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CALIBRACION INSTRUMENTAL SHIMADZU N1

EXACTITUD FOTOMETRICA
Puede realizarse con:
a)

Soluciones estndares de absorbancia conocida a determinadas

longitudes de onda.
b)

Filtros control, los cuales se adquieren con el instrumento.

c)

Utilizacin de lneas de emisin de las lmparas de mercurio y

deuterio.
I.- EXACTITUD FOTOMTRICA CON SOLUCIN DE SULFATO DE AMONIO Y
COBALTO 0,0367 Y 0,0735 EN SHIMADZU N1.
Se usa fundamentalmente para el rango de luz visible.
Procedimiento:
1)

Encender el shimadzu con lmpara de tungsteno. Esperar 15


minutos.

2)

Se proceder a leer a: 400-450-500-510-512-550-600 nm.

3)

Calibrar a cero de absorbancia con agua destilada.

4)

Anotar las lecturas obtenidas y compararlas con las presentadas en

la siguiente tabla:
Tabla de datos: Absorbancias de sulfato de amonio y cobalto:

Longitud de onda
(nm)

Valores NBS* Valores de autores Valores de trabajo prctico

400

0,0125

0,012

0,088

450

0,0773

0,075

0,111

500

0,1635

0,160

0,155

510

0,1742

0,174

0,160

512

--------

-------

0,160

550

0,0775

0,076

0,110

600

0,0137

0,004

0,072

Grfico exactitud fotomtrica Shimadzu N 1

Conclusin: El Shimadzu nmero 1 presenta buena exactitud fotomtrica, porque


el mximo de absorbancia (mnimo de transmitancia) est entre 510 nm y 512 nm
tal como lo indica la literatura.
II- EXACTITUD FOTOMTRICA CON FILTRO DE DIDIMIO EN SHIMADZU N1.
Procedimiento:

1)

Colocar la longitud de onda que indica el filtro control.

2)

Colocar la perilla RANGO en absorbancia 0-2.

3)

Usar lmpara de didimio.

4)

Ajustar a cero con aire (compartimiento de muestra vacio)

5)

Colocar el filtro estndar, en el paso de luz y leer en la escala.

La calibracin esta correcta si lee entre 1,00 0,01 (0,99 1,01).


6)

Anotar su resultado.

Carril Absorbancia (nm)


3

1,010

Conclusin: El carril 3 del shimadzu N 1 presenta buena exactitud fotomtrica,


ya que la absorbancia con filtro est dentro del rango 1,00 0,01 (0,99-1,01) como
lo indica la literatura.
PD NO RECUERDO SI SOLO MEDIMOS EL CARRIL 3 O TODOS?
III.- EXACTITUD FOTOMTRICA EN RANGO UV CERCANO CON DICROMATO

DE POTASIO 0,05 G/L EN SHIMADZU N1.


Se usa para la zona UV cercana, por lo que debe leerse con cubetas de
cuarzo y con lmpara de deuterio.
Procedimiento:
1)

Encender el shimadzu con lmpara de deuterio. Esperar 15

minutos.
2)

Leer la solucin de dicromato de potasio a 267 y 350 nm

llevando a cero de absorbancia con solucin de cido sulfrico 0,01


N.
3)

Anotar los resultados y calcular el coeficiente de absortividad

(a) recordando que:


a= A/bxc
4)
Concentracin
soluciones
0,05 g/L

Comparar el resultado obtenido con la tabla N 2

Autores
14,38

267 nm
PSG **

T.P

Autores

14,5

-----

10,69

350 nm
PSG **
10,7

T.P.
#

0,10 g/L

14,46

-----

----- 10,72

------

-----

i) 0,1
ii) Photoelec Spectrometry Group Bull
iii)Litro
Resultados:
Dicromato de potasio 0,05 g/L en H2SO4 0,01 N.
Concentracin
Soluciones

Longitud de onda (nm) Coeficiente de Absortividad

1) 0,05 g/L

267 nm

15.8

2) 0,05 g/L

350 nm

11.88

1) = 15,8 g/L/mol
2) =11,88 g/L/mol

Conclusin: El instrumento Shimadzu N 1, presenta mayor exactitud a los


350 nm que a los 267 nm; segn lo indicado en la tabla N 2, sin embargo
cabe destacar que las muestras no son 100% puras

