AISLAMIENTO DE LA BACTERIA (clostridium putrefaciens)

BARBOZA HERNANDEZ ANDRES FELIPE

BENITEZ BARRIOS CARMEN
DIAZ TORDECILLA FELIX
FERNANDEZ RUIZ MARIANA

ING: YENIS PASTRANA

MICROBIOLOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD DE INGENIERIAS
PROGRAMA DE INGENIERIA DE ALIMENTOS
SEDE BERASTEGUI- CORDOBA
2009

CONTENIDO
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
2.JUSTIFICACIN
3.OBJETIVOS
3.1 OBJETIVO GENERAL
3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
4. MARCO TEORICO
5. HIPOTESIS
6. DISEO METODOLOGICO
6.1 TIPO DE INVESTIGACION
6.2 LOCALIZACION
6.3 UNIVERSO DE ESTUDIO
6.4 VARIABLE
7. FLUJOGRAMA CON BASE A LOS MATERIALES DE
LABORATORIO
7.1 materiales
7.2 Materia Prima
7.3 Aislamiento de la bacteria (Clostridium putrefacien)
7.4 Pre-enriquecimiento
7.5 Medio de cultivo
7.6 Pruebas bioqumicas
8.CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
9. BIBLIOGRAFIA

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

La bacteria Clostridium putrefaciens, es una bacteria anaerobia estricta que provoca
putrefaccin, es decir que descompone las protenas anaerbicamente por esta la razn
fundamental de nuestro investigacin. Por esto se debe aprovechar la investigacin para
la ampliacin de los conocimientos para formarnos como ingenieros de alimentos
El problema proviene del beneficio que podemos adquirir a partir del aislamiento de la
bacteria Clostridium putrefaciens, como pieza fundamental en la prevencin para
procesos que se necesitan en ciertos alimentos (carnes),teniendo en cuenta la
temperatura a la que crece Clostridium putrefaciens.

, produciendo compuestos malolientes tales como cido sulfrico, mercaptanos, aminas,

indol, y cidos grasos. La mayor parte de las especies proteolticas de Clostridium son
putrefactivas

2. JUSTIFICACION
El aislamiento de la bacteria Clostridium putrefaciens, es fundamental para el desarrollo
de nuestros conocimientos en el rea de los alimentos, principalmente en el rea de
microbiologa. En ocasiones en los procesos con los de alimentos se necesitan o no la
presencia de algunas bacterias, de ah la necesidad de aislar y conocer las funciones de
estas sobre el alimento.
Debido a la gran variedad de procesos en la industria alimentaria, nos vemos atrados a la
gran necesidad de adquirir el manejo correcto en el Laboratorio de microbiologa y
conocer ms sobre

cmo se realizan aislamientos de bacterias. Esto nos ayuda a

determinar objetivos de estudio y para mejoramiento de los procesos en la industria de

Alimentos.

3. OBJETIVOS

3.1 OBJETIVO GENERAL

Obtener por medio del aislamiento el Clostridium putrefaciens a partir de

carne de cerdo picada

3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

Obtener a partir del aislamiento de la bacteria en proliferacin sobre Agar

gelatina

Obtener la identificacin de Clostridium putrefaciens

pruebas bioqumicas.

