Universidad de la Amazonia

Facultad de Ciencias Bsicas

Programa de Qumica

LOGO PROGRAMA
DE QUMICA

PRACTICA N2
SEPARACIN DE AMINOACIDOS DE EXTRACTOS VEGETALES POR
CROMATOGRAFIA EN PAPEL
1. OBJETIVOS
1.1 Realizar la extraccin de diversos compuestos a partir de material vegetal utilizando
los solventes apropiados.
1.2 Separar aminoacidos presentes en un homogenado de tejido vegetal.
1.3 Identificar los diferentes aminocidos presentes en el homogenea vegetal por
comparacin de los Rf que se obtienen de las muestras con la de los patrones que se
utilizarn.
2

FUNDAMENTO TEORICO

Al estar formados los tejidos vegetales por una agrupacin de celulas poseen una gran
variedad de compuestos organicos, dentro de los cuales se encuentran los aminoacidos
que se caracterizan por tener en su estructua un carbono quiral denominado alfa el cual
esta unido a cuatro grupos, un amino basico (NH2), un acido carboxilo (-COOH), uno,
denominado cadena lateral que es propio de cada aminoacido y el otro un hidrogeno. La
cadena lateral a la que se le suele hacer referencia como erre(- R) confiere a cada
aminoacido su propia identidad.
Tales cadenas laterales proporcionan diferencias a las propiedades de los aminoacidos,
razn por la cual los encontramos polares (neutros, acidos y basicos:
G,S,T,Y,C,N,Q,D,E,R,H), apolares
(hidrofobos: A,V,L,I,F,M,P,W). Estos compuestos
nitrogenados se encuentran en los homogenados de los tejidos animales y vegetales y los
podemos separar e identificar mediante tecnicas como la cromatograifia en capa fina o
como una tecnica mucho mas economica cromatografia en papel.
La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para realizar
anlisis cualitativos ya es sencilla de implementar y no requiere de equipamiento
sofisticado. En esta tcnica la fase estacionaria est constituida simplemente por una tira
o circulo de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas
gotas de una solucin de la muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicacin.
Luego el disolvente o mezcla de disolventes empleada como fase mvil (eluente o
eluyente) se hace ascender por capilaridad. Para esto se coloca una porcin del papel en
contacto con la fase mvil dentro de un recipiente que la contiene (cmara de desarrollo).
Despus de unos minutos, cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al borde
extremo del papel, se retira el papel y seca. Es importante que la cmara de desarrollo

permanezca bien tapada durante el proceso de ascenso capilar de la fase mvil

(desarrollo cromatogrfico), pues de lo contrario no se alcanza el equilibrio necesario
entre el lquido (fase mvil) y el vapor del lquido. Si el disolvente elegido fue adecuado y
las sustancias tienen color propio se debern ver manchas de distinto color separadas a
lo largo del papel. Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a
procesos de revelado Figura 1

A medida que el disolvente se mueve a travs de la placa por capilaridad y entre en

contacto con la fase estacionaria acuosa, los aminocidos comienzan a repartirse entre
las dos fases. El ms soluble en el agua tienden a permanecer en la fase acuosa
estacionaria y por lo tanto ascienden ms lentamente por la placa mientras que los ms
hidrfobos tienden a disolverse en la fase orgnica apolar, ascendiendo por esta razn
ms rpidamente por la placa. La identificacin de los aminocidos se hace por
comparacin
de
los
Rf
de
los
patrones
que
se
sembraron.
3

TRABAJO PREVIO

3.1 Conceptos de cromatografa, tipos de cromatografa. Ejemplos.

3.2 Caractersticas y aplicaciones de la cromatografa en papel.
3.3 Fenmeno de adsorcin. La propiedad de retencin. Concepto de Rf
3.4 Eluyentes, soportes y reveladores ms comunes para cromatografa en papel.
3.5 Factores que influyen en una separacin por cromatografa de papel
4

ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRACTICA

4.1 Materiales y equipos

1 Mortero-pistilo
1 pipeta de 10 ml
1 embudo
1 Pipeteador
3 Vaso de precipitados de 100mL y 250 mL
4 probetas de 25 mL

Universidad de la Amazonia
Facultad de Ciencias Bsicas
Programa de Qumica

LOGO PROGRAMA
DE QUMICA

1 Vidrio reloj
1 Papel filtro (cortar placas de 10 cm x 5 cm)
1 Cubeta de Cromatografa
3 Capilares
1 Bao termostato a 80C
Pipetas Pasteur plsticas para cada reactivo (17) y muestras (10)
4.1 Reactivos
Cantidad
10 ml
15 ml
15 ml
5 ml
3,7 g

Reactivo
C,G,Q,A,E,Y,F,I,L
Butanol
Acetona
cido actico
Ninhidrina

Descripcin
Solucin acuosa al 5 mM
Puro
Puro
Puro
25 ml de butanol ms 25 mL de acetona,
de esta solucin colocar 3,6 mL al
solvente.

DESARROLLO EXPERIMENTAL

Preparacin de la fase mvil:

Mezclar los solventes segn la siguiente proporcin:
Butanol:
14

Acetona:

cido Actico: Agua:

14

Saturar la cmara con 20 mL de la fse mvil

Preparacin de la muestra:
Pesar 0,5 g de material vegetal homogenizndose en un mortero con 10 mL de solucin
salina fisiolgica. Luego filtrar a travs de papel.
Por otra parte, trazar a 1,5 cm del borde inferior de la tira de papel filtro una lnea con lpiz
y sobre ella marcar un nmero de puntos equidistantes igual al nmero de muestras y
patrones a sembrar.
Luego, aplicar sobre los puntos en la tira de papel filtro, cada una de las respectivas
soluciones (las muestras y los patrones) de manera que se forme una pequea mancha

en cada uno (evitar poner los dedos en la parte central del papel ya que al final pueden
salir las huellas dactilares) y esperar un momento a que sequen un poco. Utilice para este
procedimiento los capilares.
Se introduce el papel en la cmara de forma que el lquido no moje inmediatamente la
lnea marcado con lapiz. Cerrar la tapa para que la atmsfera se sature del vapor de la
fase mvil (solvente).
Esperar un tiempo a que la fase mvil ascienda por el papel y llegue al otro extremo o
deje de subir.
Sacar la tira y marcar el punto alcanzado por la fase mvil. Dejar secar hasta que no se
perciba el olor a solvente.
Agregar 1,8 mL de sustancia reveladora a la mezcla del solvente (o la cantidad que se
calcule dependiendo del volumen de la fase mvil) y colocarla de nuevo hasta que el
solvente llegue al extremo superior. Sacar la placa y llevarla a un horno a 37C, visualizar
los diferentes aminocidos y compartir sus Rf con los de los patrones.
6

RESULTADOS
6.1 Mostrar los resultados de la cromatografa en papel.
6.2 Reportar cul de las sustancias, la ms polar o la menos polar, recorre mayor
distancia en el papel a partir del punto de aplicacin?por qu?

PREGUNTAS

7.1 Qu significa que una sustancia tenga:

a) Rf < 0.5
b) Rf = 0.5
c) Rf > 0.5
7.2 Cules son los criterios para elegir el solvente adecuado en una cromatografa en
capa fina?
7.3 Qu es el poder eluyente y qu relacin tiene con la polaridad de los solventes?
7.4 Consulte por lo menos 3 sustancias que se utilizan como reveladores y en que
cromatografas se usan.
7.5 Cul de las sustancias problema es la ms polar? Por qu?
7.6 Cul es la sustancia problema menos polar? Por qu?
7.7
REFERENCIAS

BUSCAR BIBLIOGRAFIA DE LA BIBLIOTECA

ABBOTT, D y ANDREWS, R. Introduccin a la cromatografa
BOHINSKI. 1991 Bioqumica. 5ed., Pearson. Mxico.
MATHEWS VAN HOLDE. 2004 Bioqumica. 3 Ed Pearson. Espaa
WILSON, K., AND WALKER, J. 2000. Principles and Techniques of practical
Biochemistry. Fifth edition. Cambridge University Press.