UNIVERSIDAD NACIONAL INTERCULTURAL DE LA

AMAZONIA

CARRERA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

PRACTICA N 3
ENSAYO FITOQUIMICO DEL EXTRACTO ETANOLICO
Ensayo para Alcaloides
Pesamos 400 mg. de extracto seco se le adiciona 15 ml de cido clorhdrico al 10 % se
calienta hasta disolver y filtramos. De esta forma se obtiene un residuo y una disolucin
cida (lavados cidos). Se mide 1 mL de los lavados cidos en cuatro (4) tubos de
ensayo un tubo es para muestra patrn y adicionamos unas gotas de los reactivos de
reconocimiento de Dragendroff (la presencia de turbidez, floculacin o precipitado rojonaranja), de Mayer (precipitado crema), de Wagner (precipitado marrn).Pruebas
directas para alcaloides.
Al lavado cido sobrante lo colocamos en un pera de separacin y extraemos con
cloroformo, donde se obtiene dos fases: clorofrmica y acuosa. La fase clorofrmica lo
pasamos a un baln y lo llevamos a sequedad en un rotavapor , hacemos una CCF, la
presencia de manchas de color naranja indica la presencia de alcaloides .
Ensayo para Triterpenos y Esteroides (Reaccin de Liebermann Burchard)
A una fraccin de extracto disolver en cloroformo ( CHCL 3), adicionamos 1 ml. de
anhdrido actico y 3 a 4 gotas de cido sulfrico concentrado. Observamos la
aparicin de una coloracin rojo-pardo nos indica la presencia de estructuras
Triterpnicas
La aparicin de una coloracin azul-verde indica la presencia de estructuras
Esteroidales.
El residuo seco obtenido a partir de la fraccin para realizar el ensayo de alcaloides se
redisuelve en 4 mL. de cloroformo, de estos se toma 1 mL en un tubo N 1 y se le aade
el mismo volumen de anhdrido actico. Por la pared del tubo se deja caer de 3-4 gotas
de cido sulfrico concentrado.
Al tubo N 2 aadir 3-4 gotas de cido sulfrico concentrado dejndolo caer por las
paredes del tubo hasta el fondo. La formacin de un anillo de color rojo en la interfase
es indicativa de esteroles insaturados. El tubo N 3 es de control y no se agrega reactivo.
Ensayo para Quinonas (Borntrager)
Tomar un tubo de ensayo con la muestra ya disuelta en. Cloroformo (CHCl 3), se
adiciona 1 mL. de (NaOH) hidrxido de sodio al 5 %, agitamos y dejamos en reposo,
se forman dos fases la clorofrmica y alcalina . Una coloracin, rojo, rosa en la fase
alcalina indica la presencia de quinonas.
De la disolucin clorofrmica obtenida a partir de la fraccin para el ensayo de
triterpenos y esteroides. Tubo N2 se utiliza 1 mL. la cual se le adiciona la misma
cantidad de hidrxido de sodio al 5 % Una coloracin, rojo, rosa en la fase alcalina
indica la presencia de quinonas.
En el tubo N 3 adicionar 1 mL. de solucin de acetato de magnesio al 0.5 % en
metanol. Coloracin roja indica presencia de antraquinonas libres.
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Ensayo para Flavonoides (Mtodo de Shinoda)

Colocar en un tubo de ensayo con la muestra ya diluida en etanol, adicionar un trocito
de cinta de magnesio y 5 a 6 gotas de HCl concentrado. Observndose la reaccin del
Mg con el HCl donde se realiza un cambio de color en la parte superior del lquido de
nuestra dando:
Resultados Positivos:
Amarillo-rojo = Flavonas, chalconas, auronas
Rojo-magenta = Flavanonoles
Rojo, magenta, violeta,azul = Antociancidos
Amarillo claros, incoloros = Flavonoles, Flavonas y Isoflavonas.
Ensayos para Lactonas y Cumarinas (Baljet)
A una fraccin de extracto se disuelve en 2 mL. de etanol se distribuye en dos tubos de
ensayo un tubo para control, al otro tubo se le aade una mezcla recin preparada de de
1 mL. de cido pcrico al 1 % en etanol y 1 mL de hidrxido de sodio al 10 % en agua.
Un color o precipitado rojo-naranja indica la presencia de agrupamientos lactnico
(cumarinas).
Ensayos para cumarinas Fijas y Volatiles
Tomar dos tubos de ensayo de la muestra ya disuelta en etanol.
Para el ensayo de Cumarinas voltiles; En un papel filtro sembrar unas gotitas de KOH
, envolver en el tubo donde est la muestra amarrarlo y llevar a bao Mara por 5
minutos y sacar el papel filtro, llevar al UV el anillo de color amarillo verdoso
fluorescente nos indica positivo (+)
Para el ensayo de Cumarinas fijas, se siembra en un papel filtro dos punto de muestra
y a uno de los puntos agregamos una gotita de KOH y se lleva al UV, si uno de los
puntos presenta fluorescencia amarillo verdoso el resultado es positivo (+).
Ensayo para Fenoles y Taninos
A una fraccin del extracto ya disuelto en etanol se toma 1 mL, adicionamos de 3 a 5
gotas de cloruro ferrico (FeCl3), lentamente, fijndonos la variacin y aparicin de un
color o precipitado verde. Rojo, azul o negro indica la presencia de Fenoles y/o Taninos.
La coloracin azul indica posible presencia de Taninos hidrolizables, y coloracin verde
de taninos condensados. Si el color o precipitado es Prpura o rojo-pardo indican
presencia de Fenoles.
Ensayo para Saponinas.
A una fraccin del extracto diluida en etanol se le adiciona 4 mL de agua y se agita la
mezcla fuertemente durante 2 minutos, dejar reposar 5 minutos.
Si aparece una espuma jabonosa de ms de 2 mm de altura en la superficie del lquido y
persiste esto indica la presencia de saponinas.
Ensayo para aminocidos y aminas (Ninhidrina)
A una fraccin el extracto diluido en etanol se le adiciona 1 mL de disolucin de
ninhidrina al 5 % en etanol. Se calienta en bao de agua de 5 10 minutos.
La aparicin de una coloracin azul violcea indica la presencia de aminas.
Ensayos para Carotenos (Carr-Prince)

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A una fraccin del extracto hexanico 1 ml. se le adiciona igual volumen del reactivo de
Carr-Prince.
La aparicin de una coloracion verde azulada indica la presencia de carotenos.
Ensayo para Lipidos y/o Aceites Esenciales ( Sudan III)
A una fraccin del extracto hexanico 2 ml se evapora hasta sequedad en presencia de la
disolucin de Sudan III.
La aparicin de gotas oleosas de color rojo oscuro, indica la presencia de lpidos y/o
aceites esenciales .

ENSAYO O PRUEBA

EXTRACTO

ETANOLICO

D
W
M

Alcaloides

Triterpenos
Esteroides
Quinonas
Flavonoides
Lactonas
Fenoles
Taninos
Saponinas
Aminocidos y Aminas
Lpidos
y/o
Aceites
Esenciales
Carotenos
Cumarinas Fijas
Cumarinas Voltiles

Leyenda:
Ensayo positivo (+), contenido: (+) Poco; (++) Medio; (+++) Abundante
Ensayo negativo (-)
No s realiza el ensayo para este tipo de extracto (No).

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