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Dysoxie et Mtabolisme

R Guieu Laboratoire de
Biochimie, Timone, UMR MD2

Causes de dysoxie
l
l
l
l
l

Dfaut de ventilation (origine pulmonaire)


Dfaut de perfusion (origine circulatoire)
Augmentation des besoins sans apport
supplmentaire (exercice)
Diminution de la PO2 dans le milieu ambiant
(altitude)
Augmentation des apports: plonge sous
marine, caisson hyperbare, oxygnation
thrapeutique
2

Glucose
ATP
ADP

G6P

Glycolyse
F6P
ATP

Phosphofructokinase

ADP

F1-6 DiP
Aldolase
isomrase

Glyceraldhyde 3P
deshydrogenase

Dihydroxyacetone P

Acide lactique
Lipides,
protines

mitochondrie
NADH + H+

Acide 1-3
diphosphoglycrique
ADP

Actyl Coa

O2

Acide pyruvique
H 2O

ATP

Acide 3-phosphoglycrique

Anarobie + 2 ATP

+ 30 ATP

Acide 2 phosphoglycrique

Pyruvate
kinase

ATP

Acide phosphoenolpyruvique

En cas de dfaut doxygnation


Pas daccepteur dlectron dans la chaine respiratoire mitochondriale
Elevation de NADH+ et H+ qui inhibent le cycle de lacide citrique
Inhibition de la pompe proton

Aliments hydrocarbons
NAD+

NADH + H+

02 + e + H+

O2

CO2

H2 O

PV = nRT BOYLE/MARIOTTE
n=mol; R= p0 X V0/T0
p0 = 1 atm (1013hP)
V0 = volume molaire
T0= 273
R=8,3
K Henry= P gaz/conc Gaz dissout (en bar/mol)
Concentration de O2 dans l'eau en quilibre avec de l'air 25 C.
KHenry = [O2 (aq) ] / P(O2) = 1,2710-3 Mbar-1
L'air contient 21% de O2, donc P(O2) = 0,21 bar.
[O2 aq] /0,21= 1,27 Mbar-1
[O2 aq] = 2,6710-4 M.

Hmoglobines embryonnaires

Gower 1

Portland

Gower 2

Hmoglobines Foetales

(F)
2

Hmoglobines Adultes

!
"

Hm A

Hm A2

saturation
%
100
02

Hm maternelle

50

Hm foetale

20

40

60

PO2 torrs

80

Courbes de dissociation Mb02 et Hb O2


myoglobine
100%

hmoglobine

50%

pression veineuse

20

40

pression artrielle

60

pO2 (torr)

80

100

NH3+

!2

COO -

Arg 141

NH3+

Lys 40

COO -

His 146

Asp 94

Asp 126

"2

!1

Asp 94

"1

Asp 126

His 146

Lys 40

Asp 141

COO -

NH3+
COO -

NH3+

15

!2

"2

!2

"2

0,4 A

Saturation
%

PO2
torrs
Influence du CO2 sur la courbe se
saturation de l hmoglobine.
Hm de crocodile <5% de C02
Hm de crocodile 20% de C02
Hm Humain, 20% de C02
Hm Humain, <5% de C02

Saturation
%

pH 7,6

100

pH 7,2

50

20

40

60

pO2
torrs

Effet Bohr

80

Exemple : manque dapport par dfaut de perfusion

Marqueurs diagnostic et/ou


pronostic
Infarctus du myocarde, ischmie
myocardique
et marqueurs biologiques

19

Ischemia - Part of Continuum


Coronary Artery Disease

Progression

Intracoronary Thrombus
Thrombus Precursor Protein

Reduced Blood Flow


Perfusion Imaging
Angiography

Myocardial Ischemia
ECG, Sestamibi
IMA

Myocardial Infarction

C-Reactive Protein

Unstable
Angina
Angina

Plaque Disruption

Clinical Diagnosis

Asymptomatic

Pathophysiology

Myocardial Necrosis
Troponin, CKMB, Myoglobin

Risk
20

Courtesy Robert Jesse, MD, Medical College of Virginia

Infarctus du myocarde
(IDM)
Dfinition ( Concensus ESC/ACC)
douleur

rtrosternale caractristique

anomalies

d lectrocardiogramme ou
lvation de marqueurs biochimiques de
ncrose (troponine cardique ou CK-MB).
21

Marqueurs biologiques
l La

troponine
l CK-MB
l Myoglobine
l IMA

: albumine modifie
l Adnosine

22

23

Cintique des marqueurs


cardiaques dans le sang
A: myoglobine
B: Troponine
C: CK-MB
D: troponine aprs
micro infarctus

