Universidad Nacional Autnoma de

Mxico

Facultad de Estudios Superiores Iztacala

PROPIEDADES NUTRACUTICAS DE LA FLOR DEL
COLORN (Erythrina americana), DE DOS ESTADOS DE LA
REPBLICA MEXICANA; UNA ALTERNATIVA PARA EL
MEJORAMIENTO DE LA NUTRICIN
T

PARA OBTENER EL TTULO DE

B

PRESENTAN:
ARREDONDO FERNNDEZ RODRIGO, CASTILLO CHVEZ
CECILIA SARAHI, GARCA FRANCO MIRIAM IXCHEL, LPEZ
AGUSTN KEVIN ARMANDO, REYES TLAPALE LINET.

ASESORAS Y DIRECTORAS DE LA TESIS:

DRA. MA. MARGARITA CANALES MARTNEZ
M. en C. KARLA STEPHANIE MARTNEZ ELIZALDE

TLALNEPANTLA, ESTADO DE MXICO.

2014
AGRADECIMIENTOS

DEDICATORIAS

ndice del contenido

ndice de Figuras
nmero de paginas
ndice de Cuadros.
RESUMEN..
1. INTRODUCCIN
2. ANTECEDENTES..
3. PROBLEMA.
4. HIPTESIS..
5. OBJETIVO GENERAL..
6. OBJETIVOS PARTICULARES
7. METODOLOGA.
7.1 Colecta de material.................
7.2 Obtencin de los extractos
7.3 Cuantificacin de protenas.
7.4 Cuantificacin de carbohidratos..
7.5 Cuantificacin de lpidos
7.6 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C).
7.7 Evaluacin de la actividad antibacteriana
7.8 Determinacin cualitativa de alcaloides..
7.9 Determinacin cualitativa de fenole..
7.10 Determinacin cualitativa de flavonoides..
8. RESULTADOS
8.1Rendimiento de los extractos.
8.2 Cuantificacin de protenas
8.3 Cuantificacin de carbohidratos
8.4 Cuantificacin de lpidos.
8.5 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C)
8.6 Evaluacin de la actividad antibacteriana..
8.7 Determinacin cualitativa de alcaloides
8.8 Determinacin cualitativa de fenoles
8.9 Determinacin cualitativa de flavonoides.
9. DISCUSIN..
10. CONCLUSIONES.

11. PERSPECTIVAS.
12. APNDICES...
13. BIBLIOGRAFA

Indice
ndice de Figuras...................................................................................................i
ndice de Cuadros................................................................................................ii
RESUMEN.............................................................................................................1
1. INTRODUCCIN...............................................................................................2
2. ANTECEDENTES..............................................................................................3
3. JUSTIFICACIN................................................................................................5
4. PROBLEMA.......................................................................................................5
6. OBJETIVO GENERAL......................................................................................5
7. OBJETIVOS PARTICULARES..........................................................................6
8. METODOLOGA................................................................................................7
8.1 Colecta de material.......................................................................................7
8.2 Obtencin de los extractos...........................................................................7
8.3 Cuantificacin de protenas por mtodo de Bradford..................................8
8.4 Cuantificacin de carbohidratos por mtodo de Nelson-Somogy................8
8.5 Cuantificacin de lpidos por mtodo de Soxhlet.........................................8
8.6 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C) con reactivo de FolinCiocalteau...........................................................................................................8
8.7 Evaluacin de la actividad microbiana.........................................................9
8.8 Determinacin cualitativa de alcaloides utilizando el reactivo de
Dragendorff.........................................................................................................9
8.9 Determinacin cualitativa de fenoles utilizando cloruro frrico....................9
8.10 Determinacin cualitativa de flavonoides utilizando cloruro de aluminio.10
9. RESULTADOS.................................................................................................10
9.1 Rendimiento de los extractos.....................................................................10
9.2 Cuantificacin de protenas........................................................................10
9.3 Cuantificacin de carbohidratos.................................................................11
9.4 Cuantificacin de lpidos............................................................................13
9.5 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C).........................................13
9.6 Evaluacin de la actividad antibacteriana..................................................13
9.7 Determinacin cualitativa de alcaloides.....................................................15
9.8 Determinacin cualitativa de fenoles.........................................................16
9.9 Determinacin cualitativa de flavonoides...................................................16
10. DISCUSIN...................................................................................................16

11. CONCLUSIONES..........................................................................................18
12. PERSPECTIVAS............................................................................................18
14. APNDICES..................................................................................................19
Apndice 1........................................................................................................19
Erythrina americana.........................................................................................19
Zonas de colecta..............................................................................................20
Pre tratamiento de las muestras......................................................................23
Apndice 4........................................................................................................24
Obtencin del extracto metanlico...................................................................24
Extraccin de protenas....................................................................................24
Apndice 6........................................................................................................24
Cuantificacin de protenas por Mtodo de Bradford......................................24
Extraccin de carbohidratos.............................................................................25
Cuantificacin de Carbohidratos por el Mtodo de Nelson-Somogy...............26
Apndice 9........................................................................................................27
Extraccin de grasas por mtodo de Soxhlet..................................................27
Apndice 11......................................................................................................29
Actividad antimicrobiana del extracto metanlico: Mtodo de difusin en agar
de Kirby-Baer (Koneman, 1985).....................................................................29
Caractersticas generales de Staphylococcus aureus y Salmonella typhi.......31
Apndice 13......................................................................................................34
Analisis estadisticos.........................................................................................34
Determinacin de alcaloides por mtodo de Dragendorff................................34
Determinacin de fenoles FeCl3 (Dey y Harborne, 1989)................................35
Apndice 16......................................................................................................36
Determinacin de flavonoides AlCl3 (Dey y Harborne, 1989)..........................36
Apndice 17 ANOVA de dos factores Actividad Antimicrobiana.................36
REFERENCIAS....................................................................................................38

ndice de Figuras
Figura 1. Rendimiento en porcentaje de protenas de flores de Erythrina
americana frescas y hervidas y las
aguas.11
Figura 2. Rendimiento en porcentaje de carbohidratos de las flores hervidas y
frescas, y aguas, de ambas zonas.12
Figura 3. Grfica de barras del contenido de lpidos de flores frescas y hervidas de
ambas zonas.13
Figura 4. Dimetros de los halos de inhibicin de la prueba de Kirby-Baer.15

ndice de Cuadros
Cuadro 1. Designacin de las muestras utilizadas. .7
Cuadro 2. Rendimiento de los extractos metanlicos
obtenidos...10
Cuadro 3. Rendimiento de Carbohidratos.11
Cuadro 4. Actividad antibacteriana del extracto metanlico de todos los extractos
frente a Salmonella typhi y Staphylococcus aureus.14
Cuadro 5. Determinacin de alcaloides con reactivo de Dragendorff...15
Cuadro 6. Presencia de fenoles con reactivo de FeCl 3.16

RESUMEN
La flor del colorn (Erythrina americana) o mejor conocida como pemoche en la
regin de la Huasteca, es utilizada en sta misma zona como alimento y forma
parte de la dieta cotidiana de mltiples pueblos en Hidalgo y Quertaro.
En ste trabajo se evalu las propiedades nutracuticas de la flor del colorn,
tratndola como usualmente se consume en esa regin, que es sin pistilo y
hervidas por aproximadamente 10 minutos. Se determin el contenido proteico
mediante la cuantificacin de protenas por el mtodo de Bradford. Se evalu el
contenido lipdico por el mtodo de Soxhlet. As mismo de determin el contenido
de carbohidratos por la tcnica de Nelson-Somogyi, todo esto para evaluar las
propiedades nutracuticas. Para la determinacin de cido ascrbico (vitamina C)
se utiliz el reactivo de Folin-Ciocalteau. A partir del extracto metanlico de cada
muestra se evalu la actividad antibacteriana (mtodo de difusin en agar de
Kirby-Baer en dos cepas bacterianas). Adems se evalu el contenido cualitativo
de fenoles con cloruro frrico, de flavonoides con cloruro de aluminio y de
alcaloides con el reactivo de Dragendorff.
Como resultados se obtuvieron bajas

concentraciones

en

protenas

carbohidratos, cuyos porcentajes de rendimiento fueron inferiores al 1%. En

lpidos, el rendimiento fue de ms de 0.3% hasta 5.4%. En cuanto a Vitamina C
no se obtuvieron resultados.
En la parte fotoqumica hubo presencia de metabolitos secundarios (fenoles y
alcaloides), mas no de Flavonoides. En cuanto actividad antibacteriana, todos los
extractos presentaron actividad frente a S. typhi y S. aureus, siendo el extracto de
la flor fresca de Agua Zarca el ms destacado de todos.