por medio de las

4. MARCO TEORICO
Gnero clostridium
El gnero clostridium perteneciente a la familia Clostridiaceae. Est compuesto por
bacilos Gram Positivos con extremos redondeados caracterizados por su capacidad para
producir endosporas. El gnero incluye microorganismos anaerobios estrictos. Muchas
otras especies estn distribuidas en la naturaleza y se hallan en la mayor parte de las
muestras de suelos. Ciertos miembros de dicho gnero han adquirido importancia como
parecidos a los rasgos de Clostridium putrefaciens, morfolgicamente los esporangios que
tienen forma de baquetas, son indicadores de clostridium putrificum (bienstock)
Clostridium tetani. Los bastones de Clostridium putrefaciens, tienen un dimetro
ligeramente ms grande que el de los Clostridium putrificum y a menudo sobrepasan en
longitud a los de Clostridium tetani, adems la falta de movilidad y el requerimiento de
bajas temperaturas de la primera especie lo diferencian de las ltimas dos.
. Clostridium putrefaciens es una bacteria anaerobia estricta de tipo Clostridium y son
caractersticamente proteolticas. Los cultivos jvenes en medios crnicos se caracterizan
por filamentos y cadenas, despus de dos o tres das de cultivo las clulas comienzan a
agruparse, este aglutinamiento de cepas como inflacin es mejor descrito como
(hinchazn).
A partir de la etapa inicial la esporulacin procede rpidamente y las esporas maduras se
encuentran en uno o dos das despus, son plectridial, siendo terminal, esfrica y con
aproximadamente 2.2 veces el dimetro del bastn. La baqueta distintiva de los
esporangios permanece intacta durante semanas, tiempo durante el cual es raro que las
esporas estn libres, cuando estos se encuentran se tien dbilmente (mtodo de Gram)
aparentemente de pared delgada, cultivos muy antiguos muestran considerables
desintegraciones de la clula con la liberacin de muchas de estas esporas dbiles de
tincin, mientras que este es el comportamiento tpico de Clostridium putrefaciens.
Cuando en primer lugar, se cultivan en el laboratorio hay que reconocer que los escritores
en comn con boyer (1926) han observado una disminucin considerable de la
esporulacin despus de la cultivacin prolongada de un cultivo puro. No se han
observado otros cambios en el comportamiento.
Su Morfologa son bacilos anaerobios de 0.5 - 0.7 por 3-15 con extremos redondeados,
se producen por separado y en cadenas, en forma de baqueta con esporas terminales
esfricas de 1.1-1.6, inmviles, gram positivas, con filamentos gruesos que predominan
ms en medios de pH bajo.
Sus colonias en agar son pequeas y filamentosas; en medios de cultivo inclinado,
pueden ser escasas, blancas, roseadas y brillantes; mientras que En caldos pueden ser
moderados, temporales y con turbidez; el crecimiento fuerte ocurre con una floculante
sedimentacin en el fondo.

Se aslan en carnes de cerdo picada en la que se muestran desintegraciones escasas de

las partculas de carne con caractersticas fuerte, agrias y con olores putrefactos. Se
encuentra poco evidencia visual de la digestin de la carne, hasta que se toman muestras
y estas son diluidas en agua peptonada y despus de su proliferacin el tubo se agita
vigorosamente mostrando la
desintegracin y dando una pulpa ms o menos
homognea.
El medio de cultivo ptimo para este microorganismo es la Gelatina punzada, en el cual el
crecimiento y la licuefaccin empiezan en el fondo de dos a tres das, completndose de
tres a cinco das despus. La temperatura optima de crecimiento es de 20 a 25C
creciendo de manera lenta, incluso a temperaturas ms bajas, su crecimiento no es visible
a los 37C, con un pH optimo donde el crecimiento ocurre en carnes con un pH medio
entre 6.0 y 9.0 pero la optimo es de 8.0.
Leche de tornasol: el tornasol se reduce de cuatro a cinco das. La cuajada de cuajo
aparece a los 15 das con un pH de 6.5. La peptonizacion sucede lentamente. Clostridium
putrefaciens es indol negativo, produce escasamente sulfuro de hidrogeno y no reduce
nitratos.
La fermentacin es acida y con escasez de gases en la glucosa. Es lactosa, sacarosa,
maltosa negativos y no hidroliza el almidn.
Son anaerbicas sin crecimiento exterior, sobre medios sin condiciones estrictamente
anaerobias.
Habitat: Se hallan en tejido muscular de cerdos. De acuerdo con Mc bryde el extracto de
cerdo puede ser favorable para el crecimiento y se ha usado como base de agar gelatina,
gelatina y el caldo de cultivo empleado.(5)(4)
En estudios realizados sobre Clostridium putrefaciens, los escritores han demostrado
cuales son sus requerimientos de crecimiento; este microorganismo fuertemente
proteoltico, crece muy bien a los 0C, poco o nada a los 37C.
Es muy caracterstico el olor que se produce en la carne, una persona acostumbrada o
alguien acostumbrado a estos olores no tiene dificultad en diferenciar los cultivos puros de
esta anaerbica de otros organismos putrefactivos por este medio.
Los cultivos viejos de carne de Clostridium putrefaciens presentan un contraste fuerte con
algunos cultivos similares de otras bacterias anaerobias putrefactivas, en donde se
evidencia perfectamente licuefaccin extensiva algo caracterstico de Clostridium
putrefaciens es el marcado adelgazamiento ( suavizamiento de la carne) sin evidente
reduccin.(2)
Es obvio que un organismo que convierte del 30 al 40 por ciento del Nitrgeno total de la
carne a aminocidos y amonaco, no puede ser considerado sacaroltico.
El hecho de que Clostridium putrefaciens produce en la carne alrededor de ocho dcimas
y en tres dcimas partes de gelatina como mucho amoniaco como C. sporogenes sugiere

una diferencia fundamental entre los dos organismos. el escritor que las diferencias
cuantitativas en el producto de los cambios proteolticos han sido muy a menudo de ms
insistir en la identificacin de anaerobios(4)
.

