SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE

CENTRO NACIONAL DE HOTELERIA, TURISMO Y ALIMENTOS

TECNLOGO EN PROCESAMIENTO DE ALIMENTOS
RECUENTO DE Bacillus cereus EN ALIMENTOS
Juan Guillermo Cubillos Hinojosa
Microbilogo Agroindustrial (c) MSc.
1. INTRODUCCION
Este patgeno aerobio, Gram positivo, esporulado que se encuentra en el suelo, vegetales,
alimentos crudos y procesados es importante su deteccin debido a las enfermedades que
ocasiona; cuando el recuento de B. cereus es mayor de 106 colonias/gramo en un alimento
puede ocasionar intoxicacin alimentaria.
2. OBJETIVOS

Desarrollar habilidades en la preparacin de reactivos, pruebas bioqumicas y medio

de cultivo para S. aureus.
Adquirir destreza en el recuento de B.cereus en diferentes alimentos.
Elaborar informe e interpretar los resultados de la muestra analizada.

3. MATERIALES
Agar MYP para B. cereus
Solucin de polimixina
Emulsin de yema de huevo al 10%
Cajas petri
Erlenmeyer
Tubos de ensayo
Morteros
Agua peptonada
Puntas estriles
Micropipetas
4. METODOLOGIA
1. Se funde el medio de base y se mantiene en un bao de agua regulado entre 45 C 2Cy se
aaden los otros componentes (Polimixina B, Emulsin de yema de huevo estril) mezclando
bien despus de cada adicin. Se mantiene el medio completo en un bao de agua a 45 C
2. Tomar 10g de muestra y macerarla. En caso que la muestra sea liquida tome 10mL
en una probeta estril.

3. Agregar la muestra al Erlenmeyer que contiene 90mL de agua peptonada,

obteniendo la dilucin 10-1. Realice diluciones seriadas hasta 10-3.
4. Sembrar 0.1mL de cada una de las diluciones en la superficie de la placa de agar
MYP.
5. Dejar secar y seguidamente invertir la caja Petri e incubarla a 35C+/-2 durante 48
horas.
6. Contar las colonias rosadas (manitol negativo) que presenten un halo denso (lecitina
positiva) sobre un fondo rojo violeta (colocando la caja invertida).
Nota: Debe tomar tres colonias y realizarle pruebas bioqumicas.

Muestra
de 10g
90mL
H2O
Peptonada
9mL
H2O
Peptonada

Sembrar en
superficie 0.1mL

10-1

10-2

10-3
Incubar a 35C+/-2
durante 48 horas

Figura 1. Esquema de recuento de B. cereus en alimentos

5. LECTURA DE RESULTADOS
a) Despus del perodo de incubacin especificado, se cuentan las colonias de las
cajas, empleando el equipo de recuento de colonias bajo luz tenue.
b)Seleccione las dos cajas correspondientes a la misma dilucin que presenten entre
15 y 150 colonias. Hallar la media de los valores y multiplicar por el factor de
dilucin. Si se presentan recuentos menores a 15 y mayores a 150 se deben contar
todas las diluciones sacando el promedio entre ellas.

c) Se recomienda examinar con atencin los elementos dudosos, empleando una lupa cuando sea
necesario, con el objeto de diferenciar las colonias de partculas extraas.
d) Las colonias invasoras deben ser consideradas como una sola colonia. Si menos de un cuarto de
la placa est invadida por dichas colonias, se cuentan las colonias de la parte no
afectada de la placa y se calcula el nmero correspondiente a la placa entera. Si est
invadido ms de un cuarto de la placa, se desecha el recuento.
6. EXPRESION DE RESULTADOS
Se redondea el resultado calculado con dos cifras significativas. Se toma como resultado
el nmero de unidades formadoras de colonias, UFC/ml o UFC/g de producto,
expresado como un nmero entre 1,0 y 9,9 multiplicado por 10 x donde x es la potencia
apropiada de 10.
Se calcula el nmero de N de colonias por mililitro o por gramo de producto,
dependiendo del caso, usando la siguiente ecuacin:

El nmero estimado de Bacillus cereus es por lo tanto: 1,1 x 104 expresados /g o /ml.
Ejemplo:
Un recuento directo de B. cereus a 30C 2 C dio los siguientes resultados:
- en la primera dilucin retenida (10-3): 63 y 80 colonias
- en la segunda dilucin retenida (10-4): 7 y 4 colonias.
Se sacaron los siguientes nmeros:
Para 63 colonias: 5 colonias, 4 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a = 50
Para 80 colonias: 5 colonias, 3 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a = 48
Para 7 colonias: 5 colonias, 4 de las cuales concordaban con los criterios, dando
a=6

Para 4 colonias: se encontr que todas eran el microorganismo que se buscaba.

Por lo tanto,

Aproximando el resultado tal como se especific anteriormente, se obtiene 49

000 4,9 x 10 4 UFC/ ml oUFC/ g de producto.
7. BIBILOGRAFIA
ICONTEC. 2006. Norma Tcnica Colombiana NTC 4679. Microbiologa. mtodo horizontal
para el recuento de Bacillus cereus tcnica de recuento de colonias ICONTEC. 2009.
Norma Tcnica Colombiana NTC 4092. Microbiologa de alimentos y productos para
alimentacin animal. Requisitos generales y directrices para anlisis microbiolgicos.
INVIMA. 1998. Manual de tcnicas de anlisis para control de calidad microbiolgico
de alimentos para consumo humano.