1. INTRODUCCIN
La malnutricin engloba dos trminos fundamentales en cuanto a salud se
refiere, el primero de ellos es la sobrenutricin (sobreconsumo calrico), as como
tambin a la desnutricin. La UNICEF define la desnutricin como resultado de la
ingesta insuficiente de alimentos y la aparicin repetida de enfermedades; esto trae
como consecuencia que el organismo, al no contar con los aportes calricos y
nutricionales necesarios, no pueda llevar a cabo correctamente sus funciones
orgnicas, tales como el crecimiento, la defensa proporcionada por el sistema
inmunolgico, el aprendizaje, el trabajo fsico, y el embarazo y la lactancia en las
mujeres. Para el 2006 cerca de 1.5 millones de nios menores de cinco aos
sufran de desnutricin crnica (baja talla); esto a lo largo de toda la Repblica
Mexicana (ENSANUT, 2012).
Algunas otras causas de desnutricin son enfermedades como la diarrea, la
neumona, el paludismo y el VIH/SIDA; sin embargo las causas directas tienen
ms relacin con la inequidad en la distribucin de recursos y riqueza, por lo cual
se propone la bsqueda de alimentos nutraceticos que son aquellos que ofrecen
propiedades alimenticias y farmacuticas y que sean de precio accesible a
cualquier estrato socioeconmico.
A lo largo de la historia se ha observado el consumo de plantas silvestres

complementando

la

alimentacin

como

posible

medicamento

para

padecimientos comunes, esto principalmente en zonas rurales ya que su

obtencin es inmediata y Mxico es un pas rico en plantas medicinales (Martnez,
1991).
En la Huasteca Queretana se encuentra un pueblo llamado Agua Zarca, en el cual,
el consumo del pemoche (Erythrina americana) (Apndice 1) es muy comn. La E.
americana es un rbol que produce leguminosas, stas, son pequeas vainas de
color carmes, a la cual se le atribuyen propiedades antirreumticas, efecto
somnfero (Garca et al., 2001) y relajante. La principal forma de preparacin es
por medio de la coccin.

2. ANTECEDENTES
Mio y cols. (2001), evaluaron la actividad antinocioceptiva (disminucin de
la sensacin de dolor) de la (E. crista-galli L) en ratones administrando extractos
acuosos de hojas del ceibo en dosis de 250, 500 y 1000 mg/kg. Tambin la
actividad antiinflamatoria en los extractos diclorometnico, metanlico y acuoso
Los resultados obtenidos demuestran actividad antinociceptiva y antiinflamatoria
de los extractos ensayados.
Morillo y cols. (2013) Determinaron la eficiencia de dos dietas alternativas en la
alimentacin de alevines de Colossoma macropomum (cachama negra), utilizando
como fuente proteica a la Chachafruta (E. edulis) y la soya (Glycine max) como
sustituto de la harina de pescado, comparndola con una dieta testigo a base de
harina de pescado. Las dietas se formularon con un porcentaje terico de protena
bruta (PB) de 30%. Los resultados no mostraron diferencias significativas por lo
cual se pudo inferir que la sustitucin total de la harina de pescado por harina de
chachafruto y harina de soya conducira a buenos resultados para la alimentacin
de alevines de Colossoma macropomum.
Se extrajeron y purificaron 6 isoflavonoides (Isolupalbigenin, Erythrinin B,

Lipiwighteone, Laburnetin, Erysubin B y M-Wi-2) de la corteza de Erythrina

poeppigiana, los cuales fueron probados en Staphylococcus aureus resistente a la
meticilina; fue el Isolupalbigeninel que mayor actividad anti MRSA present;
seguido de Erythrinin B; el Isolupalbigenine es comparable con el efecto de
vancomicina, un antibitico natural derivado de Nocardia orientalis, alternativo a la
penicilina; este estudio lo trabajaron Sato y cols. (2006).
La especie E. americana es descrita como un rbol ornamental, endmico de
Mxico, perteneciente a la familia Fabaceae, cuyas flores son comestibles y a
partir de ellas se preparan infusiones que, dentro de la medicina tradicional, se
emplea como laxante, expectorante, antiasmtico y antimalrico. Se han aislado
alcaloides isoqunolicos identificados como -erythoroidina y su derivado con
actividad cuariforme, dihidro--erythoridina. (Garca-Mateos, 2001).
Sotelo

Lpez-Garca

(2007),

evaluaron

los

factores

nutricionales

antinutricionales de flores comestibles de Mxico, las flores estudiadas fueron:

Agave Salmina, Aloe vera, Arbutus xalapensis, Curcubita pepo, Eythrina
americana, Erythrina caribaea, Euphorbia radians benth y Yuca filifera. Los niveles
ms altos de protena digestible fueron encontrados en Erythrina americana y A.
samiana; en cinco muestras el aminocido limitante fue Lisina, y en tres de ellos
fue el Triptofano. Las dos especies de Erythrina presentaron alcaloides.
Pugalendhi y cols. (2004), utilizaron las semillas de Tamarindus indica, Erythrina
indica y Sesbania bispinosa para evaluar su potencial nutrimental. Todas las
semillas excepto T. indica tuvieron un alto contenido de protena cruda. Las tres
espacies tienen niveles relativamente altos de lpidos. Las especies estudiadas
presentaron un alto contenido de nutrientes, alta digestibilidad in vitro de su
protena y un bajo nivel de factores anti nutricionales.
Sotelo y cols. (2003), evaluaron las propiedades nutritivas y toxicolgicas de la
semilla deshidratadas, germinadas y las vainas de Erythrina americana, se
estudiaron crudas y hervidas. Las semillas crudas germinadas mostraron un
contenido ms alto de protena y menor contenido de fibra. El contenido total de

aminocidos esenciales de las semillas germinadas incremento al hervirse. Por el

bajo contenido de alcaloides y la calidad de las protenas, se propuso utilizar, las
semillas secas-hervidas y las vainas, como alimento animal.
Muchos trabajos han referido la presencia de alcaloides en E. americana y otras
especies de Erythrina, por ejemplo, en 2000, Garn-Aguilar y cols. Probaron
fracciones metanIicas, hexanicas y libres, de alcaloides obtenidos de semillas de
E. americana en ratas agresivas, teniendo como resultado la disminucin del
comportamiento agresivo .Garca-Mateos y cols. en 2003 obtuvieron alcaloides de
tipo isoqunolico de varios subcultivos de callos y semillas de E. americana.
Tambin fueron

evaluados alcaloides con actividad antioxidante a partir de

semillas de E. americana, por Ibarra y cols. en 2011, teniendo como resultado una
disminucin de hasta 94% del DPPH. gg

3. JUSTIFICACIN
Debido a la desnutricin que se presenta en Mxico se busca alternativas
econmicas de alimentos que cumplan con las caractersticas nutricionales
necesarias para una dieta sana.
Adems, se pretende que contribuya a la reduccin de importaciones de productos
extranjeros para impulsar la produccin de alimentos mexicanos que permitan un
mejoramiento de la economa, y a su vez, de la condicin alimenticia.
4. PROBLEMA
E. americana presentar propiedades nutracuticas?
5. HIPTESIS
Si el gnero Eythrina ha mostrado tener propiedades nutricionales, y la
especie E. americana presenta caractersticas farmacuticas, entonces podr
cumplir con los requerimientos necesarios para considerarse como un alimento
nutracutico.

6. OBJETIVO GENERAL
Evaluar las propiedades de Erythrina americana como un producto
nutracutico.
7. OBJETIVOS PARTICULARES
1.- Realizar la colecta de flor de E. americana en dos estados de la repblica
mexicana.
2.- Obtener el extracto metanlico por maceracin.
3.-Determinar protenas por el mtodo de Bradford.
4.- Determinar carbohidratos por la tcnica de Nelson-Somogyi.
5.- Determinar Lpidos por el mtodo de Soxhlet.
6.- Determinar Vitamina (C), por Folin-Ciocalteau.
7.- Determinar la actividad antibacteriana del extracto metanlico por difusin en
agar Kirby-Baer.
8.- Determinar la presencia de alcaloides (Dragendorff).
9.- Determinar la presencia de fenoles (cloruro frrico).
10.- Determinar presencia de flavonoides (cloruro de aluminio).

