INMOVILIZACIN DE ENZIMAS POR ADSORCIN

Es una tcnica que se utiliza no slo para enzimas sino tambin clulas
enteras, aunque su uso ms general sea para la primera mencionada. Consiste en
poner en contacto la enzima que se encuentra en la solucin acuosa con un
soporte adsorbente por un lapso de tiempo de 2 a 48 horas, para despus lavar el
soporte y eliminar la enzima que no fue inmovilizada. (1)
Esta tnica aprovecha las interacciones fsicas tales como las interacciones
hidrofbicas, fuerzas de van der Waals y puentes de hidrogeno. Los soportes
inorgnicos son los ms usados entre ellos tenemos el soporte de alumina, carbn
activado, vidrio, resinas cambiadoras, entre otras. (2)
Como ejemplo se conoce que las levaduras poseen una superficie qumica
cargada por lo general negativamente, por lo tanto se usa un soporte que este
cargado positivamente para lograr la inmovilizacin. (3)
Es un proceso muy suave en donde la actividad del enzima se conserva ya
que no requiere de la activacin qumica pero si es necesario un estricto control de
las condiciones a las que se lleve a cabo las condiciones de adsorcin y es un
proceso reversible en funcin de las condiciones de temperatura, pH, etc. (4)
Bsicamente el procedimiento consiste en mezclar juntos los componentes
biolgicos y el soporte (con propiedades adsortivas) bajo condiciones deseables
de pH, fuerza ionica y tiempo de incubacin, posteriormente se recolecta el
material y se lava para eliminar las enzimas que no se adsorbieron. (3)
En la siguiente figura se muestra un esquema bsico de cmo funciona la
adsorcin de enzimas cargadas positivamente por un soporte cargado

negativamente.

Figura 1. Proceso de adsorcin enzimtica (3)

El contacto de la solucin acuosa de la enzima con el soporte se puede hacer

por varias tcnicas de contacto:

Bao con agitacin es la tcnica ms usada en el laboratorio, consiste en

que la solucin enzimtica es puesta en contacto con el slido en un tanque
termostatizado y agitado por vibracin, vaivn o movimiento orbital,
logrndose una deposicin uniforme de enzima. (5)
La inmovilizacin en un reactor se usa ya a escala industrial, este reactor
puede ser de lecho fijo o fluidizado o tambin un tanque agitado por hlice,
paleta o turbina, al que la solucin enzimtica se recircula o en el que se
agita dicha solucin. (5)
Adsorcin por electrodeposicin, el soporte es colocado cerca de un
electrodo y debido a la atraccin elctrica la enzima migra hacia l. (5)
La adsorcin esttica es el procedimiento ms lento y origina una
deposicin no uniforme ya que no hay agitacin. (5)

Los principales factores que influyen en la adsorcin son:

pH del medio ya que este es el que controla la naturaleza y cantidad

de las cargas que se encuentran en la superficie de la protena y del
slido. (6)
La fuerza inica no debe ser muy alta debido a que al aumentar la
fuerza inica se produce la desorcin de la enzima, ya que los iones
inorgnicos se unen con ms fuerza al soporte que la protena. (6)
El dimetro de poro este debe ser aproximadamente dos veces el
tamao del eje mayor de la enzima. (6)
La presencia de iones que acten como cofactores de la enzima, ya
que pueden incrementar la carga enzimtica del derivado. (6)

Este mtodo posee varias ventajas entre las cuales se destacan: (6)
1. Es de preparacin sencilla
2. No presenta un costo muy alto
3. La especificidad enzimtica no vara.
4. Mientras el contenido de agua sea bajo, los derivados son estables.
Pero as como presenta esas ventajas tambin tienes desventajas. Entre
los inconvenientes de la adsorcin tenemos: (6)
1. La optimizacin de las variables que controlan la adsorcin.
2. Los derivados obtenidos son poco estables desde el punto de vista mecnico.
3. Dbil unin al soporte.

