PROTOCOLO DE VALIDACIN

Lmite de deteccin instrumental

Medir 11 veces el blancos (agua de mar sinttica). Se calcula: el promedio aritmtico
(Xm), la desviacin estndar (s), el coeficiente de variacin (% CV).

Lmite de deteccin del mtodo

Se cuantifica por la frmula L.C. = 3s, esto es tres veces la desviacin estndar,
de un estndar de concentracin terica cercana al lmite de cuantificacin
(estndar bajo, Eb),

Lmite de cuantificacin instrumental

Medir 11 veces el blancos (agua de mar sinttica). El lmite de cuantificacin se
calcula de la siguiente manera:
LC = Seal del blanco + 10s (desviacin estndar del blanco).

Lmite de cuantificacin mtodo

Medir 11 veces un estndar de concentracin cercana al lmite de cuantificacin y

determinar la desviacin estndar de los datos para calcular el lmite de
cuantificacin del mtodo.
ENSAYOS

SEAL DEL BLANCO

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

PARAMETROS

VALOR

Promedio
SD
CV (%)
LD
LC

SENSIBILIDAD DEL INSTRUMENTO

De acuerdo al fabricante del equipo Shimadzu COT-L como sensibilidad
Sensibilidad.= rea de pico muestra de 30 mg / L - rea del pico del blanco de agua
El valor se compara con un ndice de sensibilidad donde un valor mayor a 210 para
la medicin nos indica que la sensibilidad es aceptable, cabe aclarar que este valor
va cambiando con la edad del equipo
SENSIBILIDAD METODO
Se eligi la curva que presentaba el mejor coeficiente de correlacin y se tom la
pendiente como la sensibilidad.

LINEALIDAD
Se leern patrones a diferentes concentraciones con el fin de examinar la correlacin
entre ellos (coeficiente de correlacin) y observar la linealidad que presentaban.
INTERVALO DE TRABAJO LINEAL
El rango de trabajo debe definirse con base en las concentraciones de los patrones
que presentaron mejor linealidad en la curva de calibracin.
CURVAS DE CALIBRACIN
A partir del estndar, se realizaron los respectivos clculos para tomar el volumen
correspondiente con el fin de obtener varios patrones, cubriendo concentraciones
desde 0, 5, 10, 20 y 25 mg/L de biftalato de potasio. Realizar tres curvas, de las
cuales se debe elegir la que tenga mejor coeficiente de correlacin.
NOTA: utilizar el lmite de cuantificacin como estndar bajo para la curva, corroborar
si no da igual a 5 sustituir.

PROCEDIMIENTO DE VALIDACIN.
El proceso consisti en la corrida de las muestras y el registro de los resultados
necesarios para la determinacin de los parmetros de VALIDACIN. Los ensayos
pueden ser continuos o alternos, con una diferencia mxima de 3 das entre un
ensayo y otro (viernes-lunes).

EXACTITUD
Medir 11 rplicas de cada estndar, a tres concentraciones tericas diferentes,
durante 7 das.
Eb: Estndar bajo, cercano al LC.
Em: Estndar medio, cerca del 50 % del rango de trabajo.
Ea: Estndar alto, cerca del 80 % del rango de trabajo.
Con lo cual se calcul: promedio Xm, desviacin estndar s, coeficiente de variacin
% CV y porcentaje de error % E.
La medida de la exactitud se puede hacer de 2 formas:
1. Con placebo
Se utiliza una mezcla preparada en el laboratorio de todos los componentes de la
matriz de la muestra sin el principio activo a determinar, luego el placebo se enriquece
con un estndar.
2. Con muestra
Cuando no es posible contar con un placebo, se determinan en total 33 veces para la
3 concentraciones con su respectivo promedio del analito en la muestra con el mtodo
a validar, una vez conocido el contenido promedio se produce a enriquecer la muestra
con estndar.
Mantener la muestra en cantidad constante y se agregan los estndares.
NOTA: En el caso que se trabaje con muestras enriquecida, para llevar a cabo el
clculo del %R se requiere contar con los datos del contenido del principio activo en la
muestra antes de la adicin estndar.
CRITERIO DE ACEPTACIN
Para la muestra natural como para el placebo debe presentar un porcentaje de 98102% del valor terico o 2% de error relativo.