8. METODOLOGA
8.1 Colecta de material
La flor de E. americana Mill. (Apndice 1) se colect de dos diferentes
zonas; Agua Zarca, Quertaro; y FES Iztacala, Tlalnepantla de Baz, Estado de
Mxico (Apndice 2).
8.2 Pre tratamiento y designacin de las muestras.

A las flores colectadas se les fue retirado el pistilo. Flor y pistilo fueron
separados en dos porciones, una para mantenerse fresca y otra para ser hervida
en agua. El agua que se recuper del proceso de hervir la flor, y el agua
recuperada de hervir pistilo, tambin fueron utilizadas.
La designacin de las muestras fue la siguiente:

Clave

Agua de flores
Agua de pistilos
Flor hervida
Flor fresca
Pistilo hervido
Pistilo fresco
Cuadro 1. Designacin de

Muestra
Agua Zarca

FES Iztacala

(AZ)
(FES)
1
1.1
1.2
2
2.1
2.2
3
3.1
3.2
4
4.1
4.2
5
5.1
5.2
6
6.1
6.2
las muestras utilizadas. Se menciona solamente la

clave cuando el tratamiento se llevo a cabo para las muestras de ambas zonas.
8.2 Obtencin de los extractos
Para la obtencin de los extractos metanlicos de 30 g de las muestras 3 a
6 (Apndice 3) se utiliz aproximadamente 100 mL de metanol por muestra;
siguiendo la metodologa descrita por Domnguez (1973) (Apndice 4).
8.3 Cuantificacin de protenas por mtodo de Bradford.
Primero se realiz la extraccin de 1 g de las muestras 3 a 4 por la
metodologa descrita por Gonzlez y Pealosa (2000) (Apndice 5). Una vez
realizada la extraccin se llev a cabo la tcnica de Bradford propuesta por dem
(Apndice 6). Se tomaron 500 L de muestra problema de las muestras 3, pero
debido a la extrapolacin de esas muestras, se llev a cabo una dilucin 1:1 con
agua destilada; mientras que para las muestras de 4 y 1, se utiliz 1 mL de
solucin problema

8.4 Cuantificacin de carbohidratos por mtodo de Nelson-Somogy

Previamente a la cuantificacin se realiz la extraccin de carbohidratos de
1 g todas las muestras slidas y 1 mL de las muestras 1 y 2, por la tcnica descrita
por Gonzlez y Pealosa (2000) (Apndice 7). La cuantificacin por el mtodo de
Nelson-Somogy se llev bajo las condiciones propuestas por dem (2000)
(Apndice 8).
8.5 Cuantificacin de lpidos por mtodo de Soxhlet
Se realiz la cuantificacin de las muestras 3 y 4. Se armaron cuatro cuatro
cartuchos de papel filtro con, tres con 5 g de las muestra de flor fresca de Agua
Zarca y flor fresca y hervida de la FES Iztacala3.2 y 4, cada uno, y uno con 3 g de
flor hervida de Agua Zarca3.1; correspondientemente. Siguiendo la tcnica de
extraccin de lpidos por Soxhlet propuesta por Gonzlez y Pealosa (2000)
(Apndice 9) y por diferencia de peso del cartucho, se determin el contenido total
de lpidos de las muestras.
8.6 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C) con reactivo de FolinCiocalteau
Se determin la presencia de cido ascrbico mediante el reactivo de FolinCiocalteau segn Gonzlez y Pealosa (2000), utilizando 1g de muestra slida en
1mL de cido tricloractico para la

homogenizacin de las muestras.

Posteriormente se disolvieron 0.2 mL de las aguas y del homogenado de flor y

pistilo en 0.8mL de cido tricloractico. Gonzlez y Pealosa (2000),
Pero debido a que no hubo reaccin (coloracin) entre las muestras y el
reactivo, se determin que no haba presencia de Vitamina C en nuestras
muestras (Apndice 10).
8.7 Evaluacin de la actividad microbiana
Microorganismos utilizados
Para determinar evaluar la actividad antimicrobiana, se utilizaron las
siguientes cepas:

Staphylococcus aureus y Salmonella typhi, (Apndice 12) aislamientos donados

por el Laboratorio de Farmacognosia de la UBIPRO de la FES-Iztacala.
Evaluacin de la actividad antibacteriana por el mtodo de difusin en agar
Kirby-Baer
La actividad antibacteriana se evalu de acuerdo al mtodo de difusin en
agar Kirby-Baer (Koneman, 1985) (Apndice 11), utilizando como control positivo
sensidiscos impregnados con 25 g de Cloranfenicol. Se utilizaron 2 mg de todos
los extractos obtenidos previamente. Como control negativo, se utilizaron
sensidiscos con 10 L de metanol, solvente empleado para obtener los extractos.
Cada bioensayo se hizo por triplicado.
8.8 Determinacin cualitativa de alcaloides utilizando el reactivo de
Dragendorff.
Se determinaron cualitativamente los alcaloides presentes en los extractos
obtenidos utilizando 2 gotas del reactivo de Dragendorff, esperando ver la
formacin del precipitado naranja-rojizo segn los principios de la tcnica.
(Wagner, 2001) (Apndice 13).
8.9 Determinacin cualitativa de fenoles utilizando cloruro frrico.
La presencia de fenoles en los extractos obtenidos se determin utilizando
llevando a cabo una reaccin de xido-reduccin utilizando cloruro frrico,
esperando ver una coloracin verdosa distintiva de la reaccin entre los fenoles
presuntamente presentes y el reactivo mencionado. qu reaccin ven aqu???
(Apndice 14).
8.10 Determinacin cualitativa de flavonoides utilizando cloruro de aluminio.
La presencia de flavonoides en los extractos obtenidos se determin
utilizando cloruro de aluminio (reaccin oxido-reduccin), hasta obtener un cambio
de coloracin naranja (Apndice 15).

9. RESULTADOS
9.1 Rendimiento de los extractos
En el cuadro 2 se muestra el rendimiento en porcentaje de los extractos:
Extracto

Rendimiento (%)

3.1

0.5

3.2

0.46

4.1

31.24

4.2

28.66

5.1

0.83

5.2

0.5

6.1

13.16

6.2

18.61

Cuadro 2. Rendimiento de los extractos metanlicos obtenidos

Los mayores rendimientos se obtuvieron de las flores frescas de ambas zonas;
seguidos por los pistilos frescos. El rendimiento para los extractos de flores y
pistilos hervidos fue inferior al 1%.
9.2 Cuantificacin de protenas
Se encontraron protenas en las flores frescas, hervidas y en las aguas donde se
hirvieron de ambas regiones; el porcentaje de rendimiento fue inferior al 1%;
siendo la flor hervida de la FES Iztacala la que mayor porcentaje de protenas
solubles conobtuvo 0.028%. . PONER EL VALOR
Para ambas zonas; la flor tras ser hervida presenta un mayor rendimiento de
protenas en comparacin con las flores frescas.
La figura 1 muestra el rendimiento de protenas solubles en porcentaje:

10

% de Protenas
0.03
0.03
0.02

% de Protenas

0.02
0.01
0.01
0
FFAZ

FHAZ

AFAZ

FFFES FHFES AFFES

Figura 1. Rendimiento en porcentaje de protenas de flores de Erythrina

americana frescas y hervidas y las aguas.
9.3 Cuantificacin de carbohidratos
En todas las muestras se determin la presencia y concentracin de
azcares reductores, el rendimiento de carbohidratos obtenido se observa en el
cuadro 3:
Cuadro 3. Rendimiento de Carbohidratos.
Muestra
FFES
FHFES
PFES
PHFES
FAZ
FHAZ
PAZ
PHAZ
AFFES
APFES
AFAZ
APAZ

% de CHO
0.423
0.756
0.090
0.244
0.821
0.256
0.186
0.135
0.003
0.004
0.005
0.006

Se observa que el porcentaje de hidratos de carbono en todas las muestras es

inferior al 1%.

