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pithlium rtinien

Diltiazem :
neuroprotection
des btonnets

Inserm et Innovation
Na+
Segment
externe

ette rubrique est consacre, chaque mois,


aux recherches menes dans un laboratoire de lInstitut National de la Sant et de la
Recherche Mdicale (Inserm), porteuses despoirs de progrs mdicaux.

1 Les missions de lInserm, interview de


Christian Brchot, Directeur Gnral de
lInserm. AIM 114.
2 Recherches en Cardiovasculaire lInserm, U689. AIM 115.

5/ U 592 : rtinopathies
pigmentaires, comment
protger les photorcepteurs

3 Maladies du motoneurone, dcryptage


et stratgies thrapeutiques, U798.
AIM 116.
4 Les rcepteurs contrlant le mtabolisme nergtique, cibles potentielles
contre lobsit. AIM 118.

pcialise dans la physiopathologie de la rtine, lunit Inserm U592 du Pr Jos-Alain Sahel (Hpital Saint-Antoine, Paris) sintresse
aux rtinopathies pigmentaires, affections hrditaires incurables qui concernent 40 000 patients en
France et sont caractrises par une dgnrescence
des photorcepteurs (btonnets et cnes). Mais les
stratgies thrapeutiques dveloppes dans ce cadre
pourraient avoir des retombes dans la DMLA (voir
p. 8 de ce numro), maladie de la rtine beaucoup
plus frquente, qui touche 2 millions de patients en
France.

Une dgnrescence des


btonnets, puis des cnes
Chez les sujets atteints de rtinopathie pigmentaire, ce sont dabord les btonnets, qui permettent de voir la nuit et en priphrie, qui sont d-

- Jos-Alain Sahel est directeur de lInserm U592


(Hpital Saint-Antoine, Paris), coordinateur du
Centre dInvestigation Clinique (CIC) Inserm-Centre
hospitalier national dophtalmologie (CHNO) des
Quinze-Vingts, chef de service au CHNO et la
Fondation Rothschild et professeur au University
College de Londres et lUniversit Pierre et Marie Curie. Il est directeur scientifique et coordinateur du futur Institut de la Vision.
- Thierry Lveillard, biologiste molculaire, et
Serge Picaud, lectrophysiologiste, dirigent chacun une quipe de recherche lInserm U 592.

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2006 A.I.M. 119

Excs de GMP
cyclique

+ Neuroprotection
des cnes

Ouverture continue
des canaux cationiques
de phototransduction

Ca2+

RdCVF
exogne

Segment
interne
Dpolarisation
permanente des
btonnets

Pas de
libration
de RdCVF

Transplantation
des btonnets

Apoptose
prcoce des
btonnets

Dgnrescence
secondaire
des cnes

Noyau

Les rtinopathies pigmentaires sont lies une dgnrescence


des btonnets, suivie de celle des cnes. Pour prserver la survie
de ces cnes, essentielle la vision diurne, colore et centrale,
les chercheurs de lunit 592 de lInserm tudient diverses voies
thrapeutiques : notamment une stratgie de neuroprotection par un
facteur trophique issu des btonnets, ou par un bloqueur de canaux
calciques utilis depuis longtemps en cardiologie, le diltiazem.

ADN

Mutation spcifique
dun gne exprim
dans les btonnets
(ex : gne de la
phosphodiestrase)

Btonnet

Leffet neuroprotecteur
du diltiazem
Les chercheurs ont test leffet dun bloqueur
de canaux calciques prescrit depuis longtemps en
cardiologie : le D-cis-diltiazem, connu pour inhiber
aussi les canaux cationiques sensibles la lumire
ouverts par le GMP cyclique. Rsultat : chez les souris Rd1, linjection intrapritonale quotidienne
de D-cis-diltiazem ralentit la dgnrescence des
photorcepteurs (btonnets et cnes) et prserve
plus longtemps la fonction visuelle 4. Ainsi, chez des
souris ges de 36 jours, les btonnets survivants sont
2,48 2,78 fois plus nombreux chez les souris traits
que chez les non traites (p<0,001) ; et les cnes survivants 1,44 fois plus nombreux (p<0,01). Ce traitement amliore aussi la fonction visuelle : par exemple,
lge de 25 jours, toutes les souris traites ont une
activit lectrique des cellules rtiniennes (ERG) mesurable, contre aucune des souris non traites.

