 100% de eficiencia) (Arnheim N y
Erlich H, 1992). La reaccin es muy sensible, slo
cantidades pequeas de ADN tienen que estar
presentes.
2. Fase lineal: La reaccin se ralentiza as como la
ADN polimerasa va perdiendo actividad y los
reactivos que se consumen, como cebadores y
dNTPs, se hacen limitados.
3. Fase Plateau: No se acumula ms producto
debido al agotamiento de reactivos y enzima. En
esta etapa del PCR es en donde se pueden analizar
los datos, por ejemplo mediante electroforesis.
Variantes del PCR
Nested PCR (PCR anidado): Es una tcnica muy
sensible en donde dos conjuntos de cebadores se
utilizan en la ejecucin de dos PCR consecutivos,
el segundo conjunto es destinado a amplificar un
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Apartado 2. Diseo de Cebadores.

Por qu son importantes los cebadores? La principal razn es porque los cebadores le dan la especificidad al PCR.
Por lo que un buen diseo de ellos llevar a un ptimo desempeo del PCR. En este apartado se vern las
consideraciones bsicas para el diseo de estos, el diseo de un cebador depende de la variante de PCR.
Ubicacin del cebador: Definir la ubicacin antes de ser diseados teniendo en cuenta un posible rango de variacin.
Y esta ubicacin debe ser flexible para no perder valiosos nucletidos de la secuencia de inters.
Tamao del cebador: Influye en el tiempo y temperatura necesarios para la hibridacin y en la especificidad (A
mayor tamao ms especificidad ya que eso disminuye el nmero de lugares posibles de unin).
Temperatura de fusin (Tm): Es una medida de la estabilidad de las secuencias de doble cadena. Es definida como
la temperatura en la cual 50% de los complejos cebador-molde encuentran formados y 50% an permanecen
disociados o sin formarse. Un alto contenido de G/C incrementa la temperatura de fusin ya que la unin entre estas
bases complementarias tiene 3 puentes de hidrgeno, a diferencia de A/T que solo tiene 2.
Temperatura de hibridacin (Th): Es la temperatura utilizada para que los cebadores se hibriden, generalmente es
4 C menos que la temperatura de fusin y vara directamente proporcional a esta. Ambos cebadores deben tener Th
similares porque si no el cebador con Th ms alto hibridar inespecficamente a bajas temperatura mientras que el de
Th ms baja puede que no hibride a temperaturas altas.
Evitar homodmeros: Es importante que un cebador no tenga complementariedad entre ms de 3 de los nucletidos
que lo conforman. Ya que las regiones de auto-homologa pueden formar estructuras parcialmente de dos cadenas que
puedan interferir con la hibridacin al molde. Tambin se recomienda que la energa libre de Gibbs sea mayor de -8.0
kcal/mol de preferencia positivo; de esto depende la cantidad de G/C y A/T (A mayor complementariedad de G/C se
tiene menor energa libre de Gibbs) (Fig. 7).
Evitar heterodmeros: Un heterodmero es la homologa entre los dos cebadores. Una homologa parcial en las regiones
medias de los cebadores puede que interfiera con la hibridacin, en caso la homologa ocurra en los extremos 3 de cada
cebador se dar la formacin de dmeros que impedirn la formacin del producto por competicin.
Contenido en G/C: La composicin de bases del cebador en guanina y citosina debe ser de entre el 50% y 60% y se
debe evitar que el cebador contenga zonas poli-G o poli-C que puedan llevar a hibridacin inespecfica. Tambin se
debe evitar las zonas ricas en poli-A y poli-T ya que es por dnde puede des-hibridarse el complejo molde-cebador
(Somma M, Querci M 2007).
Secuencia 3 terminal: La posicin terminal 3 confiere una unin firme entre el cebador y la secuencia molde. Se
debe considerar la existencia de dos residuos de G o C en las ltimas bases a modo de grapa (por ejemplo GG, CC,
GCO CG) para que la polimerasa acte ah (Figura 6). Se conoce tambin que los cebadores con secuencias inestables
(Mucha concentracin de A/T o G mayor de -8 kcal/mol) suelen ser ms especficos ya que la tasa de apareamiento
en lugares incorrectos es menor. (Fig. 8)
Estructuras secundarias del ADN molde: Puede que el cebador se vea obstaculizado si la secuencia blanco tiene
afinidad entre de bases. Se debe evitar que el cebador deba unirse a zonas con apareamiento de base del molde. Para eso
debemos saber que zonas del ADN molde tienen afinidad entre s (Fig. 9).
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Figura 7. Esquema de complementariedad de