5. HIPOTESIS

El aislamiento de la bacteria " Clostridium putrefaciens ", permite una investigacin mas a
fondo acerca de esta, teniendo en cuenta que el aislamiento sea directamente
proporcional al mtodo que se utiliza.

6. DISENO METODOLOGICO
6.1 TIPO DE INVESTIGACION
La investigacin se caracteriza de tipo experimental y explorativa debido a las variadas
pruebas, mtodos y ensayos que Llevaremos a cabo para mostrar la presencia de Ia
bacteria en estudio (Clostridium putrefaciens).

6.2 LOCALIZACION
El desarrollo de esta investigacin se llevara a cabo en las instalaciones del laboratorio de
microbiologa perteneciente al programa de Ingeniera de Alimentos de la Universidad de
Crdoba (Sede Berastegui) situada geogrficamente en las coordenadas 8 40' 26" de
latitud norte y 75 46' 44" de latitud oeste con respecto al meridiano de Greenwich.

6.3 UNIVERSO O POBLACIN

El estudio en esta investigacin es el aislamiento de Ia bacteria (Clostridium
putrefaciens) en carne de cerdo picada. Esta materia prima se obtuvo del mercado
pblico del municipio de Ceret-Crdoba

6.4 VARIABLES
1 Variables independientes:
Tiempo, temperatura, pH.
2 Variables dependientes:

4.

Carne de cerdo picada, cultivo, (Agar gelatina), pruebas bioqumicas, tincin

de Gram, Tincin de Schaeffer-Fulton, TSI y motilidad.

7. FLUJOGRAMA DE AISLAMIENTO DE LA BACTERIA Clostridium putrefaciens

7.1 Materiales:
MATERIALES Y REACTIVOS
1 30g de carne de cerdo picada o macerada
2 80ml de agua peptonada
3 Bistur
4 Estomacher y bolsa.
5 Incubadora de 20 a 25 C.
6 4 Medios Mossel 2 medio SIM
7 Asas bacteriolgicas
8 Mechero
9 Microscopio.
2 Cristal violeta
3 Lugol
4 Safranina de Gram.
5 Alcohol acetona
6 Sulfato de cobre
7 Verde de malaquita
8 Balanza analitica
9 frascos de 225 ml
10 Pipetas
11 portaobjetos
7.2Materia prima. La materia prima para aislar nuestra bacteria es la carne de cerdo
picada

2. 7.3 Enriquecimiento. De la carne se tomaran 30g y se maceraran, y se

agregarn a una bolsa de estomacher que contenga 80ml de agua peptonada, y
se someter a estomacher durante 30 segundos, para homogenizar la muestra y
luego se incubar de 20 a 25 C por 24 horas.

3. 7.4 Siembra (Clostridium putrefaciens). Despus de la incubacin se pasarn a

los 2 tubos del medio gelatina, sembrados en punzacion con asa en punta . Y se
incubarn por 24 horas de 20 a 25 C.

4. 7.5 Pruebas bioqumicas: Despus de la incubacin se observ el crecimiento y

se realizaron las diferentes pruebas bioqumicas. Tincin de Gram., Tincin de
Schaeffer Fulton, TSI y motilidad.

8 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
ACTIVIDAD A REALIZAR
Materia prima carne de cerdo
Pre-enriquecimiento
Aislamiento de la bacteria (Clostridium

FECHA DE REALIZACION
Sbado 9 de mayo
lunes 11 de mayo 9:00 am a 11:00 am
martes 12 de mayo 7:00 am a 10:00 am

putrefaciens).
Siembra de la bacteria en medio solid

mircoles 13 de mayo de 9:00am a

Pruebas bioqumicas
Observacin

11:00am
jueves 14 de mayo 11:00am a 1:00pm
jueves y viernes 14 y 15 de mayo

BIBLIOGRAFIA

http://www.monografias.com/trabajos10/bacil/bacil.shtml#ge

http://www.bioland.cl/nutricompoust-mo.htm

http://www.bioland.cl/mo-biobac.htm

KONEMAN, Elmer; STEPEN D. Allen.

Diagnostico Microbiologico.Texto y atlas.5a

edicion.editorial medica. Panamericana.

5

BEUCHAT, Thomas J. DOYLE, Michael P. R. Larry. Microbiologa de los alimentos,

fundamentos y fronteras editorial Acribia S.A.