Ces rtinopathies sont des maladies monogniques


trs htrognes : depuis 1990, on a identifi plus de
20 gnes muts qui, dans une trs large proportion,
codent des protines localises dans le segment externe des btonnets. Ds lors, on pouvait envisager
une approche de correction par thrapie gnique, spcifique de chaque gne incrimin, mais pas toujours
applicable. Cest donc une autre approche, moins
spcifique mais vise thrapeutique plus large, qua
privilgie lquipe de Thierry Lveillard lInserm
U592 : la neuroprotection des cnes.

Les chercheurs sont alors partis en qute de ce


facteur trophique : un travail de fourmi qui a ncessit de cribler durant plus de 6 ans, grce un systme automatis de gnomique fonctionnelle, lensemble des 210 000 clones issus de lADN
complmentaire des ARN messagers de la rtine normale de souris pour slectionner, in fine, la protine qui permet la meilleure survie des cnes 2.

De premiers essais cliniques devraient tre initis au CIC des Quinze-Vingts (Paris) chez une population de patients atteints de rtinopathies pigmentaires bien caractrises, dont les mutations
auront t recherches. Il sagira dapprcier linnocuit de cette stratgie, de valider le mode dadministration de RdCVF (par injection dans lil,
dlivrance par des vecteurs viraux, utilisation de
cellules encapsules produisant ce facteur) et dvaluer son effet thrapeutique. En parallle, les chercheurs sattachent identifier le rcepteur du RdCVF
la surface des cnes et dcrypter son mcanisme
daction (dans les cnes) et le mode de contrle de son
expression (par les btonnets). De plus, au Centre National de Gnotypage dEvry, limplication du gne
codant le RdCVF dans la DMLA est ltude chez
5200 patients atteints de cette affection polygnique
et multifactorielle, notamment marque par une atteinte prcoce des btonnets, suivie de celle des cnes.

qui permet une protection


contre le stress oxydatif

Lexcs de GMP cyclique,


toxique pour les btonnets

Les chercheurs ont slectionn un facteur de


survie des cnes, quils ont nomm RdCVF (rod-derived cone viability factor). Il sagit dune protine de
109 acides amins, uniquement exprime par les btonnets et code par un gne jusqualors inconnu
(Txnl6). Elle prsente une homologie avec une famille
de protines, les thiordoxines, impliques dans la protection contre le stress oxydatif. Ce RdVCF est localis dans les segments externes des btonnets et dans
lespace extracellulaire entourant les photorcepteurs ;
il semble possder un site daffinit la surface des
cnes. In vivo, linjection de RdCVF purifi dans lespace sous-rtinien de souris rd1 dont les btonnets ont
dj dgnr (et ne peuvent donc plus produire de
RdVCF) permet une protection significative des cnes.
In vitro, cet effet protecteur disparat aprs addition
dun anticorps spcifiquement dirig contre ce RdCVF.

Une autre approche thrapeutique vise ralentir


la dgnrescence des btonnets, mme non fonctionnels, pour quils puissent exercer leur effet trophique sur les cnes. Dans ce but, lquipe de Serge
Picaud, dans cette unit, a dcrypt les mcanismes
responsables de la dgnrescence des btonnets chez
la souris porteuse du gne mut de la phosphodiestrase. Normalement cette phosphodiestrase clive le
GMP cyclique, permettant la fermeture des canaux
cationiques qui assurent la transduction du signal lumineux dans les photorcepteurs. Mais lorsquelle est
mute, il sensuit une augmentation anormale du GMP
cyclique dans les btonnets. Cest cet excs de GMP
cyclique qui est toxique : il entrane louverture
continue des canaux cationiques de phototransduction, provoquant la dpolarisation permanente
et complte des btonnets et, in fine, leur apoptose 3.

Chez des souris rd1 ges de 5 semaines, chez


qui subsistent trs peu de btonnets (moins de 0,02%)
mais encore la plupart des cnes, des couches pures

A.I.M. 119 - 2006

Cne

... et pourrait constituer


une protine thrapeutique

de photorcepteurs, constitues de 97% de btonnets


et de 3% de cnes, ont t transplantes par Saddek
Mohand-Sad, lInserm U592. Rsultat 1 : ce transplant a ralenti la dgnrescence de prs de la moiti des cnes de la rtine hte, permettant la survie
de 40% de cnes en plus que dans la rtine controlatrale non traite (p<0,001). Mme les cnes situs
distance du transplant ont une survie augmente,
renforant lhypothse dun facteur diffusible libr
par les btonnets greffs.

Les chercheurs ont fait le postulat suivant :


puisque les cnes dgnrent aprs les btonnets,
leur survie doit dpendre dun facteur trophique
produit par les btonnets. Ils ont test cette hypothse dans un modle animal de rtinopathie pigmentaire : la souris rd1, porteuse dune mutation du
gne codant la phosphodiestrase des btonnets. Cette
souris souffre dune forme rcessive de dgnrescence squentielle des btonnets puis des cnes, galement trouve chez lhomme.

