Vous êtes sur la page 1sur 31

Universit Constantine I

Facult des Sciences de la Nature et de la Vie

Travaux Pratiques

Physique
1meanne LMD
Tronc commun SNV
Anne universitaire 2012 - 2013

Pr. Lounis CHEKOUR

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Prambule
Le laboratoire est un espace utilis par plusieurs quipes pdagogiques (Physique,
Botanique, etc.). Le nombre de personnes qui y travaillent est donc bien
important. Il est, de ce fait, demand aux tudiant(e)s de faire le MINIMUM de
BRUIT possible. Nous comptons sur votre comprhension et votre civisme pour
aider au bon fonctionnement des sances de TP. On vous en REMERCIE.
On vous demande aussi, de bien respecter les rgles suivantes :
Le port de la bouse est obligatoire. Comme lest aussi le devoir de se
munir dun crayon, gomme, papier millimtr et calculatrice pour laborer votre
compte rendu.
Il est absolument ncessaire dtudier le polycopi concern y compris les
annexes avant de se prsenter aux sances de TP. Cela vous facilitera la rdaction
du compte-rendu qui sera remis OBLIGATOIREMENT lenseignant la FIN DE LA
SEANCE, et ce, quelque soit le droulement du TP.
Le compte-rendu SERA NOT en fonction de votre avancement dans le travail.

Prsentation du compte-rendu :
Rsumer brivement le but de la manipulation. Il est inutile de RECOPIER le
polycopi! Et si vous le faites, vous ne rcolterez que des points en moins.
Dans vos commentaires faites RESSORTIR, la qualit de vos rsultats
exprimentaux en vous appuyant sur votre ANALYSE objective et critique.

Droulement des manipulations


Au niveau du laboratoire de BioPhysique, il y a 2 sries de manipulations qui sont
rattaches aux modules de Physique et de Biophysique. Les TP de physique sont
2

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

assurs durant le premier semestre de la premire anne et les TP de biophysique


le sont au second semestre de la deuxime anne. Ces TP ont pour objectif
dassurer lapproche exprimentale des notions fondamentales prsentes aux
cours et des travaux dirigs. Ils apportent aussi lopportunit ltudiant(e) de
cerner et de comprendre certains phnomnes inhrents aux sciences biologiques.
Dans cette srie de TP dOPTIQUE, il y a trois manipulations :
Etude de la dispersion de la lumire par un prisme. Ce TP N1 est appel
PRISME
Formations des images par les lentilles minces. Ce TP N2 est appel
LENTILLES
Etude du phnomne dabsorption des radiations par des solutions en
utilisant un spectrophotomtre prisme. Ce TP N3 est appel
SPECTROPHOTOMETRIE .
Les TP seffectuerons par ordre croissant et selon la rotation suivante :
TP1

TP3

TP2

Si, par exemple, un binme ou un trinme commence par faire le TP3, il ferait le
TP1 durant la mme sance quinze jours aprs. Et il ferait son dernier TP qui serait
le TP2, quinze jours aprs et durant la mme sance.

Remarques
Si vous ratez une sance de TP, par contrainte personnelle ou pour une
autre raison (jour fri, etc.), le TP sera rattrap pendant une priode rserve
aux rattrapages programmes fin de la srie. Durant sance suivant votre
absence, vous ferez le TP programm selon la rotation des manipulations dcrite
ci-dessus.
3

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Une seule absence justifie est tolre. Et si un(e) tudiant(e) sabsente


une deuxime fois, la sance sera comptabilise comme nulle et le TP sera not
zro.
Les Comptes rendus, remis OBLIGATOIREMENT la fin de la sance, sont
corrigs et remis aux tudiant(e)s pour consultation, quinze jours aprs sa
ralisation.
Barme de correction
Prsentation
Objectif
Dfinition
Mesure de A
Commentaire
Spectre Na, Hg
Mesure dviation Dm
Commentaire
Indice n
Graphe n= f()
Commentaire
Conclusion

/01
/01
/01
/02
/02
/02
/02
/02
/02
/02
/02
/01

/20

Des QUESTIONS se rapportant aux TP seront poses au CONTROLE des


connaissances semestriel.

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

TP1 - PRISME
I. Gnralits
1 Spectre lumineux
Le large spectre des ondes lectromagntiques est visualis sur la figure ci-dessous (fig.1 a). Bien qu'il soit
continu et qu'il ny ait pas de frontire claire entre une couleur et la suivante, limage donne les limites
approches des couleurs du spectre. Une lumire blanche mise par une lampe incandescence passant
au travers d'un prisme, est "tale" en une infinit de rayons de toutes les couleurs visibles, allant du rouge
jusqu'au violet (fig.1b). La lumire blanche est l'addition de lumires de toutes les couleurs (voir poster
affich au niveau du laboratoire). Ainsi, l'arc en ciel (fig.1c), obtenu par la dcomposition de la lumire
blanche du Soleil par les gouttelettes d'eau contenues dans un nuage est form d'une infinit de couleurs
visibles du rouge au violet. La lumire visible n'est qu'une petite "fentre" d'un domaine plus gnral dit
des ondes lectromagntiques. Les radiations de longueurs d'onde allant 0,4 0,8 micromtres (m*),
forment la lumire est visible. Les longueurs d'onde plus courtes que 0,4 m, sont le domaine des rayons
ultra-violets, puis des rayons X et des rayons gamma. Les longueurs d'onde plus grandes que 0,8m,
appartiennent au domaine des infrarouges, des ondes millimtriques, centimtriques (four microondes),des ondes dcimtriques (GPS, Wi-Fi, Tlvision) et les ondes mtriques et dcamtriques (radio
FM) (fig.1a).

a)

c)
b)

Fig. 1. a) Spectre lectromagntique, b) Spectre visible, c) Arc-en- ciel


E

2. Dfinitions

Un prisme (fig.2) est un milieu transparent limit par deux


dioptres plans non parallles EEGG et EEFF', que l'on appelle
faces du prisme. La droite (EE'), intersection des deux faces, est
appele l'arte du prisme. L'angle plan (A) du didre form par les
faces est appel angle du prisme. La dispersion dun prisme est sa
capacit sparer spatialement les diffrentes composantes G
spectrales d'une lumire. Cest la dcomposition ou dispersion de
la lumire.
en nm (*)

<400

Couleur
Ultraviolet

Arte

G
Base

F'

