REVISTA BRASILEIRA

DE HEMATOLOGIA
E HEMOTERAPIA

Artigo / Article

Avaliao do efeito da hipotermia por crioimerso corporal, nos neutrfilos e

linfcitos sanguneos de ratos submetidos ao exerccio fsico agudo
Evaluation of the effect of hypothermia by cold water immersion on blood neutrophils and
lymphocytes of rats submitted to acute exercise

Jos A. Bachur1
Paulo R. Quemelo1
Cynthia A. K. Bachur1
Julio C. Domenciano2
Carlos H. G. Martins3
Marcos A. Stoppa3
Turbio L. de Barros Neto4
Srgio B. Garcia5

O estresse sistmico induzido pelo exerccio libera substncias bioativas determinantes

da mobilizao neutroflica. A crioterapia diminui a reao inflamatria e atenua a
elevao da perfuso sangunea induzida pelo exerccio. O objetivo deste trabalho foi
analisar a influncia da hipotermia decorrente da crioimerso corporal (CIC) imediata ao esforo fsico agudo nas concentraes neutroflicas e linfocticas no sangue. Os
ratos do grupo controle (AI) foram mantidos em repouso enquanto os do grupo AII
foram submetidos ao protocolo de CIC a 10C por 10 minutos. Enquanto os animais
dos grupos BI, BII, BIII e BIV realizaram o esforo fsico agudo (EFA) em gua a 31C
durante 100 minutos com sobrecarga corprea de 5% do peso corporal, os dos grupos
CI, CII, CIII e CIV foram submetidos ao EFA seguido imediatamente de CIC. Nos
grupos B e C, os animais foram sacrificados nos perodos de 06 (I), 12 (II), 24 (III) e
48 (IV) horas posteriores ao EFA. Atravs da microscopia ptica realizou-se a contagem dos neutrfilos e linfcitos. Utilizou-se do Teste T Student para anlise estatstica
considerando-se nvel de significncia p 0,05. Observou-se uma significativa neutrofilia
nos grupos AII, BI, BII, BIII, BIV, CI, CII e CIII em relao a AI, diferentemente do
grupo CIV, que apresentou quantidade de neutrfilos igual ao grupo controle. Os
valores de linfcitos nos grupos BII, BIII, BIV, CI e CII foram significativamente
menores do que AI, e nos grupos AII, BI, CIII e CIV foram iguais a AI. A neutrofilia e
a linfopenia posteriores ao intenso exerccio agudo so mantidas por 48 horas ou mais,
porm, mediante a aplicao da crioimerso corporal imediata ao exerccio, so
normalizadas em 24 horas. Rev. Bras. Hematol. Hemoter. 2008;30(6):470-474.
Palavras-chave: Exerccio; neutrfilos; linfcitos; hipotermia; crioimerso corporal.

Introduo

teciduais.1 A realizao do esforo fsico pode produzir trauma muscular e esqueltico seguidos da reao inflamatria
local, porm, com a repetio do estmulo estressor, a inflamao local pode generalizar-se na sndrome da resposta
inflamatria sistmica (SIRS).2,3 Em humanos, os sinais e
sintomas indicativos da presena da Sndrome da Resposta

O estresse sistmico induzido experimentalmente pelo

esforo fsico repetitivo libera substncias bioativas que determinam a mobilizao neutroflica e a capacidade funcional, podendo atingir rgos susceptveis a partir das leses

Professor
Professor
3
Professor
4
Professor
5
Professor
1
2

da Unifran. Lab. de Estudos da Recuperao Orgnica e Funcional - Fisioterapia da Universidade de Franca SP.
de Fisioterapia da Universidade de Franca (Unifran) Franca-SP.
de Biomedicina da Universidade de Franca (Unifran) Franca-SP.
da Unifesp. Centro de Medicina da Atividade Fsica e do Esporte, da Universidade Federal de So Paulo (Unifesp) So Paulo-SP.
da FMRP. Depto de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto-USP-SP

Faculdade de Fisioterapia da Universidade de Franca, Cemafe Franca-SP.