bases de un cebador de 20 nucletidos con G
de 0.22 kcal/mol. (Tomado de The RNA
Institute: College of Arts and Science:
http://mfold.rna.albany.edu/ y modificado por el
autor del artculo de revisin).
Figura 8. Esquema simple de la unin de cebadores

a la secuencia molde, se puede apreciar que en los
extremos hay al menos una guanina a modo de grapa.
(Tomado
de
Davidson:
http://www.davidson.edu/academics/biology
y
modificado por el autor del artculo de revisin).
Figura 9. Presencia de estructuras secundarias en

el ADN molde. (Tomado de The RNA Institute:
College
of
Arts
and
Science:
http://mfold.rna.albany.edu/ y modificada por el
autor del artculo de revisin).
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Volumen 1, n2
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objetivo secundario dentro del producto de la
primera ejecucin (Severini G et al, 1993).
Multiplex PCR (PCR mltiple): Tcnica de PCR
que permite la deteccin simultnea de ms de una
secuencia en una sola reaccin. Mediante el empleo
de dos o ms parejas de cebadores para producir
amplicones de tamaos distintos que son
especficos para diferentes secuencias de ADN
diferentes (Markoulatos P et al, 2002).
Real Time PCR (PCR a tiempo real): Es una
tcnica que se basa en el mismo principio que el
PCR convencional, solo que a este se le aade
fluorforos y adems se utiliza un termociclador
con sensores de fluorescencia.
Gracias al fluorforo se miden los productos a
medida que se producen, en simultneo; durante la
amplificacin este fluorforo se une a las molculas
del ADN y los valores de fluorescencia se reportan
en cada ciclo (Hirakawa Y et al, 2010).
RT-PCR (PCR transcriptasa inversa): Es una
variante de la PCR en la que se usa ARN, utiliza
una enzima transcriptasa inversa para realizar la
sntesis de un ADN complementario al ARN
(ADNc). Para luego aplicar un PCR convencional
sobre este. Es frecuentemente utilizado en los
perfiles de expresin, para determinar la expresin
de un gen o para identificar la secuencia de un
transcrito de ARN, incluyendo el inicio de la
transcripcin y los sitios de terminacin. (Doak S y
Zair Z, 2012)
Inverse PCR (PCR inverso): Una limitacin de la
PCR convencional es que requiere cebadores
complementarios a ambos extremos de la secuencia
blanco, pero este mtodo permite amplificar e
identificar una secuencia conociendo solo una
regin interna de la secuencia objetivo es
ampliamente usado en gentica (Ochman H et al,
1988).
Usos y aplicaciones del PCR
Huella digital gentica: Esta tcnica forense
permite identificar a una persona comparando su
ADN con otra muestra obtenida, por ejemplo, de la
escena de un crimen. Determinando si pertenecen al
mismo individuo o no, o si existe parentesco entre
ellas. Como la muestra suele ser muy escasa, el PCR
puede aumentar la cantidad de ADN amplificando
ciertos segmentos polimrficos (variantes en la
poblacin), para luego ser separados por
Figura 6. Grfica de amplificacin del PCR segn el

