OECD/OCDE

404
Adopte :
24 avril 2002

LIGNE DIRECTRICE DE LOCDE POUR LES ESSAIS DE

PRODUITS CHIMIQUES
Effet irritant/corrosif aigu sur la peau
INTRODUCTION
1.
Rgulirement mises jour, les Lignes directrices de lOCDE pour les essais de produits
chimiques intgrent les meilleures donnes scientifiques disponibles. La rvision de la prsente Ligne
directrice a port plus particulirement sur les possibilits damliorer le traitement des animaux de
laboratoire et sur lvaluation de toutes les informations existantes se rapportant aux substances dessai en
vue dviter les tests inutiles sur animaux. Cette nouvelle version de la Ligne directrice 404 (adopte en
1981 et rvise une premire fois en 1992) recommande aux intresss danalyser la valeur des rsultats
pertinents dj disponibles avant de conduire lessai in vivo de corrosion/irritation de la substance dcrit
ci-aprs. Les donnes manquantes pourront tre combles par des essais squentiels (1). La dmarche
exprimentale inclut la ralisation dessais in vitro valids et accepts, dcrits dans le supplment cette
Ligne directrice. Cette dernire recommande galement dopter, le cas chant, pour une application
successive plutt que simultane des trois timbres sur lanimal dans lessai in vivo initial.
2.
Les dfinitions de lirritation et de la corrosion cutanes sont donnes en annexe cette Ligne
directrice.

CONSIDRATIONS INITIALES
3.
Pour assurer la fois la fiabilit des rsultats scientifiques et le bien-tre animal, on ne procdera
pas aux essais in vivo tant que toutes les donnes relatives au caractre ventuellement corrosif ou irritant
pour la peau de la substance nauront pas t values au cours dune analyse de leur valeur. Ces donnes
comprendront les rsultats dtudes menes sur des humains et/ou des animaux, des donnes relatives
leffet corrosif ou irritant dune ou plusieurs substances structurellement proches de la substance dessai ou
de mlanges de ces substances, des donnes dmontrant la forte acidit ou alcalinit de la substance (2)(3),
et des rsultats dessais in vitro et ex vivo valids et accepts (4)(5)(6). Cette analyse devrait rduire la
ncessit de pratiquer des essais in vivo de leffet corrosif ou irritant sur la peau des substances pour
lesquelles des tudes prcdentes ont dj livr suffisamment dinformations quant ces deux aspects.
4.
On prconise ici une dmarche exprimentale de type squentiel, comportant des essais de
corrosion et dirritation in vitro et ex vivo, valids et accepts, dcrits dans le supplment cette Ligne
directrice. Cette dmarche, labore au cours dun atelier de lOCDE (7) et recommande lunanimit
par les participants cet atelier a t adopte titre de recommandation dans le cadre du Globally
Harmonized System for the Classification of Chemical Substances (GHS) [Systme de classification des
substances chimiques harmonis lchelon mondial] (8). Il est recommand dappliquer cette dmarche
exprimentale avant de procder des essais in vivo. Sagissant de nouvelles substances, on prconise de
suivre une dmarche exprimentale par tapes pour obtenir des rsultats scientifiques fiables sur leffet
corrosif ou irritant de la substance. En ce qui concerne les substances existantes dont les donnes sur
leffet corrosif ou irritant sont insuffisantes, on supplera ces dernires en appliquant cette stratgie. Le
choix dune autre dmarche exprimentale trs diffrent ou la dcision de ne pas procder par tapes
doivent tre justifis.
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5.
Si lanalyse de la valeur des rsultats ne permet pas de dterminer leffet corrosif ou irritant, on
envisagera un essai in vivo compatible avec la dmarche squentielle (voir supplment).

