Hans Christian Joachim Gram (1853-1889) estaba buscando una tincin

para visualizar bacterias en biopsias de tejidos y termin por descubrir

todo un nuevo mundo, el mtodo capital para diferenciar grandes grupos
microbianos por microscopia. El 15 de marzo de 1884, public sobre su
anlisis de veinte cultivos obtenidos por Friedlander (Sabio Alemn,
descubridor de la Klebsiella pneumoniae) de casos fatales de neumona
lobar. Todas las bacterias cultivadas eran capsuladas y diecinueve de ellas
retuvieron la coloracin, mientras solo una desti: este curioso coco (las
formas jvenes de Klebsiella pueden ser muy cortas) era en realidad el
nico bacilo de Friedlander, en tanto que las otras diecinueve eran die
genuine Pneumonie de Fraenkel. Habra de pasar un ao, en cuyo curso
aparecieron los trabajos de Weischelbaum sobre la neumona lobar, antes
de que Friedlander reconociera hidalgamente su error y que la inmensa
mayora de las neumonas eran causadas por el neumococo de Fraenkel,
retenedor de la Tincin de Gram, en tanto que slo una minora de
excepcin se deba a su propio bacilo, incapaz de retener el violeta:
enrojecieron as el microbio y su descubridor. Sin embargo, y en honor a la
verdad, se debe reconocer que desde un principio Friedlander acept la
posibilidad que diversas bacterias pudieran producir neumona, as como
distintas especies generaban infecciones purulentas, y que fue Fraenkel
quin siempre adoptara una posicin belicosa, y confrontacional, ignorada
sabiamente por su rival. En cuanto a la tincin misma, su utilidad se hizo
cada vez ms evidente, hasta que en 1889 la famosa serie de los Prcis
de, publicada regularmente por la editorial Mason et Fils, recomendara,
en el volumen correspondiente a Microbiologa, someter todos los
cultivos a la tincin de Gram, como primera orientacin diagnstica. Con
este nico aporte, Hans C. J. Gram entraba a la galera de los inmortales.
(Ledermann, 2007).
En los aos inmediatos a la publicacin de su mtodo se hizo evidente
que era tambin de gran utilidad como medio para dividir las bacterias en
dos clases, de acuerdo con su comportamiento cuando se aplicaba un
agente decolorante. Las que retenan la tincin violeta fueron clasificadas
como Gram-positivas y las que se decoloraban y tean de rosceo
mediante la tcnica de recuento por tincin, como Gram-negativas.
(Collard, 1985).
El procedimiento bsico de la tincin de Gram consiste en fijar el
material orgnico a la superficie del portaobjetos del microscopio ya sea
por calor o con metanol. La fijacin con metanol preserva la morfologa de
las clulas husped, as como la de las bacterias, y es especialmente til
para examinar muestras de sangre. Los portaobjetos se cubren con
metanol al 95% durante 1 minuto; se deja escurrir el metanol y el

portaobjetos se seca al aire antes de la tincin. Despus de la fijacin, el

primer paso en la tincin de Gram es la aplicacin del colorante principal
cristal violeta (metil rosanilina o violeta de genciana). Luego se aplica un
mordiente, el yodo de Gram, para que el colorante alcalino se una a la
pared celular de las bacterias a travs de enlaces qumicos. La coloracin
distingue las clulas Gram-positivas de las Gram-negativas. Despus de la
decoloracin los microorganismos que aparecen como Gram-positivos
retienen el cristal violeta y los Gram- negativos lo pierden. El agregado del
colorante de contraste safranina teir de color rosa o rojo las bacterias
Gram-negativas claras. (Forbes; Sahm; et al. 2009).
Estas diferencias presentes se deben a que la estructura celular de la
pared celular, son diferentes en las bacterias Gram-positivas y Gramnegativas. Las paredes de las clulas Gram-positivas, estn formadas por
un polmero denominado peptidoglucano o mucopptido, en el que
participan unas unidades alternativas de N-acetilglucosamina y cido Nacetilmurmico, con tetrapptidos de l-alanina, d-glutmico, cido
mesodiaminopimlico o l-lisina, y d-alanina, unidos al cido Nacetilmurmico; con numerosos enlaces cruzados de cido teicoico;
mientras que en las paredes de las clulas Gram-negativas, la capa de
peptidoglucano es ms delgada. Es probable que la gran cantidad de
enlaces cruzados de cido teicoico de los microorganismos Gram-positivos
contribuya a su capacidad de resistir la decoloracin con alcohol. Si bien
el colorante de contraste puede ser captado por los microorganismos
Gram-positivos, su color violeta no se altera. (Gimeno, Pemn, et. al.
2007).
Se debe tener cuidado en la preparacin e interpretacin de los frotis
ya que esta tincin puede presentar algunas trampas clsicas que
pueden conducir a posibles errores. Por ejemplo, el S. pneumoniae se
presenta como diplococos Gram-positivos en forma de lanceta, puede ser
interpretado como una mezcla de microorganismos ya que una variante
en su presentacin lo hace aparecer como cocos alargados semejantes a
bacilos cortos. Los microorganismos Gram-positivos que perdieron la
integridad de la pared celular debido al tratamiento antibitico, al
envejecimiento o a la accin de enzimas autolticas, permiten que el
violeta cristal se elimine durante la decoloracin y pueden aparecer como
Gram-variables, con algunas clulas coloreadas de rosa y otras de violeta.
Sin embargo, con propsitos de identificacin, estos microorganismos se
consideran Gram-positivos verdaderos. Por otra parte, las bacterias Gramnegativas raras veces (o nunca) retienen el cristal violeta (no se tien de
violeta) si el procedimiento de tincin se ha realizado de manera
apropiada. Las clulas husped, como los eritrocitos y los leucocitos

(fagocitos), pierden el cristal violeta con la decoloracin y aparecen de

color rosa, en los frotis preparados y teidos de manera correcta. Una vez
teido, el frotis se observa con el objetivo de inmersin (1.000X). Cuando
el material orgnico se tie con Gram (p. ej., frotis directo) el portaobjetos
se evala en busca de la presencia de clulas bacterianas as como de las
reacciones de Gram, las morfologas (p. ej., cocos o bacilos) y la
disposicin (p. ej., cadenas, pares y racimos, de las clulas observadas.
Esta informacin a menudo proporciona un diagnstico preliminar con
respecto a los agentes infecciosos y con frecuencia se utiliza para el
tratamiento directo inicial del paciente. (Forbes; Sahm; et al. 2009).

Referencias Bibliogrficas
Collard P. (1985). El desarrollo de la Microbiologa. Editorial Revert.
Barcelona- Espaa. Pp. 18.
Forbes B., Sahm D., Weissfeld A. (2009). Diagnstico Microbiolgico.
Tcnicas de tincin para la microscopa ptica: Tincin de Gram.
Editorial Medical Panamericana. Argentina. Pp. 80-81.
Gimeno C., Pemn J., Salavert M., Zaragoza R. (2007). Microbiologa
Aplicada al Paciente Crtico. Conocimientos bsicos de microbiologa
para no microbilogos: bacterias. Editorial Mdica Panamericana.
Madrid- Espaa. Pp. 1-2.
Ledermann W., (2007). Una historia personal de las bacterias. La tincin
de Gram decide la batalla. Santiago de Chile, Ril Editores. Pp. 56-57.