F
Fig. 2. Schma dun prisme

400

430

450

490

570

600

630

violet

indigo

bleu

vert

jaune

orange

rouge

radiations lumineuses visibles

> 800

Infrarouge

Tableau 1 - Longueurs dondes des radiations visibles


-9
-6
(*) Les longueurs d'onde sont donnes en nm : 1nm (1 nanomtre) = 10 m, 1 m (micromtre)=10 m= 1000nm.
5

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

3. Formules du prisme
Pour simplifier l'tude du prisme, nous supposerons que le :
- mme milieu baigne les deux faces du prisme,
- prisme est le plus rfringent que le milieu ambiant,
- rayon incident est situ dans un plan de section principale, qui est ainsi le plan d'incidence
(form par le rayon incident et la normale IN) qui contient tout le trajet SII'S'.
Le rayon incident SI contenu dans le plan de section principale (plan de la fig. 2), arrive sur la
premire face du prisme sous l'angle d'incidence i. Comme le prisme est plus rfringent que le
milieu extrieur, ce rayon peut toujours pntrer (selon le rayon rfringent II') dans le prisme en
restant dans le plan d'incidence (1re loi de Descartes). Et sur la deuxime face sous l'angle
d'incidence r'. Les rfractions en I et I' ont pour effet de rabattre les rayons vers la base du prisme,
elles se traduisent par les relations (Descartes) :
sin i n sin r et sin i n sin r

(1)

Dans le triangle IKI', on peut crire : A = r + r'


La dviation D subit par le rayon incident est la somme des dviations induites chacune par le
premier (en I) et le second dioptre (en I') :
dI = i - r,

d2 = i' - r' ,

D = dI +d2 = i + i' - (r + r' )

D'o lon dduit les formules du prisme :


M
A
N

d1
I

i'

r'
K

S
N'

d2

N'

S'

sin i = n sin r
sin i' = n sin r'
A = r + r'
D = i + i' - A

(2)
(3)
(4)
(5)

S I : rayon incident,
NN : Normales en I et en I
I : point d'incidence,
I' : point d'mergence,
SM : direction de l'incidence,
IS : direction du rayon mergent
d1 : premire dviation
d1 : deuxime dviation
D : dviation totale
A : angle du prisme,
n : indice de rfraction du prisme.

Fig. 2. Dispersion de la lumire blanche par un prisme.

4) Etude de la dviation : Variation de la dviation en fonction de l'angle d'incidence


D'aprs les relations du prisme, la dviation peut tre considre comme fonction de trois
paramtres indpendants, savoir :
- l'angle d'incidence i,
- l'indice de rfraction n,
- l'angle du prime A.

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

L'tude thorique de la fonction D= f(i), n et A tant considrs constants, montre que celle-ci
prsente un minimum de dviation pour i = im (fig.4). Ainsi, le trajet du rayon correspondant au
minimum de dviation est symtrique par rapport au plan bissecteur du prisme. Aussi, on
dmontre quau minimum de dviation on a :
i = i= im et r = r= rm
Dans ces conditions les formules du prisme deviennent (fig. 3):

(6)
r r rm

Fig. 4. Variation de la dviation en fonction


de langle dincidence

Fig. 3. Parcours des rayons lumineux :


Cas de la Dviation minimale

Et de la relation de Descartes :

On dduit:

(7)

On montre, en utilisant la diffrentielle logarithmique et en supposant que A = Dm que :


(8)
Lindice de rfraction du prisme dpend de langle A et de la dviation minimale Dm. Comme cette
dernire dpend de la longueur donde de chaque radiation, lindice se trouve aussi dpendant.

II. Exprimentation
1. But
- Comprhension du phnomne de dispersion et utilisation d'un spectrogoniomtre,
- Mesure de langle du prisme,
7

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

- Variation de la dviation en fonction de l'angle d'incidence,


- Dviation minimale et dtermination de l'indice de rfraction dun prisme.
2. Principe de la mesure
La lumire issue d'une source est constitue d'une suite continue ou discontinue de radiations
monochromatiques correspondant chacune une longueur d'onde. L'indice de rfraction du
prisme n'est pas identique pour toutes les longueurs d'ondes.

Drouge
Dbleu

Fig. 5 - Dviation en fonction de la longueur donde de la radiation.

Ainsi, chaque radiation monochromatique , correspond un indice n et une dviation bien dtermins.
Dans le cas des substances transparentes, la loi de variation de l'indice en fonction de la longueur d'onde
est reprsente (pour le spectre visible) par la formule empirique de Cauchy:

[9]
Pour un prisme d'indice n et d'angle A, la dviation D de la lumire est une fonction dcroissante
de l'indice. Les radiations de courtes longueurs d'onde (bleue) sont donc plus dvies (fig. 5) que
les radiations de grandes longueurs d'onde (rouges). De plus, la dviation D varie avec l'angle
d'incidence i pour une radiation donne. On constate que la dviation passe par un minimum Dm
lorsque i varie de 0 /2.
3. Description du spectrogoniomtre (fig. 6, 7 et Annexe 1)
Le goniomtre se compose :
- d'un collimateur qui fournit les rayons incidents parallles,
- d'une embase tournante (ou platine porte prisme) sur laquelle est pos le prisme,
- d'une lunette qui reoit les rayons mergents parallles.
Le collimateur
Il est constitu par une fente verticale F de largeur variable (vis 20) place au foyer d'une lentille
convergente. Cette fente peut tre rapproche ou loigne de l'objectif (vis 17). Elle est claire
par une lampe vapeur mtallique (exemple Na, Hg ou Cd).
L'embase
Elle se compose de deux plateaux:
- le plateau infrieur mobile autour de l'axe du goniomtre,
8

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

- le plateau suprieur dont l'orientation par rapport au prcdent peut tre modifi au moyen de
trois vis calantes (7) formants les sommets d'un triangle quilatral.