11

Figura. Grfico de barras del porcentaje de CHO

% de CHO
0.900
0.800
0.700
0.600
0.500

% de CHO

0.400
0.300
0.200
0.100
-

Figura 2. Rendimiento en porcentaje de carbohidratos de las flores hervidas y

frescas, y aguas, de ambas zonas.
En la figura 2 se observa que fueron la flor hervida de la FES Iztacala y la flor
fresca de Agua Zarca las que mayor rendimiento de carbohidratos mostraron
(0.7% y 0.8% respectivamente); de la grfica de barras se puede notar tambin
que tanto las flores como pistilos de la FES Iztacala, despus de ser hervidos
tienden a incrementar la concentracin de azucares reductores; mientras que los
de Agua Zarca tienen a disminuir dicha concentracin tras ser hervidos. Las aguas
donde se hirvieron las muestras presentan una concentracin de carbohidratos
mnima.
9.4 Cuantificacin de lpidos
A continuacin se muestra el porcentaje de lpidos presente en las muestras
analizadas:

12

% de Lpidos
6
5
4

3
2
1
0
FFAZ

FHAZ

FFFES

FHFES

Figura 3. Grfica de barras del contenido de lpidos de flores frescas y hervidas de

ambas zonas.
Fueron ambas muestras de flores de la FES Iztacala las que mayor porcentaje de
lpidos mostraron (4.4% para flor hervida y 5.4% para flor fresca), en comparacin
con las flores de Agua Zarca. En ambas zonas existe una disminucin en lpidos
tras hervir las muestras, esto se observa en la figura 3.
9.5 Cuantificacin de cido ascrbico (Vitamina C)
Ninguna de las muestras dio el color azulado propio de la reaccin entre el
cido ascrbico y el reactivo de Folin-Ciocalteau.
9.6 Evaluacin de la actividad antibacteriana
Todas las muestras empleadas presentaron actividad antibacteriana frente a las
sepas de Salmonella typhi y Staphylococcus aureus.
A todos los datos se les realiz ANOVA de dos factores (Apndice), el cual no
arroj diferencias estadsticamente significativas (P 0.05) entre las muestras
empleadas, ni tampoco en la interaccin con la zona de su procedencia.
El promedio general del halo de inhibicin para la S. aureus fue de 6.110.32 mm;
mientras para S. typhi fue de 6.220.51mm.

13

Se emple metanol como control negativo, el cual no mostr actividad para

ninguna de las sepas.
El cuadro 4 y la figura 4 muestran la media de los halos de inhibicin la
desviacin estndar.
Cuadro 4x.: Actividad antibacteriana del extracto metanlico de todos los
extractos frente a Salmonella typhi y Staphylococcus aureus.
Staphylococcus
aureus
Halos de inhibicin

Salmonella typhi
Halos de inhibicin

Muestra
(mm)
(mm)
1.1
6.170.29
6.000.50
1.2
6.330.58
6.170.29
2.1
5.830.29
6.000.00
2.2
6.170.29
6.6700.58
3.1
6.000.00
6.000.00
3.2
6.000.00
6.831.04
4.1
6.330.58
7.000.00
4.2
6.000.00
6.330.29
5.1
6.330.58
6.000.00
5.2
6.000.00
6.000.00
6.1
6.170.29
5.830.29
6.2
6.000.00
5.830.29
C+
27.002.00
21.331.15
MeOH
0.000.00
0.000.00
Halos de inhibicin en mm; valor promedio de 3
repeticiones;

el

extracto

probado

fue

con

una

concentracin de 2 L/10L por sensidisco. Todas las

especies bacterianas mostradas fueron sensibles al
cloranfenicol (25 g/disco).

14

30.00
25.00
20.00
Halo de inhibicin (mm).

15.00
10.00
5.00
0.00
Muestra

Staphylococcus aureus

Salmonella typhi

Figura 4. Dimetros de los halos de inhibicin de la prueba de Kirby-Baer

(SD)
9.7 Determinacin cualitativa de alcaloides
Se encontr la presencia de alcaloides en todas las muestras tratadas (Cuadro 5),
aunque existi diferencia en cuanto a la concentracin del color de las mismas,
siendo las de mayor concentracin las aguas donde fueron hervidos tanto las
flores como los pistilos de ambas zonas; mientras los extractos de flor de Agua
Zarca y pistilo de la FES presentaron nicamente pocos alcaloides, el resto de las
muestras se determin su una concentracin abundante de estos metabolitos.
Cuadro 5. Determinacin de alcaloides con reactivo de Dragendorff.
Alcaloide
Muestra
1.1
1.2
2.1
2.2
3.1
3.2
4.1
4.2
5.1

s
+++
+++
+++
+++
++
++
+
++
++

15

5.2 ++
6.1 ++
6.2 +
Criterios: +++ (muy abundantes), ++ (abundantes), + (poco abundantes).
9.8 Determinacin cualitativa de fenoles
El cambio de coloracin que indica la presencia de fenoles se dio en casi todas las
muestras (Cuadro 6), a excepcin de los extractos de las flores hervidas de ambas
regiones (3.1 y 3.2); as como tambin la coloracin fue menor para los extractos
de pistilo hervido de la FES y pistilo fresco de Agua Zarca (5.2 y 6.1).
Cuadro 6. Presencia de fenoles por reaccin con FeCl 3
Muestra Fenoles
1.1
++
1.2
++
2.1
++
2.2
++
3.1
3.2
4.1
+
4.2
++
5.1
++
5.2
+
6.1
+
6.2
++
Criterios: ++ (muy abundantes), + (abundantes), - (sin presencia).
9.9 Determinacin cualitativa de flavonoides
No se determin la presencia de flavonoides para ninguno de los extractos
obtenidos.
10. DISCUSIN
Una revisin general de la especie Erythrina americana la describe como una
planta valiosa y verstil por su alto contenido proteico y su uso potencial en el
mbito farmacolgico, por la presencia de alcaloides en la planta. Tambin se ha
sugerido como sedante, pues se ha reportado presencia de alcaloides en la
infusin de la flor (Garca-Mateos, 2001).

16

En ambas zonas se detect que al hervir las muestras hubo un incremento de

protenas solubles, esto puede deberse a un rompimiento de enlaces no
covalentes que unen a las protenas de estructura cuaternaria; quedando libres
sus subunidades (Lehninger, 1985) De esta protena se reporta un alto contenido
de Lisina, Triptfano y Tripsina (Sotelo, 2007).
Estudios previos reportan un porcentaje de 4.5% de protena tanto en flor de
Colorn cocida como en cruda. (Prez y cols. 2008); mientras que en una
comparacin de flores comestibles de Mxico se reporta que hay un contenido de
protena cruda en muestras deshidratadas de flor de E. americana de 2625 g/kg
utilizando los mtodos estndar de la AOAC,es decir, utilizando el mtodo de
Khjendal (Sotelo, 2007). En el presente trabajo se obtuvo un mayor porcentaje de
protena soluble en la flor hervida de la FES Iztacala (0.028%), las diferencias
entre estas cantidades puede deberse al tipo de protena cuantificados en los
distintos trabajos y a los mtodos empleados para su extraccin y cuantificacin.
La mayor concentracin de azucares reductores en muestras hervidas de Agua
Zarca (0.8%) y flor fresca de la FES Iztacala (0.7%); previamente se ha reportado
un porcentaje del 10% de carbohidratos (Prez y cols., 2008), la diferencia de
estos porcentajes puede deberse a que en la tcnica empleada en el presente
trabajo (Nelson-Somogy) no cuantifica carbohidratos totales.
A partir del anlisis de lpidos podemos observar que las flores de la zona de la
FES Iztacala tienen la mayor concentracin de stos (5.4 % para flor hervida y
4.4% para flor fresca), mientras el trabajo de Prez y cols. (2008) reporta un
0.25% de lpidos en muestras frescas y hervidas. Esto se pudo deber a que se
desconoce la tcnica utilizada en el trabajo anteriormente citado o, que en el
presente trabajo se extrajeron lpidos totales y probablemente en el otro trabajo
solo hayan cuantificado lpidos digeribles.
En cuanto a la cuantificacin de vitamina C, no hubo presencia de sta. Lo que se
pudo deber a que las flores fueron almacenadas en congelador por gran tiempo,
se descongelaban y congelaban constantemente lo que pudo haber provocado la