24

Troponine (TnIc)
l Marqueur

trs spcifique de l IDM


l Apparition entre la 3e et 8e heure aprs
la douleur thoracique.
l Pic 12 et 16me heure, reste leve 5 9j.
l Spcificit

cardiaque 98,8% ; sensibilit


9 4 ,6 % ( syst me A DVI A Cen t au r ,
immunoenzymatique)
25

CK-MB
l
l

Isoforme de la CK, localise principalement


dans le muscle cardiaque.
CINETIQUE
Delai d appartion : 3e 8e heure
l Pic : 12e heure
l Normalisation : 48e heure
l

l
l

Technique immunodosage, la plus sensible


C est un marqueur prcoce mais pas encore
spcifique 100% du myocarde.
26

Myoglobine
l
l

Marqueur non spcifique, prsent dans tous les


muscles stris.
CINETIQUE :
Delai d apparition : 2e 4e heure
l Pic : 9e et 12e heure
l Normalisation : 24e et 36e heure
l

l
l
l

Diagnostic d exclusion : VPN 99%


Intrt : marqueur le plus prcoce d IDM
mais un rsultat positif chez un patient admis
pour un IDM mrite parfois d tre confirm.
27

What is IMA?
Human Serum Albumin (HSA) is
a circulating protein in blood with a
metal binding site at the N-terminus.

The N-terminus is damaged during an ischemic event, resulting in


Ischemia Modified Albumin (IMA). IMA is unable to bind metals at
the N-terminus.
28

Bar Or et al, European Journal of Biochemistry, 2001


MoA

Ischemia Modified Albumin (IMA) Includes Two


Variants of HSA

Cu++

Human serum albumin with N-terminus


occupied by copper
Human serum albumin with modified
N-terminus that can not bind metals

29

IMA - Mechanism of Action


anaerobic
metabolism

perfusion
oxygen

pH

Cu++

Cu+

Cu++

e-

Cu++

Cu++

eAscorbic
Acid

O2

O2 -

H2O2
SOD

OH

Cu++

Cu++

During an ischemic event:


Copper is released and binds to circulating albumin at
the N-terminus.
Copper induced oxidative damage to the N-terminus
causes modifications leading to decreased metal
binding capacity.

30

Albumine modifie (IMA)


l

IMA: albumine modifie au niveau de la


partie N-terminale.
Dans les territoires ischmiques, capacit
de fixer les mtaux (Co++, Cu++), pH
modifie la rpartition de charges de
l extrmit N-terminale.
Marqueur prcoce de l ischmie tissulaire.
31

Before Infarct

100%
50%
0%

Lost Muscle

% Muscle
Lost

Acute chest pain


Shortness of breath
ECG changes

Infarct

Clinical Problem is Time

After Infarct

32

IMA
l Apparition

dans les premires minutes de


l ischmie, reste augmente de 2 4 h
aprs le dbut, normalisation 6 h aprs.

l IMA

+ les marqueurs d IDM, augmentent


la sensibilit de la dtection d ischmie
et la VPN pour le diagnostic d exclusion.
33

Collinson Po et al Emerg Med j 2006

538 paiients

Non AMI n= 501

AMI n= 37

Tn +
19

IMA+
2

Tn et
IMA+
16

Tn et
IMA0

Tn +
4

IMA+
302

Tn et
IMA+
16

Tn et
IMA173

34

Collinson Po et al Emerg Med j 2006

537 paiients

Non AMI n= 500

AMI n= 37

Tn +
10

CKMB
+
n=0

Tn et
CKMB
+
n= 25

Tn et
CKMB

n=0

Tn +
23

CKMB
+
n=15

Tn et
CKMB+
n=3

Tn et
CKMB

n=459

35

IMA as Aid to Diagnosis


of Cardiac Ischemia
Myocardial Perfusion Imaging (MPI) by Sestamibi plus ECG
69 patients: 49 Exercise Stress ECG, 20 Rest ECG
IMA correlates to diagnosis of ischemia by MPI and ECG

IMA

Diagnosis of Cardiac Ischemia


by MPI and ECG
Positive

Negative

Total

Positive

14

15

29

48.3%

PPV

Negative

39

40

97.5%

NPV

Total

15

54

69

21.7% Ischemia +

93.3%

72.2%

42.0%

Sensitivity Specificity

IMA +

36

Heller et al, Clin Chem 2001

IMA as Aid to Diagnosis


of Acute Myocardial Infarction
Rule Out Myocardial Infarction (ROMI) trial
>400 Patients, 4 US Hospitals
IMA+Troponin have higher sensitivity, especially at presentation

Sensitivity (%)

100%

IMA

cTnI

IMA+cTnI

50%

0%

0 Hours

1-6 Hours
Time of Draw

AMI = Ischemia+ Necrosis


AMI Diagnosis= IMA+ Troponin

>6-12 Hours

37

Wu et al, Cardiovascular Toxicology, 2001

ACS Sequence and Timing


All Ischemia

Some Ischemia, some Necrosis

All Necrosis

Discharge

ED Presentation

Onset of Pain

Plaque Rupture

Amount of Tissue

Time
-12 to
0 hrs

12 to
24 hrs

IMA

Ischemia

cTn

Muscle death

BNP

Muscle Overload

38

IMA et Ischemie des Membres

39

Traxter M et al Eur J Vasc Endovasc Surg 2006

Peopratoire

Clampage
aortique

IMA (UI)