Vernier

Goniomtre
F
Vernier

Fig. 6 - Spectrogoniomtre

Fig. 7. Vue de dessus du spectrogoniomtre

La lunette
Elle est mobile autour de l'axe du goniomtre (rotation rapide lorsque (12) est dbloque; rotation
lente, lorsque (12) tant bloque on tourne (11). La vis (6) permet la mobilit de la lunette autour
d'un axe horizontal. (3) coulisse afin de mettre au point l'oculaire sur le rticule, (2) permet le
rglage de la distance objectif-oculaire.
4. Rglage de l'appareil
Il s'agit de raliser les deux conditions dcrites au paragraphe 2.1 (remarques 1&2). Pour la
condition 1, on ralisera le rglage de la lunette et du collimateur. Pour la condition 2, celui de la
plate-forme :
- Positionner les vis calantes (7) mi-course.
- Aligner la lunette et le collimateur.
- Rgler l'horizontalit de la lunette et du collimateur l'aide des vis (6) et (15).
- Poser le prisme sur l'embase.
Rglage de la lunette
Mettre en marche le dispositif d'clairage (4) du rticule.
Pour commencer, dplacer l'oculaire (3) jusqu' voir nettement le rticule. Les rayons lumineux
provenant du rticule, clair par un dispositif latral, traversent l'objectif et sont rflchis par une
des faces du prisme.
Orienter correctement le prisme en tournant lentement l'embase jusqu' voir le faisceau rflchi
dans le champ de la lunette (apparence d'un disque clair). Bloquer l'embase.
Rgler le tirage de la lunette avec la vis (2), jusqu' voir nettement le rticule et son image.
Le rticule est alors au foyer de l'objectif de la lunette.
Si le collimateur fournit un faisceau parallle issu de la fente F, l'image de F se formera au foyer de
l'objectif de la lunette et sera donc nette en mme temps que le rticule.
9

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Rglage du collimateur
Le collimateur doit fournir un faisceau parallle, il faut pour cela que la fente F soit au foyer du
collimateur. Eteindre l'clairage du rticule. Enlever le prisme de l'embase.
Eclairer la fente source l'aide d'une lampe au Mercure-Cadmium (qui aura chauffe quelques
minutes avant le dbut du rglage) puis ajuster la position de F en faisant coulisser le porte-fente,
de manire voir son image nette dans la lunette. Veiller ce que la fente soit parallle l'arrte
du prisme. Bloquer la vis (17). Obtenir une fente aussi fine que possible l'aide de (20).
Rglage de la plate-forme
Il faut rendre l'axe de la lunette et le plan de l'embase perpendiculaire l'axe du goniomtre.
Lorsque ce rglage sera ralis, le faisceau lumineux sera toujours dans le plan normal l'arte du
prisme. Le rticule (clair) et son image tant vus nets et la lunette tant bloque, on ralisera les
oprations suivantes:
- remettre le prisme sur l'embase,
- bloquer la lunette dans l'axe du collimateur l'aide de la vis (12),
- faire concider les traits verticaux du rticule et de son image en tournant lentement l'embase; la
bloquer,
- raliser la concidence des traits horizontaux en agissant pour moitis sur la vis d'orientation (6)
de la lunette et pour moiti sur la vis calante (7) de l'embase situe juste en face de la lunette,
- dbloquer l'embase, la tourner de 120 et recommencer cette srie de rglages pour la deuxime
puis la troisime face du prisme. Continuer, en tournant toujours dans le mme sens, jusqu' ce
que le trait horizontal du rticule concide avec son image pour les trois faces du prisme,
- bloquer les vis de rglage en hauteur (6) et (15) l'aide des contre-crous.
On veillera ne pas dplacer le prisme durant toute la manipulation!
5. Manipulation
5.1. Lecture sur goniomtre laide dun vernier (fig. 8).
Le disque fixe est gradu en degr. La plus petite division correspond 0.5.
Le vernier mobile est divis en 30 divisions dune minute chacune. Le trait du zro indique sur le
disque fixe la valeur de langle en degr. La concidence entre un trait de la graduation du disque
et un trait de la graduation du vernier correspond au nombre de minutes dangle quil faut.

10

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Le vernier consiste en 30 graduations d'une minute (chelle suprieure.


Graduation du vernier

Graduation du Goniomtre

Concidence

Fig. 8. Exemple de lecture

Dans l'exemple ci-dessus, la position du zro (0) du vernier se trouve dans la deuxime
moiti d'un degr, entre 150 et 151. On crit 150 + 30' (deuxime moiti) + 12'
(graduation du vernier qui concide avec une graduation de l'chelle principale) pour un total
de 150 42' ou encore 150+42/60 ou encore 150,70
Exercice : Donnez la lecture du vernier ci-dessous

N.B. : On comptera les angles algbriquement (sens positif = sens trigonomtrique)

Remarque : Toutes les mesures doivent tre exprimes en degr et minute dangles.
On rappelle que 1 degr dangle correspond 60 minutes dangles.
Exemple :
Quand on trouve langle correspondant une longueur donde lue : = 144 19
Langle 19 reprsente
Do :

, soit 0.32

= 144 19= 144+0.32= 144.32

On donnera le rsultat sous la forme A = Amesur + A, o A est lincertitude absolue estimer.


Donner galement lincertitude relative A/A.
5.2. Mesure de l'angle A (fig. 9)
Eteindre lclairage du rticule et clairer la fente - source laide de la lampe au mercure, par
exemple. L'arte du prisme est dirige vers le collimateur. La lumire incidente est rflchie par les
deux faces du prisme. On vise successivement les deux faisceaux rflchis, sans bouger le prisme,
on note les positions de la lunette soit 1 et 2. On montre que l'angle entre ces deux positions
est : = 1 + 2 est gal 2A.
11

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Soit i1 l'angle d'incidence sur la face de droite sur la figure et i2 l'angle d'incidence sur la face de
gauche. On appelle l'angle dterminer. On a:

Et

Or,
Faire 3 mesures de langle A. Prenez la
moyenne de ces mesures. Estimez
lerreur A, sachant que la mesure su
le goniomtre est faite une minute
prs.

i1

i2

i1

i2

Rayons rflchi
par la 1re face

Remarque: Pour identifier l'image de


la fente par rflexion on se rappellera
qu'il n'y a que 4% de lumire rflchie
sur du verre, le reste tant transmis.
De plus la rflexion se fait sans
dispersion

Rayons rflchi
par la 2re face

=2A

Fig. 9. Mesure de langle du prisme

5.3. Observation du spectre


Observer la lunette le spectre de raie de la lampe vapeur au sodium (Na).
Quelle est la couleur la plus dvie? Quelle est la couleur la moins dvie?