17

oxidacin de la vitamina. La bibliografa s reporta vitamina C, una cantidad de

14.8mg en 40 gramos de flor tanto hervida como cruda (Prez y cols. 2008)
La prueba cualitativa de fenoles, dio una coloracin azul para todas las muestras
excepto para las flores hervidas; esto se puede deber a que los fenoles presentes
en las flores son de naturaleza polar y se disuelven en el agua tras ser hervidos,
se ha reportado un bajo nivel de fenoles en E. indica (Pugalenthi y cols., 2004).
No se encontraron flavonoides en las flores de E. americana, aunque si se han
logrado identificar flavoniodes de la corteza de E. poeppigiana (Sato, 2006).
En el anlisis cualitativo de alcaloides todas las muestras dieron positivo en la
presencias de alcaloides solo que en diferentes concentraciones. Las muestras de
las aguas de ambas zonas, se observ un color rojo ladrillo ms oscuro en
comparacin con las dems muestras, lo que lleva a inferir que una cantidad
considerable de alcaloides se concentra en el agua al momento de hervir las
flores, es por esto que, a pesar de que dichos alcaloides de E. americana son
muy conocidos y estudiados por su toxicidad (Sotelo, 2007), la gente no presenta
sntomas de intoxicacin.
De acuerdo a los resultados de actividad antimicrobiana se determin sensibilidad
de bacterias tanto Gram positivas, como Gram negativas, ante los extractos
empleados; dicha actividad se puede atribuir a los fenoles y alcaloides presentes
en flores y pistilos. Ambos grupos se han reportado como componentes
antimicrobianos en plantas; el primero de ellos se considera acta contra los
microorganismos mediante inhibicin enzimtica, donde los grupos sulfhdrilos de
aminocidos o bien reacciones ms inespecficas con protenas de las bacterias
(Araujo y Salas, 2008).
A diferencia de los fenoles, los alcaloides s fueron identificados en todas las
muestras. Snchez- Herrera y cols. Determinaron la presencia de los siguientes
alcaloides en inflorescencias de E. americana: -eritroidina, -eritroidina, 8-oxo-eritroidina, eritrinina, eritralina, cristamidina y erisodina; por su parte, Pinzn y cols.
lograron identificar el alcaloide (+)-8-oxoerisodina en flores de E. fusca Loureiro,

18

dicho alcaloide present actividad sobre cepas de K. pneumoniae, B. subtilis, S.

typhymurium y S. aureus. (Calle et. al., 1997). La (+)-8-oxoerisodina resulta de
agregar un grupo cetona (oxo) en el carbono 8 de la erisodina; ste alcaloide
puede ser el principal componente activo en la inhibicin del crecimiento de S.
aureus y S. typhi.
11. CONCLUSIONES

La flor de E. americana se puede considerar como un alimento

nutracetico.
Si contiene protenas, carbohidratos y lpidos.
Si mostro actividad antibacteriana.
Presenta metabolitos secundarios como fenoles y alcaloides.
Se confirma que la toxicidad se pierde al hervir la flor, puesto que los
alcaloides se concentran en el agua.

12. PERSPECTIVAS
Es importante continuar el estudio de la flor de E. americana debido a que no hay
mucha informacin sobre sus propiedades nutrimentales, ya que se consume
frecuentemente a lo largo de la Repblica Mexicana, por lo que se propone
realizar los siguientes estudios:
1. Continuar con estudios nutrimentales considerando la biodisponibilidad de
las biomolculas encontradas.
2. Determinar nutrimentos inorgnicos sin previo congelamiento.
3. Trabajar tanto con la semilla como con la vaina.
4. Evaluar la actividad antibacteriana con mayores concentraciones y otros
organismos.
5. Extraccin de metabolitos secundarios a los cuales se les pueda atribuir la
actividad antibacteriana y as determinar el principio activo.
14. APNDICES
Apndice 1
Erythrina americana
Erythrina americana conocido por muchos nombres comunes como, colorn,

19

pemoche, zompantle, entre otros; es un rbol que alcanza aproximadamente los 9

m de altura, con ramas provistas de espinas. Sus flores son muy caractersticas,
de color rojo intenso y con forma de vaina, organizadas en forma de racimo. Las
hojas son amplias y con forma de rombo redondeado, con un color verde opaco.
El fruto se da en vainas, son semillas rojas y brillantes, con forma de frijol. El rbol,
las flores y los frutos se muestran en la figura 1.
Se distribuye por el altiplano central mexicano y la costa del Golfo de Mxico,
principalmente Hidalgo, Estado de Mxico, Distrito Federal, Puebla, Oaxaca y
Guerrero (FAO, 1986).
Tradicionalmente, las flores se consumen principalmente hervidas, acompaadas
con huevo o en ensaladas; mientras que las semillas y otras partes de la planta
como, la corteza y las hojas, son evitadas por ser txicas, ya que contienen
alcaloides que provocan parlisis respiratoria (Fraile et al., 2008)

Figura 5. El rbol, la flor y el fruto de Erythrina americana vistos a detalle

Apndice 2
Zonas de colecta 1
Zona 1
Agua Zarca.

20

Agua Zarca Quertaro. Municipio: Landa de Matamoros

Localizado en una altura de 1380 metros y 1264 habitantes.
La longitud: -99.095000
Latitud: 21.218611
Clima
El municipio cuenta con una gran variedad de climas debido a lo
accidentado de sus suelos, desde el fro de sus bosques hasta el sofocante calor,
caracterstico de las zonas tropicales. La temperatura media anual es de 22C y
en el mes de mayo llega hasta los 43C. En el mes de enero se presentan
temperaturas de -2C. La precipitacin pluvial anual promedio es de 920 mm3, con
variaciones en los ltimos aos. La direccin de los vientos predominantes es de
Noroeste a Sureste. En la parte baja existe clima seco y subhmedo en las partes
medias.
Flora
El municipio es rico en flora y fauna. La variedad depende de la zona en
que nos situemos pues es variable su geografa. Dentro de la principal flora
silvestre tenemos el pino, cedro rojo, cedro blanco, capuln, palo de rosa,
granjeno, cactus, mora y frijolillo. Los principales frutos cultivados principalmente
son naranja, durazno, papaya, limn, aguacate, toronja, lima, zapote, caa de
azcar, ciruela, manzana, mango y caf.
Fauna
La fauna de igual manera es muy variable y en forma silvestre existen
especies como tigrillo, coyote, zorra, armadillo, tejn, gato monts, conejo,
tlacuache, vbora, venado, correcaminos, trtola, jilguero, gorrin y guacamaya,
as como mariposas de diferentes clases. La fauna domstica comprende
caballos, mulas, vacas, burros, borregos, cabras, cerdos, aves de corral y abejas.

21

Figura 6. Ubicacin geogrfica de Agua Zarca Qro.

Zona de colecta 2
Tlalnepantla
Facultad de Estudios superiores Iztacala (Estado de Mxico)
Municipio: Tlalnepantla de Baz
Latitud 19 30 longitud 99 12 (INEGI)
Coordenadas geogrficas extremas:
Norte: 19 35 40 de latitud norte.
Sur: 19 30 07 de latitud norte.
Oriente: 99 05 00 de longitud oeste.
Poniente: 99 15 22 de longitud oeste.
Clima
El clima predominante en el 82.67% del territorio municipal es templado
subhmedo con lluvias en verano, de menor humedad C (w0), mientras en el
17.33% restantes se presenta un clima templado subhmedo con lluvias en
verano, de humedad media C (w1). En condiciones normales, las variantes
climticas de esta regin son: semisco (invierno y primavera) y semifro, sin
estacin invernal definida. La estacin seca comprende los meses de diciembre a
abril. El municipio tiene una temperatura media mnima de 10.3 C y una
temperatura media mxima de 27.30 C. La temperatura media anual es de

22

15.5C.
Precipitacin
La precipitacin pluvial anual es de 733.9 mm; en los meses de junio, julio,
agosto y septiembre se concentra hasta el
80% del total anual de dicha precipitacin.
Flora
El 14.91% del territorio municipal est formado por suelo destinado a la
agricultura temporal, pastizal inducido y matorral crasicaule; an se observan
especies como maz, frijol, navajita, zacatn, cazahuate, copal, nopal, ua de
gato, huizache y biznaga.
Geologa
En el territorio municipal se encuentran dos unidades geomorfolgicas: la
Sierra de Guadalupe (con una altitud de 2,250 a los 2,650 m.s.n.m) y la planicie
(con una altitud promedio de 2,250 m.s.n.m.). El tipo de suelo predominante en la
zona plana es regosol, acompaado de litosoles y de afloramiento de rocas de
tepetate, mientras que en la Sierra de Guadalupe el suelo es de tipo feozem
hplico, con una capa superficial oscura, suave, rica en materia orgnica y
en nutrientes; aunque se erosiona con facilidad.

Figur

23

a 7. Ubicacin geogrfica de la Facultad de Estudios Superiores Iztacala.

Apndice 3
Pre tratamiento de las muestras
A las flores colectadas se les fue retirado el pistilo. Flor y pistilo fueron
separados en dos porciones, una para mantenerse fresca y otra para ser hervida
en agua. El agua que se recuper del proceso de hervir la flor, y el agua
recuperada de hervir pistilo, tambin fueron utilizadas.
La designacin de las muestras fue la siguiente.
Clave

Agua de flores
Agua de pistilos
Flor hervida
Flor fresca
Pistilo hervido
Pistilo fresco
Cuadro X.