PRINCIPE DE LESSAI IN VIVO

6.
Une seule dose de la substance dessai est applique sur la peau de lanimal choisi pour
lexprience, les zones non traites de la peau de lanimal servant de tmoin. Lexprimentateur observe et
note selon une chelle de valeurs le degr dirritation ou de corrosion intervalles dtermins, et le dcrit
de faon plus dtaille afin de fournir une valuation complte des effets. La dure de ltude doit tre
suffisante pour permettre dvaluer la rversibilit des effets observs.
7.
Les animaux qui manifestent des signes persistants de dtresse et/ou de douleur aigus
nimporte quel stade de lessai doivent tre euthanasis, et ces symptmes seront pris en compte dans
lvaluation de la substance. Les critres rgissant la dcision deuthanasier les animaux moribonds et
souffrant fortement sont exposs dans un autre document dorientation (9).

PRPARATION DE LESSAI IN VIVO

Slection de lespce animale
8.
On choisira de prfrence de jeunes adultes sains parmi les lapins albinos. Lutilisation dune
autre espce sera justifie, le cas chant.
Prparation des animaux
9.
Environ 24 heures avant lessai, la rgion dorsale du tronc des animaux sera tondue ras. On
prendra soin de ne pas gratigner leur peau et seuls des animaux prsentant une peau saine et intacte seront
utiliss.
10.
La fourrure de certaines souches de lapins est plus touffue par endroits et ce phnomne est plus
marqu certaines priodes de lanne. Ces plages forte pilosit ne doivent pas recevoir la substance
dessai.
Conditions dhbergement et dalimentation
11.
Les animaux sont placs dans des cages individuelles. La temprature du local exprimental est
rgle 20C (3C) pour les lapins. Si lhumidit relative doit atteindre au moins 30 pour cent sans
excder de prfrence 70 pour cent, en dehors des heures de nettoyage du local, on sefforcera de maintenir
le taux dhumidit autour de 50 60 pour cent. On appliquera un clairage artificiel, alternant 12 heures de
lumire et 12 heures dobscurit. Les lapins seront nourris avec un mlange classique pour animaux de
laboratoire et boiront de leau potable volont.

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MODE OPRATOIRE
Application de la substance dessai
12.
La substance dessai est applique sur une petite zone (environ 6 cm2) de la peau et recouverte
par une compresse de gaze, assujettie au moyen dun sparadrap non irritant. Si lapplication directe est
impossible (dans le cas de liquides ou de certaines ptes, par exemple), la substance dessai est dabord
applique sur la compresse de gaze, laquelle est ensuite place sur la peau. La compresse doit tre
maintenue en contact souple avec la peau laide dun pansement semi-occlusif durant la priode
dexposition. Si la substance dessai est dpose sur la compresse, celui-ci doit tre fixe sur la peau de
faon ce que la substance y soit rpartie uniformment et entre bien en contact avec celle-ci. On fera en
sorte que lanimal nait pas accs la compresse et ne puisse ingrer ou inhaler la substance dessai.
13.
Les substances liquides sont gnralement testes ltat non dilu. Si la substance dessai est
solide (elle peut tre pulvrise si ncessaire), il y a lieu de lhumidifier avec la plus petite quantit deau
(ou au besoin dun autre vhicule appropri) ncessaire assurer un bon contact avec la peau. Lorsquon
utilise un vhicule autre que leau, linfluence ventuelle du vhicule sur lirritation de la peau par la
substance dessai doit tre minimale.
14.
la fin de la priode dexposition, qui dure normalement 4 heures, on enlve ce qui peut ltre
de la substance dessai restante, avec de leau ou un solvant appropri sans interfrer avec la raction ni
altrer lintgrit de lpiderme.
Dose
15.

Une dose de 0,5 mL de liquide ou de 0,5 g de solide ou de pte est applique sur la plage tester.

Essai initial (essai dirritation/corrosion cutane in vivo sur un seul animal)

