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Sumrio
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1. Introduo
2.
Espectrometria no Ultravioleta
3
3. Espectrometria no Infravermelho
4.
Espectrometria de Massa
4
5.
6.
Espectrofotmetro
5
7. Instrumentao
7.1.
7.2.
Monocromadores
7.3.
Cubetas
7.4.
Detectores
13
8.1.
13
8.2.
14
8.3.
Chopper
14
9. Concluso
15
10. Bibliografia
16
1. Introduo
A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas
investigaes biolgicas e fsico-qumicas. O espectrofotmetro um
instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma
soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma
quantidade
conhecida
da
mesma
substncia.
Todas as substncias podem absorver energia radiante, mesmo o vidro que
parece completamente transparente absorve comprimentos de ondas que
pertencem ao espectro visvel. A gua absorve fortemente na regio do
infravermelho.
A absoro das radiaes ultravioletas, visveis e infravermelhas dependem
das estruturas das molculas, e caracterstica para cada substncia qumica.
Quando a luz atravessa uma substncia, parte da energia absorvida: a
energia radiante no pode produzir nenhum efeito sem ser absorvida.
A cor das substncias se deve a absoro de certos comprimentos de ondas
da luz branca que incide sobre elas, deixando transmitir aos nossos olhos
apenas
aqueles
comprimentos
de
ondas
no
absorvidos.
Espectrofotometria de absoro atmica o mtodo de anlise usado para
determinar qualitativamente e quantitativamente a presena de metais. O
mtodo consiste em determinar a presena e quantidade de um determinado
metal em uma soluo qualquer, usando como princpio a absoro de
radiao ultravioleta por parte dos eltrons que, ao sofrerem um salto quntico
depois de devidamente excitados por uma chama de gs acetileno a 3000
graus Celsius, esses devolvem a energia recebida para o meio, voltando assim
para a sua camada orbital de origem. A energia devolvida na forma de um fton
de luz, por sua vez, absorve a radiao ultravioleta emitida pela fonte
especfica (ctodo oco) do elemento qumico em questo. Dessa forma,
eltrons que esto contidos na soluo, e que sofrem tambm um salto
quntico e que no pertencem ao mesmo elemento que constitui o ctodo oco
que est sendo usado no momento, no sero capazes de causar uma
interferncia, isso porque eles absorvero apenas radiao com comprimento
de onda referente ao elemento qumico do qual fazem parte.
Alguns termos bsicos devem ser conhecidos:
2. Espectrometria no Ultravioleta
Quando a radiao eletromagntica da regio do UV passa atravs de um
composto que tm ligaes mltiplas (duplas e triplas), uma parcela da
radiao , usualmente absorvida pelo composto. A quantidade de radiao
absorvida depende do comprimento de onda da radiao e da estrutura do
composto. A absoro ocorre pela subtrao de energia do feixe de radiao
provocada pela excitao dos eltrons de orbitais de baixa energia para
orbitais de energia mais elevada. A espectrometria no UV, portanto,
provocam transies eletrnicas. Logo, para que um composto possa ser
detectado com radiaes na regio do UV, necessrio que esse composto
possua eltrons capazes de serem excitados, ou seja, eltrons pi ou
eltrons livres (no-ligantes). Os eltrons sigma no podem ser excitados,
porque a transio de eltrons de uma ligao sigma acarretaria a quebra
da ligao e, conseqentemente, a perda da estrutura caracterstica do
composto.
3. Espectrometria no Infravermelho
Os compostos orgnicos tambm absorvem radiaes na regio do
infravermelho (IV) do espectro. A radiao infravermelha no tem energia
suficiente para excitar os eltrons e provocar transies eletrnicas, mas ela
faz com que os tomos ou grupos de tomos vibrem com maior rapidez e
com maior amplitude em torno das ligaes covalentes que os unem. Estas
vibraes so quantizadas e, quando ocorrem, os compostos absorvem
energia IV em certas regies do espectro. Nas vibraes, as ligaes
covalentes comportam-se como se fossem pequenas molas unindo os
tomos. Quando os tomos vibram, s podem oscilar com certas
freqncias, e as ligaes sofrem vrias deformaes. Quando a ligao
absorve energia, ela sofre alteraes e, ao retornar ao estado original, libera
essa energia, que ento detectada pelo espectrmetro.
As molculas podem vibrar de muitos modos. Dois tomos unidos por uma
ligao covalente podem efetuar vibraes de estiramento dessa ligao,
como se fosse uma mola que estica e retorna ao tamanho original. Trs
tomos tambm podem efetuar diferentes vibraes de estiramento e
alterao dos ngulos de ligao, em vrios planos do espao. No entanto,
as vibraes de estiramento so as mais importantes.