1
2
3
4
5
6

Muestra
Agua Zarca

FES Iztacala

(AZ)
1.1
2.1
3.1
4.1
5.1
6.1

(FES)
1.2
2.2
3.2
4.2
5.2
6.2

Apndice 4
Obtencin del extracto metanlico
Se tomaron todos los tratamientos de la flor y se agreg un solvente con
polaridad alta, en ste caso se utiliz metanol. Una vez obtenido el extracto, se
destil el exceso de solvente con destilacin simple. El extracto obtenido se coloc
en platos de vidrio para completar la evaporacin del solvente, finalmente de
calcul el rendimiento total por diferencia de peso (Domnguez, 1973).
Apndice 5
Extraccin de protenas

24

Se suspendi 1 g de muestra vegetal en 2 mL de una mezcla de metanolcloroformo-agua (12:5:3) en un bao de hielo. Despus de

homogenizar se

realiz una centrifugacin a 5000 rpm. El sobrenadante fue colectado, mientras se

realizaba una re extraccin con 2 mL ms de la mezcla de MCA y con una
posterior centrifugacin. Se colect el sobrenadante con el primero, y a este
extracto se le agreg 1 mL de cloroformo y 1.5 mL de agua destilada, para
posteriormente retirar la fase clorofrmica y utilizar el extracto MCA.
Apndice 6
Cuantificacin de protenas por Mtodo de Bradford.
(Gonzlez y Pealosa, 2000)
Para cuantificar las protenas presentes se pipetea en un tubo de ensayo
0.1mL de la solucin de protena con 10-100 g, agregar 0.9 mL de agua para
completar el volumen a 1 mL.

Se aaden 5 mL de reactivo de Bradford y se mezcla por inversin o

Vortex.
Se mide la absorbancia a 595 nm despus de 2 minutos o antes de una
hora. El banco de reactivo deber contener 1 mL del amortiguador

adecuado o agua, adems 5 mL de reactivo de Bradford.

Se calcula la concentracin por interpolacin en curva patrn. El
procedimiento simultneo para la curva patrn y el problema se ilustra en el
cuadro siguiente:
Sustancia
1
Patrn de protenas (mL) 0
(BSA 100 g/mL)
Agua
destilada
amortiguador
Solucin

2
3
4
5
6
0.2 0.4 0.6 0.8 1.

7
--

0
o 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 --

--

problema --

--

--

--

--

--

1.0

(contenido 10-100 g de
protena)
Cuadro 4. Preparacin de cada tubo para la metodologa de Bradford
5.- Mezclar bien cada tubo, leer a 595 nm.

25

Apndice 7
Extraccin de carbohidratos
Para muestras slidas: Se pesan 0.1g de la pulpa del fruto y se le agregan
2ml de etanol fro al 80%. Se enfra en un bao de hielo por 15 minutos para
precipitar protenas. Se centrifuga a 10000 rpm por 15 minutos, se decanta el
sobrenadante y se evapora en vaco a sequedad. Reconstituir el sobrenadante en
5 ml de agua destilada
Para muestras lquidas: Tomar 0.1mL de la muestra y se le agregan 2ml de
etanol fro al 80%. Se enfra en un bao de hielo por 15 minutos para precipitar
protenas. Se centrifuga a 10000 rpm por 15 minutos, se decanta el sobrenadante
y se evapora en vaco a sequedad. Reconstituir el sobrenadante en 5 ml de agua
destilada (Gonzlez y Pealosa, 2000).

Apndice 8
Cuantificacin de Carbohidratos por el Mtodo de Nelson-Somogy
(Gonzlez y Pealosa, 2000).
Se hace reaccionar un azcar reductora (como glucosa) se forma xido
cuproso de color rojo, debido a la donacin de electrones del reductor al oxidante
(el in Cu2+ se transforma en in Cu+). Ya que el xido cuproso precipitado
insoluble no puede valorarse fotomtricamente, por lo que se trata con reactivo de
arsenomolibdato para transformarse a un in verdoso que se mide en el
fotocolormetro.

26

Al estar los reactivos en exceso el agente reductor es el factor limitante; por lo cual
se puede usar para determinar la cantidad de

Cu 2 O

que es proporcional a la

cantidad de glucosa originalmente presente. La sensibilidad es de 25 a 250g/mL.

1. Se construye la siguiente serie de tubos:
1
2
Patrn de glucosa (mL)
-0.25
Agua destilada (mL)
1.0
0.75
Problema (mL)
--Reactivo de cobre (mL)
1.0
1.0
Cuadro 5. Preparacin de cada tubo para

3
4
5
6
0.50 0.75 1.0
-0.50 0.25 -----1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
la metodologa de Nelson-

Somogy
2. Se tapan los tubos con papel aluminio y se colocan en bao mara hirviente
por 20 minutos, enfriar con agua corriente.
3. Se agrega a cada tubo 1mL del reactivo de arsenomolibdato.
4. Agregar a cada tubo 7.5mL de agua destilada.
5. Mezclar por inversin cada tubo y leer en el fotocolormetro a 565nm
utilizando el tubo 1 como blanco.
6. Se construye una curva patrn y se interpola la absorbancia de los tubos
problema.
Patrn de glucosa (200 g/mL).
Disolver 600g de glucosa en 3mL de agua destilada.
Reactivo de Cobre
400mL de agua destilada + 40g de carbonato de sodio anhidro y disolver.
Agregar 7.5g de cido tartrico y disolver otra vez. Enfriar si es necesario. Agregar

4.5g de sulfato de cobre

CuSO
( 4 5 H 2 O)

y disolver. Aforar a 1L y envasar en frasco

mbar. Dejar madurar por 2 semanas.

Reactivo de Arsenomolibdato
Disolver 50gr. de molibdato de amonio en 900 mL de agua destilada,
agregar 42mL de

H 2 S O4

concentrado lentamente y aadir 50 mL de solucin

27

de ortoarseniato disdico al 12% (

NaHAsO 4

. Mezclar bien e incubar a 37C

durante 24 a 48 horas. Envasar en frasco mbar.

Apndice 9
Extraccin de grasas por mtodo de Soxhlet.
(Gonzlez y Pealosa, 2000)
La extraccin se hace utilizando el aparato Soxhlet, un cartucho armado de
papel filtro previamente pesado a masa constante, balanza analtica, ter etlico,
hexano y tricloroetano.
Muestras secas de 4 g se colocan dentro del cartucho que posteriormente se
colocar dentro del extractor cuyo matraz se ha puesto previamente a masa
constante. Se aade suficiente disolvente sobre la muestra hasta que haga sifn
dos veces. El cartucho se retira y se pone a secar a 80-90 C hasta masa
constante.
La diferencia en masa del cartucho antes y despus de la extraccin, corresponde
a la masa total de lpidos totales extrados por el disolvente.
El porcentaje de masa total se realiza mediante la siguiente frmula:
Lipidos (gr)= Peso inicial- Peso final

Apndice 10
Determinacin de cido ascrbico (Vitamina C) con reactivo de FolinCiocalteau (Gonzlez y Pealosa, 2006).

28

El cido ascrbico interacciona con el reactivo de Folin-Ciocalteau

produciendo color con una absorbancia mxima a 760 nm. La tcnica obedece la
ley de Lambert y Beer hasta una concentracin de 45 g de cido ascrbico. El
color es estable hasta por 18 horas.
Procedimiento
Se agregan 0.8 mL de cido tricloractico al 10% a 0.2 mL de muestra
lquida o 0.2mL de homogenizado de muestra slida. Agitar vigorosamente los
tubos y colocarlos en bao de hielo por 5 minutos. Centrifugar a 3000 rpm 5 min.
Decantar el sobrenadante.
Utilizar alcuotas de 0.2-0.5 de sobrenadante para la estimacin del cido
ascrbico. Diluir a 2mL con agua bidestilada y agregar 0.2mL de reactivo de FolinCiocalteau comercial ya diluido 10 veces y agitar vigorosamente.
Dejar reposar 10 min y leer la absorbancia a 760 nm.
Prepara la curva patrn pipeteando de 0.5 a 0.7 ml de la solucin de cido
ascrbico stock a 5-70 mg de cido ascrbico en agua, ajustar volmenes,
agregar los reactivos y procesar con el procedimiento descrito.
Apndice 11
Actividad antimicrobiana del extracto metanlico: Mtodo de difusin en
agar de Kirby-Baer (Koneman, 1985)
Este mtodo se utilizar para evaluar cualitativamente la actividad
antibacteriana del extracto metanlico y del agua en que la flor fue hervida, con S.
typhi y S. aureus.
Medio
Se utilizar como medio de cultivo estndar el agar Mller-Hinton. Es
importante que el medio alcance en la placa un espesor de 4mm. Si es ms fino,
los antibiticos tienden a difundir ms en direccin lateral aumentando el tamao
de las zonas de inhibicin, un agar de ms de 4mm de espesor produce una
mayor disolucin del antibitico hacia abajo, con tendencia a estrechar
artificialmente las zonas de inhibicin.
Inculo