Centro de Medicina da Atividade Fsica e do Esporte, Depto. de Patologia da Faculdade de Medicina de Ribeiro Preto da USP-SP.
Correspondncia: Jos Alexandre Bachur
Rua Phylipina Borges do Val, 4421 Jardim Nomia
14400-600 Franca-SP Brasil
Email: jabachur@unifran.br

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Inflamatria Sistmica so: temperatura corporal excedente a

38C; frequncia cardaca superior a 90 batimentos por minutos; frequncia respiratria superior a 20 incurses por minuto; contagem de leuccitos superior a 12.000 clulas/l;
neutrfilos imaturos em quantidade superior a 10%.1
O aumento no nmero de leuccitos no sangue comumente mediante a agresso, pode ocorrer em at duas ou trs
vezes a mais o valor normal, aps um minuto de exerccio
extremamente intenso, ou aps uma injeo de noradrenalina.
Aproximadamente uma hora aps o esforo fsico, a neutrofilia fisiolgica volta ao normal, devido ao fato de que a
maior parte dos leuccitos est novamente aderida parede
dos vasos, reduzindo-se a magnitude do compartimento
leucocitrio central ou circulante.2 A aplicao de gua gelada pelo perodo de 10 minutos mostra-se efetiva, sob uma
temperatura entre 10 a 15C, podendo-se sustentar a reduo trmica local sem comprometer a pele,4 alm de estabelecer um decrscimo da reao inflamatria em situaes experimentais.5 Atravs da comparao das imagens entre os
dorsiflexores no submetidos aplicao de bolsa de gelo
com aqueles em que se aplicou tal procedimento aps a realizao do esforo fsico de dorsiflexo, observou-se que o
resfriamento atenua a elevao da perfuso induzida pelo
esforo fsico.6
Partindo-se do preceito de que a realizao de um esforo fsico exaustivo pode predispor o organismo a um quadro de neutrofilia associada a linfopenia, provvel que a
imerso em gua gelada imediatamente aps a realizao do
referido esforo fsico exaustivo por um determinado tempo
possa interferir nas respostas neutroflica e linfoctica. Objetivo: Analisar a influncia da hipotermia decorrente da
crioimerso corporal (CIC) imediata ao esforo fsico agudo,
nas concentraes sanguneas de neutrfilos e de linfcitos.

Os dos grupos C foram submetidos ao EFA, seguido imediatamente da CIC e sacrificados nos diferentes perodos posteriores ao EFA, da mesma forma que os animais dos grupos B.
Crioimerso corporal (CIC): Os animais foram individualmente imersos na gua at a regio axilar, em um recipiente cilndrico de plstico, com 15 cm de dimetro por 30 cm
de altura. A referida imerso ocorreu durante 10 minutos contnuos, sendo que a gua utilizada foi mantida constantemente na temperatura de 10C.
Esforo fsico agudo: O EFA do tipo natao foi realizado em tanque apropriado com gua a 31C com durao de
100 minutos, sob uma intensidade relativa sobrecarga
corprea equivalente a 5% do peso corporal, de acordo com
protocolo utilizado em outros estudos.7,30,31
Coleta e anlise de material biolgico: Ao final do
perodo experimental foram coletadas amostras de sangue
por puno cardaca, com os animais sob efeito anestsico
decorrente da associao de 0,5 ml de ketamina (Pfizer do
Brasil Ltda, SP, Brasil) a 0,1 ml de xilasina (Bayer do Brasil
Ltda, SP, Brasil). Para a anlise das concentraes de leuccitos foi utilizada uma pipeta para separao de sangue total
diludo em soluo de Turk, agitando-se por trs minutos. A
soluo era gotejada na cmara de Neubauer para a contagem de leuccitos totais, utilizando-se de um microscpio
ptico. Para a contagem diferenciada dos leuccitos foram
confeccionadas lminas de esfregao sanguneo corado com
Leishman.8
Anlise Estatstica: Todos os valores obtidos foram
tratados estatisticamente na obteno de mdias ponderadas, com os valores de Erro Padro da Mdia conhecidos, e
a significncia da diferena avaliada atravs do Test de
Student, onde o nvel de significncia (*) considerado foi de
p 0,05.