5.4. Mesure de l'angle Dm


Eclairer la fente source l'aide de la lampe au sodium (Na) ou de mercure (Hg). Les longueurs des
diffrentes lampes vapeur sont reportes au niveau de lannexe 3. Orienter l'embase de faon
ce que l'incidence soit rasante (i=/2) et la faire tourner de manire se rapprocher de l'incidence
normale (i=0). Observer une raie (la raie jaune est la plus intense) l'aide de la lunette: elle se
dplace d'abord dans le sens de rotation du prisme, s'arrte, puis repart en sens inverse. Le
minimum de dviation, pour cette raie, est obtenu pour la position du prisme pour laquelle le sens
du dplacement s'inverse. Le prisme tant bloqu dans cette position, pointer la position de la raie
tudie aprs avoir referm autant que possible la fente.
- Faire les dterminations de Dm pour chaque raie. Calculer son incertitude Dm
- Dduire des mesures prcdentes la valeur de l'indice n et son incertitude n (relations
prcdentes 7 et 8 en page 7).
- Tracer n = f (). Comparer la forme de la courbe obtenue celle que donnerait la relation de
Cauchy (relation 9, page 8).
Attention: A et Dm doivent tre exprims en radian !
12

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Annexe 1
Mesure et incertitude
Mesurer des grandeurs identifies est une activit fondamentale dans les laboratoires de recherche
scientifique et dans l'industrie. Cest aussi fondamental dans de nombreuses activits quotidiennes comme
le pesage dans les commerces, les analyses biologiques, la mesure de vitesse avec un radar, Il est
ncessaire dtablir la confiance dans les rsultats fournis lors de ces mesures. Mesurer une grandeur
(intensit dun courant, tension, longueur,), nest donc pas simplement rechercher la valeur de cette
grandeur mais aussi lui associer une incertitude afin de pouvoir qualifier la qualit de la mesure.
Dterminer une incertitude de mesure est une opration difficile et complexe, mais nanmoins
indispensable (et pas seulement en TP, bien sur).
Quoi quil en soit, en Travaux Pratiques, vous ne devrez jamais donner un rsultat de mesure sans
laccompagner de son incertitude, sous peine dtre verbaliss .
Prsenter un rsultat de mesures :
Vous mesurez langle dun prisme. Le rsultat doit tre donn sous la forme :
A = 59 58 45 + /- 15
Vous mesurez la focale dun systme optique :
f ' = (51,0 +/- 1,5 mm)
Chiffres significatifs :
Donnez toujours les rsultats avec un nombre de chiffres significatifs raisonnable et en accord avec
lincertitude. Surtout pas de, par exemple, f = (101,024587 +/- 5) mm

Annexe 2
Schma du goniomtre
(1) Lunette
(1.1) Vis d'ajustage pour compensation des
dfauts d'alignement
(2) Vis de rglage de nettet
(3) Oculaire de Gauss coulissant
(4) Dispositif d'clairage
(5) Vis d'ajustage pour dcalage latral de la
lunette
(6) Vis de rglage en hauteur de la lunette (1)
blocable
(7) Vis calante de l'embase du prisme
(8) Vis de blocage de l'embase du prisme
(9) Vis de blocage du disque gradu
(10) Disque gradu
(11) Rglage fin de la rotation de la lunette
(12) Vis de blocage de la lunette (1)
(13) Verniers
(14) Loupes
(15) Vis de rglage en hauteur du collimateur
(16) Vis d'ajustage pour dcalage latral du
collimateur (21)
(17) Vis de blocage du coulisseau porte- fente
(18) Limitateur de fente rglable
(19) Fente rglable
(20) Vis micromtrique de rglage de la largeur
de la fente
(21) Collimateur
(21.1)Vis d'ajustage pour compensation des
dfauts d'alignement
(22) Embase du prisme.

13

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Annexe 3
Domaine du spectre lectromagntique
Le spectre lectromagntique est la dcomposition du rayonnement lectromagntique selon ses diffrentes
composantes en termes de frquence (ou priode), d'nergie des photons ou encore de longueur donde associe, les
quatre grandeurs (frquence), (priode), (nergie) et (longueur donde) tant lies deux deux
par :La constante
de
Planck h (approx. 6,62606910-34 J.s)
et
la vitesse
de
la
lumire c
(exactement 299 792 458 m/s), sont relies selon les formules :
E = h = h / T (pour lnergie transporte par le photon), avec C = .v = /T et E = hc /
On dcoupe habituellement le spectre lectromagntique en divers domaines selon les longueurs d'onde et le type
de phnomne physique mettant ce type d'onde:
Ondes radio: Oscillations d'lectrons au sein d'un circuit lectrique comme une antenne.
Micro-ondes: Oscillations d'lectrons au sein de composants lectriques spcifiques (comme une diode Gunn par
exemple.
Infrarouge: Oscillations de particules, transitions d'lectrons de valence au sein d'atomes ou de molcules.
Visible: Transitions d'lectrons de valence de haute nergie qui ont la particularit d'tre dtectes par l'il humain.
Ultraviolet: Transitions d'lectrons de valence de plus haute nergie encore, et donc non observables par l'il
humain.
Rayons X: Transitions d'lectrons au sein d'un atome ou acclration d'lectrons libres de haute nergie.
Rayons gamma: Dcomposition radioactive d'un noyau instable, de faon spontane ou sous l'effet d'une
acclration au sein d'un acclrateur de particules.

Spectre lumineux

Domaines du spectre lectromagntique en fonction de la longueur d'onde et de la frquence


La lumire blanche peut se dcomposer en arc-en-ciel l'aide d'un prisme ou d'un rseau de diffraction. Chaque
couleur spectrale de cette dcomposition correspond une longueur donde prcise ; cependant, la physiologie de
la perception des couleurs fait qu'une couleur vue ne correspond pas ncessairement une radiation de longueur
14

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

donde unique mais peut tre une superposition de radiations monochromatiques. La spectromtrie tudie les
procds de dcomposition, dobservation et de mesure des radiations en ondes monochromatiques.