16.
Il est fortement recommand de commencer par pratiquer lessai in vivo sur un seul animal,
surtout lorsquon pense que la substance risque dtre corrosive. Cette prcaution obit la dmarche
exprimentale squentielle (supplment).
17.
Ds lors quune substance est juge corrosive daprs lanalyse de la valeur des rsultats, tout
essai sur animal savre superflu. Pour la plupart des substances risquant dtre corrosives, il nest
gnralement pas ncessaire de procder un essai in vivo. Toutefois, si lon estime que les donnes
disponibles ne sont pas assez convaincantes, on peut raliser un essai limit sur un animal en suivant la
procdure dcrite ci-aprs. Jusqu trois timbres dessai sont appliqus successivement sur lanimal. Le
premier timbre est enlev aprs trois minutes. Si aucune raction cutane grave nest constate, un
deuxime timbre est appliqu un endroit diffrent et retir aprs une heure. Si les observations effectues
ce stade indiquent que lexposition peut tre tendue quatre heures sans que cela fasse trop souffrir
lanimal, lexprimentateur appliquera un troisime timbre durant quatre heures et attribuera une cote la
raction.
18.
Si un effet corrosif est dtect lissue dune des trois expositions squentielles, lessai sachve
immdiatement. Si aucun effet corrosif nest relev aprs lenlvement du troisime timbre, lanimal est
gard en observation durant 14 jours, moins quun effet corrosif se dclare avant.
19.
Dans les cas o lon sattend ce que la substance dessai soit peut-tre irritante, mais pas
corrosive, un seul timbre sera appliqu sur un animal durant quatre heures.

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Essai confirmatoire (essai dirritation cutane in vivo sur des animaux supplmentaires)
20.
Si lessai initial ne rvle aucun effet corrosif, il convient de confirmer la raction irritante ou
ngative sur deux animaux supplmentaires, traits chacun avec un timbre maintenu durant quatre heures.
Si lessai initial produit un effet irritant, lessai confirmatoire peut tre conduit en mode squentiel ou par
lexposition simultane de deux animaux supplmentaires. Au cas exceptionnel o lessai initial ne serait
pas pratiqu, deux ou trois animaux peuvent tre traits au moyen dun seul timbre appliqu durant quatre
heures. Si lon utilise deux animaux et quils expriment la mme raction, il nest pas ncessaire de
poursuivre lessai. Dans le cas contraire, le troisime animal est galement test. Lutilisation danimaux
supplmentaires pourra tre requise si les ractions sont quivoques.
Priode dobservation
21.
La dure de la priode dobservation devrait tre suffisante pour permettre dvaluer
compltement la rversibilit des effets observs. Il faudra cependant mettre fin lexprience ds que
lanimal montre des signes persistants de douleur ou de dtresse aigus. La rversibilit des effets est
dtermine par lobservation des animaux sur une priode stendant jusqu 14 jours aprs lenlvement
des timbres. Si la raction savre rversible avant le quatorzime jour, lexprience sachve ce
moment-l.
Observations cliniques et cotation des ractions cutanes
22.
Lobservation des signes drythme et doedme chez tous les animaux et la cotation des
ractions seffectuent au bout de 60 minutes et ensuite 24, 48 et 72 heures aprs lenlvement du timbre.
Sagissant de lanimal du test initial, la plage soumise lpreuve est aussi examine immdiatement aprs
lenlvement du timbre. Les ractions cutanes sont cotes et consignes conformment lchelle
figurant dans le tableau ci-dessous. Si la peau prsente des lsions qui naccusent pas lirritation ou la
corrosion aprs 72 heures, il pourra tre ncessaire dobserver lanimal jusquau quatorzime jour afin de
dterminer la rversibilit des effets. En plus de lobservation de lirritation, tous les effets toxiques
locaux, tels que le dgraissage de la peau, et tout effet systmique nocif (par exemple, des effets se
manifestant par des signes cliniques de toxicit et sur le poids corporel) doivent tre relevs et dcrits en
dtail. Lexamen histopathologique est envisager au cas o il faut claircir des ractions quivoques.
23.
La cotation des ractions cutanes est forcment subjective. Lharmonisation de la cotation des
ractions cutanes et lappui aux laboratoires dessai ainsi quau personnel charg deffectuer et
dinterprter les observations passent par une formation adquate des exprimentateurs au systme de
cotation utilis (voir tableau ci-dessous). Un manuel illustr sur la cotation de lirritation cutane et
dautres lsions pourrait tre utile (10).