EXACTITUD CON SOLUCIN NITRATO DE POTASIO 1.170 G/DL


Se usa para la zona UV cercana, por lo que debe leerse en cubetas de cuarzo y
con lmpara de Deuterio.
Procedimiento:
1) Encender el Shimadzu con lmpara de deuterio. Esperar 15 minutos.
2) Leer a 302 nm, contra blanco de agua destilada.
3) Calcular el coeficiente de absortividad y compararlo con el coeficiente
dado por la PSG, y otros autores, valores que se presentan en la tabla N3.
Absorbancia obtenida: 1,072
A= 0,09 cm/gr/L

Debido a que la concentracin de Nitrato de Potasio se encuentra en g/dL,


debemos hacer la conversin de unidad correspondiente a g/L. Quedando
de la siguiente manera:
1,170 % = 1,170 g
100 ml
Xg
1000 ml
Resultado: 11,7 g/L
Tabla N 3. Absortividad del Nitrato de Potasio 1,170 % a 302 nm.
Longitud de onda Autores
302 nm

0,0703

PSG Trabajo prctico


0,0705

0,09

*El valor entregado por la


PSG puede variar en
0,0002

Conclusin: El instrumento Shimadzu N1, no presenta exactitud fotomtrica


debido a que el resultado obtenido a travs de la medicin se encuentra fuera de
los valores que indica PSG * y autores, por lo que se puede concluir que no es
exacto para la solucin de nitrato de potasio 1,17 g/dL.

USO DE EMISIN DE LMPARA DE DEUTERIO, PARA LA CALIBRACIN DE


LONGITUD DE ONDA.
Procedimiento
1. Encender el Shimadzu con lmpara de deuterio.
2. Cambiar la perilla RANGE a CHECK.
3. Las lecturas se realizarn entre las siguientes longitudes de onda: 470 y
700nm, con diferencias de 10 nm entre ellas.
4. Colocar la longitud de onda adecuada.
5. Ajustar el control abs. 0, hasta que el medidor digital indique un valor
positivo.
6. Mover la perilla de longitud de onda detenindose en la longitud de onda
de mxima lectura, en el medidor digital. Al mismo tiempo puede rotarse la
perilla CONC SET en el sentido de las agujas del reloj para aumentar la
sensibilidad de la medicin facilitando as el hallazgo de la longitud de onda
de mxima energa ptica.

7. Si est bien calibrado, el error en la longitud de onda encontrada como


ptima estar dentro de 1 nm.
8. Grafique sus resultados, lecturas vs longitud de onda y comprelas con
las
entregadas por el catalogo del instrumento.
Las lecturas efectuadas entre las siguientes longitudes de onda: 470 y 700nm
Longitud de
onda (nm)
470
480
486
490
500
510
520
530
540
550
560

Emisin energa
radiante.
1000
1005
1031
1008
1001
990
977
971
976
973
969

570

1008

580

1036

590

1002

600

992

610

966

Longitud de
onda (nm)
620
630
640
650
656
660
670
680
690
700

Emisin energa
radiante.
948
945
924
921
1068
937
918
928
929
917

Grfico. Exactitud fotomtrica en Shimadzu N1 con emisin de lmpara de D 2

Conclusion: El instrumento Shimadzu N1 presenta exactitud fotomtrica, la


energa radiante emitida por la lmpara de deuterio, alcanza dos picks en
absorbancia en las longitudes de 486 y 656 nm, longitudes que coinciden con los
valores que entrega la literatura.

MEDICIN DE LA LINEARIDAD FOTOMTRICA SHIMADZU CON SULFATO


DE AMONIO Y COBALTO
Con el trmino Linealidad Fotomtrica se pretende definir la capacidad de
respuesta de un instrumento, cuando se leen en l una serie de diluciones de una
solucin, esperando obtener lecturas proporcionales a las concentraciones de
esas diluciones.
A menudo se realizan, para comprobar este parmetro curvas de calibracin de
sustancias que siguen la ley de Beer, sin embargo numerosos autores advierten
que esto es una condicin necesaria perno no suficiente, Es importante considerar
el ancho de banda del instrumento, el cual incidir en su capacidad de respuesta
frente a las diluciones que en l se lean.
Es por esto, que se recomiendan algunos compuestos como los sealados a
continuacin y a las longitudes de onda que se indican:
Oxihemoglobina

415nm

p-Nitrofenol

405nm

Sulfato de amonio y Cobalto 512nm


Cianmetahemoglobina

540nm

Biuret-Protena

560nm *

Fenol va Foln-Cicalteau

680nm y 750 nm

*La banda de absorcin ocurre a 560 nm. Cuando se blanquea contra Biuret.