4. Espectrometria de Massa
Simplificadamente, o espectro de massa funciona da seguinte maneira: Um
feixe de eltrons de alta energia bombardeia a amostra, em fase gasosa, e o
aparelho detecta e registra os fragmentos gerados pelo impacto dos
eltrons. Da, a partir do valor da massa molecular de cada um dos
fragmentos, montamos a molcula, como um quebra-cabea. Os fragmentos
gerados podem ser ons, radicais ou molculas neutras. No aparelho so
detectados apenas os fragmentos catinicos (ons positivos), chamados
ons moleculares, de carga unitria. Estes ons possuem alta energia e so
capazes de romper ligaes covalentes, fragmentando-se em pedaos
menores. A partir de um fragmento, portanto, podem surgir vrios outros
fragmentos menores.
6. Espectrofotmetro
Um espectrofotmetro um aparelho que faz passar um feixe de luz
monocromtica atravs de uma soluo, e mede a quantidade de luz que foi
absorvida por essa soluo. Usando um prisma o aparelho separa a luz em
feixes com diferentes comprimentos de onda (tal como acontece no arco-ris
com a separao das cores da luz branca). Pode-se assim fazer passar atravs
da amostra um feixe de luz monocromtica (de um nico comprimento de onda,
ou quase). O espectrofotmetro permite-nos saber que quantidade de luz
absorvida a cada comprimento de onda.
Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da
variao de absorvncia (ou transmitncia) em funo da concentrao de
vrias solues-padro.
A preciso dos comprimentos de onda para anlise so chamados de bandas
de passagem, mais comum na ordem de 10nm. O espectro da anlise mais
comum de 360nm 1000nm para a faixa visvel.
A operao de um espectrofotmetro basicamente de iluminar a amostra com
luz branca e calcular o montante de luz que refletido pela amostra em cada
intervalo do comprimento de onda. Tipicamente os dados so medidos para 31
intervalos de comprimento de onda centrados em 400 nm, 410 nm, 420 nm,.....,
700 nm. Isto feito passando-se a luz refletida atravs de filtros de
interferncia ou de grade de difrao que dividem a luz em intervalos
separados de comprimentos de onda. O instrumento calibrado usando-se
uma cermica branca cuja refletncia em cada comprimento de onda seja
7. Instrumentao
Um espectrofotmetro constitudo por uma fonte de luz (lmpada), um portaamostra, um monocromador (separa a luz, pode ser um prisma ou grade de
difrao, sendo este ltimo mais comum nos aparelhos modernos) e um
detector (fotoclula, fotodiodo ou vlvula fotomultiplicadora). As figuras abaixo
representam o esquema de instrumentao de um espectrofotmetro de feixe
simples e feixe duplo.
7.1.3. Laser
Pelo processo de emisso estimulada, os lasers produzem uma enxurrada de
feixes muito estreitos e intensos de radiao. Todas as ondas procedentes ao
material emissor esto em fase entre si, e, por isso, praticamente no
apresenta disperso quando se propaga.
Isso permite uma concentrao de energia num ponto muito pequeno, mesmo
que esteja numa distncia considervel.
.
7.2. Monocromadores
So dispositivos essenciais dos espectrofotmetros e tem como funo a
seleo do comprimento de onda e que se tem interesse para a anlise.
constitudo de uma fenda de entrada de um elemento de disperso de radiao
e de uma fenda de sada. O elemento de disperso pode ser um prisma ou
uma rede de difrao.
7.3. Cubetas
So usados como recipientes cubas ou cubetas retangulares de vidro ou
quartzo. As cubetas de vidro so usadas quando se trabalha na regio do
visvel. Para a regio do ultravioleta, devem-se usar as cubetas de quartzo, que
so transparentes radiao ultravioleta, pois o vidro absorve a mesma.
Uma cubeta ideal deve ser de 1 cm, para simplificar os clculos da expresso
da Lei de Beer. As cubetas tambm podem ter dimenses diferentes, e esse
dado deve ser considerado na hora do clculo.
Para aplicaes industriais, como, por exemplo, no controle de qualidade de
lotes de produo, utiliza-se um sistema automatizado em que as amostras
circulam em srie em cubetas adequadas. Esse sistema chamado de anlise
por injeo de fluxo ou FIA (do ingls Flow Injection Analysis)
7.4. Detectores
Os detectores em um espectrofotmetro so dispositivos capazes de fornecer
informaes fsicas de um sistema quanto intensidade de radiao incidida
no mesmo, ou de modo indireto, a intensidade absorvida por uma amostra,
convertendo esta intensidade de radiao em um sinal eltrico.