RSULTATS ET RAPPORT
24.
Les rsultats de ltude devraient tre rcapituls dans un tableau joint au rapport dessai final et
couvrir tous les aspects numrs au paragraphe 27.
valuation des rsultats
25.
Le degr dirritation cutane devrait tre valu conjointement avec la gravit des lsions et leur
caractre rversible. Les cotes individuelles ne fournissent pas une valeur absolue des proprits irritantes
dune substance, celles-ci tant values paralllement dautres effets de la substance. En revanche, les

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cotes individuelles doivent tre considres comme des valeurs de rfrence, valuer en combinaison
avec toutes les autres observations effectues au cours de ltude.
26.
Lvaluation des ractions dirritation doit tenir compte de la rversibilit des lsions cutanes.
Si des ractions, telles que lalopcie (sur une aire limite), lhyperkratose, lhyperplasie et la
desquamation, persistent jusqu la fin de la priode dobservation de 14 jours, il y a lieu de considrer la
substance dessai comme irritante.
Rapport dessai
27.

Le rapport dessai doit contenir les informations suivantes:

Justification de lessai in vivo: analyse de la valeur des rsultats disponibles avant lessai,
notamment des rsultats de la dmarche exprimentale squentielle:
-

description des donnes pertinentes livres par des essais prcdents;

donnes obtenues chaque tape de la dmarche exprimentale;
description des essais in vitro effectus exposant le dtail des procdures et les rsultats
obtenus avec les substances dessai et de rfrence;
comment lanalyse de la valeur des rsultats a dbouch sur la dcision de conduire
ltude in vivo.

Substance dessai:
-

donnes didentification (par exemple, numro du CAS, source, puret, impurets

connues, numro de lot);
tat physique et proprits physico-chimiques (par exemple, pH, volatilit, solubilit,
stabilit);
sil sagit dun mlange: composition et pourcentages relatifs des constituants.

Vhicule:
-

identification, concentration (sil y a lieu), volume utilis;

justification du choix du vhicule.

Animaux dexprience :
-

espce/souche utilise, justification de lutilisation ventuelle dun animal autre que le

lapin albinos;
nombre danimaux de chaque sexe;
poids de chaque animal au dbut et la fin de lessai;
ge des animaux au dbut de lessai;
source des animaux, conditions dencagement, rgime alimentaire, etc.

Conditions exprimentales:
-

technique de prparation du site dapplication;

dtails concernant la composition du timbre et la technique dapplication de ce dernier;
dtails sur la prparation, lapplication et lenlvement de la substance dessai.

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Rsultats:
-

tableau faisant apparatre, pour chaque animal et chaque relev, les cotes attribues aux
ractions dirritation/corrosion observes;
description de toutes les lsions observes;
description circonstancie de la nature et du degr dirritation ou de corrosion observ, et
de tout effet histopathologique;
description de tout autre effet local nfaste (par exemple le dgraissage de la peau) et des
effets systmiques.

Discussion des rsultats.

BIBLIOGRAPHIE
(1)

Barratt, M.D., Castell, J.V., Chamberlain, M., Combes, R.D., Dearden, J.C., Fentem, J.H., Gerner,
I., Giuliani, A., Gray, T.J.B., Livingston, D.J., Provan, W.M., Rutten, F.A.J.J.L., Verhaar, H.J.M.,
Zbinden, P. (1995). The Integrated Use of Alternative Approaches for Predicting Toxic Hazard.
ECVAM Workshop Report 8. ATLA 23, 410 - 429.

(2)

Young, J.R., How, M.J., Walker, A.P., Worth W.M.H. (1988). Classification as Corrosive or
Irritant to Skin of Preparations Containing Acidic or Alkaline Substance Without Testing on
Animals. Toxicol. In Vitro, 2, 19 - 26.

(3)

Worth, A.P., Fentem, J.H., Balls, M., Botham, P.A., Curren, R.D., Earl, L.K., Esdail, D.J., Liebsch,
M. (1998). Evaluation of the proposed OECD Testing Strategy for skin corrosion. ATLA 26, 709720.

(4)

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Toxicology Centre, Brussels.