29

Con un asa de siembra se tocan las superficies convexas de 4 o 5 colonias

de apariencia semejante del microorganismo a ensayar. Se sumerge el asa en 10
mL de caldo de Mller-Hinton, se enjuaga bien el lquido para descargar todo
material y luego se retira el asa, incubar el tubo de cultivo a 37C durante
aproximadamente 18 a 24 horas, o hasta que la turbidez del medio sea
equivalente al estndar N 0.5 de McFarland. Esto equivale a una concentracin
de aproximadamente 1.5x10-8 UFC/mL.
Una vez logrado esto, se sumergir un hisopo de polister, estril y seco en la
suspensin de levadura, antes de retirarlos se elimina el exceso de lquido
haciendo rotar el hisopo contra la pared interna del tubo. Con este hisopo de
inocula la superficie de una placa de agar de Mller-Hinton. Previamente se deja
que la placa alcance temperatura ambiente; es aconsejable mantener la tapa
entreabierta para permitir la evaporacin de cualquier exceso de humedad de la
superficie de agar. Finalmente, se siembra mediante estra en por lo menos tres
direcciones, dando vueltas a la placa en ngulos de aproximadamente 60 luego
de cada estra.
Aplicacin de sustancias
Se utilizarn sensidiscos de 5 mm de dimetro hechos de papel Whatman
del N5. Se utilizarn 2 mg de extracto en 10 L del solvente empleado.
Los discos se colocarn en la superficie del agar manualmente utilizando una
pinza estril.
Control Negativo
Sensidiscos con 10 L del solvente empleado para disolver el problema, se
dejarn evaporar durante 12 horas.
Control positivo
Se evaluar la sensibilidad de las cepas experimentales con sensidiscos
con 25 g de cloranfenicol.
Interpretacin de resultados.
En caso de presentar zonas de inhibicin se reportara la sustancia como activa.
Apndice 12

30

Caractersticas generales de Staphylococcus aureus y Salmonella typhi.

Staphylococcus aureus
Fue Sir Alexander Ogston quien mediante la expresin griega staphyle

(racimo de uvas) designo el nombre de estafilococos. Los estafilococos son cocos

Gram positivos que miden cerca de 1 m de dimetro, no mviles, aerobios
facultativos y fermentadores de glucosa. El gnero Staphylococcus contiene ms
de 30 especies diferentes, y muchas de stas son habitantes naturales de la piel y
las membranas mucosas.
Los estafilococos crecen en medios que contengan glucosa, sales, aminocidos,
tiamina y cido nicotnico. En medios suplementados, los estafilococos crecen
bien en rangos de pH de 4.8 a 9.4 y a temperaturas de 25 a 43 C. El color
amarillo clsico de las colonias de S. aureus se debe a la produccin de
carotenoides.
La elevada virulencia de S. aureus fue notificada por primera vez en un estudio
publicado en 1941, en donde se identific 82% de mortalidad asociada a pacientes
con bacteriemias ocasionadas por este microorganismo en un hospital de la
ciudad de Boston.
Esta bacteria es capaz de causar infecciones menores de la piel e infecciones
invasoras serias como: bacteriemia, infecciones del sistema nervioso central,
osteomielitis, infecciones del tracto respiratorio, infecciones del tracto urinario y
sndrome de choque txico.
En Estados Unidos de Amrica (EUA), S. aureus ocupa el segundo lugar despus
de los estafilococos coagulasa negativa como causa de bacteriemia adquirida en
el hospital y es una causa letal y potencial en las infecciones. En Mxico, la Red
Hospitalaria de Vigilancia Epidemiolgica (RHOVE) notific que los porcentajes de
mortalidad entre pacientes infectados con S. aureus varan entre 5 y 70%.
La introduccin de la penicilina a principios de los aos 40 como tratamiento en las
infecciones causadas por S. aureus abati de manera importante las infecciones

31

ocasionadas por este microorganismo. Sin embargo, para 1946, en Inglaterra se

observ que aproximadamente 60% de los aislamientos de estafilococos fueron S.
choleraesuis resistentes a penicilina, y para mediados de 1950, los aislamientos
de S. aureus mostraron niveles ms elevados de resistencia.
La meticilina es un derivado semisinttico de la penicilina. Esta droga fue
introducida en Europa en 1959, y un ao despus se detect la primera cepa de
S. aureus meticilinorresistente.
El elemento central de la resistencia a meticilina en S. aureus es la adquisicin del
gen mecA, el cual no es endgeno de esta bacteria y est integrado en el
cromosoma.

Salmonella.
Son bacilos gramnegativos con las caractersticas propias de las

enterobacterias. Son mviles en su mayora, y no fermentan lactosa.

Actualmente el gnero Salmonella est dividido en 2 especies, con numerosos
serotipos. Las dos especies son S. choleraesuis (S. enterica) y S. bongori. En la
especie se encuentran todas los salmonellas patgenas para el hombre.
Un gran nmero de serotipos tienen su hbitat en el sistema digestivo de aves y
mamferos, que al alcanzar al hombre le causan enteritis, por ello se les denomina
serotipos gastroentricos. Otros como S. typhi y paratyphi estn estrictamente
adaptados al hombre y producen las fiebres tifoparatficas.
1) Gastroenteritis: el modo habitual de infeccin es a travs de alimentos
contaminados, como huevos o carne. Se requiere una dosis infectiva elevada.
Tras la ingestin y un periodo de incubacin de 8-48 horas se inicia un cuadro
clnico con nauseas, vmitos, dolor abdominal, febrcula y diarrea. El diagnstico
microbiolgico se realiza mediante coprocultivo en medios de enriquecimiento y
selectivos. En los casos no complicados evoluciona a la curacin espontnea. Si
se requiere tratamiento (inmunosupresin, edades extremas o material protsico
intravascular) se administrarn quinolinas o amoxicilina.

32

2) Infecciones tifoparatficas: la fiebre tifoidea es producida por S. typhi y las

fiebres paratficas por las Salmonella paratyphi A, B o C; los cuadros clnicos de
ambas son similares aunque menos severos y con menos complicaciones en el
caso de las paratficas. Tras un periodo de incubacin variable, aparece un cuadro
grave caracterizado por fiebre muy alta en meseta (40C), con cefalalgia intensa,
estupor y esplenomegalia: pueden aparecer complicaciones como hemorragias o
perforaciones intestinales.
El tratamiento se puede realizar con quinolinas, cefalosporinas de 3 generacin o
cloranfenicol. Se recomienda la profilaxis mediante vacunas en viajes a zonas
endmicas.
Apndice 13
ANOVA de dos factores Actividad Antimicrobiana.

Staphylococcus Aureus.