Todos estos reactivos deben ser de la ms alta pureza posible. Tambin puede
aadirse a esta lista el: Cloruro de cobalto 2,2% en HCL 1% v/v (510 nm.)
Procedimiento:
1. Preparar soluciones de 2, 4, 6, 8 y 10 g. de sulfato de amonio y cobalto
en 100 ml de acido sulfrico 1% v/v.
2. Leer las absorbancias a 512 nm, contra blanco de H2SO4.
3. Grafique sus resultados.
Absorbancia blanco: 0,083
Concentracin
g/dL

Absorbancia Absorbancia blanco Absorbancia corregida

0,264

0,083

0,181

0,434

0,083

0,351

0,622

0,083

0,539

0,816

0,083

0,733

10

1,0003

0,083

0,917

Grfico. Linealidad fotomtrica Shimadzu N1, solucin sulfato de amonio y


cobalto.

Conclusin: carril N 1 del Shimadzu presenta buena linealidad fotomtrica, ya


que la concentracin de sulfato de amonio y cobalto son proporcionales con
respecto a las absorbancias obtenidas a travs de las mediciones realizadas. Al
traspasar los datos a un grfico Absorbancia V/S Concentracin, se puede
observar el comportamiento lineal por lo que hay cumplimiento de la ley de Beer.

MEDICION DE LA PRESICION DE LAS LECTURAS DE LOS INSTRUMENTOS


Procedimiento:
1) Realizar 20 lecturas de la solucin escogidas, en las condiciones que el

instrumento y la solucin requieran


2) Obtener la desviacin estndar, la cual no debe exceder de 0,005

Lecturas

Carril N
1

Carril N
2

Carril N
3

Carril N
4

1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Promedi
o
SD

0,628
0,629
0,629
0,629
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,628
0,627
0,628
0,628
0,628
0,6281

0,619
0,619
0,619
0,619
0,619
0,619
0,618
0,618
0,619
0,619
0,619
0,618
0,617
0,617
0,619
0,619
0,619
0,619
0,619
0,619
0,61865

0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639
0,639

0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656
0,656

0,0004

0,001

Conclusin: El carril N 1 del Shimadzu N 1, el cual corresponda al carril el cual


nosotros como grupo efectuamos el pareo de cubetas, presenta buena precisin,
ya que la desviacin estndar es menor a 0,005 como lo indica la literatura.
Cabe destacar, la buena precisin de los dems carriles, ya que al igual que el
primer carril, presentan buena precisin, las lecturas obtenidas son menor al
0,005.

Practico N

, jueves 5 de junio.

Evaluacin de luz parasita


Procedimiento
1. Se dispone de una solucin de K2CrO4 0,5g/L en KOH 0,05N

2. Calibrar el instrumento convenientemente y leer a 400nm. Leer en sp20


3. La lectura debe ser 0%T o 2 de absorbancia
4. Cualquier lectura indicar, presencia de luz parsita
%T
Carril N
3

A
+1 2

Conclusin: El shimadzu N 1 no presenta luz parsita puesto que entrega una


lectura +1 (uno titilante), por lo que su absorbancia ser superior o igual a dos.
PAREO DE CUBETAS
Procedimiento
1. Se utilizarn 10 cubetas para Shimadzu.
2. Se utilizara cloruro de cobalto 2,2% para efectuar esta evaluacin
3. Se efectuaran las lecturas a 510nm, calibrando el instrumento a 100%T
con agua destilada
4. Anote sus resultados u aparte aquellas cubetas que dan diferencias muy
altas.

Cubeta
N
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10

Abs
0,637
0,645
0,668
0,676
0,674
0,612
0,635
0,632
0,644
0,587

Conclusin: Al efectuar el pareo de cubetas en el Shimadzu N 1, podemos


descartar dos cubetas la N6 y 10 respectivamente. Debido a que presentan
absorbancias alejadas de los otros valores.
Al observar las cubetas descartadas podemos observar presencia de ralladuras en
sus caras pticas, lo cual hace que el rayo luminoso que las atraviesa se desve,
provocando alteracin en las lecturas efectuadas por ellas, en este caso, en este
caso absorbancias por debajo de las dems.