Una variante dentro de la tcnica de la adsorcin consiste en emplear

resinas de intercambio inico, las cuales contienen grupos funcionales y
contraiones mviles. Estos contraiones se pueden intercambiar reversiblemente
por otros iones de la misma carga, sin que se produzcan cambios en la matriz
insoluble. (6)
De acuerdo al tipo de interaccin del soluto con el adsorbente se pueden
distinguir 4 tipos bsicos de adsorcin fsica:
1. Adsorcin fsica: En este tipo de adsorcin las fuerzas de atraccin entre
el soluto y el adsorbente son de tipo Van Der, puentes de hidrgeno. (8)
2. Adsorcin inica: Las atracciones electroestticas las genera la diferencia
de cargas entre el adsorbente y el soluto, este tipo de atracciones resultan
ms fuertes y selectivas. (8)
3. Adsorcin hidrofbica: Tal como su nombre lo dice, este mtodo se basa
en las interacciones de los grupos hidrofbicos de la protena con un
soporte de naturaleza igualmente hidrofbica. Las interacciones
hidrofbicas son ms fuertes a fuerza inica alta, por lo que esta tcnica por
lo general puede ser llevada a cabo tras la precipitacin salina o la
cromatografa de intercambio inico, sin necesidad de cambiar la
concentracin salina de la muestra. Los materiales usados para este tipo de
cromatografa suelen ser matrices de agarosa o derivados con ligando de
tipo isopropil, butil, octil o fenil, y como eluyentes los ms comnmente
usados son los basados en sales con elevada fuerza inica, siendo el ms
habitual el sulfato amnico en concentraciones superiores a 1M. (7)
4. Adsorcin por afinidad: La molcula a ser purificada es adsorbida de
forma reversible y especfica, a una sustancia complementaria (ligando)
inmovilizada en un soporte insoluble (matriz). Tiene un efecto concentrador,
lo que permite procesar grandes volmenes de muestra. La alta
selectividad de las separaciones depende de la especificidad natural de las
molculas interactuantes, es la herramienta ms poderosa para la
purificacin de protenas. (7)

Figura 2. Tipos de adsorcin. (a) Fsica, (b) Inica, (c) Hidrofbica, (d)
Afinidad.
En la adsorcin por afinidad el adsorbente consta de dos partes:

El soporte o matriz.
Los ligandos, estas son molculas de alta afinidad por el soluto de inters y
pueden ser de diversos tipos (8)

Figura 3. Tipos de ligando en adsorcin de afinidad.

Para adsorbentes que van a ser usados en la industria es importante una

apropiada seleccin de la matriz. Desde el punto de vista econmico, la celulosa
es uno de los materiales ms atractivos para la inmovilizacin de ligandos por
afinidad, debido a su gran estabilidad qumica, resistencia mecnica, capacidad y
costo. (8)
Bibliografia
(1) http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/109921/mod_resource/co
ntent/0/Inmovilizacion%202.pdf. Fecha de revisin 17/01/2015 hora: 8:30
pm
(2) file:///D:/Downloads/Tema_10_Biotec_Enzimas.pdf. Fecha de revisin
17/01/2015 hora: 9:00pm
(3) http://www.bdigital.unal.edu.co/1122/1/luisriosfranciscoarias.2002.pdf.
Fecha de revisin 18/01/2015 hora: 7:00 am
(4) file:///D:/Downloads/INMOVILIZACI_N_DE_ENZIMAS.pdf Fecha de revisin
18/01/2015 hora: 7:30 am
(5) http://biblioteca.ucm.es/tesis/19972000/X/0/X0043802.pdf Fecha de revisin
20/01/2015 hora: 9:23 pm
(6) file:///D:/Downloads/ENZIMAS%20INMOBILIZADAS%20.pdf
Fecha
de
revisin 18/01/2015 hora: 12:25 pm
(7) http://www.tesisenred.net/bitstream/handle/10803/5317/asf1de2.pdf?
sequence=1 Fecha de revisin 18/01/2015 hora: 1:30 pm
(8) http://tesis.uson.mx/digital/tesis/docs/1575/Capitulo1.pdf