Longueurs donde des radiations de certaines lampes vapeurs

15

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

TP 2 - Lentilles minces
I . But
La distance focale est la proprit la plus importante des lentilles et systmes optiques. Celle-ci est
dtermine par les mthodes suivantes:
-

Relation de conjugaison
Auticollimation
Bessel
Silbermann

II. Dfinitions
1. Lentilles
On appelle lentille tout milieu limit transparent homogne et isotrope limit par deux surfaces
(dioptres) dont l'une au moins n'est pas plane. La plupart des lentilles utilises sont limites par
deux calottes sphriques ou par un plan et une calotte sphrique. Les lentilles sont classes en
deux catgories (fig. 1) :

bi-convexe

plan concave

mnisque
convergent

plan-concave

mnisque
divergent

reprsentation
schmatique

reprsentation
schmatique

Fig. 1. Diffrents types de lentilles

Une lentille convergente L donne dun objet AB, une image AB. La lentille convergente est
caractrise par (fig. 2) :
L

Direction de propagation de
la lumire

Fig. 2. Diffrents types de lentilles


16

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

- son centre optique O,


- la distance focale objet OF = f , la distance focale image OF = f
2. Foyer Image (fig. 2)
Un point est dit foyer image, not A', quand il est l'image d'un point objet situ l'infini.
direction du faisceau incident
(+)

F'

axe optique de la lentille


A
Point objet situ l'infini

A'
Point Image relle au foyer
image

Lentille convergente

OS: :Sommet
la la
lentille
sommetdede
lentille
F:
focal
de la lentille
F' Point
: Foyer
de image
la lentille
SF' = OA
SA'
f f'== OF

Fig.2. Dfinition du foyer image d'une lentille convergente

3. Foyer objet : Distance focale objet (fig. 3)


Le point focal objet, not A (foyer objet) est la position du point objet dont l'image donne par la
direction du faisceau incident
lentille est l'infini.
(+)

axe optique de la lentille

A
point objet au foyer objet

O
A'
Point image l'infini
lentille convergente

Fig.3. Dfinition du foyer objet d'une lentille convergente

O : Sommet de la lentille
F : Point focal de la lentille
f = OF = OA

4. Relation de conjugaison des lentilles et formation dune image dun objet (fig. 4)
La distance focale d'une lentille mince convergente quelconque se dduit de la relation de
conjugaison qui relie la position de l'objet (OA = p), la position de l'image (SA' = p') et la distance
focale de la lentille (OF' = f ') :
Ou, plus simplement :

1
1
1

OA' OA OF'
1 1 1

p' p f'

(1)
17

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

direction du faisceau incident


(+)
Plan focal image

Plan focal objet

F'
S

A'

B'
AB
: objet
AB
: Image
A'B'
: image
AB : Objet
centre de
lentille
OS: : Sommet
de la
la lentille
F'
:
foyer
image
lentille
F : Foyer image dede
la la
lentille
' = OA
ff' == SF
OF

Fig. 4. Marche des rayons lumineux : Image d'un objet donne par une lentille convergente

Exercice ( prparer avant le TP)


1) Faire l'tude complte de la fonction p' = h(p) (relation (1))
2) En se basant sur les dfinitions prcdentes et sur le schma de la figure 4, faire la
construction gomtrique de la formation de l'image donne par une lentille dans les cas suivants :
a) p < 0, p < f ' , avec f ' > 0
b) p > 0, p < f ' , avec f ' > 0
c) p < 0, p < f ' , avec f ' < 0
d) p > 0, p < f ' , avec f '< 0
Donner, dans chacun des cas, la nature de l'objet et de l'image.

III - Dtermination exprimentale des foyers Image et Objet


1. Foyer image
direction du faisceau incident
(+)
B

Plan focal

collimateur

axe optique de la lentille

OS

objet AB renvoy par


le collimateur l'infini

F' A' Image relle au


plan focal image
B'

Lentille convergente
SO :: sommet
delalalentille
lentille
Sommet de
F'
de lalalentille
lentille
F :: Foyer
Foyer de
OF==SA'
OA
f'f ==SF'

Fig. 5. Dtermination du foyer (plan focal) image.

Pour obtenir un faisceau parallle, comme s'il tait mis par un objet situ l'infini, on dispose
aprs la source (lampe vapeur de mercure, par exemple) et l'objet AB (lettre grave dans une
petite plaque mtallique) un collimateur (ensemble de lentilles, etc.) muni d'une fente

18

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

rectangulaire, rglable son entre, d'o sort un faisceau paralllement l'axe optique. Le
faisceau arrivant sur la lentille tudie en sortira pour donner une image A'B'. Il suffira de
rechercher cette image en dplaant l'cran sur le rail. Vous remarquerez que la position de
l'image est situe sur un "intervalle" o l'image est plus ou moins nette. Recherchez dans cet
intervalle la position o l'image est la plus nette possible (la nettet de l'image est dtermine, ici
par l'image d'un cheveu coll l'objet). Position que l'on notera c. Vous avez ainsi la position du
foyer image. Le plan vertical qui passe par ce point est appel plan focal image . Pour valuer
l'incertitude sur la position de l'image, on procdera de la manire suivante : En partant de la
position la plus nette de l'image note c, on dplacera l'cran droite de "c", jusqu' ce que
l'image commence devenir floue. On notera cette position c1 . On dplacera, de nouveau
l'cran gauche de la premire position de nettet "c", jusqu' ce que l'image commence
devenir floue. On notera cette position c1 . On procdera de la mme manire pour trouver la
position extrme gauche c2. L'image d'un objet ne se forme pas donc en un seul point, mais sur
l'intervalle c1c2 qu'on pourra appeler l'amplitude de vision nette de l'image. Et l'incertitude
absolue sur la mesure de position c est donne par la moiti de l'intervalle c1c2 qui est gal :
c

c2 c1
2

2. Foyer objet
De la mme manire, procder la dtermination du foyer (plan focal) objet en permutant la
source et l'cran, ou en tournant simplement la lentille de 180. Comme la lentille est symtrique,
les points focaux image et objet sont de mme symtriques par rapport au centre de la lentille.

IV- Mthodes de dtermination de la distance focale d'une lentille mince


1. Mthode des points conjugus
a) Principe: (fig. 5)
Une lentille convergente (L) donne de l'objet AB une image A'B' dont la position, la grandeur et le
sens dpendent de celles de l'objet.
Pour une position donne (position chercher en dplaant l'objet et l'cran, la lentille tant fixe)
de l'objet, la position de son image est dtermine et visualise sur un cran.
De la mesure de p' = OA', sur le banc optique, on dduit la distance focale f ' = OF en utilisant la
relation de conjugaison.
La position (c) de l'image et son incertitude absolue (C), sont dtermins selon le procd dcrit
prcdemment.
A partir de la position de l'objet (P = OA), de la position de l'image (P' = OA') et de C, on dduit f'
et f '. Le rsultat de la mesure doit tre prsent comme suit :
f ' = f ' mesur f ' mesur
Remarque: L'objet, la lentille et l'cran sont ports sur des pieds coulissant sur le banc optique.
19

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

b) Manipulation
Identifier les lments du montage schmatis ci-dessous. Faire le montage.
Raliser les mesures selon le tableau ci-dessous, o :
- a : position de l'objet,
- b : position de la lentille,
- c : position de l'image.