PRECISIN.
Para la determinacin de la precisin se realiz en funcin de:
Repetibilidad: La cual consisti en medir 3 concentraciones diferentes 11 veces
(estndar bajo Eb, estndar medio Em y estndar alto Ea), y muestras durante 7 das,

con los cuales se calcula: promedio Xm, desviacin estndar s, coeficiente de

variacin % CV y porcentaje de error % E.
Reproducibilidad: El analista sustituto mide 3 concentraciones diferentes y muestras,
11 veces, el grupo de estndares durante 7 das. Para cada grupo de datos se
calcul: Xm, s, % CV y % E.
RECUPERACIN.
Determinacin de la recuperacin, expresada como Porcentaje de recuperacin (%R),
medir 11 veces, a una muestra real, cuya concentracin estuvo cercana al 50% del
rango de trabajo. La recuperacin se determin utilizando la siguiente ecuacin.
%R= [(C Muestra fortificada C Muestra sin fortificar)/Adicionada] x 100

ANALISTA

ENSAYOS

BC
mg/L
1
2
3
4

Lote 1

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 1
tarde

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 2

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 2
tarde

5
6
7
8
9

BF
mg/L

Eb
mg/L

Em
mg/L

Ea
mg/L

Mfb
mg/L

Mfm
mg/L

Mfa
mg/L

M
mg/L

10
11
Promedio
1
2
3
4
Lote 3

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 3
tarde

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 4

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 4
tarde

5
6
7
8

9
10
11
Promedio
1
2
3
4
Lote 5

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 5
tarde

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 6

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 6
tarde

5
6
7

8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4
Lote 7

5
6
7
8
9
10
11
Promedio
1
2
3
4

Lote 7
tarde

5
6
7
8
9
10
11
Promedio

Plan de validacin de COT

ANALISTA

ENSAYOS

TIEMPO

Lote 1

Da 1

Lote 1

BC
mg/L

BF
mg/L

Eb
mg/L

Em
mg/L

Ea
mg/L

Mfb
mg/
L

Mfm
mg/L

Mfa
mg/L

M
mg/L

Media

SD

%CV

%E

Da 1 (tarde)

Lote 2

Da 2

Lote 2

Da 2 (tarde)

Lote 3

Da 3

Lote 3

Da 3 (tarde)

Lote 4

Da 4

Lote 4

Da 4 (tarde)

Lote 5

Da 5

Lote 5

Da 5 (tarde)

Lote 6

Da 6

Lote 6

Da 6 (tarde)

Lote 7

Da 7

Lote 7

Da 7 (tarde)

EXACTITUD
PARAMETROS ESTADISTICOS

ENSAYOS

TIEMPO

Lote 1

Da 1

Lote 2

Da 1 (tarde)

Lote 3

Da 2

Lote 4

Da 2 (tarde)

Lote 5

Da 3

Lote 6

Da 3 (tarde)

Lote 7

Da 4

Lote 8

Da 4 (tarde)

Lote 9

Da 5

Lote 10

Da 5 (tarde)

Lote 11

Da 6

Lote 12

Da 6 (tarde)

Lote 13

Da 7

Lote 14

Da 7 (tarde)

BLANCO
FORTIFCADO
NIVEL BAJO

BLANCO
FORTIFCADO
NIVEL MEDIO

BLANCO
FORTIFCADO
NIVEL ALTO

PRESICIN

BLANCO

SD

%CV

LIMITE
SUPERIOR

MEDIA

LIMIT
INFERIO

MUESTRAS

REPETIBILIDAD
Eb

Em

Ea

REPRODUCIBILIDAD
Eb

Em

Ea

PARAMETROS ESTADISTICOS
SD

%CV

LIMITE
SUPERIOR

MEDIA

Lote 1
Lote 2
Lote 3
Lote 4
Lote 5
Lote 6
Lote 7
Lote 8
Lote 9
Lote 10
Lote 11

Lote: son los ensayos realizados para cada muestra y estandar, para esta validacion
se realizara un numero de 11 repeticiones para cada muestra y estandar

LIMITE
INFERIOR