Em princpio, um detector consiste de trs componentes: uma parte receptora
sensitiva determinada caracterstica do sistema, um transdutor para converter
a informao obtida em um sinal eltrico e um amplificador de sinal. Levandose em conta o tipo de medida a que se destinam, podem-se classificar os
detectores como detectores diretos ou indiretos. Os detectores diretos so
aqueles que captam diretamente a incidncia da radiao transmitida a partir
da amostra, j os indiretos so aqueles que captam um segundo ou terceiro
sinal sem ser diretamente a radiao incidida na amostra, como temperatura ou
sinal sonoro.
Os detectores podem ser das mais variadas formas, variando de acordo com
sua finalidade e esquema de montagem do espectrofotmetro.
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7.4.2. Bolmetro
Bolmetros compreendem basicamente de um termistor, isto , de um
dispositivo cuja resistncia eltrica varia com a temperatura. Pode ser
construdo tanto a partir de metais quanto com semicondutores que
apresentem dependncia significativa da resistncia eltrica com a
temperatura. A utilizao dos bolmetros se d geralmente na regio do
infravermelho, na qual o detector pode facilmente interpretar a variao de
radiao incidente como uma variao de temperatura na superfcie do mesmo,
que conseqentemente ocasiona uma variao na sua resistncia. A Figura 5
ilustra, qualitativamente, essa dependncia entre dois tipos de bolmetros.
7.4.3. Fotodiodo
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7.4.4 Fotomultiplicadoras
As fotomultiplicadoras, ou tubos fotomultiplicadores, so tubos de vidro sob
vcuo, contendo um foto-catodo (negativo), recoberto por material que absorve
a luz e emite eltrons, que so acelerados em direo a um nodo (positivo),
baseados no princpio do efeito fotoeltrico. No caminho, estes eltrons se
chocam com dinodos que esto progressivamente com potenciais mais altos
(Fig. 6), e em cada um destes um eltron desloca de 3 a 4 novos eltrons, que
so acelerados at o prximo dinodo. Esse processo pode ser repetido de dez
a quinze vezes. A multiplicao por etapas depende tambm da voltagem
aplicada, o que ocasiona uma amplificao de at 300 vezes. Desta maneira, a
luz incidente permite a passagem de uma corrente eltrica que pode ser
medida eletronicamente. O fator de amplificao extremamente sensvel
mudanas na voltagem (cerca de 1kV), que precisa ser altamente estabilizada.
7.4.5 Microfones
Utilizados na tcnica PAS (Photo Acustic Spetroscopy) os microfones captam
um sinal sonoro emitidos pela amostra contida na clula fotoacstica (fig. 7), a
qual absorve a radiao incidente, transformando em um sinal eltrico atravs
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7.4.6- CCDs
Iniciais do termo em ingls Charge Coupled Device (dispositivo de carga
acoplada), os CCDs (Fig. 8) criados inicialmente para atuarem como um chip
de memria (1969) mostrando ser um excelente sensor ptico, sendo utilizado
como detector em algumas tcnicas de espectroscopia.
O funcionamento dos sensores CCDs baseia-se no efeito fotoeltrico. Algumas
substncias tm a propriedade de absorver ftons e libertar no processo um
eltron. O silcio constitui a matria prima para a construo de um CCD. Um
CCD tpico consiste numa placa quadrada ou retangular de silcio com 125 a
500 micrmetros de espessura e alguns milmetros de comprimento. Nesse,
implantada uma rede de eletrodos que capturam e analisam os eltrons
gerados pelo efeito fotoeltrico. Cada trio de eletrodos atua como uma ratoeira
eletrosttica, acumulando em seu redor os eltrons gerados na placa de silcio.
O eletrodo central de cada trio mantm uma carga positiva, enquanto que os
restantes mantm um potencial nulo. Deste modo os eltrons, cuja carga
negativa, se acumulam em volta do eletrodo central medida que a luz incide
no detector. Os trios de eletrodo so dispostos em colunas que cobrem a
totalidade do sensor CCD. As diferentes colunas so isoladas entre si por um
material que gera um potencial negativo permanente ao entrar em contacto
com a placa de silcio, o que evita a contaminao entre colunas. As linhas de
eletrodos consideradas perpendicularmente s colunas so designadas como
filas. Cada trio de eletrodos uma pea fundamental do detector CCD e
corresponde a um elemento da imagem digital final, e designado pixel ou
elemento de imagem. O tamanho fsico do pixel varivel. Existem pixels
retangulares e pixels quadrados.
As suas dimenses variam habitualmente entre 6 e 27 micrmetros.
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Figura 9: Espectrofotmetro AA
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8.3. Chopper
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9. Concluso
Espectrofotmetros
so
instrumentos
capazes
de
registrar
dados
de
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10. Bibliografia
SILVERSTEIN, R. M.BASSLER, G.C.MORRILL,T. C., Identificao espectromtrica
de compostos orgnicos 5 ed., LTC.
VINAD, M. E. C; VINAD, E. R.C, Mtodos espectroscpicos de anlise
quantitativa, editora UFSM.