Les rtinopathies pigmentaires


rsultent de mutations spcifiques de gnes exprims
dans les btonnets. Quand
cette mutation affecte le gne
de la phosphodiestrase, elle
provoque un excs de GMP
cyclique dans ces cellules,
entranant une ouverture
continue des canaux de phototransduction : il sensuit une
dpolarisation permanente
des btonnets, suivie de leur
apoptose.
Les btonnets ne peuvent plus
produire de RdCVF, un facteur
trophique des cnes : en labsence de ce facteur, les cnes
leur tour dgnrent.

Corps
synaptique

truits : les premiers signes cliniques, gnralement


ladolescence, sont une ccit nocturne et un champ
visuel qui se rtrcit en priphrie. Puis ce champ diminue progressivement jusqu rendre la vision tubulaire , traduisant la perte secondaire des cnes
qui assurent la vision colore, la vision contraste
lev, lacuit visuelle et toutes les fonctions visuelles
en atmosphre lumineuse normale. Aprs 20 30
ans dvolution, la vision centrale son tour se rduit, menaant les patients de ccit.

Les btonnets produisent un


facteur de survie des cnes

Sources

Stratgies de neuroprotection
des btonnets et des cnes

2006 A.I.M. 119

applicable lil ?
Les chercheurs ont confirm leffet neuroprotecteur
du diltiazem in vitro, sur des explants de rtine de rat
incubs avec un inhibiteur de la phosphodiestrase, le
Zaprinast, qui induit lapoptose des btonnets en augmentant la concentration intracellullaire de GMP cyclique 3. Pour une application future chez lhomme, les
chercheurs tudient des systmes de dlivrance locale
du diltiazem, qui viterait les effets secondaires lis
ladministration systmique de fortes doses du produit
(suprieures aux doses prescrites en cardiologie).

Enfin, lquipe de Serge Picaud tudie avec un


groupe suisse un projet de prothse rtinienne.
Lide est de stimuler les cellules ganglionnaires qui
subsistent, chez les patients atteints de dgnrescence des photorcepteurs, pour favoriser une vision
minimale. Pour lheure, les chercheurs testent chez
le rat des implants sous-rtiniens produits lEcole
Polytechnique de Lausanne, pour examiner la biocompatibilit des implants, valuer lefficacit et linnocuit des stimulations, prciser les mcanismes de
ces stimulations 5 Un projet suivre
Florence Rosier
1. Mohand-Sad S. et al. Arch Ophthalmol 2000 ; 118 : 807-11.
2. Lveillard T. et al. Nature Genetics 2004 ; 36 (7) : 1-5.
3. Vallazza-Deschamps G. et al. European Journal of Neurosciences 2005 ; 22 : 1013-22.
4. Frasson M. et al. Nature Medicine 1999 ; 5 (10) : 1183-87.
5. Salzmann J. et al. Br J Ophtalmol 2006 ; 90 : 1183-87.

LInstitut de la Vision
La premire pierre de lInstitut de la Vision a
t pose fin septembre 2006. Il ouvrira dbut
2008 dans lenceinte des Quinze-Vingts (Paris)
et se composera dune zone de recherche (incluant lU592 de lInserm), dun secteur ddi
de jeunes entreprises innovantes et dun secteur
hospitalier. Bnficiant de financements publics
(Inserm, rgion Ile-de-France, ville de Paris) et
privs (Fondation Rothschild, AFM, Fondation
NRJ), cet Institut sera le plus vaste hpital europen consacr aux maladies de lil. Son ambition : favoriser linnovation dans ce domaine en
rapprochant chercheurs, mdecins et industriels. A terme, il devrait accueillir 150 200
chercheurs et une trentaine dentreprises.

Fovea : une socit pour favoriser linnovation thrapeutique en ophtalmologie


En mai 2005, des chercheurs de lU592, avec dautres co-fondateurs, ont cr la socit Fovea, spcialise
dans le dveloppement et la commercialisation de molcules innovantes pour le traitement de maladies de la
rtine : DMLA, rtinites pigmentaires, rtinopathie diabtique Les Conseillers scientifiques en sont les Pr JosAlain Sahel, Thierry Lveillard et Serge Picaud. Fovea sappuie sur un rseau de scientifiques et cliniciens de renomme internationale. Elle a lev 20,5 millions d'euros dans le cadre d'un premier tour de financement priv.

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