nmero de ciclos empleados a) gel de agarosa donde
se realiz la optimizacin de la cantidad de ADN (en
donde 1: escalera, 2: producto especfico, 3: producto
inespecfico); b) grfica de concentracin de ADN
respecto del nmero de ciclos empleados c) logaritmo
de la concentracin de ADN respecto del nmero de
ciclos
empleados
(Tomada
de
http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/7/7
e/Cycle_range_end-point_PCR.jpg y modificada por
el autor del artculo de revisin).
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electroforesis lo que se conoce como ADN
fingerprint o huella digital.
Test de paternidad: En esta tcnica se amplifica
por PCR fragmentos polimrficos de ADN de la
madre, del nio y de l o los presuntos padres y,
separndolos mediante electroforesis, se puede
visualizar una serie de fragmentos que tiene el
nio, los cuales deben compartir con la madre y
padre biolgicos.
Deteccin de enfermedades Cada gen en estudio
puede ser amplificado por PCR, con los cebadores
adecuados, y luego ser secuenciados; para as
determinar si un individuo porta alguna mutacin
que explique la presencia de una enfermedad o su
aparicin en el futuro, la que puede ser heredada a
sus progenitores y as se maneje su tratamiento.
Secuenciacin y clonacin de genes: La PCR es
habitualmente usada para amplificar un
determinado gen o un ARNm (representado por un
ADNc), que puede introducirse en un vector y
luego en un organismo, que al duplicarse tambin
duplicar el gen que nos interesa. As podemos
tener una cantidad suficiente de un gen o ADNc,
por ejemplo, para secuenciarlo o incluso para
producir a gran escala la protena que este gen
codifica.
;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;
Anlisis de ADN antiguo: Con el PCR se puede
analizar ADN que tiene miles de aos de
antigedad (siempre y cuando est en buen estado),
lo que ha permitido estudiar muestras obtenidas
desde momias hasta animales y vegetales ahora
extintos
Conclusiones
El conocimiento de los diversos mecanismos
moleculares implicados en la replicacin ha
permitido desarrollar la tcnica del PCR y
reemplazar el uso de enzimas por variables
controladas como la temperatura en aparatos
automatizados. Adems el PCR es altamente
especfico y debe esto principalmente a los
cebadores y su diseo, haciendo del PCR una
tcnica ampliamente usada en el mundo. A partir
de un PCR convencional, que consta de tres pasos
por ciclo (desnaturalizacin, hibridacin y
extensin), se han desarrollado distintas variantes
de acuerdo al campo y/o finalidad de su uso. Por lo
que el uso del PCR se ha extendido a campos desde
la biologa evolutiva hasta la medicina.
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Volumen 1, n2
Mini-Review
Integracin de la Biotecnologa Bacteriana

y la Ingeniera Gentica de Plantas
Morales, M.
Correo electrnico: mmarlon14o@hotmail.com
INFORMACIN DEL
ARTCULO:
Morales M. Integracin de
la Biotecnologa Bacteriana
y la Ingeniera Gentica de
Plantas. Boletn Cientfico.
2014. 1(2): 42-51.
Palabras
Claves:
Agrobacterium tumefaciens,
TDNA, opern vir
R E S U M E N
Los estudios en biotecnologa han demostrado que se puede utilizar el
mecanismo de infeccin de microorganismos fitopatgenos para que las
plantas expresen molculas cuya produccin actual es ineficiente y de alto
costo. Uno de estos organismos utilizados en la ingeniera gentica de plantas
es Agrobacterium tumefaciens que tiene la capacidad de transferir una
secuencia del plsmido Ti al genoma vegetal. Esta secuencia se denomina
TDNA y el proceso es regulado, principalmente, por el opern vir del pTi, el
cual est conformado por ocho genes vir (A-H). La transferencia comienza
con la activacin de la protena receptora virA, por interaccin con
compuestos fenlicos secretados por la planta; a partir de ello, se fosforila la
protena VirG, y acta como factor de transcripcin para las dems protenas
Vir. Las protenas que se encargan de transportar el TDNA y mantener su
integridad son VirD1 y VirD2, VirB, VirE y VirF. Esta propiedad, ha dado
paso a mltiples investigaciones en donde se reemplazan los genes del TDNA
por un gen de inters y se acompaa de otro vector de A. tumefaciens que no
posee una regin de TDNA pero s el opern vir permitiendo la transferencia
del TDNA modificado, a este sistema se le denomina vector binario. En la
actualidad mediante la aplicacin de esta metodologa se pueden obtener
plantas transgnicas lo cual permite mejorar la productividad de plantas de
importancia econmica u obtener sustancias proteicas que son indispensables
en otras reas de la ciencia.
Las plantas, fuente de vida