(5)

Fentem, J.H., Archer, G.E.B., Balls, M., Botham, P.A., Curren, R.D., Earl, L.K., Edsail, D.J.,
Holzhutter, H.G. and Liebsch, M. (1998). The ECVAM international validation study on in vitro
tests for skin corrosivity. 2. Results and evaluation by the Management Team. Toxicology in Vitro
12, pp.483 524.

(6)

UE (2000). Journal officiel des Communauts europennes L136/91 du 8 juin 2000, Mthode B.40
Corrosion cutane.

(7)

OECD (1996). OECD Test Guidelines Programme: Final Report of the OECD Workshop on
Harmonization of Validation and Acceptance Criteria for Alternative Toxicological Test Methods.
Held in Solna, Sweden, 22 - 24 January 1996 (http://www.oecd.org/ehs/test/background.htm).

(8)

OECD (1998). Harmonized Integrated Hazard Classification System for Human Health and
Environmental Effects of Chemical Substances, as endorsed by the 28th Joint Meeting of the
Chemicals Committee and the Working Party on Chemicals, November 1998
(http://www.oecd.org/ehs/Class/HCL6.htm).

(9)

OECD (2000). Guidance Document on the Recognition, Assessment and Use of Clinical Signs as
Humane Endpoints for Experimental Animals Used in Safety Evaluation. OECD Environmental

6/14

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OECD/OCDE
Health and Safety Publications. Series
(http://www.oecd.org/ehs/test/monos.htm).
(10)

on

Testing

and

Assessment

No.

EPA (1990). Atlas of Dermal Lesions, (20T-2004). United States Environmental Protection
Agency, Office of Pesticides and Toxic Substances, Washington, DC, August 1990.
[peut tre obtenu sur demande auprs du Secrtariat de lOCDE].

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TABLEAU: COTATION DES RACTIONS CUTANES

Formation drythme et descarre

Pas drythme .............................................................................................................................................0
rythme trs lger ( peine perceptible) ........................................................................................................1
rythme bien dfini .......................................................................................................................................2
rythme modr grave ................................................................................................................................3
rythme grave (rouge violac) formation descarre empchant la cotation de lrythme.........................4
Maximum possible: 4
Formation doedme
Pas doedme
.............................................................................................................................................0
Oedme trs lger ( peine perceptible) .........................................................................................................1
Oedme lger (pourtour de la zone oedmateuse bien dlimit par une enflure nette) ..................................2
Oedme modr (enflure denviron 1 mm) ....................................................................................................3
Oedme grave (enflure de plus de 1 mm stendant au-del de laire expose) .............................................4
Maximum possible: 4
Un examen histopathologique pourra tre conduit pour claircir des ractions douteuses.

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ANNEXE

DFINITIONS
1.
Lirritation cutane dsigne lapparition de lsions cutanes rversibles conscutives
lapplication dune substance dessai durant une priode de quatre heures au maximum.
2.
La corrosion cutane dsigne la survenue de lsions cutanes irrversibles, et plus prcisment
dune ncrose visible travers lpiderme et dans le derme, la suite de lapplication dune substance
dessai durant une priode de quatre heures au maximum. La corrosion cutane se manifeste par des
ulcres, des saignements, des crotes saignantes et, au terme de la priode dobservation de 14 jours, par
une dcoloration due au plissement de la peau, des zones dalopcie totale et des escarres. On envisagera
un examen histopathologique sil faut lucider des lsions douteuses.

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SUPPLMENT LA LIGNE DIRECTRICE 404

Dmarche exprimentale squentielle pour les essais dirritation et de corrosion cutanes