Material e Mtodo
O presente estudo foi realizado mediante a
sua prvia aprovao pelo Comit de tica em
Pesquisa (CEP) da Universidade de Franca,
protocolada com o nmero 004/06 em 16/08/2006.
Foram utilizados 50 ratos machos da linhagem
Wistar, pesando 300 gramas em mdia. Os animais foram distribudos aleatoriamente, cinco a
cinco, nos grupos controle AI e AII; de exerccio
BI, BII, BIII e BIV; de exerccio seguido de
crioimerso CI, CII, CIII e CIV. Enquanto os animais do AI foram mantidos em repouso sob temperatura ambiente (TA), os do grupo AII foram
submetidos crioimerso corporal (CIC). Os ratos do grupo B foram submetidos ao EFA e em
seguida mantidos em repouso temperatura
ambiente at o momento do sacrifcio para a coleta de sangue que ocorreu 06 (BI), 12 (BII), 24
(BIII) e 48 (BIV) horas aps o exerccio fsico.
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Resultados

O esforo fsico de alta intensidade geralmente acompanhado por alguns sintomas, como: fadiga, distrbios do
sono, perda de peso, dores de cabea,16 alm de promover
modificaes na concentrao, proporo e funes das clulas brancas do sangue, especialmente nos leuccitos
polimorfonucleares, nas clulas NK e nos linfcitos.18 Portanto, o esforo fsico de alta intensidade pode causar leso
tecidual associada liberao de mediadores qumicos da
inflamao, elevao da produo dos hormnios do
estresse, alteraes na quantidade e funo das vrias clulas circulantes do sistema imunolgico, como a mobilizao e
ativao dos leuccitos, alm da elevao da produo de
radicais livres, provocando o estabelecimento do estresse
oxidativo.19,20 Indivduos sedentrios submetidos a trs diferentes modelos de esforo fsico, ambos com durao de 120
minutos sob uma intensidade relativa a 60% do consumo
mximo de oxignio (VO2 mx), apresentaram leucocitose (com
aumento de neutrfilos e moncitos) por trs horas aps
esforo fsico.21
A resposta dos neutrfilos polimorfonucleares a uma
sesso nica de exerccio est na dependncia da intensidade deste. A neutrofilia imediata ao exerccio decorrente
da desmarginao provocada por alteraes hemodinmicas,
como a elevao do dbito cardaco, associada ao de
catecolaminas. 21,22 Estes dois aspectos movimentam os
polimorfonucleares ao longo dos vasos sanguneos, incluindo os neutrfilos, que esto geralmente marginados nos
pulmes, bao e fgado.21 Vrias horas aps o exerccio ocorre um segundo pico de neutrofilia, consequente mobilizao
de clulas da medula ssea em resposta elevao das
concentraes plasmticas de cortisol.22 O retorno dessas
clulas linha de defesa leva cerca de 24 horas, aps a
realizao do esforo fsico.21 A neutrofilia mantida por 48
horas ou mais, observada no presente trabalho, demonstranos que o esforo fsico realizado, apesar de agudo, foi de
uma dimenso no mnimo moderada, pois, em relao resposta funcional ao exerccio, o trabalho moderado associase a aumento de funo do neutrfilo.23 O exerccio de mxima intensidade est associado a diminuio funcional da
maioria das atividades de neutrfilos. No entanto, a evidncia de que o exerccio progressivo at a exausto aumenta a
capacidade fagoctica, associada ao achado de aumento de
atividade de elastase no plasma, indicando degranulao,
sugere que a supresso relatada de funes neutroflicas
possa estar relacionada a um perodo refratrio ps-exerccio.24 A normalizao neutroflica ocorrida anteriormente ao
perodo de 48 horas, como foi observada junto aos animais
submetidos crioimerso corporal imediata ao esforo fsico, pode ser considerada como um fator benfico mediante
a fragilidade imunolgica em que se encontram os organismos submetidos realizao de esforo fsico de dimenses moderadas a exaustivas.
A linfopenia decorrente do esforo fsico observada
neste estudo, segundo outros estudos, causada pela alta

