Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
[ES]
P + E
AcPase
Mg
p-NPP
(incoloro)
2+
PO43 -
p-NP
(amarillo)
Solucin:
Buffer AcH/AcNa pH 5,0 (0,2 M)
MgCl2 (100mM)
p-NPP (50 mM)
Muestra de enzima
H2O
(c.s.p. 500 l)
Volumen
250 l
10 l
50 l
10 l
180 l
Concentracion final
0,1 M
2 mM
5 mM
500 l
3.- Homogeneizar en vortex cada tubo y colocar en bao de H2O a 37C durante 15 min.
4.- Transcurrido el tiempo, sacar los tubos del bao y dejarlos en hielo. Agregar 500 l de
Na(OH) 2 N.
5.- Medir la DO a 410 nm en espectrofotmetro.
6.- A cada medicin restar la DO del tubo B, esto se considera DO corregida, y es la DO
producto de la actividad enzimtica, nicamente.
7.- Calcular la actividad de la enzima en U.ml-1 utilizando la siguiente frmula y registrarlos
en el cuadro al final de la gua:
1000 L
DOcorregida
U . mL-1 =
.
15 min
10 L