Desde los inicios de la humanidad, las plantas han
sido los principales organismos pluricelulares que
se han usado como alimento, medicina, e inclusive
como ornamento. La distribucin de muchas
especies puede llegar a ser global dependiendo del
uso al que est destinado. Es as que, a medida que
se desarrollaban nuevas tcnicas para cultivar y
conservar diferentes tipos de plantas, se adaptaban
otros organismos que, al igual que los humanos,
necesitaban de la planta para sobrevivir, causando

prdidas en la productividad de cultivos, como el
virus de la papa que afecta al 90% de las plantas
cultivadas (Robles L et al, 2010). Esto inici los
estudios guiados a la fitopatologa, rea que se ha
desarrollado desde 1729, cuando el botnico
Michelli observ hongos en plantas de melocotn,
dando paso a la determinacin de hongos, bacterias
y virus, que producen enfermedades en las plantas
(Agrios G, 2013).
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Volumen 1, n2
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De las bacterias a las plantas
realizar un mejoramiento gentico, o inclusive

Una de estas enfermedades es la Corona de expresar molculas difciles de obtener en otros
Agallas, denominada as por las agallas de aspecto sistemas (Valderrama A et al, 2005).
tumoroso que aparecen en la parte basal del eje
principal areo de la planta, generalmente en la Transferencia de ADN (T-DNA) en la clula
base del caule, y fue descrita por primera vez por vegetal
Fabre F y Dunal F en 1853. Sin embargo, fue en
1997 cuando Chilton M et al, reconocieron El desarrollo de la enfermedad est ligado a la
fragmentos de ADN en los tumores axnicos de interaccin entre el patgeno, el ambiente y el
plantas de tabaco, procedentes de un bacilo hospedero. El patgeno coloniza las heridas e infecta
gramnegativo:
Agrobacterium
tumefaciens. la planta mediante mecanismos moleculares que
Posteriormente, se determin que estos fragmentos involucran una serie de interacciones genticas que
contribuyen a que la bacteria sea capaz de adherirse
a la planta y causar la tumoracin y transferencia de
ADN; estos procesos se pueden sintetizar en cuatro
pasos fundamentales: la colonizacin bacteriana; la
induccin del sistema de virulencia; la generacin
del complejo de transferencia (T-DNA); y la
integracin del T-DNA en el genoma de la planta.
En este proceso resalta la participacin de un
plsmido denominado Ti (Tumoral inductor
inductor del tumor) (Fig. 2). (De la Riva G et al,
1998).
Figura 1. Corona de Agallas causada por A.

tumefaciens (Escobar M y Dadenlar A, 2003).
de ADN contenan genes que inducan la formacin

de tumores en las clulas vegetales, ya que eran
introducidos mediante un mecanismo de
transferencia al genoma de las plantas. Es as que la
investigacin caus gran impacto en el rea de la
gentica de plantas, concibiendo la idea de que una
planta puede expresar un gen que no se encuentre
normalmente en su genoma. A partir de ello se
comenz a investigar este mecanismo con el fin de
El proceso colonizacin bacteriana incluye la

adherencia del patgeno a la raz o tallo de la planta;
esto se da debido a que Agrobacterium reconoce
clulas vegetales que se encuentran daadas por
factores fsicos, qumicos o biolgicos; ya que dichas
clulas vegetales secretan sustancias fenlicas de
bajo peso molecular como acetosiringona e
hidroxiacetosiringona que son reconocidos por la
bacteria; por otro lado, las clulas vegetales daadas
tiene la caracterstica de no presentar una pared
celular estable lo que conlleva a la alta produccin
de lignina y flavonoides que permiten dirigir a la
bacteria
hacia
las
clulas
susceptibles;
posteriormente, la bacteria se une a la clula
mediante la accin de una molcula en la pared
celular sensible a proteasas que es reconocida por la
bacteria; estas molculas pueden ser dos protenas de
adhesin en donde se encuentra la vitonectrina y la
ricoadhesina, sin embargo este proceso no ha sido
descrito genticamente (Llop P, 2003); no obstante,
se han identificado genes que son necesarios para
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45
Volumen 1, n2
Mini-Review
esta accin como: chvA y chvB. En segundo lugar,
la induccin del sistema de virulencia se refiere a la
expresin del opern vir, el cual consta de 8 genes:
6 de ellos se han determinado como esenciales:
virA, virB, virC, virD, virE y virG; mientras que los
otros no se consideran relevantes en la
transferencias de ADN: virF y virH. El VirA es un
receptor dimrico ubicada en el peptidoglicano y la
membrana interna, que se une a la protena ChvE la
cual reconoce los compuestos fenlicos secretados
por la planta y por accin de un sensor kinasa (1),
ubicado en la regin del VirA que se encuentra en
el citoplasma, que capta los grupos fosfatos del
ATP y fosforila al VirG (2) ubicado en el
citoplasma de la bacteria, y que funciona como