De acordo com os dados da Tabela 1, em relao

concentrao de neutrfilos do grupo controle (AI), ocorreu um significativo aumento de neutrfilos nos animais
submetidos apenas crioimerso (AII), assim como naqueles animais submetidos ao esforo fsico agudo intenso
desde as seis primeiras horas (BI) at 48 horas (BIV) posteriores. Porm, o aumento de neutrfilos nos animais submetidos ao esforo fsico agudo seguido de crioimerso corporal foi mantido desde as seis primeiras horas (CI) at 24
horas (CIII), normalizando-se em 48 horas (CIV), diferentemente daqueles animais no submetidos crioimerso psesforo fsico agudo intenso, nos quais a neutrofilia
mantida por at 48 horas ou mais. Comparativamente com a
concentrao linfoctica dos animais do grupo controle (AI),
a significativa reduo desta clulas nos animais submetidos ao esforo fsico agudo intenso (grupos B) ocorre inicialmente com 12 horas e mantida at 48 horas aps a
realizao do referido esforo. Nos animais submetidos ao
esforo fsico agudo intenso seguido de crioimerso corporal (grupos C) observa-se uma significativa reduo
linfoctica da 6 hora (CI) at a 12 hora (CII), retornando
aos valores normais em 24 horas e mantendo-se dentro da
normalidade.
Discusso
O exerccio fsico gera um desvio do estado de homeostase orgnica, levando reorganizao da resposta de diversos sistemas, dentre eles o sistema imune, sendo que esta
resposta imune dever ser proporcional dimenso do estmulo recebido.9 Ao considerarmos a relao entre intensidade-durao-frequncia, vrias formas de atividade fsica esto associadas elevao de alguns marcadores inflamat
rios, tais como a Protena C reativa e os nveis das clulas
leucocitrias.10 Isto porque substncias bioativas liberadas
mediante o estresse sistmico induzido experimentalmente
pelo esforo fsico repetitivo so capazes de determinar a
mobilizao neutroflica.1 Os mecanismos que modulam a resposta imune ao exerccio podem ser divididos em trs grupos: hormonais,11,12 metablicos13 e mecnicos.14
Dentre os fatores metablicos e mecnicos devemos
citar a glutamina, que um aminocido fundamental no metabolismo das clulas musculares e do sistema imune,13 a
hipxia, hipertermia12 e, finalmente, a leso muscular geradora do processo inflamatrio localizado.14 Dentre os principais hormnios que atuam no sistema imune durante o
exerccio esto as catecolaminas (epinefrina), o cortisol,
hormnio do crescimento (GH) e os peptdeos opiides
(endorfinas).15 Alteraes nas concentraes dos hor
mnios catecolamnicos e do cortisol16 levam a uma redistribuio dos leuccitos, caracterizando um efeito imunossupressor. 17
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concentrao de cortisol, hormnio de crescimento e