125

100

75

50

25

Claudication intermittente n=15


Anvrysme de laorte n=12
40

Controles n= 16

Other Conditions & IMA


IMA is not significantly elevated in patients with
autoimmune diseases, skeletal muscle ischemia*,
benign gastrointestinal disease, orthopedic injuries,
non-ischemic cardiac conditions, using stimulant, or
hypoxia.
IMA is elevated in most patients with cirrhosis,
infections and some cancers (all these are potent
producers of free radicals)
IMA seems to be elevated in patients with brain
ischemia (stroke) and End Stage Renal Disease.
41

* Skeletal Muscle Ischemia as induced in marathon runners for example

Adnosine (Ado)
l Nucloside

purinergique produit par


l hydrolyse d ATP intracellulaire.
l Diffusion facilite travers la membrane
cellulaire.
l En

cas d ischmie seulement de quelques


secondes, l Ado est libre dans les
espaces extracellulaires. Donc marqueur
d ischmie trs prcoce.
42

Cellule endothliale

Adnosine plasmatique





ATP



ADP



AMP



adnosine

5 nuclotidases

nuclosidase

Xanthine oxydase

kinases

Rcepteurs purinergiques

des cellules cibles

adnosine

adnosine deaminase



ADA





Inosine

recapture



Hypoxanthine



Xanthine



Acide urique

Domaine extracellulaire

Globules rouges

Systme de diffusion

facilite

43

Ischmie augmente [Ado]


Cellule myocardique

Ischmie
baisse du pH

adnosine kinase

Ado

Ado

AMP

44

Dosage d Ado par CLHP


Adnosine

Guieu et al, J Liq Chrom 1999


45

Stress oxydatif

Ischmie

Activation des
rcepteurs A2A

up regulation

Libration
dadnosine
46

Expression des rcepteurs A2A en fonction de la PO2


A

mol wt
51 kDa

A2AR
36 kDa

mol wt
51 kDa

A2AR
36 kDa
GAPDH

A2AR/GADPH

1.11
PO2:100

1.05

90

0.98

80

0.89
60

0.74

50

47

CD26/DPPIV

48

NK1
A1
A2A

Fibres nociceptives

ATP

SP
Endomorphine II
NY

Ischmie/hypoxie

DPPIV

X-Pro
Y-Pro

adnosine

incrtines
ADA

Inosine
NH4+

CD45
49

Angioplastie coronaire comme


modle dischmie reperfusion
20 patients souffrants de SCA sans sus dcalage
du segment ST

50

MCADA (IU)

A
25
Patients

20

p = 0.04

Controls

p = 0.03
p < 0.01

15

10

T0

T15

T120

DPPIV (arbitrary units)

B
2

p = 0.04
p = < 0.01
p = 0.03

1.6

p = 0.02

1.2

0.8

0.4

T0

T15

T120

p < 0.01
p < 0.01

IMA (arbitrary units)

125

100

75

50

25

51
T0

T15

T120

A
2
r= 0.79; p<0.01

2,00

DPPIV (arbitrary units)

DPPIV (arbitrary units)

2,00

1,75

1,50

1,50

1,25

1,25

1,00

0.75

0,75

0,50

0,50

0,25
6

10

12

14
MCADA

16

18

20

r= 0.51; p<0.05

1.75

10

12

14

16

18

20

MCADA

52

HIF: hypoxia inducible factor


Protines agissant comme facteur de transcription:
Induit en cas de diminution de la PO2: (hypoxia response element HRE)
HIF-1 est un facteur de transcription qui stimule la production
Dryhtopotine
Structure: htrodimre (chaine alpha: 826 et chaine bta 789 aa)
Famille des facteurs de transcription, la chaine alpha est instable en normoxie
HIF alpha est rtapidement dgrade dans le protasome en normoxie
(demie vie de 5min)
Augmentation dans les tumeurs cancreuses (hypoxie intra tumorale)
Syndrome de von Hippel Lindau

53

54

Fatty acid binding protein?


Anhydrase carbonique?

55

Conclusion
2 Types de marqueurs
Marqueurs dont lexpression est
directement li aux variations de
loxygnation tissulaire
Marqueurs lis au stress oxydant
56

Ischmie Myocardique

Marqueurs intrinsques

Prcoce
non spcifique
(Intermdiaire
mtabolique:
adnosine, ATP
etc..)

Spcifique
mais tardif
gnralement
une protine
Troponine,
CKMB, FaBP
Anhydrase etc..

Marqueurs extrinsques

Peuvent varier de manire ultra


prcoce.
Pas spcifiques
Marqueurs dhypoxie ou
dischmie priphrique
adnosine, CD 26, IMA
marqueurs de stress

Prcoce et spcifique:
miRNA?

57