CONSIDRATIONS GNRALES
1.
Pour concilier la fiabilit des rsultats scientifiques et le bien-tre animal, il importe dviter
lutilisation inutile danimaux dexprience et de rduire au minimum toute procdure exprimentale
susceptible de dclencher des effets graves chez les animaux. Avant denvisager un essai in vivo, on
valuera toutes les informations relatives lventuel pouvoir corrosif/irritant dune substance sur la peau.
Il se peut que les donnes disponibles suffisent classer une substance dessai quant son pouvoir irritant
ou corrosif, sans quil soit ncessaire deffectuer des essais sur animaux. Ainsi, le recours une analyse de
la valeur des rsultats et ladoption dune dmarche exprimentale squentielle limiteront au maximum la
ncessit de pratiquer des essais in vivo, surtout si la substance risque dengendrer des ractions violentes.
2.
Il est recommand dvaluer les informations existantes concernant le pouvoir irritant ou corrosif
des substances laide dune analyse de la valeur des rsultats, afin dtablir la ncessit de raliser des
tudes supplmentaires, autres que des tudes cutanes in vivo, pour contribuer caractriser ce pouvoir.
Si cette ncessit se confirme, une dmarche exprimentale squentielle est prconise pour produire les
donnes exprimentales pertinentes. Sagissant des substances qui nont pas encore fait lobjet dessais, il
convient dobtenir lensemble des donnes permettant dvaluer le pouvoir corrosif ou irritant de la
substance par une dmarche squentielle. La dmarche exprimentale expose dans ce supplment a
dabord t labore au cours dun atelier de lOCDE (1) avant dtre entrine et complte dans le cadre
du Systme harmonis de classification intgre des risques pour la sant humaine et lenvironnement lis
aux substances chimiques (Harmonized Integrated Hazard Classification System for Human Health and
Environmental Effects of Chemical Substances), adopt par la vingt-huitime Runion conjointe du
Comit sur les produits chimiques et du Groupe de travail sur les produits chimiques, les pesticides et la
biotechnologie, en novembre 1998 (2).
3.
Si cette dmarche exprimentale squentielle ne fait pas partie intgrante de la Ligne directrice
404, elle constitue cependant la procdure recommande pour dterminer leffet irritant ou corrosif sur la
peau. Cette procdure reprsente la fois la meilleure pratique et une rfrence thique dans ce domaine.
La Ligne directrice dcrit le mode opratoire de lessai in vivo et rcapitule les facteurs qui devraient tre
examins avant dentamer lessai. La dmarche indique comment valuer les donnes existantes relatives
aux proprits irritantes ou corrosives des substances et prsente les diffrentes tapes permettant dobtenir
des donnes pertinentes sur les substances qui rclament dautres tudes ou qui nont pas encore t
tudies. Elle recommande galement, dans certaines circonstances, deffectuer des essais in vitro ou ex
vivo dirritation et de corrosion cutanes, valids et accepts.

DESCRIPTION DE LA STRATGIE DVALUATION ET DESSAI

4.
Avant dentreprendre les essais inscrits dans la dmarche exprimentale squentielle (figure), il
faut valuer toutes les informations disponibles afin dtablir la ncessit deffectuer des essais cutans in
vivo. Bien que lvaluation de certains paramtres particuliers puisse livrer des informations significatives
(par exemple un pH extrme), la totalit des informations existantes doit tre prise en considration.
Toutes les donnes pertinentes sur les effets de la substance en question, ou ses analogues, seront
examines en vue dune prise de dcision fonde sur lanalyse de la valeur des rsultats, dcision qui doit
tre justifie. Il convient daccorder une place prpondrante aux donnes se rapportant aux humains et
10/14