En el diseo experimental elaborado se buscaron diferencias significativas entre

los tratamientos (Factor B) (aguas de flores, y extractos metanlicos de flores y
pistilos frescos y hervidos de ambas zonas); as como tambin se quiso
determinar si la zona (Factor A) tendra influencia en la actividad antimicrobiana. A
continuacin se muestra el cuadro de trabajo elaborado en el cual se indican las
sumas de los datos, sus medias y su desviacin estndar:
Total
por
1
2
3
4
5
6
rengln
Y1.1=18.5 Y2.1=17.5 Y3.1=18.0 Y4.1=19.0 Y5.1=19.0 Y6.1=18.5 Y=110.5
AZ

FES

0
0
0
0
0
0
1.1=6.17 2.1=5.83 3.1=6.00 4.1=6.33 5.1=6.33 6.1=6.17

0
=6.14

S1.1=0.29 S2.1=0.29 S3.1=0.00 S4.1=0.58 S5.1=0.58 S6.1=0.29 S=0.38

Y1.2=19.0 Y2.2=18.5 Y3.2=18.0 Y4.2=18.0 Y5.2=18.0 Y6.2=18.0 Y=109.5
0
0
0
0
0
0
1.2=6.33 2.2=6.17 =3.26.00 4.2=6.00 5.2=6.00 6.2=6.00

0
=6.08

33

S1.2=0.58 S2.2=0.29 S=03.2.00 S4.2=0.00 S5.2=0.00 S6.2=0.00

Total por

Y=37.50

Y=36.00

Y=36.00

Y=37.00

Y=37.00

Y=36.50

=6.25

=6.00

=6.00

=6.17

=6.17

=6.08

columna

S=0.26
Y=220.0

0
S=0.42
S=0.32
S=0.00
S=0.41
S=0.41
S=0.20
El cuadro de Anova elaborado consider los niveles para el factor A=2, B=6; un
total de 3 repeticin (r=3) y un nivel de significancia = 0.05. A continuacin se
muestran las hiptesis elaboradas:
o Factor A:
Ho: 1= 2.
Ha: Una de las dos zonas genera mayor inhibicin de S.
aureus.
o Factor B:
Ho: 1= 2 =3= 4 =5= 6.
Ha: Un tratamiento genera mayor inhibicin en S. aureus.
o Interaccin AB:
Ho: No existe interaccin zona-tratamiento.
Ha: Existe interaccin zona-tratamiento.
Suma de
Fuentes de
Variacin
A
B
AB
E
T

Cuadrado
s

Grados
de
Liberta Cuadrado
d

0.0322

0.31

0.5511

2.6667
3.56

24
35

F0

Fcrit

s Medios
0.28979637
0.0322

8
0.55799302

0.062

0.11022
0.1111125

0.9919676

<

7.82

<

3.9

<

3.9

Conclusin
Rechaza
Ho
Rechaza
Ho
Rechaza
Ho

Tanto en el factor A (zona), B (tratamiento) y AB (interaccin) no se encontraron

diferencias estadsticamente significativas (P0.05, F A=0.28, FB=0.55, FAB=0.99).

Salmonella typhi.

34

En el diseo experimental elaborado se buscaron diferencias significativas entre

los tratamientos (Factor B) (aguas de flores, y extractos metanlicos de flores y
pistilos frescos y hervidos de ambas zonas); as como tambin se quiso
determinar si la zona (Factor A) tendra influencia en la actividad antimicrobiana. A
continuacin se muestra el cuadro de trabajo elaborado en el cual se indican las
sumas de los datos, sus medias y su desviacin estndar:
Total
por
1
2
3
4
5
6
rengln
Y1.1=18.0 Y2.1=18.0 Y3.1=18.0 Y4.1=21.0 Y5.1=18.0 Y6.1=17.5 Y=110.5
AZ

0
0
0
0
0
0
0
1.1=6.00 2.1=6.00 3.1=6.00 4.1=7.00 5.1=6.00 6.1=5.83 =6.14
S1.1=0.50 S2.1=0.00 S3.1=0.00 S4.1=0.00 S5.1=0.00 S6.1=0.29 S=0.45
Y1.2=18.5 Y2.2=20.0 Y3.2=20.5 Y4.2=19.0 Y5.2=18.0 Y6.2=17.5 Y=113.5

0
0
0
0
0
0
0
1.2=6.17 2.2=6.67 3.2=6.83 4.2=6.33 5.2=6.00 6.2=5.83 =6.31
S1.2=0.29 S2.2=0.58 S3.2=1.04 S4.2=0.29 S5.2=0.00 S6.2=0.29 S=0.57
Total por Y=36.50 Y=38.00 Y=38.50 Y=40.00 Y=36.00 Y=35.00 Y=224.0
=6.08 =6.33 =6.42 =6.67 =6.00 =5.83
columna S=0.38
0
S=0.52
S=0.80
S=0.41
S=0.00
S=0.26
FES

El cuadro de Anova elaborado consider los niveles para el factor A=2, B=6; un
total de 3 repeticin (r=3) y un nivel de significancia = 0.05. A continuacin se
muestran las hiptesis elaboradas:
o Factor A:
Ho: 1= 2.
Ha: Una de las dos zonas genera mayor inhibicin de S. typhi.
o Factor B:
Ho: 1= 2 =3= 4 =5= 6.
Ha: Un tratamiento genera mayor inhibicin en S. typhi.
o Interaccin AB:
Ho: No existe interaccin zona-tratamiento.
Ha: Existe interaccin zona-tratamiento.
Fuentes

Suma de

Grados

Cuadrados

de

Cuadrado

de

Medios

F0

Fcrit

Conclusi
n

35

Variacin
A
B
AB
E
T

Libertad

0.2577

2.8133

2.159

24

9.23

35

0.2577

1.5462
3.3759

0.56266
0.4318
0.1666666

6
2.5908

<

7.82

<

3.9

<

3.9

Rechaza
Ho
Rechaza
Ho
Rechaza
Ho

Tanto en el factor A (zona), B (tratamiento) y AB (interaccin) no se encontraron

diferencias estadsticamente significativas (P0.05, FA=1.54, FB=3.37, FAB=2.59).

Apndice 143
Determinacin de alcaloides por mtodo de Dragendorff.
(Wagner, 2001)
Los alcaloides son compuestos nitrogenados, estando en la mayora de los
casos el nitrgeno formando parte de un heterociclo.
Las tcnicas de reconocimiento son basadas en la capacidad que tienen los
alcaloides en estado de sal (extractos cidos), de combinarse con el yodo y
metales pesados como bismuto, mercurio, tungsteno formando precipitados; estos
ensayos preliminares se pueden realizar en el laboratorio o en el campo.
Preparacin del reactivo de Dragendorff
Se prepara mezclando 8 g de nitrato de bismuto pentahidratado en 20 mL
de cido ntrico al 30% (dens.1.18) con una solucin de 27.2 g de yoduro de
potasio en 50 mL de agua. Se deja en reposo por 24 horas, se decanta y se afora
a 100 mL. La presencia de alcaloides se detecta por la formacin de un
precipitado naranja rojizo cuando se le adiciona esta reactivo a una solucin cida

36

de alcaloides. De los precipitados lavados se puede recuperar los alcaloides con

una solucin saturada de carbonato de sodio.
Algunas sustancias oxigenadas con alta densidad electrnica como es el caso de
las cumarinas, chalconas, maltol, acetogeninas, etc. pueden dar falsos alcaloides
con el reactivo de Dragendorff.
El reactivo de Dragendorff modificado: Comprende dos soluciones: Solucin a:
0.85 g de subnitrato de bismuto disueltos en una mezcla de 10 mL de cido
actico y 40 mL de agua.
Solucin b: 8 g de yoduro de potasio disueltos en 20 mL de agua.
Se mezclan 5 mL de solucin a con 5 mL de solucin b y 20 mL de cido actico
para luego completar a 100 mL con agua.
Determinacin (Prado, 2009).
Si el extracto es acuoso, a la alcuota se le aade una gota de cido clorhdrico
concentrado. Calentar suavemente y dejar enfriar, aadir 3 gotas del reactivo, si
hay opalescencia se considera (+), turbidez definida (++), precipitado (+++) de
color rojo ladrillo.
Apndice 154
Determinacin de fenoles FeCl3 (Dey y Harborne, 1989)
Extraccin
Dado que los compuestos fenlicos y flavonoides son de naturaleza polar,
se utiliz metanol para extraerlos, removiendo inicialmente todos los dems
extractos cuyos compuestos no son de inters utilizando acetona y hexano como
disolventes. Posteriormente se concentr los extractos metanlicos en un
rotaevaporador hasta completa evaporacin del disolvente.
Determinacin de fenoles en una muestra
Se pesan 5 mg de extracto y disolver en 1 mL de agua destilada. Se diluir
1:10 en agua destilada y tomar 100 L para despus completarse a 500 L con

37

agua destilada. Se agrehan de 2 a 3 gotas de una solucin de FeCl 3 10%, el cual

anta la presencia de fenoles dar una coloracin azul. El mtodo detecta la
mayora de los compuestos fenlicos de un extracto.
Apndice 165
Determinacin de flavonoides AlCl3 (Dey y Harborne, 1989)
Se agregan 2 o 3 gotas de una solucin de de AlCl 3 10% a una muestra de
extracto, el cambio de coloracin que indica la presencia de flavonoides es la
formacin de un complejo anaranjado.
REFERENCIAS
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Sotelo, A., Argote, R.M., Moreno, R.I., et al. 2003. Nutritive Evaluation of the Seed,
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Flowers of Wilds Plants in Mexico. Plant Food. 62, 133-138.

39