Les abscisses (a, b, c) sont prises par rapport l'origine (0) reprsente par le bord du banc
optique.
Ecran

Source
de lumire
Banc optique

O
x = 0 cm
Origine de
laxe optique

X
Objet
x = a = 30cm

Lentille
x=b

Image
x=c

Fig.6 - Montage mthode des points conjugus

a = 30 cm
b (cm)
c (cm)
c
p= a-b
1/p
p' = c b
p / p2(1/p')=
1/f' = 1/p' - 1/p
f'
f ' = f (1/p')

150

130

110

90

180

60

- Tracer p' = f(p). Dduire la distance focale f ' et f '. Conclusion.

2. Mthode d'autocollimation
Dplacer la lentille (L) et placer le miroir (M), de faon former l'image A'B' de l'objet AB dans le
plan () du porte objet. La mesure de OA ' donne la distance focale f ' de la lentille.
a) Expliquer le fondement de la mthode
b) Donner le rsultat de la mesure de f et et son incertitude f.

20

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Lentille
Plan focal objet

Objet AB

Lampe
Image AB

i
i

B
A

A= F

B
Miroir
Fig. 7. Mthode dautocollimation

3. Autres mthodes de dtermination de la distance focale dune lentille


B
A
A

F
B

D
Fig. 8. Image dun objet donne par une lentille convergente

De la relation de conjugaison (1) ou (2):


1
1
1

OA' OA OF'

On a alors (fig. 8),

AO.OA
OA OF '
En introduisant l'expression de D dans la relation de conjugaison (2), on trouve l'quation du
second degr:
P + Dp + Df = 0
Si D (D- 4f ') 0
Alors :
D 4f
D AA' AO OA'

3.1. Mthode de Bessel: Cas o D > 4f '


a O:
D AA' AO OA'

Et,
D = AO1 + O1O2 + O2A' = d + p'2 - p1
21

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

De mme,
D = AO2 + O1O 2 + O1A' = p'1 - p'2 - d
Comme,
p '1 = - p2
On dduit la relation de base de la mthode :

et

p'2 = - p

D2 d 2
f '
4D

Interprtation:
Une lentille de distance focale f ', pour une distance D > 4f ', il est possible de trouver deux
positions O1 et O2 (fig.8) pour lesquelles la lentille donne l'image AB d'un objet AB.
3.2. Mthode de Silberman : Cas o D = 4f '
Il existe, dans ce cas deux solutions confondues de lquation (3) :
p1 = p2 = p = - D / 2 = - 2 f '
p' = 2 f'

et,

Interprtation:
Avec une lentille convergente de distance focale f ', et pour une distance D = 4 f ', on ne trouve
quune seule position de cette dernire qui donne une image AB de lobjet AB.de grandissement
gal lunit.
Position 1

Position 2

B
O1

O2

A
B
d
D

Fig. 9. Mthode de SILBERMAN

3.3. Manipulation (fig.9)


Matriels utiliss:
- Une source de lumire (lampe spectrale du mercure)
- Un porte objet (chiffre 1 perl)
- Une lentille convergente
- Un cran et un banc optique
a) Mthode de Bessel
Placer la lentille et lcran sur le banc optique, en choisissant la distance D (entre lobjet et lcran)
de faon alatoire. Chercher limage de lobjet en dplaant la lentille. Si D est suprieure 4f ,
vous obtenez respectivement deux positions de la lentille qui donnent une deux images de
grandeurs diffrentes sur lcran. Si ce nest pas le cas, augmentez la distance D en loignant
lcran de la lentille, jusqu lobtention des deux positions.
22

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

- Mesurer les distances d (entre les deux positions O1 et O2) et D avec leur prcisions respectives.
- Dduire la distance focale de la lentille et son incertitude.
b) Mthode de Silberman
De la mme manire, procder au dplacement de la lentille et de lcran jusqu lobtention de la
position unique (pour une distance D donne) de la lentille qui donne une image sur lcran.
- Mesurer la distance D et son incertitude.
- Dduire la distance focale de la lentille et son incertitude.

4) Mthode de BADAL (fig.10)


Cette mthode permet la mesure de la distance focale d'une lentille convergente comme d'une
lentille divergente. Comme les mthodes prcdentes ont servi l'tude de lentilles convergente,
on mettra en uvre cette mthode pour dterminer la distance focale d'une lentille divergente.
Pour ce faire, on utilise deux lentilles (L1, L2) convergentes auxiliaires, de distances focales de
prfrence gales (f '= 30cm), et la lentille (L) divergente dont on cherche mesurer la distance
focale.
d
Ecran

A=F1

A' = F'2

O1

O2

F2

F'1

Ecran

A=F1

A''
A'

F'1

L1

F2

L2

Fig. 10. Mthode de BADAL

Cette mthode permet la mesure de la distance focale d'une lentille convergente comme d'une
lentille divergente. Comme les mthodes prcdentes ont servi l'tude de lentilles convergente,
on mettra en uvre cette mthode pour dterminer la distance focale d'une lentille divergente.
Pour ce faire, on utilise deux lentilles (L1, L2) convergentes auxiliaires, de distances focales de
prfrence gales (f '= 30cm), et la lentille (L) divergente dont on cherche mesurer la distance
focale.
- Placer les lentilles (L1, L2), de manire obtenir une image relle sur l'cran. L'objet tant plac
au foyer objet de la premire lentille. Noter la position de cette image avec son amplitude de mise
au point (fig.9a)
23

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

- Intercaler la lentille divergente (L) au plan focal objet de la lentille (L2) (fig.9b). L'image se
retrouve de ce fait dplace. Rechercher la nouvelle position de cette image en dplaant l'cran
jusqu' l'obtention d'une image nette. Notez sa position et sa latitude de mise au point. Dduire
le dplacement de l'image not D ainsi que la distance focale de la lentille (L) donns par :

D O2 A' ' O2 A'


Et,
f '

f 2 '2
D

f '2 tant la distance focale de la deuxime lentille (L2).


Dterminer f et son incertitude sur f.