catecolamina no plasma. A concentrao de linfcitos tende
a normalizar-se aos nveis basais, cerca de 24 horas aps a
realizao do esforo fsico, dependendo da relao entre os
parmetros de intensidade, durao e frequncia do esforo
fsico realizado.21 Com relao capacidade funcional, relatada diminuio da proliferao linfocitria aps exerccios
de alta intensidade, persistindo esta resposta por vrias horas aps uma maratona.25 A inibio da proliferao linfocitria
decorrente, principalmente, da ao da epinefrina e do
cortisol, como foi observado que, mediante a administrao
de epinefrina in vivo est associada reduo de responsividade de linfcitos a mitgenos. In vitro, a estimulao de
receptores 2-adrenrgicos por epinefrina pode inibir a proliferao linfocitria,26 a secreo de IL-2 e a expresso de
receptores para IL-2.27 O cortisol tambm parece inibir a proliferao por ao direta na clula e por inibio da produo
de IL-2.28,29 Assim como se observou neste estudo em relao aos neutrfilos, a normalizao linfocitria ocorrida em
24 horas nos animais submetidos crioimerso corporal imediata ao esforo fsico apresenta-se como uma importante
alternativa teraputica em busca no estado homeostsico,
diferentemente do ocorrido naqueles no submetidos a este
procedimento trmico, os quais apresentaram uma linfopenia
permanente por 48 horas ou mais.
As evidncias disponveis demonstram que o esforo
fsico tem efeitos modulatrios importantes sobre a dinmica de clulas do sistema imune e, possivelmente, sobre sua
funo. Os fatores neuroendcrinos que atuam na redis
tribuio de clulas e na liberao de citocinas em resposta
ao exerccio fsico parecem tambm mediar a relao entre o
sistema imunolgico e o esforo fsico. Porm, os mecanismos desta relao ainda no esto totalmente elucidados,
incluindo-se o padro da resposta imunolgica do exerccio
agudo.32
Um fator a ser considerado como facilitador da desistncia da prtica esportiva, ou mesmo da queda no desempenho fsico aps exerccio vigoroso, o conjunto de alteraes no sistema imune que podem ser desencadeadas por
sesses agudas de exerccios.33 Embora os resultados obtidos neste estudo sejam relevantes por serem aparentemente
favorveis para a minimizao do estresse orgnico causado
pelo esforo fsico agudo, necessrio que os mecanismos
determinantes desta normalizao leucocitria mediante a
crioimerso corporal sejam devidamente esclarecidos em estudos posteriores.

Abstract
Systemic stress induced by exercise increases bioactive substances
in plasma which leads to neutrophilic mobilization. Cryotherapy
causes a decrease in the inflammatory reaction and attenuates
high blood perfusion after exercise. The objective of this work was
to analyze the influence of cold water immersion (CWI) after acute
exercise on neutrophil and lymphocyte mobilization. A control group
of rats (AI) was kept at rest and a second group (AII) was submitted
to CWI at 10 C for 10 minutes. The animals of Groups BI, BII,
BIII and BIV were submitted to acute exercise which consisted in
swimming in water at 31 C for 100 minutes with a load equivalent
to 5% of the body weight. Groups CI, CII, CIII and CIV were
submitted to CWI immediately after acute exercise. The animals
were sacrificed at 6 (I), 12 (II), 24 (III) and 48 (IV) hours after the
exercise and neutrophil and lymphocyte cells were counted for all
groups by optic microscopy. The Student t-test was used for
statistical analysis with a significance level of p< 0.05. A significant
increase in the number of neutrophils was observed in Groups
AII, BI, BII, BIII, BIV, CI, CII and CIII compared to AI. The
neutrophil count of the CIV Group was similar to the Control
Group. There was a significant drop in the number of lymphocytes
in Groups BII, BIII, BIV, CI and CII when compared to Group AI.
The lymphocyte count of Groups AII, BI, CIII and CIV were similar to the Control Group. The changes in neutrophil and lymphocyte
counts caused by acute exercise were reverted to normal at 24
hours by cold water immersion. Rev. Bras. Hematol. Hemoter.
2008;30(6):470-474.
Key words: Exercise; neutrophils; lymphocytes; hypothermia and
cold water immersion.

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Concluso

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A crioimerso corporal em gua a 10C por 10 minutos

imediatamente aps o esforo fsico agudo com intensidade
alta pode vir a ser uma importante conduta teraputica, pois
provoca uma normalizao neutroflica e linfoctica no perodo em torno de 24 horas.

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Recebido: 06/03/2008
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