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aux animaux, et dexaminer ensuite les rsultats des essais in vitro et ex vivo sur la substance. Les tudes
in vivo sur des substances corrosives devront tre vites chaque fois que cela est possible. Les facteurs
pris en compte dans la dmarche exprimentale sont repris ci-aprs:
5.
valuation des donnes existantes sur les humains et les animaux (premire tape). Les donnes
existantes sur ltre humain, par exemple des tudes cliniques ou sur les conditions de travail et des
rapports sur des cas relevant de ces disciplines, et/ou les rsultats dessais sur animaux, par exemple des
essais de toxicit par exposition cutane unique ou rpte, sont examiner en premier car ils livrent des
informations directement lies aux effets sur la peau. Les substances dont le pouvoir irritant ou corrosif est
avr et celles dont le caractre non corrosif et non irritant a t clairement dmontr ne doivent pas faire
lobjet dtudes in vivo.
6.
Analyse des relations structure-activit (RSA) (deuxime tape). Le cas chant, les rsultats
dessais sur des substances structurellement proches doivent tre pris en considration. Sil existe
suffisamment de donnes relatives aux humains et/ou aux animaux sur des substances structurellement
proches ou sur des mlanges de ces substances pour attester leur pouvoir corrosif ou irritant, on peut
supposer que la substance tudie provoquera les mmes ractions. Auquel cas, il nest plus forcment
ncessaire de tester la substance. Les donnes ngatives issues dtudes de substances structurellement
proches ou de mlanges de ces substances noffrent pas une preuve suffisante de leffet non corrosif ou non
irritant dune substance dans le cadre de la dmarche exprimentale squentielle. On dterminera son
pouvoir corrosif ou irritant pour la peau en appliquant une mthode danalyse RSA valide et accepte.
7.
Proprits physico-chimiques et ractivit chimique (troisime tape). Les substances prsentant
des pH extrmes, savoir et VRQWVXVFHSWLEOHVGLQGXLUHGHIRUWHVUpDFWLRQVORFDOHV6LXQH
valeur de pH extrme est un indice dcisif quant au caractre corrosif dune substance, son pouvoir tampon
doit galement entrer en ligne de compte (3)(4). Si le pouvoir tampon donne penser que la substance
peut ne pas tre corrosive pour la peau, cette hypothse demande tre confirme par un autre essai, de
prfrence un essai in vitro ou ex vivo valid et accept (voir paragraphe 9).
8.
Toxicit cutane (quatrime tape). Sil est prouv quune substance est fortement toxique par
voie cutane, une tude dirritation ou de corrosion cutane risque dtre impossible raliser in vivo, la
quantit de substance dessai normalement applique pouvant dpasser la dose trs toxique et entraner
ainsi la mort des animaux ou les faire souffrir beaucoup. En outre, lorsque des tudes de toxicit cutane
ont dj t menes sur des lapins albinos jusqu la dose limite de 2 000 mg/kg de poids corporel, ou
au-del, et quaucune irritation ou corrosion cutanes nont t constates, il nest plus toujours ncessaire
deffectuer un essai supplmentaire dirritation ou de corrosion cutane. Il convient de faire attention
plusieurs aspects lorsquon value la toxicit cutane aigu observe dans des tudes prcdentes. titre
dexemple, les informations rapportes sur les lsions cutanes peuvent tre incompltes. Les ractions de
sensibilit sont susceptibles de varier considrablement entre les espces et il se peut que les essais et les
observations se rapportent dautres espces que le lapin. De mme, la forme sous laquelle la substance
dessai a t applique sur les animaux peut ne pas convenir lvaluation de lirritation et de la corrosion
cutanes (par exemple la dilution des substances (5). Nanmoins, sil existe des tudes de toxicit cutane
sur le lapin bien conues et menes, leurs rsultats ngatifs peuvent tre considrs comme une
dmonstration suffisante du caractre non irritant ni corrosif de la substance.
9.
Rsultats des essais in vitro ou ex vivo (tapes 5 et 6). Ne doivent pas tre prouves sur des
animaux les substances dont le pouvoir fortement irritant ou corrosif a t avr au cours dun essai in vitro
ou ex vivo valid et accept (6) (7) conu pour valuer ces effets particuliers. Il est trs vraisemblable que
ces substances produiront des effets semblables in vivo.

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OECD/OCDE

10.
Essai in vivo sur des lapins (tapes 7 et 8). Si la dcision deffectuer un essai in vivo a t prise
sur la base de lanalyse de la valeur des rsultats, celui-ci doit dbuter par un essai initial conduit sur un
seul animal. Si les rsultats de cet essai indiquent que la substance est corrosive pour la peau, il ne faut pas
poursuivre les essais. Si lessai initial ne montre aucun effet corrosif, la raction ngative ou dirritation
doit tre confirme sur un ou deux animaux supplmentaires exposs la substance durant quatre heures.
Lorsque lessai initial fait apparatre un effet irritant, lessai confirmatoire doit tre conduit sur un mode
squentiel, ou par lexposition simultane des deux animaux supplmentaires.