factor de transcripcin para la expresin de los
dems genes vir (3) (De la Riva G et al, 1998).
La generacin del T-DNA se da mediante la
expresin del gen virD2, principalmente, el cual
funciona como endonucleasa unindose a los bordes
(Right border y Left border) del plsmido en el
sentido 5 3, formando el complejo virTDNA (4).
La protena VirD2 es la ms importante en este
proceso ya que gua al TDNA desde el citoplasma
bacteriano al genoma de la planta (Rodrguez L,
2012); adems se aade la funcin de las protenas
VirE2 que ayuda en el transporte del TDNA y su
Figura 2: Mecanismo molecular de la transferencia del TDNA del pTi al genoma vegetal.
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Volumen 1, n2
Mini-Review
integracin (6) (Wroblewski T et al, 2005). Adems
acta la protena VirF cuya funcin no est
completamente determinada, pero se cree que acta
inactivando las enzimas que puedan degradar el
TDNA mediante protelisis (7) (Schrammeijer B et
al, 2001). Este complejo ingresa en el citoplasma de
la clula hospedera mediante la accin de las
protenas VirB1-11 y VirD4 los cuales unen la
membrana celular de la bacteria con el citoplasma
de la clula vegetal (5) formando un puente similar a
un proceso de conjugacin (McCullen C y Binns A,
2006) (Fig. 2).
Finalmente, el complejo virTDNA es internalizado
en el ncleo de la clula vegetal por la protena
VirD2 el cual contiene dominios de recombinacin
y ligacin (Bako L et al, 2003); y con la
participacin de histonas como la H2A (Tzfira T y
Citovsky V, 2002); adems, existen protenas de la
planta, como Vip1, que reconocen al virE2 para
permitir la integracin del TDNA; por otro lado,
tambin, es reconocido por las chaperonas de la
planta: RocA, Roc4 y CypA (8) que mantienen la
insercin del TDNA en el genoma de la planta
(Valderrama
A et al, 2005).
La transformacin: Base de la Ingeniera

Gentica
A partir del mecanismo anterior. La ingeniera
gentica ha encontrado un beneficio propio en la
obtencin de plantas transgnicas. Es as que se
utiliza un sistema de vector binario, el plsmido Ti
se ha domesticado inhibiendo la sntesis de genes
de induccin de tumor y desarrollo de la
enfermedad y manteniendo los genes de
transferencia de ADN: el opern vir (Gutarra B,
2004) (Fig. 3), este plsmido se utiliza con otro
vector que posee el gen de inters con el fin de
obtener varias copias del plsmido, y subclonado
en un plsmido de expresin que posee un
promotor, residuos que facilitan la purificacin (Ej.
His-6) y un terminador (Shoji Y et al, 2008).
Adems, para facilitar la identificacin de una
transferencia exitosa, el vector de expresin
presenta un gen que da resistencia a herbicidas, as
se puede tratar a las plantas con dichas sustancias y
si no resultan afectadas entonces la transferencia
del gen es satisfactoria (Cubero J, 2013). Existen,
actualmente, vectores comerciales con sitios
mltiples de clonacin (MCS), como pT7-Blue y
pBluescriptII, en los que se ha insertado el gen del
Figura 3: Sistema de Vector Binario. (izq.) plsmido Ti desarmado. (der.) Vector con el gen de inters. Tomado de:
http://concienciadeplantas.blogspot.com/2013/03/tecnicas-que-empleamos-parte-1.html
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Volumen 1, n2
Mini-Review
IFN controlado por promotores de Amy y
Ubiquitina, el cual fue subclonado en otro plmsido
comercial de A. tumefaciens: pCAMBIA1390, el
cual est diseado con el marcador de resistencia a
higromicina; es decir que aquellas plantas que hayan
sido transformadas debern ser resistente a este
antibitico y expresar el IFN (Chen T et al, 2004).
Aplicaciones de la Transformacin de Plantas
mediado por Agrobacterium tumefaciens
La ingeniera gentica en microbiologa y en
botnica ha permitido la obtencin de organismos
genticamente modificados (OGM), los cuales
pueden expresar caractersticas deseables, tales
como colores, resistencia a factores abiticos como
temperatura, potencial hdrico, e inclusive
pesticidas; y biticos, como plagas principalmente;
adems se est evaluando la posibilidad de expresar
protenas cuya produccin es baja y poco efectiva y
que tienen una importancia en el rea de salud,
generalmente, tales como las molculas del sistema
inmunolgico o antgenos para la produccin de
protenas recombinantes (NSTA, 2007). Sin
embargo, en la actualidad, Europa es el principal
continente donde se ha permitido el uso de algunos
transgnicos que poseen resistencia a herbicidas y