24

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

TP 3 - La spectrophotomtrie
Introduction
Lorsqu'elle traverse les gouttes d'eau de la pluie, la lumire blanche du Soleil ou d'une lampe
incandescence se dcompose en ses constituants colors : c'est l'arc-en-ciel. Cet effet est d la
rfraction, phnomne par lequel la lumire subit un changement de direction quand elle passe
d'un milieu un autre. La mme dcomposition s'observe lorsque la lumire traverse un prisme
transparent dont l'indice de rfraction et par consquent l'angle de rfraction dpendent de la
couleur de la lumire. La spectroscopie est lanalyse des constituants dun corps par leur spectre
dabsorption obtenue au moyen dun spectroscope. Cest dire quelle est ltude des
rayonnements lectromagntiques mis, absorbs ou diffuss par la matire.
On appelle spectroscope lappareil qui donne un spectre pur, dans lequel diverses radiations
monochromatiques sont les unes ct des autres. La spectroscopie est dune grande
importance en analyse chimique et en astrophysique, car elle permet de dterminer la
composition chimique dune substance et dtre prcis dans les dosages.
Objectifs
Dans ce TP on utilise un spectroscope prisme bas sur 4 phnomnes :
- la dispersion ou la dviation de la lumire.
- labsorption de la lumire.
La mesure de labsorbance de la ou transmitance permet de dterminer la concentration molaire
dune solution donne.
I. Loi de la spectromtrie
La spectromtrie dabsorption est une mthode danalyse dont le principe est le suivant : un
faisceau de lumire (photons) de longueur donde donne traverse la solution tudie.
La mesure de la fraction dintensit lumineuse absorbe cette longueur donde permet de
dterminer la concentration de la substance absorbante.
Le domaine de longueur donde utilisable correspond au spectre visible : 400 (bleu) 800 (rouge)
nm environ ou au proche ultraviolet (200 400 nm).
a) Dfinition
Soient I0 l'intensit incidente d'un faisceau lumineuse de longueur d'onde donne ,
traversant une solution d'paisseur l et dintensit mergente I Par dfinition :
La transmission est :
T = I / I0
(1)
Souvent exprime en %, elle mesure la transmission de la solution.
L'absorbance est :
25

TP Physique Optique gomtrique

A = - log T

SNV - Premire anne LMD

(2)

Souvent appele densit optique


(D.O.), elle mesure l'absorption de la
solution.
Fig.1 - Absorption de la lumire par une solution

b) Loi de Beer-Lambert
A la longueur donde , labsorbance A est proportionnelle lpaisseur l (en cm) traverse et la
concentration c de la substance absorbante.
A = . l . c

(3)

O,
A est labsorbance ou la densit optique (sans unit) de la solution pour une longueur d'onde ;
c : est la concentration de la substance absorbante (en mol.m-3 )
: est le coefficient dextinction molaire (en L.mol-1.cm2) de la substance absorbante en solution. Il
rend compte de la capacit de cette substance absorber la lumire, la longueur donde .
II) MESURES DABSORPTION
a)

Principe de lappareil
b)
c)
d)
e)
f)
g)

Composition du spectromtre :

S : source de lumire blanche


F1 : fente de rglage de lintensit de la lumire blanche
P : dispositif dispersif (prisme)
F2 : fente slectionnant une longueur donde dtermine
d : dtecteur (cellule photolectrique) engendrant un courant dintensit proportionnelle
lintensit de la lumire reue.

26

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Eprouvette
Dtecteur d
(Photodiode)
Fente F2

Source S
Lampe

Porte
chantillon

Lecture de la
Transmitance T(%)

Levier L

Prisme P
Rail
Filtre

Obturateur Z

Lentille

a)

W (Slecteur )

S (Gain ou sensibilit)

M0
Rglage zro0

M100
Rglage max

b)

Fig.2 - a) Spectrophotomtre prisme, b) Dtail du spectrophotomtre

I
II) Exprimentation : Dtermination d'une concentration en albumine dune solution
(Voir mthode de Biuret en annexe 3)

- Courbe d'talonnage :
Le trac de la courbe A = f(c) reliant l'absorbance et la concentration c de la solution tudie, est
obtenu en effectuant les mesures de A pour diverses concentrations en albumine des diffrentes
solutions. Cette courbe est une courbe d'talonnage.
La courbe exprimentale d'talonnage permet ensuite de dterminer la concentration inconnue
d'une solution de cette substance par simple mesure de son absorbance. Le report de la valeur de
A sur le graphe A = f(c) permet de dduire la concentration c.
Remarque : La loi de Lambert - Beer a des limites. La fonction A = f(c) n'est linaire que dans un intervalle
de concentrations rduit regroupant des valeurs infrieures 10-2mol.l-1.
27

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

a) Utilisation des mesures


La loi de Beer - Lambert (A = .l.c) montre qu une longueur donde donne, le rapport des
transmitances de deux solutions contenant la mme substance est gal au rapport des
concentrations :
A1 / A2 = c1 / c2
Il suffit donc de mesurer les transmitances, dune solution talon ( c connue) et de la solution
tudie pour dterminer la concentration de cette dernire. Pour diminuer lincertitude sur la
dtermination de la concentration c, il prfrable de tracer une courbe dtalonnage en utilisant
des concentrations variables et connues de la substance doser. Le calcul de labsorbance est fait
partir de la relation (2), cite prcdemment.
b) Mesure de la transmitance
- Prenez une prouvette propre et sche et vide,
- Soulevez le couvercle de lhabitacle (porte chantillon) du dtecteur,
- Choisissez la longueur donde laide du slecteur W des longueurs donde ,
- Fermez lobturateur en mettant le bouton sur 0,
- Rglez le bouton M100 sa limite suprieure,
- Ajustez le bouton M0 sur 0%,
- Ouvrez lobturateur,
- Ajustez le bouton S et le bouton M100 pour avoir 90%
- Exercez sur lprouvette un mouvement de rotation jusquau moment que lon observe un
maximum de transmission (ceci diminue les erreurs dues aux imperfections propres
lprouvette),
- Rglez sur 100% laide du bouton M100
- Insrez lprouvette remplie au 2/3 dans lhabitacle. Exercez un mouvement de rotation
lprouvette pour avoir un maximum de transmission. Lisez la valeur affiche,
- Contrlez une seconde fois, les 100% laide de lprouvette vide.
Cette procdure donne la transmitance en % de lchantillon une longueur donde donne.
Labsorbance ou densit optique (D.O) est gnralement plus aise utiliser, elle sobtient par
lquation (2).
Etalonnage et dtermination de la concentration en albumine dune solution
Solution 1
C1 =

Solution 2
C2 =

Solution 3
c 3=

Solution 4
C4 =

Solution 5
C5 ?