BIBLIOGRAPHIE
(1)

OECD (1996). Test Guidelines Programme: Final Report on the OECD Workshop on
Harmonization of Validation and Acceptance Criteria for Alternative Toxicological Test Methods.
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(5)

Patil, S.M., Patrick, E., Maibach, H.I. (1996). Animal, Human, and In Vitro Test Methods for
Predicting Skin Irritation, in: Francis N. Marzulli and Howard I. Maibach (editors):
Dermatotoxicology. Fifth Edition ISBN 1-56032-356-6, Chapter 31, 411-436.

(6)

Fentem, J.H., Archer, G.E.B., Balls, M., Botham, P.A., Curren, R.D., Earl, L.K., Edsail, D.J.,
Holzhutter, H.G. and Liebsch, M. (1998). The ECVAM international validation study on in vitro
tests for skin corrosivity. 2. Results and evaluation by the Management Team. Toxicology in Vitro
12, pp.483 524.

(7)

UE (2000). Journal officiel des Communauts europennes L136/91 du 8 juin 2000, Mthode B.40
Corrosion cutane.

12/14

404

OECD/OCDE
FIGURE

PROCDURE DESSAI ET DVALUATION DE LIRRITATION ET DE LA CORROSION

CUTANES
Activit
1

Observation

Donnes existantes sur lhumain Corrosive

et/ou lanimal montrant des effets
sur la peau ou sur les muqueuses Irritante
Ni corrosive, ni irritante

Conclusion
Effet: considre comme
corrosive. Essai pas ncessaire.
Effet: considre comme irritante.
Essai pas ncessaire.
Effet: considre comme ni
corrosive, ni irritante. Essai pas
ncessaire

Pas dinformation disponible ou

informations non concluantes
2

Conduite dune analyse RSA sur

la corrosion ou lirritation
cutanes

Effet prvu sur la peau: grave

Effet prvu sur la peau: irritation

Juge corrosive. Essai pas

ncessaire.
Juge irritante. Essai pas
ncessaire.

Effet impossible prdire ou

prdiction incertaine ou ngative
3

Mesure du pH (tenir compte du

pouvoir tampon, au besoin)

pH RXDYHFXQ
pouvoir tampon lev, le cas
chant)

Effet corrosif suppos. Essai pas

ncessaire.

Trs toxique

Essai supplmentaire pas

ncessaire.

2< pH <11,5 ou pH   RX

11,5 avec un pouvoir tampon
faible ou nul, le cas chant
4

valuation de la toxicit
systmique par voie cutane1

Ni corrosive, ni irritante, la dose

limite de 2 000 mg/kg de poids
Suppose ni corrosive, ni irritante.
corporel ou plus, sur des lapins
Essai supplmentaire pas
ncessaire.
Information non disponible ou
non concluante

Peut tre examine avant les tapes 2 et 3.

13/14

404
5

OECD/OCDE

Conduite dun essai in vitro ou ex Raction de corrosion

vivo de corrosion cutane valid
et accept

Effet corrosif in vivo suppos.

Essai supplmentaire pas
ncessaire.

Substance non corrosive ou

absence de mthode dessai de
corrosion cutane in vitro ou ex
vivo dj valide au niveau
international
6

Conduite dun essai dirritation

cutane in vitro ou ex vivo valid
et accept

Raction dirritation

Irritation in vivo suppose. Essai

supplmentaire pas ncessaire.

Substance non irritante ou

absence de mthode dessai
dirritation cutane in vitro ou ex
vivo dj valide au niveau
international
7

Conduite dun essai in vivo initial Graves lsions sur la peau

sur un seul animal

Considre comme corrosive.

Essai supplmentaire pas
ncessaire.

Pas de grave lsion sur la peau

8

Conduite dun essai confirmatoire Corrosive ou irritante

sur un ou deux animaux
supplmentaires
Ni corrosive, ni irritante

14/14

Juge corrosive ou irritante. Essai

supplmentaire pas ncessaire.
Juge ni corrosive, ni irritante.
Essai supplmentaire pas
ncessaire.