plagas, produccin de colores, y longevidad y sus
usos
van
desde
cultivos,
alimentacin,
procesamiento, ornamentacin e importaciones
(Cuadro 1), adems, es posible la venta de semillas
de esta plantas transgnicas (Sebiot, 2000).
En nuestro pas, el uso de los transgnicos para las
actividades mencionadas anteriormente no est
permitido debido a la proclamacin de la Ley N
29811 que impide el ingreso, produccin y
liberacin de OGM en el territorio nacional por un
periodo de 10 aos, y simultneamente, se debe
equipar, adaptar y desarrollar una infraestructura
necesaria para la evaluacin de estos organismos y
su aceptacin en el pas (MINAM, 2012). Para ello,
es necesaria la investigacin en las reas de la
biotecnologa bacteriana y vegetal con el fin de
comprobar la viabilidad y uso de los organismos
genticamente modificados y transformados por
accin de Agrobacterium tumefaciens.
Conclusiones
Es as que a partir de una patologa que pareca
tener la capacidad de causar un grave impacto en la
economa de la agricultura y ms an en la
Tabla 1. Plantas Transgnicas permitidas en Europa.
Organismo
Caracterstica
Usos
Maz Bt-176
Resistente a Pyrausta nubilalisTaladro
Todos los usos
Maz MON-810
Resistente a Pyrausta nubilalisTaladro
Todos los usos
Maz T25
Resistente a glufosinato de amonio (herbicida)
Maz Bt-11
Resistente al taladro y al glufosinato de amonio
Tabaco
Resistente a bromoxinil (herbicida)
Soya A-5403
Resistente al glifosato (herbicida)
Achicoria
Tolerante al glufosinato de amonio (herbicida)
Todos los usos

Importacin y
procesamiento
Cultivo
Importacin y
procesamiento
Cultivo
Claveles
Nuevos colores
Ornamentacin
Claveles
Mayor Longevidad
Ornamentacin
Extrado de : Plantas Transgnicas: Preguntas y Respuestas (Sebiot, 2000)
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Volumen 1, n2
Mini-Review
alimentacin del hombre, result ser una
herramienta para el mejoramiento gentico que
actualmente viene solucionando gran cantidad de
problemas de la humanidad. La interaccin gentica
del plsmido Ti, permite la adherencia de la bacteria
a la planta (chvA, chvB); la induccin del sistema de
virulencia a partir de los genes virA y virG; la
sntesis del complejo virTDNA mediante la
expresin de los genes virB, virC, virD, virE, virF,
virH; y la integracin del TDNA en el genoma de la
planta, donde el principal protagonista es el gen
virD2, ya que posee dominios de ligamiento y
recombinacin. Este proceso, es aprovechado para
la obtencin de transgnicos lo cual permite mejorar
la productividad de plantas de importancia
econmica u obtener sustancias proteicas que son
indispensables en otras reas de ciencia.
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Volumen 1, n2
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Direccin:
Facultad de Ciencias Biolgicas
Av. Benavides 5440, Santiago de Surco,
Lima 33PERU
Contacto:
alcides.guerras@urp.pe
999227470

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