T (%)
A(%)
c5 =

28

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

La dtermination des concentrations des diffrentes solutions, permet de tracer la droite


dtalonnage.
-

Mesurez la transmitance ou absorbance de quatre solutions de vinaigre de concentration


connues,
Tracez A = f(c). Annotez votre graphe avec les coordonnes et les barres derreur
Dduisez de cette droite la concentration de la cinquime solution dont la transmitance est
mesure.

29

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Annexe 1
1) Montage et rglage de la lentille collimatrice
Le faisceau lumineux de la source doit tre rendu parallle par linterposition dune lentille entre la source
et le prisme. Pour raliser cela :
Remontez le levier L de blocage des , et glissez le petit habitacle du dtecteur mont sur le bras R ,
vers la droite jusquen fin de course. Ouvrez lobturateur Z en tournant le bouton appropri sur la
position O.
Prenez la lentille plan-convexe et montez la dans la monture Am, en la glissant derrire le ressort de
retenue, ne soignant que la surface plane soit positionne vers la lampe. Pour ajuster la lentille dvisser les
deux vis de retenue de la monture Am. Prenez un petit cran (un bout de papier blanc) et tenez celui-ci
environ 1m de distance du ct gauche de lappareil, de telle sorte que le faisceau lumineux y tombe
dessus. Ajustez la monture pour que le rayon soit aussi parallle que possible, c.--d. que la surface claire
soit denviron gale prs de la lentille, et environ 1m de distance. La lentille doit se trouver angle droit
par rapport au faisceau avant de fixer des vis de retenue de la monture Am.
2) Calibration de la longueur donde
La lecture des longueurs donde sur le bouton slecteur(W) en valeurs non linaires et arbitraires. Elles sont
exprimes en millimicron (m). La calibration est ralise en observant un spectre standard de lampes
spectrales Na ou Hg dont les raies sont trs troites et dont les longueurs donde sont connues (tableau cidessous). Lchelle peut donc tre talonne partir de ces informations. Cette calibration est valable que
pour une fente donne.

(nm)

Sodium (Na)
589
589.5

Mercure (Hg)
546
577
579

Couleur

Doublet jaune

Verte Jaune Jaune

Tableau : Longueurs donde et couleur des raies du Sodium et du mercure (1nm=10-9m=10-3m)


3) Calibration du gain du spectromtre
Il est gnralement ncessaire de varier me gain en observant un spectre. Sil on veut mesurer des
intensits, il sera ncessaire de connaitre le taux camplification. Pour cela, il est indispensable de calibrer
le gain :
Enlevez le filtre et tournez le bouton du gain S son extrme gauche. Fermez lobturateur et rglez le
0% du galvanomtre. Ouvrez lobturateur,. Ajuster le bouton des longueurs donde W jusquau moment
o le spectre rouge tombe dans la fente de sortie de telle sorte obtenir environ le 100% sur le
galvanomtre. Tournez le bouton w dans le contre sens des aiguilles dune montre jusquau moment
que vous obtenez une lecture de 20%. Tournez le bouton de sensibilit dun cran vers la droite, revrifiez
le zro, et notez de nouveau exactement la valeur en % de transmission. Ceci donne le facteur du gain pour
le premier cran.
Rptez lopration pour les autres crans et vous obtenez ainsi la valeur du gain pour chaque position du
bouton S

30

TP Physique Optique gomtrique

SNV - Premire anne LMD

Annexe 2
1) Mthode du biuret
La mthode du biuret est une mthode de dosage colorimtrique des protines. Cest le cas du dosage de
lalbumine effectu dans ce TP3.
Principe
En milieu alcalin, les protines qui possdent au moins 4 liaisons peptidiques forment avec les ions cuivre II
(Cu2+) un complexe bleu-violet dont l'intensit de la couleur est proportionnelle la concentration en
protines. Cette coloration varie galement en fonction de la nature des protines doser, de lalcalinit
du milieu, de la concentration en sulfate de cuivre et de la temprature. Un dosage colorimtrique est donc
possible 540 nm. Le ractif de coloration utilis est le ractif de Gornall, compos :
de sulfate de cuivre, qui donne la coloration bleu du ractif due aux ions cuivre ;
d'une solution d'hydroxyde de sodium (soude) 0,2 mol/L, qui rend le milieu basique ;
de tartrate double de sodium et de potassium, qui chlate (pige) les ions Cu2+ et vite leur
prcipitation en milieu basique sous forme d'hydroxyde de cuivre Cu(OH)2 insoluble ;
d'iodure de potassium, pour viter la rduction des ions cuivriques avant le dosage.
Mode opratoire : prparation de la solution dalbumine
Le protocole suivre pour raliser un dosage par la mthode du biuret est le suivant : mlanger 3 mL du
ractif de Gornall 2 mL de diffrentes solutions protiques de concentrations connues. Incuber ensuite
37 C pendant 10 min lobscurit. Laisser refroidir puis mesurer les absorbances des solutions 540 nm.
Ceci permet dobtenir une gamme talon ( courbe dtalonnage) afin de dterminer la concentration en
protines (albumine) dune solution inconnue traite de la mme manire.
2) Domaines d'application de la spectroscopie
En biologie
- Le spectrophotomtre est utilis lors de la ralisation du test MTT.
- En biologie molculaire, il est utilis lors de l'extraction d'ADN, pour quantifier l'ADN et dterminer sa
puret. On utilise la longueur d'onde 260 nm qui est la zone d'absorbance maximale des acides nucliques.
Une seconde mesure 280 nm permet de contrler la puret de l'extraction, savoir la prsence de
protines rsiduelles dans la solution d'ADN.
Pour une solution d'ADN purifie, le rapport R. doit tre compris entre 1,8 et 2. Si R est nettement infrieur
1,8 alors des protines contaminent probablement la solution. Suprieur 2, ce rapport indique une
probable contamination par des ARN.
La concentration d'ADN peut-tre calcule partir de la mesure 260 nm en utilisant un facteur de
corrlation :
En biochimie,
Il est utilis lors de la purification de protines, pour les quantifier (longueur d'onde280 nm) et dterminer
leur niveau de puret (longueur d'onde 260 nm).
En mdecine
L'analyse cintique de diffrentes enzymes sanguines, dosage de la phosphatase alcaline : cholestase,
lactate dshydrognase : infarctus du myocarde, hmolyse
En physique
L'analyse de la lumire permet de dterminer les composants chimiques l'origine de l'mission
lumineuse : par exemple la prsence de composs chimiques des toiles.

31